Штамм гриба asperg3llus oryzae 8п

 

Союз Советских

Социалистических

Республик

Зависимое от авт. свидетельства ¹

Кл. 6а, 14

Заявлено 19.VI 1.1966 (¹ 1091722/28-13) с присоединением заявки №

МПК C 12k

Приоритет

Опубликовано 28.!Х.1967. Бюллетень М 21

Дата опубликования описания 25,XII.1967

Комитет по делам изобретений и открытий при Совете Министров

СССР

УДК 663 11:576 8 093 1 (088.8) Авторы изобретения

Д. Я. Типограф, иностранец Леван Ньенг (Демократическая Республика Вьетнам), 1!. И. Чипизубова, Л. Е. Михайлова, A. И. Веселов и И. М. Грачева

Московский технологический институт пищевой промышленности

Заявитель!

ИТАММ ГРИБА ASPERGILLUS ORYZAE 8f1

Известны штаммы грибов Aspergillus oryzae, например Aspergillus oryzae КС, используемый в спиртовом производстве для осахаривания вместо солода. Этот штамм обладает активной сс-амилазой, но содержит недостаточное количество протеолитических ферментов, поэтому его .применяют в смеси со штаммом гриба Aspergillus аь amori 22, который имеет высокую декстринолитическую и мальтазную активность.

Предлагаемый штамм Asperglillus oryzae

8f1 отличается быстрым ростом и способностью образовывать активные амилолитическне и протеолитические ферменты, сочетание которых необходимо для полного осахаривания крахмала и гидролиза белковых веществ сырья. Это позголит применить в спиртовом производстве одну культуру гриба Aspergillus

oryzae 8f1, вместо применяющейся в настоящее время смеси вышеописанных культур, одна из которых образует нужный комплекс амилолитических ферментов, а вторая служит источником протеазы.

Штамм Aspergillus oryzae 8f1 имеет следующую характеристику.

М о р ф о л о г и я. Конидиеносцы без перегородок, бесцветные, с возрастом приобретают легкий коричневатый оттенок. Большей частью гладкие, на некоторых имеются редко расположенные небольшие вмятины или очень маленькue пологие бугорки. Конидиеносцы в длину достигают 194 — 350 лк и в поперечнике

8,3 — 10,1 лк.

Пузыревидные вздутия имеют шаровиднуо

5 или слегка удлиненную форму 15,4 — 27,02 (Р,13,2 — 27,02 лтк. Стеригмы однослойные, удлиненные, цилиндрические, на некоторых нузыревидных вздутиях они слегка расширенные или даже клиновидные 11,6:к4,6 5,8 .як.

10 Чаще стеригмы расположены на верхней части пузыря. Конидии шаровидные с гладкой оболочкой, их диаметр варьирует от 3,8 до

11,58 лк.

Конидиальные головки шаровидные или

15 слегка удлиненные 22 — 48;- 22 — 44 лск.

Гифы бесцветные, в поперечнике они имеют от 3,96 до 7,92 .чк, иногда они колбовидно утолщeны 8,8 us;.

На синтетической среде Чапека на третьи

20 сутки после посева диаметр колонии B среднем достигает 3,9 с,я и спорообразующей зоны 3,4 сл. Колонии бархатистые, в центре слегка клочковатые, ближе к периферии оии становятся желтоватыми. Преобладают зеле25 ныс тона. Обратная сторона колонии беловаТаН.

Иа сусло-агаре (7 Баллинга) па третьи сутки диаметр колонии достигает 4,5 с я и спорообразующей зоны 4,0 сл. Б центре рас30 положены колонии выпуклые с более высоким

203601

ПС (по Вильштетеру) Ед./г або. сухой культуры дс мс на рисовых отрубях на пшеничных отрубях

Штамм гриба

AC на пшеничных отрубях

АС на рисовых отрубях на пшеничных отрубях рн 7,88 рН 4,48 рН 449 рН 7,88

Asperglllus oryzae

8f 1.

AspergIllus oryzae

КС .

Aspe rglllus

awamorl 22

76,4

34, 84

1100

550

26,17

29,2

23,2

28,3

72,7

477,2

28,4

8,85

14,5

858,3

126,2

45 мицелием, чем по краю. Они окрашены а

EI4eJIToBaTo-зеленоватый IIBe r c IIpeoo fa afff4e> желтоватых тонов. Обратная сторона колонии бесцветная.

На агаризованном 409-ном отваре солодовых ростков на третьи сутки диаметр колонии достигает 3,.0 сл и спорообразующей зоны

2,7 сл. Колонии пушистые, выпуклые, покрытые довольно высоким мицелием. В центре они желтов"òûå,,осталь,ная часть колонии беловатая. Обратная сторона их бесцветная.

На пшеничных отрубях (без принудительной аэрации), слой которых р-âåí 1,,5 — 2,0 сл, в колбах к 30 час культивирования превращаются в плотный корж, полностью прорастающий мицелием. Спорообразование начинается к 36 час, к 48 час становится обильным.

На рисовых отрубях (65%) и рисовой шелухе (35%) к 35 час образуется плотный корж, спорообразование начинается к 35 час роста, обильным оно становится к 42 час.

Отношение к сахарам. Интенсивно окисляет глюкозу, мальтозу, сахарозу, ксилозу, сорбит, слабее — галактозу, рафинозу, декстрин и манпит и очень слабо — галактозу н рабинозу. Газообразование наблюдается только на среде с сахарозой.

Штамм Лspergillus oryzae 8f1 сильно гидролизует крахмал, разжижает желатипу и пеитонизирует молоко. Оптимальная температура роста штамма 30 С, его оптимальная влажность 55% и оптимальное значение pll 6,0--6,5.

Ферментативная активность культуры Aspergillus oryzae 8f1 (при лабораторных условиях культивирования) в сравнении с ферментативной активностью культур Aspergi!lus

oryzae КС и Aspergillus a vamori дана в таблице.

Из данных таблицы видно, что штамм AspergtiIIus oryzae 8fl обладает большими активностями как амилазными, так и протеазными, чем Aspergillus oryzae КС и Aspergillus awamori 22.

При получении посевной культуры Aspergillus oryzae 8f1 в лабораторных условиях трехсуточную культуру гриба, выращенную на косом сусловом агаре, пересевают на стерильные пшеничные отруби с влажностью 45—

50% . Через сутки культивирования при 30оС отруби покрываются обильным мицелием, а через двое — вся толща отрубей пронизывается светло-зелеными спорами. Через сутки роста гриба среда становится очень рыхлой и подвижной, превращаясь в пыль.

2 — 3-суточную культуру из колб пересевают в посевные кюветы на отруби, влажность которых составляет 40 — 45%, толщина слоя 1—

1,5 сл, температура культивирования 30 С.

Интенсивное спорообразование начинается после 24 час роста. Через 48 час роста вся толща среды пронизывается спорами, среда подсыхает, начинает крошиться. Такой споровый материал имеет Efa 1 г 700 — 750 млн. спор.

При более длительном культивировании (65—

72 час) происходит полное видоизменение спорового материала. Последний при легком встряхивании превращается в сильно пылящий порошок, содержащий до 1 — 1,5 млрд. спор на 1 г, Полученный посевной материал обладает большей сыпучестью и рыхлостьч, чем посевной материал Aspergil!us oryzae КС и Aspergil!us av amori 22, и служит для получения производственной культуры.

Выращивание последней осуществляют:a пшеничных простерилизованных отрубях, увлажненных стерильной водой до влажности

60 — 61%. Количество посевного материала берут из расчета 0,03 — 0,04% к весу отрубей.

Выращивают гриб Aspergtillus oryzae 8f1 в производственных растнльных камерах, емкость которых равна 250 — 300 кг по сухим отрубям. В первы- 8 — 10 час в каждой камере поддерживают температуру 32 С и относительную влажность воздуха 85 — 90%. В этот период споры набухают. К концу периода появляется первый мицелий.

Во второи период (последующие 8 — 10 час) происходит обильный рост .мицелия If интенсивное выделение тепла. Температуру в камере в этот период поддерживают в пределах

25 — 27 С и относительную влажность воздуха

100%.

Через 20 час роста вся толща среды прорастает мицелием. Интенсивно растет ферментативная активность, температура воздуха в камере 28 — 29 C и относительная влажность воз203601

Составитель Г. Ф. Лошкарева

Техред Л. Я. Бриккер Корректор О. Б. Тюрина

Редактор В. Чулкова

Заказ 3865j19 Тираж 535 Подписное

ЦПИИПИ Комитета по делам изобретений и открытий при Совете Министров СССР

Москва, Центр, пр. Серова, д. 4

Типография, пр. Сапунова, 2 духа 90 — 95 /о, 24-часовая культура Aspergillus oryzae 8И легко дробится, не имеет спор.

Выход культуры по отношению к исходной среде составляет 68 — 70 /о.

В процессе культивирования гриба определяют накопление ферментов во времени. Установлено, что, например, амилолитическая активность штамма Aspergillus oryzae 8f1 через

24 час его роста составляет 35 ед/г абсолютно сухой культуры, а штамма Aspergillus

oryzae КС через 24 час роста только 19,6 ед/г абсолютно сухой культуры.

Штамм Aspergillus oryzae 8f1 за 24 час роста нака пливает всех ферментативных активностей больше, чем обе используемые в настоящее время культуры плесневых грибов Лзpergillus oryzae КС и Aspergillus a vamori 22, Полученная сухая поверхностная культура

Aspergillus oryzae 8f1 была испытана в лабораторных и производственных условиях для осахаривания спиртовых заторов с последующим их сбраживанием. Использование этой культуры обеспечивало интенсивность процесса осахаривания и сбраживания и получение высоких выходов спирта с низким содержанием остаточного сахара.

Предмет изобретения

Штамм гриба Aspergillus oryzae. 8f1. Синт е т и ч е с к а я с р е д а. На синтетической среде Чапека колонии бархатистые, в центре слегка клочковатые, ближе к периферии они становятся желтоватыми. Преобладают зеленые тона. Ооратная сторона колонии беловатая. На третьи сутки после посева диаметр колонии в среднем достигает 3,9 сл и спорообразующей зоны 3,4 c»>:

М о р ф о л о г и я. Конидиеносцы без перегородок, бесцветные, с возрастом приобретают легкий коричневатый оттенок. Конидиеносцы большей частью гладкие, на некоторых имеются редко расположенные небольшие вмятины или очень маленькие пологие бугорки. Конидиеносцы в длину достигают 194 — 350 л к и в поперечнике 8,3 — 10,1,пк.

Пуз fpelIII;III вздутия имеют шаровидпуfo

fIëè слегка удлиненную форму 15,4 — 27,02;( 13,2 — 27,02 лк. Стеригмы однослойные, у,.,лпненные, пилиндрические, на некоторых пузыревидных вздутиях они слегка расширенные или даже клиновидные 11,6+4,6 — 5,8 лк. Чаще стеригмы расположены на верхней части пузыря.

Копидии шаровидные с гладкой оболочкой, их диаметр от 3,8 до 11,58 в к. Конидиальныс головки шаровидные или слегка удлиненные

Т5 размером 22 — 48+22 — 44 л к. Гифы бесцветные, в поперечнике они имеют от 3,96 до

7,92 як, иногда они колбовидно утолщены

8,8 лк.

Органические среды. На сусло-агаре

20 на третьи сутки, диаметр колонии достигает

4,5 сл и спорообразующей зоны 4,0 сл . В центре колонии выпуклые с более высоким мицелием, чем по краю. Они окрашены в желтовато-зеленоватый цвет с преобладанием желто25 ватых тонов. Обратная сторона колонии бесцветная.

На пшеничных отрубях к 30 час культивирования образуется плотный корж, который полностью прорастает мицелием. Спорообра30 зованпе начинается к 36 час, к 48 час становится обильным.

На рисовых отрубях и рисовой шелухе и

35 час образуется плотный корж, спорообразование начинается к 35 час роста, обильным

35 оно становится к 42 час.

О т.н о ш е н и е к с а х а р а м. Интенсивно окисляет глюкозу, мальтозу, сахарозу, ксилозу, сорбит, слабее — галактозу, рафинозу, декстр ин и м а н ни т.

40 Жел а ти н а. 5Келатину разжижает, М о л о к о. Пептонизирует.

К р а х м а л. Крахмал гидролизует сильно.