Способ радиоиммунологического определения антител к поверхностному антигену вируса гепатита в.

 

1839710

Здесь А — сигнал при избыточной концентрации в положительном образце, В— уровень неспецифической фоновой активности, Параллельно провбдят анализ согласно 5 инструкции по применению набора реактивов для радиоиммунологического анализа антител к поверхностному антигену гепатита В с использованием радионуклида 12 t (РИА-анти-HBs- l). Результаты, получен125 ные при проведении анализа в таком режиме, дают значение отношения А!В, равное

149.

Таким образом, увеличение отношения

А/В в предлагаемом способе по сравнению с прототипом говорит об увеличении

15 качества работы тест-системы и запаса

Пример 2. Извлекают флаконы с положительными и отрицательными контрольными образцами анти-HBs и пробирки из коробки, выдерживают 30-40 мин при

18-25 С. Пробирки нумеруют (1-3) — для положительного контрольного образца, (4-10) — для отрицательного контрольного образца, (11-42) — для исследуемых образцов, устанавливают пробирки в штатив.

Вскрывают флаконы. Готовят разведения

30 положительного контрольного образца в

1000,2000,4000,8000, 16000,32000, 128000, 256000 раз.

В пронумерованные пробирки с помощью пипетки вносят реактивы: в пробирки 1-3 — положительный контрольный образец, в пробирки 4-10 — отрицательный контрольный образец, в пробирки 11-12— положительный контрольный образец, разведенный в 1000 раэ, 13 — 14 — разведенный в 2000 раз и т.д. по две пробирки на каждое разведение по 0,1 мл.

Закрывают пробирки полиэтиленовой пленкой, которую закрепляют тонким резиновым кольцом. Далее анализ проводят следуя примеру 1 до стадии определения значения отношения А/В.

Определяют нижнюю границу положительных результатов по формуле

50

N, -2,,1 В+йф, 2.1х111+240,8-4739

Параллельно проводят анализ с аналогичными разведениями положительного контрольного образца согласно инструкции по применению набора реактивов для радиоиммунологического анализа антител к поверхностному антигену гепатита В с использованием радионуклида 12 I {РИА-анпрочности набора реактивов. При этом значительно уменьшается время на проведение анализа. 20 ти-HBs- i), обработка полученных рвзуль12S татов была проведена согласно этой инструкции.

Сравнение полученных результатов приведено в табл, 1.

Из данных табл, 1 следует, что предлагаемый способ позволяет увеличигь чувствительность тест-системы в 2-4 раза по сравнению с прототипом.

Пример 3. Анализ осуществляют, как описано выше, при этом первую инкубацию проводят на Water bath shaker type 357 с различными значениями частоты. амплитуды и времени инкубации. Вторую инкубацию проводят согласно прототипу;

Полученные результаты представлены в табл, 2, сравнение проводят по отношению значений А/В.

Таким образом, значения частоты перемешивания 300-350 об/мин, амплитуды 3-4 см и времени первой инкубации 2-2,5 ч позволяет достигнуть максимального значения отношения А/В, которое является критерием выбора как качественный показатель.

Пример 4. Анализ проводят, как описано выше, до стадии второй инкубации.

Вторую инкубацию проводят на Water bath

shaker type 357 с различными значениями частоты, амплитуды и времени инкубации, Полученные результаты представлены в табл. 3, сравнение проводят по отношению значений А/В.

Таким образом, значения частоты перемешивания 300-350 об/мин, амплитуды

3-4 см и времени второй инкубации 1-1,5 ч позволяют достигнуть максимального значения отношения А/В, которое является критерием выбора как качественный показатель.

Итак, использование перемешивания при проведении первой инкубации контрольных и исследуемых образцов позволяет сократить время инкубации до 2-2,5 ч вместо 12-16 по прототипу, а использование перемешивания при проведении второй инкубации с меченным 125I поверхностным BHTMceHOMwpyca гепатита В сократило время инкубации до 1-1,5 ч {по прототипу

4-6 ч); При этом чувствительность тест-системы увеличилась в 2-4 раза по сравнению с прототипом.

{56) Инструкция по применению набора реактивов для радиоиммунологического анализа антител к поверхностному антигену вируса гепатита В с использованием рационуклида {РИА-АНТИ-HB s-1251). Уз НИИНТИ, Ташкент, 1990.