Штамм вируса каскелен для приготовления диагностических препаратов

 

Использование: вирусология, диагностика , иммунология. Сущность изобретения: штамм нового вируса Каскелен № Каз-4751 кл изолирован из клещей Ixodes persubcatus. Штамм прошел 7 пассажей, инкубационный период на новорожденных белых мышах составляет 3-4 дня. Инфекционный титр равен 7,01 Ig ЛД50/0.02 мл. Взаимодействие штамма вируса Каскелен с культурой клеток Vero сопровождается дегенерацией клеток, титр вируса равен 6,0 Ig ТЦД 50/мл. Культуры клеток СПЭВ, ВНК, ФЭК к вирусу не чувствительны. Вирус высокочувствителен к эфиру и дезоксихолату натрия, титр при обработке снижается на 3-4 Ig ЛД 50/0,02 мл. При обработке БУД- Ром титр вируса не снижается. При серологической идентификации с использованием иммунных сывороток к представителям 25 антигенных групп арбовирусов антиген из штамма вируса Каскелен № Каз-4751 кл ни с одним из них не реагировал. Электронноймикроскопические данные позволили установить размеры вируса, равные 50-55 нм, и отнести его к семейству Reovlrldal, роду Orbivlrus. Штамм используется для приготовления диагностических препаратов (антигена , иммунной асцитной жидкости), которые употребляются при идентификации вновь выделенных штаммов арбовирусов из семейства реовиридае. лабораторной диагностике арбовирусных болезней, изучении иммунитета населения и животных и выявлении антигена а биологических объектах окружающей среды. 2 табл. (Л С S О 00

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛ ИСТИЧЕ СКИХ

РЕСПУБЛИК (5!)5 С 12 N 7/00

ГОСУДАРСТВЕ ННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР.ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (2.1) 4880027/13 (22) 26.09,90 (46) 30.06.92. Бюл. ¹ 24 (71) Научно-исследовательский институт эпидемиологии, микробиологии и инфекционных болезней и Институт вирусологии им.Д. И, Иван овс кого (72) Д.К.Львов, С.К.Каримов, Т,В,Кирющен- ко, А;В.Гагаринова, H.È.Äðoáèùåíêî, Л.К.Березина, Н.Г.Кондрашина; Е.А.Гущина и А.В.Чижов (53) 576.8.094.29 (088.8) (56) Clark О., Casals J. American Journal of

Tropicat ееб!с!пе and Hygiene, 1958, 7, р. 561-573.

Львов Д.К.. Клименко С.М., Гайдамович

С.Я. Арбовирусы и арбовирусные инфекции.

М., 1989, с.335. (54) ШТАММ ВИРУСА КАСКЕЛЕН ДЛЯ ПРИГОТОВЛЕНИЯ ДИАГНОСТИЧЕСКИХ ПРЕПАРАТОВ (57) Использование; вирусология. диагностика, иммунология. Сущность изобрете- ния: штамм нового вируса Каскелен. №

Каэ-4751 кл изолирован из клещей txodes

persubcatus. Штамм прошел 7 пассажей, инкубационный период на новорожденных белых мышах составляет 3-4 дня. ИнИзобретение относится к вирусологии, Штамм вируса Каскелен № Каз — 4751. кл хранится в лаборатории трансмиссивных вирусных инфекций НИИэпидемиологии, микробиологии и инфекционных болезней

Минздрава Казахской ССР и в государственной коллекции вирусов Института вйрусологии им.Д.И. Ивановского АМН СССР под номером 902.

;., Ы, Ä 1744108А1 фекционный титр равен 7,01 Ig ЛД50/0,02 мл. Взаимодействие штамма вируса Каскелен с культурой клеток Чего сопровождается дегенерацией клеток, титр вируса равен 6,0

Ig ТЦД 50/мл. Культуры клеток СПЗВ, ВН К, ФЗК к вирусу не чувствительны. Вирус высокочувствителен к эфиру и дезоксихолату натрия, титр при обработке снижается на

3-4 lg ЛД 50/0,02 мл. При обработке БУДРом титр вируса не снижается. При серологической идентификации с использованием иммунных сывороток к представителям 25 антигенных групп арбовирусов антиген иэ штамма вируса Каскелен № Каз — 4751 кл ни с одним из них не реагировал. Злектронноймикроскопические данные .позволили установить размеры вируса, равные 50 — 55 нм, и отнести его к семейству Reovirldal, роду

0rbivirus, Штамм используется для приготовления диагностических препаратов (антигена, иммунной асцитной жидкости), которые употребляются при идентификации вновь выделенных штаммов арбовирусов из семейства реовиридае, лабораторной диагностике арбовирусных болезней. изучении иммунитета населения и животных и выявлении антигена в биологических объектах окружающей среды, 2 табл, Цель изобретения — штамм неизвестно- в го ранее арбовируса, обладающий специфической иммуногенной активностью, позволяющей использовать его для приготовления специфических диагностических препаратов.

Морфологические признаки. Фильтрующийся вирус в размере 50 нм. Обработка вирусосодержащей мозовой суспензии де1744108 зоксихолатам натрия, эфиром приводит к снижению титра вируса на 3-4 Ig LD 50/О;02 мл, что свидетельствует о наличии липосодержащей оболочки.

При обработке БУДРом титр вируса не снижался, что является косвенным доказательством его принадлежности к РНК-содержащим вирусам.

При электронно-микроскопическом исследовании мозга мышей-сосунков, зараженных. вирусом Каскелен, в цитоплазме клеток наблюдались структуры, типичные для размножения Орбивирусов: мелкогранулярные матриксы с формирующимися кольцевидными частицами диаметром 50 нм и отдельные трубчатые структуры диаметром 40 нм. Формирующиеся вирусные частицы имеют электронно-плотную сердцевину и образуют в матриксах кристаллоподобные скопления, На основании электронномикроскопических и антигенных признаков изолированный -вирус отнесен к семейству

Реовириде, роду Орбивирус.

Культуральные свойства. Взаимодействие штамма ¹ Каз — 4751 кл с культурой клеток Чего сопровождается дегенерацией клеток. Титр вируса равен 6,0 (g ТЦД 50/мл.

Культуры клеток СПЭВ, ВНК, ФЭК к вирусу не чувствительны.

Адаптационные свойства. Исходный вирус выделен из клещей Ixodes persuIcatus u адаптирован к организму 1-2 дневных белых мышей. Прошел 7 пассажей. Инкубационный период составил 9 дн при первичном выделении и сократился до 3 — 4 дн в последующих пассажах. Инфекционный титр вируса для новорожденных белых мышей при мозговом заражении достигает 7,0 tg LD

50/0,02 мл.

Антигенные свойства. Серологическая идентификация штамма № Каз — 4751 кл вируса Каскелен с использованием иммунных асцитных жидкостей к 80 арбовирусам 25 антигенных групп не выявила антигенной связи его с известными арбовирусами.

Штамм при иммунизации лабораторных животных вызывает образование комплементсвязывающих, нейтрализующих и . преципитирующих антител.

Патогенные свойства вируса Каскелен для животных, Вызывает смертельную инфекцию у новорожденных белых мышей при внутримозговом заражении. Инфекционный титр в мозгу достигает 7,0 Ig О-50/0,02 мл. Для взрослых белых мышей и морских свинок при внутримозговом заражении вирус Каскелен .слабопатогенен.

Патогенные свойства вируса Каскелен для людей. В сыворотках крови здорового

40 готовленными на основе иммунной асцит45

55

35 населения, собранных.в предгорных и полупустынных рафонах Казахстана, антитела к вирусу.Каскелен в PCK выявлены в 1,753,2% случаев.

Диагностический препарат, антиген из штамма ¹ Каз — 4751 кл вируса Каскелен; получают путем внутримозгового заражения новорожденных белых мышей. Из мозга животных, .взятых на высоте клинических проявлений заболевания, готовят антиген путем сахарозо-ацетоновой экстракции.

Диагностическую иммунную асцитную жидкость готовят по известному методу

С.Я, Гайдамович с соавторами.

Изобретение аллюстрируется следующими примерами.

Пример 1, Материал для исследования — сыворотки крови населения из эндемичных по арбовирусным инфекциям районов Казахстана. Проводят постановку серологических реакций — РСК с использованием сахарозо-ацетонового антигена, приготовленного из штамма вируса Каскелен № Каз — 4751 кл. Реакцию ставят по общепринятому способу — микрометодом на аппарате Такачи, Результаты исследования сывороток людей приведены в табл, 1.

Таким образом, использование предлагаемого штамма вируса Каскелен для приготовления диагностического антигена способствовало расширению набора диагностических препаратов с целью изучения иммуноструктуры населения.

Пример 2, Материал для исследования — 107 суспензии из клещей и комаров, собранных в природных очагах арбовирусных инфекций, Проводят постановку РНГА с эритроцитарными диагностикумами, приной жидкости их предлагаемого штамма

N Каз-4751 вируса Каскелен. РНГА ставят по общепринятой методике.

Результаты исследования суспензий из членистоногих приведены в таблице 2

Следовательно, с помощью эритроцитарных диагностикумов, приготовленных на основе иммунной асцитной жидкости к штамму № Каз-4751 вируса Каскелен, устанавливается наличие антигена.вируса в биологических обьектах.

Предлагаемый штамм нового арбовируса и приготовленные на его основе диагностические препараты найдут применение в диагностических лабораториях вирусологического профиля.

Формула изобретения

Штамм вируса Каскелен ГКВ 902 для приготовления диагностических препаратов.

1744108

Та бл и ца.1

Табл и ца 2

Составитель Д.Львов

Редактор М.Недолуженко Техред M.Ìîðãåíòàë . Корректор М.Пожо.

Заказ 2169 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва. Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101