Способ моделирования вич-инфекции

 

Изобретение относится к области медицины . Целью изобретения является получение экспериментальной модели инфекционного процесса, вызываемого ВИЧ, на мелких лабораторных животных. Сущность изобретения состоит в приближении к клиническому течению заболевания за счет персистенции вируса иммунодефицита человека в лимфоцитах крови, паренхиматозных органах. ЦНС лабораторных животных путем введения вируса внутрь берцовой кости . Изобретения может быть использовано при изучении патогенеза СПИД и при разработке новых методов диагностики и лечения заболевания.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (я)5 G 09 B 23/28

ННОЕ ПАТЕНТНОЕ

CCP

СР) АНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

1 Г(ОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

21) 4899623/14

22) 04.01.91

46) 30.08.93. Бюл.N 32

71) Институт вирусологии им.Д;И.Ивановкого

72) А,Г.Коломиец, М,M.Ãàðàåâ, Н.Д.Коломиц, В,И.Вотяков и Г.П.Добойская, Т.B,Ñàицкая, А.А.Ржанинова, В.Ф.Еремин

С.А, Попов

6) Fransgenic mouse models amerging tools

r AIDS research/Curr, Comments: Newslen.

iscovery and Innovat, 1989, 3, М 1, р,4.

4) СПОСОБ МОДЕЛИРОВАНИЯ ВИЧ-ИНЕКЦИИ

1, Изобретение относится к области медиины и может быть использовано для изучеия патогенеэа СПИД и разработки новых етодов диагностики и лечения заболеваия.

Целью изобретения является приблиение к клиническому течению заболевания а счет персистенции вируса в лимфоцитах рови, паренхиматоэных органов, ЦНС. ель достигается путем введения вируса в остный мозг.

Известно, что в организме человека

ИЧ. поражает Т-лимфоциты, поэтому ввеение его в орган, где формируются В-лимоциты не должно было бы приводить к аэвитию патологического процесса, В проивоположность этому, у животных неожианно развивается качественно новый атологический процесс, заключающийся в фформировании ВИЧ-инфекции и заболева, что является неожиданным. Таких данх в литературе нет.

„„ЯЦ„„1837355 А1 (57) Изобретение относится к области медицины. Целью изобретения является получение экспериментальной модели инфекционного процесса, вызываемого ВИЧ, на . мелких лабораторных животных. Сущность изобретения состоит в приближении к клиническому течению заболевания эа счет персистенции вируса иммунодефицита человека в лимфоцитах крови, паренхиматозных органах, ЦНС лабораторных животных путем введения вируса внутрь берцовой кости, Изобретения может быть использовано при изучении патогенеза СПИД и при разработке новых методов диагностики и лечения заболевания.

Сущность способа заключается в следующей последовательности операций:

1. Животное фиксируют.

2. Волосяной покров в области бедра дезинфицируют.

3. Вируссодержащий материал вводят шприцем в берцовую кость.

П р и м e p 1. 5 морских свинок массой

150-200 г были заражены в трубчатые (берцовую) кость концентрированным образом

ВИЧ 1 штамма ZMB с содержанием белка

5,3 мг/мл в дозе 0,1 мл. Через 2 месяца у двоих животных отмечено снижение массы, потускнение волосяного покрова, адинамия. Через 7 дней одно из пало, Животное

М2 погибло через 23 дня после первых клинических проявлений, при этом потеря в массе по сравнению с контролем составила

28 . Животное М 3 погибло без каких-либо клинических проявлений заболевания через

3,7 месяца после заражения, Животные М 4 и М 5 наблюдались 6 месяцев без клиниче1837355 тные оставались здоровыми. При вирусологическом исследовании никаких признаков

ВИЧ инфекции не выявлено.

Как видно из примеров 1-3 у животных после заражения их ВИЧ в берцовую кость

25 развивается ВИЧ-инфекция, которая сопровождается образованием антител, диссеминацией вируса во все органы и ткани и на последнем этапе клинической манифестацией, Таким образом, в результате пред30 ложенного способа удалось получить экспериментальную модель инфекционного процесса ВИЧ на мелких лабораторных животных. Эта модель может быть использована для изучения патогенеза СПИД и разработки методов диагностики и лечения.

Формула изобретения

Способ моделирования ВИЧ-инфекции путем заражения лабораторных животных, отличающийся тем, что, с целью приближения к клиническому течению заболевания за счет персистенции вируса в лимфоцитах крови, паренхимотозных органах, ЦНС заражение осуществляют введением инфицированного материала внутрь берцовой кости.

Составитель А, Ржанинова

Техред М.Моргентал Корректор С. Лисина

Редактор

Заказ 2869 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного. комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул,Гагарина, 101 нических проявлений заболеваний. На вскрытии у свинки No 1 отмечено увеличение селезенки и лимфоузлов; М 2 — увеличение селезенки и пневмония; N. 3 — увеличение брыжеечных лимфоуэлов, М 4 и N 5 — изменений,не выявлено. При исследовании сывороток на наличие антител к ВИЧ в

-иммуноблотинге выявлены антитела к следующим белкам ВИЧ вЂ” М 1, 2 — gp120, р55/53, р24- р17: N. 3 — gp120, р55/53, р24;

N. 4 — р66, р55/53, р24; N. 5 — р66, р24; N.. 6— р24. При помощи цепной полимеразной реакЦии (PCR) с праймерами 816, 817 и 818, 819 показано наличие интеграции генома

ВИЧ 1 в ДНК лимфоцитов крови животных

М 1; 2, 3, 4. При патоморфологическом исследовании в головном и спинном мозге— выраженная пролиферация макроглии, дегенеративные изменения в нейронах и их частичная гибель, образование многоядерных клеток. Периваскулярная инфильтрация лимфоидными клетками, микроглиальные узелки (N. 1, 2, 3). В селезенке — образование периартериальных фолликулов (N- 1, 2, 3, 4), В лимфатических узлах — атрофия фолликулов с истощением паракортикальной зоны (N. 1, 2, 3, 4). В печени — - дистрофия гепатоцитов, периваскулярная инфильтрация (N 1, 2, 3).

Заключение: результаты серологического, молекулярно-биологического и морфологического исследований свидетельствуют о наличии у животных N. 1, 2, 3, 4 ВИЧ-инфекции.

Пример 2, Три морских свинки массой

120-150 граммов были заражены, как описано в примере 1, Через 2,8 месяца у животного N. 1 отмечено резкое похудание (потеря в массе 20 ), развитие адинамии, спустя 3 дня свинка погибла при наличии пневмонии. Оставшиеся два животных по. гибли через 4, 5,5 месяца после заражения от истощения и развития пневмонии. Антитела в сыворотках крови были обнаружены у всех 3 животных к белкам gp120, р66, р55/53, р24. Методом PCR геном ВИЧ в

ДНК лимфоцитов обнаружен у животных N.

1 и N 3, в клетках селезенки у морской свинки N -2. Морфологические изменения соответствовали описанным в примере N. 1.

Заключение: у всех животных этой группы установлено наличие ВИЧ-инфекции.

Пример 3. Три морских свинки, массой 100-200 г были заражены, как описано .

s примере М 1, через 1 6 месяца животное

N- 1 погибло от диспепсии, Животное М 2

10 погибло через 3,7 месяца после заражения от пневмонии. Животное М 3 оставалось клинически здоровым в течение всего периода наблюдения (6 мес.), Присутствие гена

ВИЧ в ДНК клеток почки и селезенки отме15 чена у морских свинок М 1 и 2.

Пример 4. Пяти морским свинкам, массой 150 — 200 г как описано в примере N.

1 было введено плацебо (неинфицированные ВИЧ клетки и тимоген). На протяжении

20 всего периода наблюдения (8 мес.) живо