Способ определения мочевины в крови

 

Использование: медицина, биология для количественного определения содержания мочевины в крови. Цель изобретения: повышение точности способа при длительном хранении проб. Сущность изобретения: к пробам крови добавляют предварительно 0,075%-ный водный раствор 9-фенантрилметилтрифенилфосфонийхлорида в соотношении проба: реактив 1:10, затем добавляют 5%-ный раствор трихлоруксусной кислоты, центрифугируют с последующим добавлением к надосадочной жидкости диацетилмонооксима 5,0 ммоль/л, тиосемикарбазида 0,9 ммоль/л, соли трехвалентного железа 25,0 мкмоль/л, серной к-ты 0.9 моль/л, затем инкубационную смесь нагревают 10 мин на кипящей водяной бане, охлаждают и колориметрируют в кювете с толщиной рабочего слоя 10 мм при 490-540 нм. 3 табл.

союз соВетских

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

<я)5 6 01 N 33/62

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ зом. (21) 4819641/14 (22) 21.02.90 (46) 07.11.92. Бюл. ¹ 41 (71) Черновицкий государственный университет (72) Г.M.ßðìoëü÷óê, И.В.Мегера и Б,М.Горшинский (56) Био-Лахема-Тест, Мочевина 150 (Urea, 150), Номенклатурный номер 253438773880. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ МОЧЕВИНЫ

В КРОВИ (57) Использование: медицина, биология для количественного определения содержания мочевины в крови, Цель изобретения: повышение точности способа при длительИзобретение относится к биологической химии и может быть использовано в биологии и медицине для отсроченного количественногоо определения содержания мочевины в тканях и биологических жидкостях.

Известен способ количественного определения мочевины в биологических объектах, Недостаток способа — необходимость завершить анализ в день забора биологических проб, поэтому он может быть использован для отсроченного определения количества мочевины в биологических пробах.

Цель изобретения — повышение точности способа при длительном хранении биологических проб за счет стабилизации в них мочевины, добавления к пробе водного раствора 9-фенантрилметилтрифенилфосфонийхлорида (ФТФ).

Способ осуществляют следующим обра Ы „1774262 А1 ном хранении проб. Сущность изобретения: к пробам крови добавляют предварительно 0,075%-ный водный раствор 9-фенантрилметилтрифенилфосфонийхлорида в соотношении проба: реактив 1:10, затем добавляют

5%-ный раствор трихлоруксусной кислоты, центрифугируют с последующим добавлением к надосадочной жидкости диацетилмонооксима 5,0 ммоль/л, тиосемикарбазида

0,9 ммоль/л, соли трехвалентного железа

25,0 мкмоль/л, серной к-ты 0.9 моль/л, затем инкубационную смесь нагревают 10 мин на кипящей водяной бане, охлаждают и колориметрируют в кювете с толщиной рабочего слоя 10 мм при 490-540 нм. 3 табл.

В три пробирки вносят по 1 мл 0,075%ного водного раствора ФТФ, Далее в опытную пробирку приливают 0,1 мл крови, в стандартную 0,1 мл стандартного раствора мочевины, в контрольную 0,1 мл дистиллированной воды. Пробирки закрывают пробками и хранят в холодильнике при 2-8 С, В последующие 60 дней аналогично подготовленные пробы накапливают в холодильнике. На 60-й или любой удобный для работника день, но не позже 60-ro определяют количество мочевины во всех накопившихся пробах.

Пример. В три пробирки вносят по 1 мл 0,075%-ного водного раствора ФТФ, Далее в опытную пробирку приливают 0.1 мл крови, в стандартную 0,1 мл стандартного раствора мочевины, в контрольную 0,1 мл дистиллированной воды. Пробирки закрывают пробками и хранят в холодильнике при

2-8 С, B последующие 60 дней аналогично подготовленные пробы накапливают в холо1774262

Таблица! зависимость получаемых показателей содержания мочееины в пробах сыворотки крови от продолжительности их хранения и концент- ° рации ФТФ (е таблице представлено среднее ариФметическое из трех параллельных определений) До прибавления раствора ФТФ (т.е. по способу-прототипу) 4, 72

15 минут хранения

4,72 4,69 .5 суток. хранения

4,7г 4,7о

10 суток хранения

4,78 4,71

20 суток хранения

4,73 4,72

30 суток хранения

4,77 4,75

40 суток хранения

4,68 4,78

4,75 4, 68 4,70

4,75 4,75 4,70 4,72 4,7о 4,73 4,74

4,75 4,74 4,72 4,74 4,74 4,71 4,73 бб

4 21 б

4,71 4,71

4,72 4,73 4,73 . 4,71 4,68 4,70 4,72

4 74 4т76 4,76 4,67 4,71 4 74 4,78

4 18

«б

4 о8

) 22

g,Ä2 кб

4,72 4,74 проб

4,69 4,67

478 469 475 471 475

209 у,12

1,22

4,70 4,79 4,72 4,74 4,72

2б82

2 64 дильнике. На 60-й или любой удобный для работника день, но не позже 60-го определяют количество мочевины во всех накопившихся пробах, для чего к ним добавляют по

1 мл 10%-ного раствора трихлоруксусной 5 кислоты, центрифугируют, переносят по 1,5 мл центрифугата в химические пробирки, приливают по 2 мл 0,9 моль/л серной кислоты, по 2 мл раствора 5,0 ммоль/л диацетилмонооксима (содержащего соль трехвалентного 10 железа 25,0 мкмоль/л и 0,9 ммоль/л тиосемикарбозида), перемешивают содержимое,, помещают на 10 мин в кипящую водяную баню, охлаждают до комнатной температуры и колориметрируют опытную и стандар- 15 тную пробы против контроля в кюветах с толщиной рабочего слоя 10 мм при длине световой волны 490-540 нм, Расчет проводят по известной формуле.

Исследования показали, что ФТФ в 20 концентрациях 0,02-0,3% обеспечивает сохранность мочевины в пробах сыворотки крови неизменной на протяжении 75 суток (табл. 1).

В табл, 2 представлены результаты со- 25 держания мочевины в сыворотке крови и крови, которые хранились на 1-60 суток после добавления к ним 0,075%-ного водного раствора ФТФ в сравнении с результатами содержания мочевины в аналогичных про- 30 бах, хранившихся без ФТФ. Как видно из этих данных, этот показатель значительно отклоняется от исходных величин, начиная с 10-ro дня хранения.

Средняя относительная ошибка опи- 35 санного способа определения мочевины, вычисленная из 200 определений исследуемого показателя (по 200 определений в крови и в сыворотке крови) в сроки, указанные в табл. 2, равнялась 4,63%

В табл. 3 приведены результаты определения мочевины в сыворотке крови доноров, у которых наблюдались минимальные, средние и максимальные отклонения от величин, полученных но способу-прототипу в день забора крови, которые показывают, что ни одна из величин, полученных по описанному способу, не отличается от величин, полученных по способу-прототипу, более чем на

5%.

Формула изобретения

Способ определения мочевины в крови, включающий добавление к пробе крови 5%ного раствора трихлоруксусной кислоты, центрифугирование с последующим добавлением к надосадочной жидкости диацетилмонооксима 5,0 ммоль/л, .тиосемикарбазида 0,9 ммоль/л. соли трехвалентного железа 25.,0 мкмоль/л, серной кислоты

0,9 моль/л, затем инкубационную смесь нагревают в течение 10 мин на кипящей водяной бане, охлаждают и колориметрируют в кювете с толщиной рабочего слоя 10 мм при 490-540 нм, отличающийся тем, что, с целью повышения точности способа за счет стабилизации мочевины, предварительно к пробе добавляют 0,075%-ный водный раствор 9-фенантрилметилтрифенилфосфонийхлорида в соотношении 1:10 проба крови;реактив, 1774262

>«

Продолжение тэбл.i

О 0,01

0,075 0,1 0,15 0,25

1 0,010 0 02

Г

0,О25 0,05

О,З хранения проб

4,67 4,75 4,70 4,74 4,76 4,78 4,71 4,69 хранения

4,70 4,74 4,73 4,70 4,70 4,70 4,74 4,76

50 суток

4,76

0 64 э

2 02

2 21

«*

60 суток

4,76

0 18

«1

Об92 оду

75 суток

4,72

4,74 4,70

4,75 4,72 4,74 4,75 4,70 4,70

Оз62

0 64

0 04 вместо ФТФ к биологическим пробам приливали 1 мл дистиллированной воды и хранили их до 75 суток

- подчеркнуты показатели проб, в которых содерх>ание мочевины уменьшалось в процессе хранения

Примечание:

Таблица2

Показатели содерпания ночевины в мН/л в сыворотке крови (и 10) и,крови (и 10) доноров> полученные по предлагаемому способу и способу-прототипу (М щ ) Использованный способ определения ночевнны l кидкостей в сутках

Сроки хранения биологических

Л 1

Т" Т вЂ” - r- "««--« —20 30 (45 I 60 гtt

Сыворотка крови

По предлэгаеному способу M - m 6,6620,16

6,8600,34 6,37 0,30 6,34 0,32 6,97М,25

6>84t0 ° 3l 6,80- 0,31 6,45 0,27 6,76 0,19

6,35 0,25

2 отличим от показателей,полученных по способу-прототипу (6,5120,22 нН/л) >ббб

3,8 о,З

2,2 2>6

5,4

2,3

7,1

4,5

2,5

Сыворотка, хранивааяся без

ФТФ и - m 6,6620,16

6,27-0 ° 30 6,62 0,30. 6,61 0,28 5,01 -0,29 4,19- 0,78 3,79 0,90 3, !8-0,75 сыворотка рээлоэ>млась

23 36

2,3 1,5

Кровь

2,3

3,7

По предлагаемому способу маm 5,96 -0,2!

5,5320,20 5,73 О,!9 5,88 0,22

5,63"-0,23 6,20 -0,22 5,72 -0,22 5,68- 0,21 5,63 0,17 5,37t0,19 б отличия от показателей, полученных по способу"прототипу (5,83>0,23 им/л) фбббб

0,8

2,6 3,4 2,9

6,3 1,9

3,4

2,2

5,2

1,7

П р и и е ч а и и е>

+ - содеркание иочееины в пробах уменыэллось из-эа продопяительного их хранения.

++ - содеряание иочевины в сыворотке крови по способу-прототипу равнялось 6,5160,22 >>M/л и определялзсь в день забора сыворотки у доноров.

+++ - содеряание мочевнны в цельной крови по способу-прототипу рав яло 5> Зб ° 3 м сь 5 83бо 23 им/л и определялось в. день забора в крови у доноров.

+н+ - средняя величина 2 отличия 3,582. б+н-+ - средняя величина 2 отличия 3,552 п - количество доноров, е крови которых определялось содеряание иочевины, М - средняя величина, полученная путем статистической обработки, + m - средняя овибка средней величины

Т а б л и ц а 3

П тели содерхания мочевина (в им/л) в сыворотке крови доноров, у которых набподалнсь оказате од минимальные средние и наксималь е и наксимальные отклонения от величин, полученных по способу-про у в день забора крови (в таблице представлены результаты, выбранные нз группы, состоя>цей н 10 доноров

Срок >ц>знания сыворотки, сутки

° 1)>)0 1)10)1>!20 10)И(00,>

ХаРактер отклонений

Донор

5,77++

6,45б

5,27

Иининальмые Б.С.В.

Средние О.IO. И.

Максимальные В.Н.И. в строке указано содерювнле ночевины в мм/л. в строке указано отклонение в э от показателя, полученного mD способу-прототипу.

Прииечанме 2+

8 отличия от показателей,полученных по способу-прототипу (6,51(0,22 нН/л) 5,86

6,26

2,9+

5,52

4,7б

5, 74 5,80 5,86

0,5 0,5 1,6

6,15 6,38 6,80

4,7 2 0 5,4

5,04 5,52 5,52

4,4 4,7 4,7

5,86

1,6

6,78

5,0

5,52

4 ° 7

6,04

4,7

6,72

4,2.

5,52

4,7

5 ° 53

4,2

6,75

4,6

5,58

5;9

5,86 .5,50

1,6 4;7

6,18 6,78

4,2 9 ° 0

5,53 5,52

4,в 4.7

5,68.

1,6 2 ° 32

6,12

S,l 4,32

4 ° 99

5,3 4,92