Сополимер 4-(изотиоцианатометил)винилбензола 1,4- дивинилбензола и винилбензола в качестве полимерного реагента для ковалентного связывания белка и способ его получения

 

Изобретение относится к синтезу полимерных реагентов для связывания белка, которые могут применяться в медицине и различных отраслях народного хозяйства. В качестве полимерного реагента для ковалентного связывания белка предлагается применять сополимер 4-(изотиодианатометил) винилбенэола, 1,4-дивинилбензола и винилбензола, содержащий указанные звенья в количестве соответственно 80-83,2, 15-18 мол.%. Способ получения данного сополимера включает обработку хлорметилизованного сополимера винилбензола и 1,4-дивинилбензола роданистым калием при молярном соотношении реагентов 1:2 при 5б-82°С в присутствии изопропанола или ацетонитрила в течение 15- 20 ч. Применение указанного сополимера позволяет повысить количество ковалентно связанного белка с 93 .до 120 мг/кг, 2 с.п. ф-лы, 2 табл. (/)

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИН

А1 (19) (11) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР (21) 4681659/05 (22) 10, 03,89 (46) 23. 03,92. Бюл ° М l l (71) Ташкентский государственный университет им, R,Ð,Ëåíèía (72) А, А. Юл ьчиба ев, С,Ахмедова, О.Ш,Халикова и В.И.Нестерова (53) 678.746,6 (088,8) (56) Renyon R,S., Liddy M.J- Enzime

Immobilisation by Covalent Attachmerlt to Novel Ро1Увег Matrics Preparect Ъу à Radiation Grafting,. Technique. — Garnett I.Z. J.Chem, Soc., Chem Communs, 1974, М 18, р. 735-736.

Axen R., Porath J., Chemical

coupling of enzime to cross linked

dextran. ("Sefadex"), Nature, l966, vol. 210, р. 367-369. (54) СОПОЛИМЕР 4-(ИЗОТИОЦИЛНАТОМЕТИЛ)

ВИНИЛБЕНЗОЛА, 1,4-ЛИВИНИЛБЕНЗОЛА И

ВИНИЛБЕНЗОЛА В КАЧЕСТВЕ ПОЛИМЕРНОГО

РЕАГЕНТА ЛЛЯ КОВАЛЕНТНОГО СВЯЗЫВАНИЯ

БЕЛКА И СПОСОБ ЕГО ПОЛУЧЕНИЯ

Изобретение относится к синтезу. полимерных реагентов для связывания белка, в частности сополимера 4-(изотиоцианатометил) винилбензола с 1,4.дивинилбензолом и винилбензолом, который может применяться в медицине и различных Отраслях народного хозяйства, (51)5 С 08 Р 21?/14 // (С 08 F 212/14, 212: 08, 212:36) 2 (57) Изобретение относится к синтезу полимерных реагентов для связывания белка, которые могут применяться в медицине и различных отраслях народного хозяйства, В качестве полимерного реагента для ковалентного связывания белка предлагается применять сополимер 4-(иэотиодианатометил) винилбенэола, 1,4-дивинилбензола и винилбензола, содержащий укаэанные звенья в количестве cooTFетственно 80-83,?, 15-18 мол.:. . Способ получения данного сополимера включает обработку хлорметилизованно. го сополимера винилбензола и 1,4-дивинилбенэола роданистым калием при молярном соотношении реагентов 1:2 при 56-82 С в присутствии изопропанола или ацетонитрила в течение 1520 ч Применение указанного сополимера позволяет повысить количество ковалентно связанного белка с 93 .до 120 мг/кг, 2 с,п. ф-лы, 2 табл, Целью изобретения является повы шение активности реагента для ковалентного связывания белка.

Во всех примерах, иллюстрирующих изобретение„использована следующая схема синтеза сополимера:

17?

-(СН вЂ” Сн) — (СН -СН)»

1 — СН-СН

KSCNl) ПРОПах ацево сн — сн)-;

C8 — СН-CH

ХЛОРОЕНЗ0Л н;сн)(сн;сн3-, ацЕ гапон сн,вся — сн

СН

-(СН, СН4

Пример 1, Смесь 0,76 r сополимера и 1,455 г соединения II кипятят в 20 мл пропанола-2 в течение 20 ч (82 С), Осадок фильтруют, промывают водой (200 мл), сушат при остаточном давлении 0,2 мм рт,ст, и температуре 30 С, Найдено: N 6,933, что соответствует х=83, y=2, z=15.

ИК-спектр сополимера IV показывает характеристическую полосу поглощения М = С = S-связи в области

1057 4

2160 см 1,которая отсутствует в спектре исходного сополимера I, Пример 2. а) Смесь 0,76 г сополимера I u

1 455 г соединения IT кипятят в ацеУ о тоне в течение 48 ч (56 С), Осадок фильтруют, промывают водой (200 мл), сушат при остаточном давлении о

l0 0,2 мм.рт.ст. и температуре 30 С, Получают 0,82 r сополимера III. Найдено: N 6,904, что соответствует х = 80, у = 2, z = 18, ИК-спектры сополимера III показывают интенсивную полосу в области 2040 см, ха( рактерной для S-СБИ-связи, которая отсутствует в ИК-спектре исходного сополимера I. б) 0,8 г сополимера III кипятят в

20 мл хлорбензола в течение 7 ч. 0садок фильтруют, промывают бензолом (20 мл), ацетоном (20 мл), водой (200 мл), сушат при остаточном давлении 0,2 мм, рт. ст, и температуре

30 С, Получают 0,78 г сополимера IV, Найдено: N 6,89ñ-:, что приблизительно соответствует х = 83, у = 2, .к=(5, ИК-спектр сополимера IV показывает интенсивную полосу поглощения в

30 области 2160 см, характерной для

-N = С = S-связи, и исчезновение полосы поглощения в области 2040 см — 1 характерной для ИК-спектра сополимера III, Пример 3, Смесь 0,76 г сополимера I и 1,455 г соединения II кипятят в 20 мл ацетонитрила в течение 15 ч (81 С), Осадок. фильтруют, промывают водой (200 мл), сушат при

40 остаточном давлении 0,2 мм рт,ст. и температуре 30 С. Получают 0,82 г сополимера IV. Найдено: N 6,954, что соответствует х = 83, у = 2, z =

15. ИК-спектр показывает полосу

< поглощения в области 2160 см, характерную для -N = С = S-связи отсутствующего в ИК-спектре исходного сополимера I, Ковалентное связывание полимер50 ных реагентов с белком осуществляют в холодильнике (3-4 С) и при комнатной температуре (20-22 С) в боратном буферном растворе, имеющем значение рН 8,45, в течение 36-72 ч. Количество связанного альбумина исследовано спектрофотометрическим методом на приборе Сф-46, основанным на измерении оптической плотности растворов при длине волны 280 нм, и фотоколориI

© г © !

Сн SCM.

5 17210 метрическим метолом Лаури, основанным на измерении оптической плотности при длине волны 750 нм (табл. 1), Как видно из сравнительных данных табл,2, предлагаемый сополимер имеет более

5 высокую чем известный, активность при связывании белка. 1анный способ получения сополимера прост, безопасен, а сам сополимер где х = 80-83 мол,4, у = 2 мол.3, z = 15-18 мол,i, в качестве полимерного реагента для ковалентного связывания белка. где х = 80-83 мол,3, у = 2 мол.г, .г = 15-18 мол,Ф, заключающийся в том, что хлорметилированный сополимер винилбензола и 1,4-ливинилбензо57 6 удобен в эксплуатации, устойчив при хранении и является более активным реагентом для ковалентного связывания белка.

Формула изобретения

1. Сополимер 4- (изотиоцианатометил) винилбензола, 1,4-дивинилбензола и винилбензола формулы

2. Способ получения сополимера

4- (изотиоцианатометил) винилбензола, 1,4-дивинилбензола и винилбензола формулы ла обрабатывают роданистым калием при молярном соотношении сополимера и роданистого калия 1:2 при 56 о

82 С в присутствии изопропанола или ацетонитрила в течение 15-20 мин, 8

100

1721057

Табли ца 1

Ковалентное связывание альбумина на сополимере 4-(изотиоцианатометил) винилбензола с 1,4-дивинилбензолом и винилбензолом

Соотношение полимер - альбумин, мг/кг

Содержание связанного ал ьбумина, мг/г

Условия связывания

» «l Температура, С Время, ч

4 - 5

4 - 5

20 - 22

20 - 22

36

72

36

100: 50

100: 50

100: 50

100 : 50

110

110

120

Табли ца 2

Химическая фиксация энзимов на и-изотиоцианатопероксиг идроксипропил-С ефаде ксе

Энзим-Сефадекс

Содержание изотиоцианата, ммоль/г

Соотношение полимер энзим мг/мг

Содержание связанного энзима, 3 мг/г

ХимотрипсинСефадекс 6200

190

200/50

Трипсин-Сефалекс 6200

150

200/50

Амила за-Сефадекс 6200

150

2 00/70

Составитель И.Стояченко

Редактор И,Янкович Техред Л.Олийнык Корректор Л. Пилипенко

Заказ 1324 Тираж Подписное

BHHHIIH Государственного комитета по изобретениям н открытиям прн ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", r.Ужгород, ул. Гагарина,101