Штамм вируса baculovirus роlyнеdrоsis lохоsтеgе sтiстiсаlis l. для получения препарата против лугового мотылька

 

союз советских

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

ГЯСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОЕ

ВЕДОМСТВО СССР (Г()CflATEHT СССР) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ПАТЕНТУ.! 4TEITH6 ТЦцр ц -,! . 1г..Р.. . 1Т (21) 4903301/13 (22) 21.01 91 (46) 23.08.93. Бюл.М 31 (7 t) Сибирский научно-исследовательский институт земледелия и химизации сельского хозяйства Научно-и роизводствен ного объединения "Земледелие" (7P) М.В.Штерншис, Н,И.Ермакова, А.Б.Фефилактова (7 ) М.В.Штерншис, H.È,Åðìàêîâà (56) Интегрированная защита растений от вредителей. Новосибирск. 1987, с.65-70. (54) ШТАММ ВИРУСА,. BACULOVt BUS

РО УНЕОЯО$! Я LOXOSTEGE STtCTtCALIS (..

ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ ПРЕПАРАТА ПРОТИВ

ЛУГОВОГО МОТЫЛЬКА (57) Использование: микробиологическая промышленность, производство микробиолОгических средств защиты растений от

Изобретение относится к микробиологии, в частности к производству микробиологических средств защиты растений от вредных чешуекрылых насекомых.

Целью изобретения является получение штамма энтомопатоге нного вируса

Bacutovlrus Potyhedrosts Loxoste9e

sticttcatis L., обладающего высокой стабильностью инфекционных свойств против лугоsqro мотылька, действующего на гусениц лугового мотылька любого возраста.

Поставленная цель достигается тем, что известную природную популяцию ВЯП лугового мотылька пассируют (проводят 5 — 8 последовательных заражений гусениц 3 возраста лабораторной культуры лугового

„., SJ „„1836005 ÀÇ (51)5 А 01 N 63/00, С 12 N 7/00 вредных чешуекрылых насекомых, и касается получения нового штамма вируса для производства препарата против лугового мотылька. Сущность изобретения; штамм вируса t3acutovirus potyhedrosts Loxostege

stictlcatis L выделен из трупов гусениц насекомых, погибших от полиэдроза. Депонирован в коллекции ВИЗР под И 12, Для приготовления энтол1опатоген ного ппепарата на основе вышеуказанного штамма готовят водную суспенэию полэдров, содержащую выше 1,28 10 пол/мл, затем заражают гусениц лугового мотылька и выдерживают до их гибели. Эффективность препарата 50 — 100 достигается при титре випуснои инфекции У.2б 1О"-1 10 пол/мл. 2 табл.

I ! мотылька) через гусениц лугового мотылька.: (A

I .

Для этого отбирают гусениц через 24 часа после линьки на 3 возраст(вес 8,35 4- 1,2 мг), С) выдерживают без корма в течение 18-24 часа, чтобы KIIIUQltlllK полностью осеобо- лЛ

Оилсл от пищи..Затем е чашку Петри помещают 15 гусениц лугового мотылька и прецлагают им 1 г искуct:TaeilHol0 корма. Гид смешанного с 0,3 мл рабочей суспензии

ВЯП с титром 1 l0 пол/ллл. Чашки с гусе- ницами ставят в термостат, где поддерживают температуру 26 + 2 С и освещенность! G часов. Через 24 часа в чашках Патри меняют корм. Гибель насеко лых, как правило, начинается на 4 — 5 сутки после инфицирования.

1836005

Погибших насекомых микроскопируют для установления причины гибели.

Для выделения ВЯП лугового мотылька к трупам гусениц насекомых, погибших от полиэдроза добавляют водопроводную воду в соотношении 1:2 и помещают в термостат при температуре 30 С на 6-7 дней. За это время происходит активное бактериальное разложение остатков тканей насекомого и освобождение полиэдров. После этого трупы гусениц тщательно измельчают в гомогенизаторе, разводят в 2 раза водой и фильтруют через 4 слоя марли. Полученный фильтрат центрифугируют 4-5 раз при 3000 об/мин 20 мин для очистки вирусных включений от тканевого детрита, Полученный осадок состоит из полиэдров, Экспериментальный штамм ВЯП лугового мотылька хранится в форме леофилизированпого порошка в запаянных ампулах у авторов и в коллекции депонированных вирусных штаммов Всесоюзного научно-исследовательского института защиты растений под

М 12, Предложенный штамм энтомопатогенного вируса имеет следующие морфологические и физико-биохимические признаки.

Белковые включения (полиэдры) вируса в основном треугольной формы. Размер полиэдров 1,2 0,18-2,1 +0,23 мк. Внутри полиэдров содержится до 360 виринов палочковидной формы размеров

246+ 14х51 3 нм, Молекулярная масса

ДНК 70. 10 дальтонов.

Вирус ядерного полиэдроза лугового мотылька размножается на живых насекомых (гусеницы лугового мотылька) в условиях, подходящих для развития насекомого-хозяина.

Экспериментальный штамм ВЯП лугового мотылька активен против гусениц лугового мотылька любого возраста при заражении суспензией попиэдров с титром

1,28.10" пол/мл и выше, Биологическая эффективность ВЯП от 50% (титр суспензии

1,28.10 пол/мл) до 100 (титр суспензии

1,5,10 пол/мп).

Пример конкретного использования экспериментального штамма.

Штамм вируса ядерного полиэдроза используют для заражения от 1,10 до 1,10 8 пол/мл, добавляют в искусственный корм в количестве 0,3 мл на 1 г искусственной питательной среды (ИПС), которую скармливают гусеницам лугового мотылька 3 возраста.

Гусениц содержат в чашках Петри по 15 штук в каждой чашке с 1 г ИПС, Для каждой концентрации вируса берут пять повторностей. После поедания зараженного корма (через 24 часа) гусеницам лугового мотылька дают чистый корм (ИПС). Гусеницу считают погибшей от полиэдроза, если в ее тканях при микроскопировании обнаруживают попиэдры. Гибель насекомых фиксировали в течение 10 суток, Результаты опыта представлены в табл.1.

Далее определяют ЛК8о по формуле: !

9ЛК8о = !9См — а(Х 1-0,5), где

"О См — максимальная из испытанных концентраций а- логарифм кратности разведения суспечэии

LI — гибель гусениц в долях смертности, вычисляемвя по формуле

По Пк — 1,,! П, где

К

По количество мертвых гусениц в опыте ! — концентрация (сумма 5 повторностей) шт, П, — количество мертвых гусениц в кон25 тропе, шт.

N — количество тест-гусениц, испытанных в 5 повторностях (равно 75) шт, В приведенном примере !

9Л К8о=!910 — !910(1+0,973+0,853+

30 +0346+0226 05)=8 2 898 ! сцЛ К5о Ф5,102

Л Кем=1,28.10 пол/мл

Опыты показывают, что ВЯП лугового мотылька патогенен для гусениц лугового мотылька ЛК88 равна 1,28,10 пол/мл.

Определение энтомопатогенной активности ВЯП лугового мотылька проводят путем скармливания гусеницам 3 возраста

ИПС с добавлением водной суспензии полиэдров лугового мотылька, содержащей от

1. 10 до 1.10 пол/мл на корм помещают гусениц, Насекомых содержат по 15 в чашках Петри с ИПС, Через 24 часа гусеницам меняют корм и далее кормят чистым кормом. Учет погибших насекомых проводят ежесуточно в течение 15 суток. Погибших личинок микроскопируют для установления причины гибели.

Подсчет попиэдров в водной взвеси

50 (титр вирусной суспензии) осуществляют в камере Горяева, Установлено, что при концентрации полиэдров в суспензии от 1,28,10 в мл и выше гибнет 50 — 100;(, гусениц лугового мотылька..

Для приготовления энтомопатогенного препарата на основе предложенного вируса готовят водную суспензию полиэдров, содержащую выше 1 28 10 пол/мл. Титр полиэдров в суспензии подсчитывают с

1836005

Таблица 1

Результаты заражения гусениц лугового мотылька 3 возраста ВЯП лугового мотылька (экспериментальный штамм) памощьо камеры Горяева. Для получения массы полиэдров, гусениц лугового мотылька заражают суспензией полиэдров с титрам 1,28.10 пол/мл и выше в лабораторных ус ловиях при температуре 26ч-2 С.

По данным смертности определяют величины ЛК50.

Для природного штамма ВЯП лугового мотылька

1gЛK5o (1g10 — lg10)0,68+0,653+

+0,453+0,4+0,386-0,5)=5,928

ЛК5о=0,85.10 пол/мл, Предложенный штамм активен против гусениц лугового мотылька любого возраста при пероральном заражении суспензией полиэдров с титром 1,28.10 пол/мл и выше.

5 5 Биологическая эффективность от 50 до

100 достигается при титре вирусной суспензии 1,28.10 до 1.10 пол/мл, Формула изобретения

Штамм вируса Baculovlrus Polyhedrosis

10 Loxostege sticticalis 1 ВИЗР М 12 для получения препарата против лугового мотылька.

1836005

Таблица 2

Составитель Г. Солдатова

Техред М. Моргентал Корректор M. Керецман

Редактор

Заказ 2987 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101

Гибель гусениц лугового мотылька 3 возраста. 10 суток после заражения (по повторностям)