Штамм культивируемых клеток растений ungernia viстоris - продуцент алкалоидов группы галантамина и ликорина

 

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (si>s С 12 N 5/04

ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОЕ

ВЕДОМСТВО СССР (ГОСПАТЕНТ СССР) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ПАТЕНТУ

10,520 — 10,720

22,20 — 22,40 (21) 4916984/13 (22) 21,12.90 (46) 30.03,93, Бюл. N 12 (76) И,В.Александрова, И.К,Гордонова, B,Г.Тулакин, П.Д.Усманов и П,М.Соложенкин (56) Муравьева Д.А. Фармакогнозия. М.; Медицина, 1978, с. 363-366.

Изобретение относится к биотехнологии, а именно к получению на основе метода изолированных культур клеток растений ценного растительного сырья, содержащего биологически активные вещества, необходимые для медицинской, пищевой и косметической промышленности.

Цель изобретения — получение штамма культивируемых клеток Ungernia victoris (Vved), обладающего способностью продуцировать алкалоиды группы галантамина и ликорина.

Исходным материалом для получения каллусной ткани служила базальная часть внутренних луковичных чешуй унгернии

Виктора (популяция Гусгарф, высота 2000 м над уровнем моря), Штамм У-1 депонирован в коллекции культивируемых клеток высших растений в

Институте физиологии растений АН СССР.

Коллекционный номер штамма 39, Каллусная ткань. средней плотности, от кремового до светло-коричневого цвета, ростовой индекс 5-9, число живых клеток 90+

1%.

Каллусная ткань выращивается при температуре 26й1 С, влажности 65-70% в тем„„5U„„ 1806188 АЗ (54) ШТАММ КУЛЬТИВИРУЕМЫХ КЛЕТОК

РАСТЕНИЙ UNGERNIA VICTOR IS — ПРОДУЦЕНТ АЛКАЛОИДОВ ГРУППЫ ГАЛАНТА,МИНА И ЛИКОРИНА (57) Использование: биотехнология, медицина. Сущность изобретения: получен штамм культивируемых клеток растения

Ungernia victoris, являющийся продуцентом алкалоидов группы галантамина и ликорина, 1 l4/l. ноте на агаризованной питательной среде в течение 30 — 40 суток, Состав питательной среды, мг/л.

МН4ЙОЗ 1640,0-1660,0

КИОз 1890,0-1950,0

CaClz 2Hz0 440,0 — 460,0 или

CaCIz.6Hz0 640,0-660,0

MgSO4 7Hz0 360,0 — 380,0 или

Mg S04 б/в 180,0-184,0

КН2РО4 б/в 160,0 — 180,0

НЗВОЗ 6,10 — 6.30

Zn S04 4Н20 8,50 — 8,70 или

Zn S04 7Íz0

Мп S04 4Н20 или

MnS04 5Hz0 24,00 — 24,20

Kl 0,82 — 0,84

NazMo04.2Hz0 0,24-0,26 или йа2Мо04 б/а 0.20-0,22

СиЯ04 5Н20 0,024 — 0,026

CoClz 6Н20 0,024 — 0,026

Трилон Б 37,365 — 37,385

FeS04.7Н20 27,75 — 27,95

1806188

1,0

2,0

75,0-85,0

Кинетин а-НУК

Мезоинозит

Гидролиээт казеина 500,0

Тиамин-хлорид 0,3-0 5

Аскорбиновая кислота ., 0.9-1, 1

Пиридоксин хлорид 0,9-1,1

Никотиновая кислота 0,9-1,1

I=Тирозин 1,8 — 2,2

Сахароза 29000,0 — 31000,0

Агар 6000,0-8000,0

НгО До 1л рн 5,8-6,2

Сосуды для выращивания и обьем питательной среды в них: банки для расфасовки сметаны объемом

200 мл, содержащие 50 — 60 мл среды или пробирки большие биологические 210х20, объем среды 20 мл, кратность рассевэ: 5 — 9.

Цитологическая характеристика, Каллусные клетки паренхимного типа, диаметр клеток 80-300 мкм, средний диаметр 184,3 мкм. Средний диаметр ядер 13,2 мкм. Ядерно-плазменное отношение

0,0850, Митотическая активность 607, в начале фазы стационарного роста, Кариологическая характеристика.

Пределы варьирования по числу хромосом, модальный класс 18 — 24; 22.

Размеры хромосом: 1-ая пара хромосом

19,2 мкм, XII-ая пара 7,8 мкм, IV-эя и Vl-ая пары хромосом содержат спутники.

Маркерные признаки: а) содержание гэлантамина — 6,67,, ликорина — 58 ь; нарведина — 6,27 от суммы алкалоидов б) электрофоретический спектр неспецифических эстераз — 14 изоформ (чертеж). в) IV u Vl пары хромосом имеют спутники; г) свечение каллусной ткани в УФ.

Способность к морфогенезу пониженная.

Штамм культивированных клеток

Ungernla vlctorls (Vved) V-1 N 39 является продуцентом алкалоидов группы галантамина и ликорина.

Алкалоидный состав изучали методами: цитохимическим, люминесценции, тонкослойной хроматографии, УФ-спектроскопии. Люминесцентный анализ показал, что ткань обладает слабым свечением, Цитохимическое исследование клеток унгернии показало наличие положительных реакций на общеосадочные реактивы алкалоидов, Тонкослойная хроматография и спектроскопия выявили наличие алкалоидов в количестве

0,04-0,06 ..

Для хранения штамма используют метод пересевов (продолжительность цикла выращивания — 30-40 суток), Пример 1, 5 Инокулятный материал в количестве

0,20 r помещают в большую биологическую пробирку с 20 мл питательной среды следующего состава, мг.л:

NHpHOs 1650,0

КЙОз 1920,0

СаС1г 2НгО 450,0

Mg SO4.7Í20 370,0

КНгР04 б/в 170,0

НзВОз 6,20

15 ZnSOp 4нгО 8,60

MnSO4 4НгО 22,30

Kl 0,83

НагМо04 2НгО 0,25

CuSO4 5НгО 0,025

СоСlг 6НгО 0,025

Трилон Б 37,375

FeS0< 7НгО 27,85

Кинетин 1,0

rt -НУК 2,0

Мезоиноэит 80,0

Гидролизат казеина 500,0

Тиамин-хлорид 0,4

Аскорбиновая кислота 1,0

Пиридоксин 1,0

Никотиновэя кислота 1,0

L-Тироэин 2,0

Сахароза 30000,0

Агар 7000,0

Нг0 до 1 л

35 рН 6,0

Выращивают 36 суток при t=24 — 26 С в темноте. Вес полученной биомассы составляет 1,74 r (87 г/л), сухой вес 0,1148 г (5 г/л), Суммарная алкалоидная фракция 0,042$ от

40 cyxoro scca

Пример 2. Инокулятный материал в количестве 1,0 г помещают в банку для расфасовки сметаны с 50 мл питательной среды. Выращивают в условиях по примеру 1 в

45 течение 31 суток, Вес снятой сырой биомассы 6,3 r (126 г/n), сухой вес 0,4914 r (9,8 г/л), Суммарная алкалоидная фракция 0,051 от сухого веса, Заявляемый штамм является первым для культивируемых клеток Ungernla Vlctorls (Vved) семейства Amaryllidaceae перспективен для выращивания в промышленных условиях с последующим получением из него биологически активного препарата медицинского назначения.

Формула изобретения

Штамм культивируемых клеток растений

Ungern1a v1ctorls ВСКК вЂ” ВР N. 39 — продуцент алкалоидов группы галантамина и ликорина.

1806188

EmdP

Составитель И. Александрова

Техред M.Moðãåíòàë Корректор Н, Милюкова

Редактор

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101

Заказ 965 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5