Способ повышения чувствительности гемагглютинационного теста с вирусом гриппа

 

Использование: вирусология, для диагностики и изучения гриппа. Сущность изобретения состоит в упрощении методики повышения чувствительности гемаглютинационного теста путем замены исходного пула эритроцитарных клеток на фракцию клеток красной крови, обогащенную ретикулоцитами. Положительный эффект: повышение титра гемагглютинации в 4 - 8 раз. 3 табл.

Использование относится к биологии и медицине и может быть использовано в широко применяемом в науке и практике здравоохранения вирусологическом тесте - реакции гемагглютинации (РГА) с вирусами гриппа.

Как известно, эта реакция осуществляется с применением в качестве индикаторной системы общего пула эритроцитарных клеток, нативных или подвергнутых предварительной стабилизации.

Известен способ повышения чувствительности РГА с помощью активации естественных рецепторов эритроцитов путем обработки последних ферментами [1, 2] .

Однако достижение такого эффекта связано с необходимостью проведения дополнительного процесса активации эритро- цитов высокоочищенными дефицитными ферментами, что не всегда осуществимо на практике.

Целью изобретения является упрощение методики повышения чувствительности гемагглютинационного теста с вирусом гриппа.

Это достигается путем замены эритроцитов на фракцию эритроидных клеток, обогащенную ретикулоцитами. В результате повышаются адсорбционные свойства индикаторной системы, роль которых выполняют эти клетки, получаемые простым, доступным методом, и, как следствие такой замены, повышается чувствительность гемагглютинационного теста.

В табл. 1 представлены результаты иммунофлуоресцентного анализа адсорбционных свойств эритроидных клеток человека, подвергнутых предварительной стабилизации глютаральдегидом, часть которых представлена общим пулом клеток, а другая - фракцией, обогащенной на 80% ретикулоцитами.

Исходные клетки красной крови полностью адсорбировали различные штаммы вируса гриппа лишь в 50-60% случаев, в то время как во фракции эритроидных клеток, обогащенных на 80% ретикулоцитами, адсорбция вируса отмечалась у 100% клеток и не зависела от штаммовых особенностей вируса. По-видимому, молодые клетки красной крови (ретикулоциты) обладают более высокой адсорбирующей вирус гриппа активностью, чем зрелые эритроциты.

Вследствие замены эритроцитов на обогащенные ретикулоцитами клетки постановка реакции гемагглютинации сопровождается повышением титра гемагглю- тинационного теста в 4-8 раз, не меньше чем при применении обработанных ферментом эритроцитов.

Из табл. 2 следует, что результат реакции гемагглютинации с применением красных клеток крови человека, обогащенных ретикулоцитами, в 4-8 раз выше, чем при использовании общего пула эритроцитарных клеток и не уступает результатам РГА, в которой используются активированные ферментом эритроциты.

Из табл. 3 следует, что для достижения положительного эффекта - существенного повышения чувствительности РГА (в 4-8 раз) необходима концентрация ретикулярных клеток в индикаторной системе не менее 80% от общей массы эритроидных клеток.

П р и м е р. Эритроцитарную массу 0/1/ группы крови человека трижды отмывают 10-кратным объемом 0,9% -ного раствора хлорида натрия центрифугированием при 1500 об/мин в течение 10 мин.

В пробирку помещают 7,5 мл 4% -ной нормальной сыворотки крови кролика и 2,5 мл осадка отмытых эритроцитов. Смесь подвергают центрифугированию на центрифуге ОП-4 при 100 об/мин в течение 3-3,5 мин. Осадок клеток удаляют, а надосадочную взвесь вновь центрифугируют при 100 об/мин 6-7 мин. Вторично удаляют осадок и снова центрифугируют надосадочную жидкость при тех же условиях, но в течение 10-10,5 мин. Осадок удаляют в третий раз, надосадочную взвесь клеток подвергают дальнейшему центрифугированию в течение 18-19 мин при 100 об/мин, после чего надосадочную жидкость сливают. В оставшемся осадке клеток (4-я фракция) содержится до 85 ± 5% ретикулоцитов, что подтверждается структурными особенностями клеток при морфологическом их исследовании под световым микроскопом. Эту 4-ю фракцию клеток в концентрации 1% на 0,9% -ном растворе хлорида натрия применяют для постановки РГА в обычном варианте (0,2 мл вирусного антигена и 0,2 мл 1% клеток).

Технико-экономические преимущества предлагаемого способа по сравнению с прототипом выражаются в упрощении методики повышения чувствительности гемагглютинационного теста с вирусом гриппа за счет исключения процесса обработки эритроцитов высокоочищенными и дефицитными ферментами.

(56) 1. Enegreen B. J. , Burness A. F. Chemical Structure of attachment sites for viruses on human erythrocytes-Nature, 1977, v. 268, N 5620, р. 536.

2. Shortridge K. F. Hemagglu- tination of trypsin modified human erythrocytes by chagres virus Arch. Virol. 1976, v. 52, N 1-2, р. 181-186.

Формула изобретения

СПОСОБ ПОВЫШЕНИЯ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ ГЕМАГГЛЮТИНАЦИОННОГО ТЕСТА С ВИРУСОМ ГРИППА, включающий использование в качестве индикаторной системы обработанной фракции эритроцитов, отличающийся тем, что фракцию эритроцитов обрабатывают до получения фракции эритроидных клеток, содержащей 85 ± 5% ретикулоцитов.

РИСУНКИ

Рисунок 1, Рисунок 2