Способ моделирования однокамерного эхинококкоза

 

Изобретение относится к медицине, а именно к гельминтологии. Цель - повышение воспроизводимости способа. Для этого изолят Echinococcus multi- locularis пассируют на хлопковой крысе . Затем забирают ацефалоцисты и вводят инокулят, содержащий 300 - 1000 ацефалоцист, золотистому хомяку. Применение способа позволяет повысить воспроизводимость модели однокамерного эхинококкоза до 100%.

СОЮЗ ССОЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

Я=СПУБЛИН

А1,SUÄÄ 1745 (Sl)S С 09 В 23/28

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

ГОСУДАРСТОЕННЫЙ КОМИТЕТ

IlQ ИЭОИ%ТЕНИЯМ И 0ТНРЫТИЯМ

flPH ГННТ СССР

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

1 (21) 4843531/14 (22) 26.06.90 (46) 07.07.92. Бюл. Р 25 (71) Институт медицинской паразитологии и тропической медицины им. Е.И.ИарцнновскогЮ

{72) Ф.П.Коваленко (53) 615.475 (088.8) (56) Коваленко Ф.П. и др. Медицинская параэитология и паразитарные болезни, 1976, Р 5, с. 546 †. 551 ° (54) СПОСОБ МОДЕЛИРОВАНИЯ ОДНОКАИЕР-. . НОГО ЭХИНОКОККОЗА

Изобретение относится к медицийе, а именно к гельминтологии.

/ Ъ .1 !

Ф

Цель изобретения - повышение воспроизводимости способа.

Дпя исполнения предлагаемого способа в качестве донорского материала используют ларвоцисты Echinococcus

multilocularis от хлопковых крыс, на которых постоянно поддерживают лабораторный штамм паразита. Хлопковых крыс-доноров заражают следующим обраsoM. Нивотныи обоего пола в возрасте

1 - 1,5 мес и массой 40 - 60 r вводят в брюшную полость по 500 » 1000 про" тосколексов.и 200 — 300 ацефалоцист, выделенных нэ ларвоцист альвеолярного эхинококка от предшествующих доноров того же вида.

Хлопковых крыс-доноров заражают инокулятом, приготовленным следующим образом. Ларвоцисты альвеолярного эхинококка массой 30 — 50 r выделяют от предццущих доноров того же вида

2 (57) Изобретение относится к медици- не, а именно к гельминтологии. Цельповйшение воспроизводимости способа.

Для этого иэолят Echinococcus multi1оси1аг з пассируют на хлопковой крысе. Затем забирают ацефалоцисты и вводят инокулят, содержащий 3001000 ацефалоцист, золотистому хомяку.

Применение способа позволяет повысить воспроиэводимость модели однокамерного эхинококкоза до 100Х. (1 — 2 крыс), вскрытых через 23 иес после заражения, и измельчают ножницами. Полученные фрагменты смешивают со стерйльным физиологическим раствором хлорида натрия при соотношении объемов фрагментов ларвоцист и физраствора 1: 10."..олученную смесь процеживают через мельничный газ с диаметром ячеек 1,0 мм. Полученный фильтрат повторно процеживают через мельничный газ с диаметром ячеек

0,3 мм. Затем фильтрат взбалтывают и после 2 — 3 мин отстаивания удаляют надосадочную жидкость и заменяют ее свежим физраствором до конечного объема 50 мл. Эту операцию повторяют 5 - 7 раз до достижения полной прозрачности надосадочной жидкости, что необходимо для последующего подсчета зародышевых элементов в инокуляте. При последней замене надосадочной жидкостью используют физраствор с. антибиотиками (0,3 мг/мл гентамнци на н 2000 Ед/мп пенициллина).

17

В приготовленном таким образом и, пригодном для заражения животных инокуляте определяют концентрацию протосколексов и ацефалоцист альвеалярного эхинакокка следующим образом.

Инокулят равномерно перемешивают на магнитной мешалке со скоростью

1000 об/мин и забирают из него 1,0 мл в шприц с ограничителем объема и иглой внутренним диаметром 0,3 мм. Затем из шприца сразу же наносят на предметные стекла 5 — 10 капель инокулята и подсчитывают при малом увеличении микроскопа число протосколексов и ацефалоцист в каждой капле. Определив среднее числа протосколексав и ацефалоцист в 1 капле и количество капель в 1 мл инокулята, вычисляют число протосколексов и ацефалоцист в указанной единице объема инакуллта, Приготовленным инокулятом с известной концентрацией зарадьппевых элементов альвеолярного эхинококка заражают 25 . — 30 хлопковых крыс обоего пола в возрасте 1 — 1,5 мес и массой

40 — 60 r. Гаждому животному обрабао тывают переднюю брюшную стенку 96 этиловым спиртом, голову и задние конечности- фиксируют руками, животное поворачивают головой вйиз и заданный объем инокулята (0,5 — 1,0 мл), содержащий 500 — 1000 протосколексов и

200 — 300 ацефалоцист, вводят с помощью шприца и инъекционной иглы внутренним диаметром 0,3 мм в брюшную полость животного через нижнюю часть бркппной стенки во избежание травмирования петель кишечника.

Хлопковых крыс вскрывают через

2 — 3 мес после заражения, выделяют из их брюшной полости развившиеся ларвоцисты альвеолярного эхинококка, выделяют из ларвоцист зародышевые элементы, которыми заражают золотистых хомяков-реципиентов. Инокулят из донорских ларвоцист готовят так же, как это описано, за исключением того, что при определении концентрации в инокуляте зародышевых элементов учитывают содержание в инокуляте только ацефалоцист, так как протосколексами золотистые хомяки не заражаются. Золотистых хомяков заражают инокулятом так же, как и хлопковых крыс-доноров.

Оптимальная доза инвазионного материала составляет 300 — 1000 ацефалоцист на животное.

Пример 1. Экспериментальную модель однокамерного эхинококкоза

4 воспроизводят у золотистого хомяка (самки) в возрасте 1 мес и массой

56 г. В качестве донорского материала используют ларвоцисты Echinococcus

multilocularis от хлопковой крысы, зараженной внутрибрюшинно пратосколексами и ацефалацистами альвеолярного эхинокакка от экспериментально зараженного предыдущего донора того же вида. Хлопковую крысу-донор заражают внутрибрюшинно инокулятом, приготовленным следующим образом. Ларвоцисты альвеолярнога эхинакокка массой 32 г выделяют из брюшной полости предыдущего донора, вскрытого на 83-й день после заражения, измельчают ножницами и полученные фрагменты смешивали са стерильным физиологическим раствором хлорида натрия при соотношении объемов фрагментов ларвоцист и физраствора 1: t0. Смесь процеживают через мельничный газ с диаметром ячеек

1,0 мм. Полученный фильтрат пропускают через мельничный газ с диаметром

25 ячеек 0,3 мм. Затем фильтрат взбалтывают и после 2 мин отстаивания удаляют надосадочную жидкость. Эту операцию повторяют 5 раз до полной прозрачности надосадочной жидкости. При

ЗО последней замене надосадочной жидкости используют физраствор с антибиотиками (0,3 мг/мл гентамицина и

2000 ЕД/мл пенициллина) и объем фильтрата доводят до 50 мл.

В приготовленном таким образом инокуляте определяют концентрацию протосколексов и ацефалацист следующим образом. Инокулят равномерно перемешивают на магнитной мешалке со

41р скоростью 1000 об/мин и забирают из него 1,0 мл в шприц с ограничителем объема и иглой внутренним диаметром

0,3 мм. Затем из шприца сразу же наносят на предметные стекла 5 капель

45 инокулята и подсчитывают при малом увеличении.микроскопа число протосколексов и ацефалоцист в каждой капле.

Определив среднее значение числа протоскалексов и ацефалоцист в 1 капле, 51 равное 5,7 и 2,3 экз. соответственно, вычисляют и количество капель в 1 мл инокулята, равное 89, подсчитывают число протосколексов и ацефалоцист в

1 мл инокулята, которое составляет

55 соответственно 507 и 205 экз.

Инокулят в указанном объеме вводят в брюшную полость хлопковой крысе (самке) в возрасте 1 .мес и массой

51 r следующим образом. Переднюю

П р и и е р 2. Экспериментальную модель однокамерного эхинококкоза воспроизводят у золотистого хомяка (самца) в возрасте 1,5 мес и массой

68 г. Источник донорского паразитарного материала, способ заражения донора, а также способ приготовления инокулята из донорских ларвоцист альвеолярного эхинококка такие же, как и в примере 1. Концентрация ацефалоцист в используемом инокуляте

1000 экз/мл. Хомяк получает внутрибрюшинно 1,0 мл инокулята способом по примеру 1. К сроку вскрытия животного через 7 мес после заражения брюшно хомяка резко увеличивается.

При вскрытии из брюшной полости хомяка выделенб 39 ларвоцист однокамерно2р го типа, диаметр которых колебается от 8 до 32 мм, а масса варьирует в пределах 0,73 — 8,54 r. Общая масса выявленных у хомяка ларвоцист 41,3 r (48,7Х от массы тела животного, раву5 ной 84,8 г). Во всех ларвоцистах обнаружены выводковые капсулы, содержавшие по 64 — 362 зрелых протосколексов.

Пременение способа позволяет повысить воспроизводимость модели однокамерного эхинококкоза до 1003.

Способ моделирования однокамерного

Зэ эхинококкоза, включающий внутрибрюшинно введение экспериментальному животному зародышевых элементов личи.ночной стадии эхинококка, о т л и— ч а ю шийся тем, что, с целью

40 повышения воспроизводимости способа, предварительно изолят Echinacoccus

multilocularis пассируют на хлопковой крысе, затем осуществляют забор ацефалоцист и вводят инокулят, содержа45 ций 300 — 1000 ацефалоцист, золотистому хомяку.

Составитель А.Бобров

Редактор И.щербак Техред ц,Иоргентал Корректор И.Эрдейи

Заказ 2364 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, !асква, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", r.Óærîðîä, ул. Гагарина,101

1745740 6 брюшную стенку крысы обрабатывают

96" этиловым спиртом, голову и задние конечности животного фиксируют рука<ми и поворачивают крысу головой вниз и с помощью шприца и инъекционной иг- . лы внутренним диаметром 0,3 мм забирают 1 мл равномерно перемешиваемого на магнитной мешалке инокулята и вводят в брюшную полость хлопковой крысе через нижнюю часть брюшной стенки.

Через 76 дн после заражения крысу вскрывают, выделяют .из брюшной полости животного развившиеся ларвоцисты альвеолярного эхинококка, масса которых составляет 26 г, и используют их для приготовления инокулята описанным способом.

При количественном определении со. держания зародышевых элементов паразита учитывают концентрацию только ацефалоцист. В 50 кп приготовленного инокулята концентрация ацефалоцист составляет 752 экз/мл. Этим инокулятом заражают подопытного золотистого хомяка так же, как и хлопковую крысудонора путем внутрибрюшинного введения животному 0,5 мл инокулята, содержавшие 300 ацефалоцист эхинококка.

На 63-й день после заражения хомяка вскрывают и выделяют из брюшной полости животного развившиеся ларвоцис ты эхинококка. Всего выделено 17 лар- ф о р и у л а и 3 о б р e T e H H я воцист, масса которых варьирует от

0,48 до 5,63 r а диаметр — от 5. до .12 мм. Все ларвоцисты однокамерного типа. При- проколе стенки каждой ларвоцисты препаровальной иглой в одной точке поверхности наблюдают полное .спадение всей ларвоцисты с истечением иэ нее гидатидной жидкости. Общая масса ларвоцист у животного составляет 26,8 г .(35,6Е от массы тела хомяка, равной 75,2 r). В 12 ларвоцистах выявлено множество,выводковых капсул с 37 - 175 юными и зрелыми протосколексами в каждой. Остальные ларвоцисты стерильны.