Способ получения комплексного соединения платины (ii) с н- днк, обладающего противоопухолевой активностью

 

Изобретение касается комплексных соединений платины (2+), в частности получения комплекса соединения платины (2+) с н-ДНК (дезоксирибонуклеиновой кислотой), обладающего противоопухолевой активностью , что может быть использовано в фармацевтической промышленности. Цель - повышение активности и снижение токсичности целевого продукта. Синтез последнего ведут реакцией цис-дихлордиамминплатмны с н-ДНК (выделенной из селезенки крупного рогатого скота, марки А) при их молярном соотношении 1.5:1 и 78 ± 0,5°С в среде воды

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

AO ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К -АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

1 (21) 4451816/04 (22) 30.06.88 (46) 15.08.92, Бюл. М 30 (71) Институт физической химии им. Л.ВЛисаржевского и Киевскйй государственный институт усовершенствования врачей .. (72) И;И.Волченскова, Н.H.Mýéäàíåâè÷, Л.И.Бударин, С.Н.Копытин, С.А.Шалимов, Е.П.Трохименко и Л.В.Кейсевич (56) Блохин H.Н., Переводчикова H.È. Хйми- отерапия опухолевых заболеваний. M.: Медицина, 1984, с.95-100.

Вестник АМН СССР, 1986, М 12, с.7983.

Авторское свйдетельство СССР

ЬЬ 2570960. кл. С 01 F 15/00, 1973, . Авторское свидетельство СССР

hk 2581026, кл. С 07 F 15/00, I979.

Координацйонные соединения в медицине. Киев: Наукова Думка, 1986, с.120-174, Авторское свидетельство СССР

ЬЬ 1685944, кл. С 07 F 15/00, 1987, (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ КОМПЛЕКСНОГО, СОЕДИНЕНИЯ ПЛАТИНЫ (И) С н-ДНК, .

Изобретение относится к способу получения нового комплексного соединения платины, обладающего противоопухолевой активностью.

Цель изобретения — получение йовото йлатиноорганического комплексного соединения с более высокой активностью и более низкой токсичностью по сравнению с известными противоопухолевыми препаратами.

Способ получения соединения PtOHДН К заключается в том, что предварительно нагретые до температуры плавления н-ДНК водные растворы н-ДНК и цис-дихлордиам, 5U,, 1754722 А1 (51)5 С 07 F 15/00; А 61 К 31/295

ОБЛАДАЮЩЕГО ПРОТИВООПУХОЛЕВОЙ

АКТИВНОСТЬЮ (57) Изобретение касается комплексных соединений платины (2+); в частности получения комплекса соединейия платины (2+) с н-ДНК (дезоксирибонуклеиновой кислотой), обладающего противоопухолевой активностью, что может быть использовано в фармацевтической промйаленности, Цель— повышение активности и снижение токсичности целевого продукта, Синтез последнего ведут реакцией цис-дихлордиамминплатины с н-ДНК (выделенной из селезенки крупного рогатого скота. марки А) при их молярном соотношении 1,5:1 и 78 и 0,5 С в среде воды (15 мин), 8 этих условиях полученный комплекс в сравнении с йзвестным Pt-ДНК имеет . токсичность ЛДво 66 мгlмг и: ЛДию - 100 мг/кг против 31,8 и 84 «ir/êã, при обеспечении 100 -ной степени выживаемости на 10ый день при дозе 17,1 мг/кг с большей степенью угнетения роста опухоли (94 против 84; ). 3 табл.

Ql

Ф минплатины (II) (ДДП), гидролизованной до, заданной степени превращения, смешивают при молярном собтйошении Pt;P = 1,5;1 и термостатируют при той же температуре дб окончания реакции.

Температуру плавления н-ДНК опреде- в ляют иэ спектрофотометрической кривой плавления.

Нативную ДНК растворяют s воде при комнатной температуре и нагревают в термостате.

Гидролиэ ДДП проводят в воде, соблюдая режим нагревания, обеспечивающий за1754722

10

Способы получения охарактеризованы следующими параметрами: выбором концентрации исходных растворов ДДП и НДНК, степенью гидролиза ДДП, молярным

15 соотношением Pt:Ð, временем и температурой проведения реакции.

Из данных табл.1 (опыты 1 — 4) видно, что выбор исходной концентрации ДДП в интервале 2520-1200 мкг/мл позволяет пол20 учить продукт с параметрами, характерными для предлагаемого соединения PtOH-ДНК. Снижение исходной концентрации ДДП приводит к отрицательному результату (опыты 5-7). Из зависимости

25 il макс растворов ДДП от концентрации препарата следует, что при концентрации меньшей, чем 1080 мкг/мл, резко изменяется степень гидролиза ДДП, что и не позволяет получить целевое. соединение платины с

40 соотношение Pt;P = 1,5;1, Отклонение от соотношения Pt:Р = 1,5:1 не позволяет пол50

55 данную степень гидролиза, которую контролируют по электронному спектру в области

250-350 нм, характеризуемому максимумом поглощения, А, изменяющимся в интервале 273,5-276,7 нм, с ошибкой 0,5 нм и с максимальным моля рным коэффициентом экстинкции Ецакс= 110 -10 л моль см

-1

Окончание взаимодействия н-ДНК и rДДП контролируют спектрофотометрически по достижению параметров УФ-спектра поглощения 1 м кс= 265,7 + 0,1 нм и Е265,7=10000 й100л моль ° см

Предлагаемое вещество получают в водном растворе или в индивидуальном состоянии. В последнем случае образующийся в результате реакции аммоний хлористый и избыток воды удаляют лиофильной сушкой.

Пример 1; На спектрофотометре

Specord M 40 с использованием держателя кюветы, снабженного блоком управления температурой, и программы измерений; обеспечивающей линейное возрастание температуры, определяют Т»> н-ДНК. Регистрируют экстинкцию как функцию температуры в диапазоне 60-95ОС при градиенте температуры 1 С/мин. Применяемая для получения предлагаемого соединения нДНК имеет Т»л - 78,0 + 0,5ОС, Растворы 405 мг цис-Р1О2(МНз)2 в 250 мл воды (концентрация 1620 мкг/мл) и 300 мг í-4НК в 250 мл воды (концентрация 1200 мкг/мл), приготовленные при комнатной температуре, каждый в отдельности, помещают в термостат и равномерно повышают 3 температуру до 78,0 + 0,5oC со скоростью .

1 С/мин как при плавлении н-ДНК. Реагенты смешивают в молярном соотношении

РсР = 1,5:1, тщательно перемешивают и термостатируют при той же температуре в ,течение 15 мин, Пример 2, Опыт проводят как в примере 1, только реакционную смесь подвергают лиофильной сушке по методике изготовления сухой плазмы крови. 4

Раствор соединения PtOH-ДНК при постоянном вращении охлаждают до -40 С в течение 40 мин, а затем выдерживают при этой температуре 12 ч, После этого температуру повышают до -20 С, образец откачиваютвтечение40ч, нагреваютдо40 Сиснова откачивают 26 ч. Полученные после лиофильной сушки соединения- Р10Н-ДНК в дальнейшем хранят в закрытой стеклянной посуде в холодильнике или на воздухе. Выход целевого продукта PtQH-ДНК практически соответствует теоретическому.

Для экспериментальной проверки предлагаемого способа получения соединения PtOH-ДНК было проведено 19 опытов, восемь из которых показали положительные результаты. В положительных опытах получен продукт, УФ-спектры которого имеют параметры, характерные для предлагаемого соединения.

Результаты опытов сведены в табл,1, где приведены характеристики полученных продуктов в зависимости от способа их получения.

ДНК. Таким образом, интервал исходной концентрации ДДП обусловлен тем, что максимальная концентрация ДДП ограничена ее растворимостью в воде при 20 С, а минимальная — величиной, ниже которой резко изменяется степень гидролиэа ДДП, Эта величина равна 1080 мкг/мл.

Выбор концентрации н-ДНК обусловлен выбором концентрации ДДП и необходимостью соблюдать моля рное учить целевое соединение с вышеуказанными параметрами (опыты 8 и 9).

Результаты.опытов 10-13, приведенные в табл.1, указывают, что взаимодействие реагентов протекает быстро и заканчивается за время, не превышающее 5 мин. Увеличение времени термостатирования реакционной смеси до 30 мин не влияет на параметры продукта реакции, Температура проведения реакции существенно влияет на такой параметр продукта реакции как Е265,7, На это указывают результаты опытов 14-19. Из зависимости

Е255,7 от температуры видно, что для получения предлагаемого соединения PtOH-ДНК термостатирование реакционной смеси надо вести при 78,0 0,5 С. Отклонение от температуры больше, чем в указанном пред1754722 еле, не дает возможности получить продукт с необходимыми параметрами УФ-спектра.

Опытами установлено, что заданная степень гидролиза ДДП обеспечивается нагреванием водного раствора ДДП в опреде; ленном режиме.

В табл.2 приведены характеристики способа гидролиза и полученного в результате продукта гидролиза ДДП.

Гидролиз проводили при разных исходных концентрациях ДДП и в разных режимах нагревания. В первых шести опытах навески ДДП растворяли в воде при 30 С и раствор нагревали до 78;0 и 0,5 С в термостате в том же режиме, как и нагревали

H-ДНК, т,е. co скоростью 1 С/мин в течение

48 мин, Результаты этих опытов показывают, что указанный режим нагревания обеспечивает получение продукта с заданными

А макс и Е»«для растворов с исходными концентрациями ДДП 2400, 1800, 1200 и

1080 мкг/мл (опыты 1-4). Понижение исходной концентрации ДДП (опыты 5 и 6) не позволяет достигнуть заданных параметров

УФ-спектра.

В опытах 7 — 14 навески ДДП растворяли в воде, нагретой до 78,0 и 0,5 С, и полученные растворы выдерживали в термостате при этой температуре в течение 3-10 мин.

Из результатов, приведенных в табл,2, и зависимости il »«oT времени видно, что необходимые параметры спектров, соответствующие заданному интервалу степени гидролиэа ДДП, также достигаются, если ДДП растворять в горячей воде (темпе. ратура 78,0 +. 0,5 С) и раствор термостатировать в течение 5 — 9 мин, Приведенные выше данные позволяют заключить, что смешение предварительно нагретых до температуры плавления н-ДНК водных растворов н-ДНК и гидролиэованной до заданной степени цис-дихлородиэмминплатины (I 1) при молярном соотношении

1,5:1 и термостатировании смеси реагентов при этой температуре в течение времени, необходимого для окончания реакции, позволяет получить соединение, характеризу- емое формулой

ЦРт:ОН)О(МНз)(Н О))ЯРтС1(йНз)(НгО)Дд } х х,и-ДНК, где и =2000 ч- 100; р -pHK=(cz)H5>0>N)5P@, с описанными физико-химическими свойства. ми. Отклонение от вышеуказанных параметров способа получения: интервала исходных концентраций ДДП и н-ДНК, степени гидролиэа ДДП, соотношения реагентов и температуры проведения реакции, не

15 дает воэможности получить предлагаемое соединение с указанными характеристиками, Предлагаемое соединение PtOH-ДНК как индивидуальный препарат представляет собой мелкокристзллический порошок желтого цвета. Оно устойчиво в водных растворах и в твердом виде, способно длительное время храниться на воздухе при комнатной температуре и в холодильнике без изменения свойств. Состав и строение соединения PtOH-ДНК определенй нэ основе химико-аналитических и физико-химических исследований растворов и твердых образцов, Злементный анализ твердого образца подтверждает состав синтезированного целевого соединения PtOH-ДНК.

Найдено, $: Pt 38,97; О 7,38; С 15,53; N

20 9,83; Н 7,17; Р 2,98, Вычислено, 7ь; Рт 38,19; CI 6,95; С 15,27;

N 9,59; Н 4,05; P 2,97.

Измеренная вискозиметрическим методом молекулярная масса соединения

25 РсОН=ДНК составляет 6,0 10 дальтон. Исходя иэ молекулярной массы соединения

PtOH-ДНК и массы мономерной единиМФ этого полимера, имеющей эмпирическую формулу

gI. <0H)CI)NH>)(H>Oj)gPtCI(NH )(H O))» х х (Сз9Н510ий15Р4), можно рассчитать среднестатистическую

35 величину и в соединенйи. Онэ равна

2000 + 100. Следовательно, е среднем на

2000 нуклеотйдных квартетов ДНК, состоящих из пар аденин-тймин, гуанин-цитоэин. приходится примерно 4000 комплексных чз40 стиц (Рт(ОН)С1(МНз)(НгО)) и 8000 комплексных частиц (PtO)NHa)(Hzo)J+.

УФ-спектр поглощения соединения

Pt0H-ДНК, полученного в водном растворе и выделенного индивидуально, характери45 эуется максимальным поглощением при

265,7 нм, а свободная н-ДНК максимальнопоглощает свет. при 258,0 нм. Молярный коэффициент поглощения PtOH-ДНК, рассчитанный на моль нуклеотида, Емт,s 10000

50 л моль" см (у свободной н-ДНК Ежв7000 л. моль см ), Длинноволновое смещение максимума поглощения, ЬА > <, на 7,7 нм у соединения PtOH-ДНК по сравнению с н-ДНК говорит об образовании ковэлент55 ных связей между атомами платины (И) и донорнь|ми атомами азотистых оснований биомакромолекулы. Длинноволновое смещение в УФ-спектре соединения Pt-ДНК, М макс, составляет 10,8 нм. Более низкая

1754722 величина Ak м,кс для Р ОН-ДНК по сравнению с Ail макс для Pt-ДНК указывает, что ковалентные связи между металлом и основаниями ДНК в предлагаемом соединении в среднем слабее, чем в соединении Pt-ДНК, 5

Повышение интенсивности поглощения для

Р ОН-ДНК, составляющее 300, говорит о том, что присоединение металла к ДНК вызывает сильные конформационные изменения ее двухцепочечной структуры, 10

УФ-спектр соединения PtOH-ДНК, полученного в растворе, и его идентичность спектру раствора, приготовленного из твердого образца, свидетельствует об одинаковой химической природе соединения Р ОН-ДНК, 15 образующегося в растворе и выделенного в твердом виде. Об этом же говорят одинаковые результаты биологических испытаний, Растворимость кристаллического образца Р ОН-ДНК в воде при 20 С, сос-авля- 20 ющая 0,0075 ja (75 мкгlмл), показывает, что максимально достижимая концентрация

PtOH-ДНК при растворении твердого соединения в 35 раз ниже максимально достижимой концентрации соединения, 25 полученного в растворе. Низкая растворимбсть индивидуального вещества свидетельствует о его необратимой десольватации при выделении в кристаллическом виде, что обуславливает необходи- 30 мость использовать его в виде суспензия при биологических испытаниях.

Водный раствор Р" ОН-ДНК практически не проводит электрический ток, что свидетельствует о том, что при растворении 35 соединение не подвергается электролитической диссоциацли.

Изменение в ИК-спектрах соединения

Р ОН-ДНК по сравнению со свободной ДНК свидетельствует о наличии химических свя- 40 эей между атомами платины (И) и атомами кислорода фосфатных групп, В ИК-спектрах имеются полосы. при 1060 и 1220 см, соответствующие валентньил колебаниям группы-Р,=,, полосы в области 1500-1700 см, 45 соответствующие валентным колебаниям групп C=C, C=N, С=О азотистых оснований, полосы в области 3100-3700 см, соответствующие валентным колебаниям С-Н, N-H, О-Н, входящих в состав ДНК и молекул во- 50 ды. Кроме того, при 340 см наблюдается валентное колебание Pt-Ci, при 1340 см деформационное колебание координированной молекулы ИНз, при 3295 см — ва-1 лентное колебание координированной гидроксильной группы, По данным термогравиметрии соединение PtQH-ДНК теряет молекулы воды только при нагревании до 200 С. Высокая температура удаления молекул воды свидетельствует об их прочном связывании в соединении.

Данные элементного анализа, вискозиметрии, кондуктометрии, УФ- и ИК-спектров поглощения подтверждают, что синтезированное соединение действительно высокомолекулярное вещество — поли(бис(гидроксохлороамминакваплатина (П))тетракис(хлороамминдиакваплатина (И)) — p -дезоксирибонуклеат формулы

f(PtCi(OH)(NHq)(Hz0)Q(PtCi (КНз)(Н2ОЩп —,и -ДНК где и =2000 + i00.

В табл,З представлены результаты испытаний токсичности и противоопухолевой активности известного соединения Р -ДНК и предлагаемого соединения PtQH-ДНК, пОлученного в растворе и выделенного в индивидуальном состоянии. Опыты проводили на мышах и крысах обоего пола разведения питомника "Столбовая".

Токсичность изучали на группах животных из половозрелых нелинейных мышей массой 30,0 +. 2,0 г, прошедших карантин 20 дней (в каждой группе по 10 животных). Препараты вводили трехкратно внутрибрюшинно с интервалами в 2 ч в виде водного раствора или водной суспензии объемом 0,5 мл. Суммарные дозы составляли 34,0; 68,0 и

84,0 мг/KF, Количество животных, погибших в каждой группе, отме вли через 24 — 48 ч после введения препаратов, Расчет токсической дозы, ДЛво, проводили по методике, летальную дозу, ЛДюо, определяли эксгериментально, Установлено, что для Р1-ДН К ЛДво - 51,8 мг/кг, ЛД оо =84 О мг/кг, для предлагаемого соединения Р ОН-ДНК ЛДво = 66,0 мг/кг, ЛД оо = 100 мг/

Противоопухолевую активность каждого из препаратов оценивали из экспериментов, проведенных на четырех группах животных (в каждой группе по 10 животных).

Опыты проводили дважды, Белым беспородным крысам массой

150-200 г под кожу бедра трансплантировали 2 10 — 2 i0 клеток перевивного в . о штаммалейкоза Швеца. Животные! группы служили для контроля. Животные li; ill u IV групп получали соединения Pt-ДНК и PtQH1754722

ДНК в растворе или в суспензии соответственно, Препаоаты вводили внутрибрюшинно трехкратно на 4-6 сут после трансплантации опухоли, второй и третий раз с интервалом в 1 сут, Суммарные дозы составляли 17,1 мг/кг.

Противоопухолевую активность оценивали по выживаемости животных(ВЖ, %) на десятые сутки после перевивки опухоли, по обьему опухоли (V, см1) и степени угнетения роста опухоли(Т/С„%}, Расчеты производили по формулам вж(у,) =

«А 100 где А — число животных на десятые сутки после трансплантации опухоли;

N — число животных в данной групп6;

Ч (смз) = 4/3 л R, «m >+ma+ma

2 3 где m>, mz и тз — три взаимно перпендикулярных измерения опухолевого узла. где Ч« . и Чоп. — обьем опухоли в контрольной группе и в опытной соответственно.

Результаты экспериментов обрабатывали статистически. Вероятностная сшибка

Р<0,05.

Анализ данных, представленных в табл,3, показывает, что введение соединения PUGH-ДИК обеспечивает 100", -ную выживаемость животных, Вместе с тем, оно тормозит рост опухоли на 94% по сравнению с контролем. Сравнительный анализ данных, приведенных в табл.3, позволяет заключить, что предлагаемое соединение

POOH-ДНК обладает лучшей эффективностью, чем известное соединение Pt-ДНК, так как, не уступая ему по такому показате. лю как выживаемость животных, превосходит его по уровню степени угнетения роста опухоли на 10%, Кроме того, оно менее токсично, чем известное вещество.

5 Таким обоазом, создание нового высокомолекулярного соединения платины с

ДНК привело к получению вещества с ценными свойс вами: противоопухолевой активностью при малой токсичности, По этим

10 показателям предлагаемое соединение выгодно отличается от соединения Рт-ДНК, превосходя или будучи сопоставимо с ним . по показателям физиологической активности. Такой комплекс свойств делает предла15 гаемое соединение перспективным в качестве основы для создания препаратов, "эффективных для лечения злокачественных опухолей, Дополнительным преимуществом пред20 лагаемого противоопухолевого вещества является обеспечение их возможности продолжить ряд платиносодержащих противоопухолевых препаратов и тем самым обеспечить преодоление эффекта привыка25 ния организма к платиновым противоопухолевым средствам, Формула изобретения

Способ получения комплексного соединения платины (11) с н-ДНК, обладающего

30 противоопухолевой активностью, взаимодействием цис-дихлородиамминплатины с дезоксирибонуклеиновой кислотой (выделенной из селезенки крупного рогатого скота, марки А) в воде при нагревании до

35 78,0 = 0,5 С, о т л и ч à ю шийся тем, что. с целью получения соединения с более высокой активностью и более низкой токсичностью цис-дихлородиамминплатину и ДНК, используют в молярном соотношении 1,5:1

40 и процесс ведут в течение 15 мин.

1754722

1

l

1

1

1

I

1

I

I

1

1

1

1

1

1

z (X 1

1

I

1

a 3

X I

X с) (.6

0 1

I "X

I V

I66 ) 66:6- „I М т

|с

1 0

1 LLI

R1 С

I

0 )

|» I

X 1 Й

66 1

У I

1.

° 1." ) Е 1. 2

) «Т 1: III

1 6(X 1 . X

) (l V

)(Ъ 1 ..О.

I Э

I66 3 |1 Х 3- 1

I Ф

ЪС е

Э -у

I I6 (66 g C4

20u аю)6 сое

Я 8 е» ° ° ° е 4 ° е

° ° ° ° ° 4 ° ° ° ° ° ° ° °

1 1

1 X

1 (д I

1 »ее

a 941 I

„С 3

1 (6Я )

1 I

6Ll )

ll

1 1 е х3

9 (66

З

a g)=

Э Cfй

m)-O а 6

1 ) 1 I

l У 1

1 M I

1 (С(I

1 I 1

I X

1 6 е

I l

) Ю I ! Я 1

1 1

I» -ф

1- Х X

1 I1 3 с

) о

1.

1 l

I I

I . )

I 1

1 1

I I

1 1

I I

I 1

I I

3 ! I

I I

I I

I I

6 I

1 3

I 1 1 I

I I

I I

I 1

) I

1 I

) I

1

1 . 1

1 I

I 1

1 ° I

1 I

1 I

I 1

)Ж)

"1 0

1 V 1 ! Я 3

1 V 1

1 III I х

I X I

3 I» I

I V I

1 X I а

1 (66 1

I 6» 1 х

I $ I

)6 III ! М 1

)

1 I

I. I

I I

l 1

I I

) 1

1

I

) I

6!

I

1!

I! .

) ИИИИИИИИИ OOOOOOOIAIA 1

-И -«ЧММ«1ММ - - 3

) I

00 CO 00 00 СО СО CO 00 00 «О CO 00 00:! И»О Л О\ О

ЛЛЛЛ ЛЛЛ ЛЛЛ ЛЛCO 1

I.

0Ъ 1 а 3 е О е- е- I

° ° 44 ° ° ° ° ° Е ° 4 4 ° ° ° ° ° 4 ° 4 ° I

ИИИИИИИiО ИИИИИИИИИИИ I а а а а а а а е a a а е a a a a a a a ) ° Е» Е» Е» ° Е» Е» Е ° Е» Е» Е» 4» Е» Е» ° Е Е» Е ) 1

1, 1

И O (Ч О М И 00 (Ч О «Ч И О М О СО О О «Ч

° е» ° ° C41 (Ч С4 е» е» е» е» ° е» O 4 е ° е ) е е-» е е» е е е» ° ) 1

I!

Л Л (Ч 00 00 О i — 0Ъ | " Л CO Л 00 Л 00 Л 6 CO 6»» I

° a Ф е а а a a е а а е а а а а а е а.0О ИМ О 01 О с -1 -а --0 -- -«6 -0.-а --« -) -З.

ЛЛЛ|» Л О О ЛЛЛЛ| ЛЛЛЛЛЛЛ I .:

СЧ СЧ CV (Ч (Ч «Ч CV C4 (Ч C4) (Ч «Ч «Ч СЧ СЧ «Ч (Ч «4 «Ч I

I

) ООО ОООООООООООО I

ОФМLAОООOСОООDОOООООО 1

СЧ 00 М00 О Ф Л (Ч О (Ч «Ч СЧ (Ч (Ч (Ч (Ч «Ч СЧ (Ч 1 е ° е» 00 еО .. ф е е» ° ° е е» ° е» е» °

C 1

ОООО ОООООООООООО 1

C4) (Ч O O O O O 0 \ СЧ (Ч СЧ СЧ С»6 С»6 СЧ «Ч «Ч (Ч «Ч 1

О LAСО СЧ Ь З 0 О О О О О О О О О О О е (Ч ° е»00Кф (Ч 4» ° ° е ° е е е» е» е ° е» )

1..

I

1 е- (Ч М 4 IAiО Л00 Щ О - (Ч М-0 IA |»»00 CFI I

° ° е е» е» е» е» °

О ОООООО О О О О

CV 00 -4 О LA М И О О О О О m О О О О СЧ (Ч

О О О О ° (Ч СЧ О И СО LA О О R О СО (Ч МСО

О О О О О О О Ф Со <ТЪ Ое О О И О 00 О О е е» е» е ° е» е С|1 0»е 0 е CA е" 4 0»е 0»е 0»е 0»е °

Л 00 Л Л О 0 е О е- О I»» 00 Со |»» Л Л Л С» а a a a а 4» ° a а а а а а а ° а е а а

tA И И LA IA -Ф И еО еО И И LA И И И И LA LA И О ъО ОЧ0сО О КЪ О О О О О О W О еОсО еО еО

СЧ СЧ (Ч «Ч С»6 СЧ СЧ СЧ СЧ C») (Ч «Ч С»6 «Ч СЧ (Ч «Ч СЧ СЧ

1754722

Таблица 2

Опыт

Характеристика условий гидролиза

Характеристика степени гидролиза

Концентрация исход ного раст» вора ДДП, мкг/мл

Режим нагревания.Время нагревания> мин Rate s, рду нм л моль см

Скорость нагрева" ния, С/мин

Темпера" турный интервал, ОС

Таблица3

Группа животных

Показатель

III (введено соединение

PtOH-ДНК, полученное в растворе) Х (контроль) ут (введено соединение

PtOH-ДНК, полученное индивидуаль1

11 (введено соединение

Pt-PHK) Введенная доза, мг/кг

5,7х317,1 5,7х3-17,1

5,7х3 17,1

Токсическая доза, ЛД„", мг/кг

Летальная доза, ЛД„,, мг/кг

66,0

66,0

51,8

84,о

100,0

100,0

100

Выживаемость на десятые сутки, 3 (ВЖ) 100

100

1ОО

0,95+0,05

Объем опухоли, смз (Ч) 15,00+0,80 2,4020,12 1 0010, 05

Степень угнетения роста опухоли, Т/С, 3

Составитель О.Смирнова

Редактор Н.Киштулинец Техред М.Моргентал Корректор Э.Лончакова

Заказ 28бб Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", r. Ужгород, ул.Гагарина, 101

4

6

8

11

12

13

1800

30-78

30-7&

30-78 .

3о-78

30" 78

30-78

78

78

78

78

78

78

78

1 1

1 л

1

О

О

О

О

О

О

О

48

48 .48

48

48

48

4

6

8

10

276,5

275,2

273, 8

273,2

269,0

266,1

297 6

286,0

278,0

275 3

275,,3

276",о. . 277,2

278,1

123

118

120 .

119

111

112

108

110