Патент ссср 187243
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
Goes Ссветскив
Социалистические
Респу0лик
Зависимое от авт. свидетельства №
Кл. 30h, 6
Заявлено 11 V1.1963 (№ 842463/31-16) с присоединением заявки №
Приоритет
Опубликовано 11.Х.1966. Бюллетень № 20
Комитет по деламиаоорвтеииЯ N открытиЯ при Совете Министров
СССР
МПК А 611<
УДК 615 45 615779 925 (088.8) Дата опубликования описания 18.XI 1966
Авторы изобретения В. Н. Шапошников, И. Л. Работнова, A. Б. Силаев, М. Б. Куплетская, Т. П. Удалова, М. С. Филиппова, Т. M. Гуськова, М. В. Корноухова, P. H. Зеленева и Н. Я. Парамонов
Заявитель
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ КРИСТАЛЛИЧЕСКОГО ГРАМИЦИДИНА С
Известны способы получения кристаллического грамицидина С с помощью продуцента
Вас. brevis.
Указанные способы, предусматривающие ферментацию продуцента поверхностным методом (в матрацах) на среде сложного и неопределенного состава, не обеспечивают постоянного высокого выхода грамицидина С, трудоемки и связаны с большой затратой времени.
С целью повышения выхода антибиотика, упрощения процесса получения и сокращения его продолжительности, ферментацию продуцента осуществляют глубинным методом, с подачей воздуха около 0,25 — 1,0 объема на один объем среды в минуту.
Продуцент грамицидина переводят в споровое состояние на среде следующего состава (в % ): глюкоза 1,5, оксалат аммония
0,812, пищевая молочная кислота 0,8 (объемных), К2НРО4 0,2, поваренная соль 0,5, сульфат магния 0,02, рН 7,2.
Сохраняют культуру в виде высушенных спор в песке или пшене. Размножение ведут по среде следующего состава (в %): глицерин
2, пищевая молочная кислота 0,8 (объемных), оксалат аммония 0,812, КаНРО, 1%, поваренная соль 0,5, сульфат магния 0,02, кислотный гидролизат казеина из расчета 0,01 аминного азота и автолизата дрожжей из расчета 0,005 аминного азота, сначала в колбах емкостью
750 мл со 100 мл среды на качалке, а затем в ферментерах емкостью 45 л, снабженных мешалкой (400 об/мин).
Подают воздух путем обдувания поверхности среды (1 объем воздуха на 1 объем среды в 1 мин). Количество посевного материала
0,4 г/л (на сухой вес). Для посева используют молодую культуру, когда количество клеток достигает /2 — % от максимального.
Ферментацию ведут на среде следующего состава (в %): глицерин 3, пищевая молочная кислота 2,4 (объемных), оксалат аммония 1,2, К2НР04 1, поваренная соль 0,5, сульфат магния 0,02, кислотный гидролизат казеина 0,02 (на аминный азот), автолизат дрожжей 0,01 (на аминный азот), рН 7,2. На такой же среде можно выращивать продуцент и в столитровых ферментерах с 60 л среды при мешалке, делающей 200 об/мин и подаче воздуха через барботер в количестве 0,25 объема на объем среды в 1 мин. Длительность ферментации 36 час. Выход грамицидина 1—
2 г/л культуральной жидкости, Для выделения и очистки грамицидина С культуральную жидкость подкисляют соля. ной кислотой до рН 4,5, добавляют поварен. ную соль и выдерживают при 60 С в течение
30 мин. Биомассу отделяют на сепараторе, высушивают, размалывают и трижды экстра187243
Предмет изобретения
Составитель В. А. Таратута
Редактор А И. Пименова Текред А. А. Камышникова
Корректоры: В. В. Крылова и М. П, Ромашова
Заказ 3404/16 Тираж 525 Формат бум. 60+90 /з Обьем 0,13 изд. л. Г. одписное
ЦНИИПИ Комитета по делам изобре1еннй и открытий при Совете Министров СССР
Москва, Центр, пр. Серова, д. 4
Типография, пр. Сапунова, 2 гируют этиловым спиртом, Экстракт подкисляют соляной кислотой до рН 3,5, добавляют
10 — 15% активированного угля, перемешивают 1 час и отделяют уголь. Очищенный экстракт упаривают два раза, предварительно нейтрализуя мелом, добавляют поваренную соль до начала выпадения грамицидина, выдерживают 1 час и разбавляют равным количеством воды, Выпавшие кристаллы грамицидина перекристаллизовывают из спирта. Выход 90% от содержания грамицидина в культур алькой жидкости.
Способ получения кристаллического грамицидина С с помощью продуцента Вас. Ьгейз, отличающийся тем, что, с целью повышения выхода антибиотика, упрощения процесса получения и сокращения его продолжительности, ферментацию продуцента ведут глубинТ0 ным методом с подачей воздуха 0,25 — 1,0 объема на 1 объем среды в 1 мин.
