Способ угнетения репродукции вируса лихорадки западного нила
СОЮЗ СОВЕТСКИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ
РЕСПУБЛИК (5!)5 С 12 N 7/02
ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОЕ
ВЕДОМСТВО СССР (ГОСПАТЕНТ СССР) (М
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ПАТЕНТУ (21) 4929530/13 (22) 19.04.91 (46) 30.08.93. Бюл. ¹ 32 (71) Научный центр эпидемиологии, гигиены и профзаболеваний Министерства здравоохранения и социального обеспечения Республики Грузия (72) А.Э. Иванидзе, Н,О. Барнабишвили, М.Б. Мирцхулава, А.Д. Цибадзе и О.К. Хомерики (73) Н,О. Барнабишвили (56) Вирусология/Под ред. P.Øoóï, М.: Наука, 1989. т. 1, с, 375.
Изобретение относится к медицине, в частности вирусологии.
Целью изобретения является повышение степени угнетения репродукции вируса лихорадки Западного Нила и сохранности нативного.состояния клетки.
Это достигается тем, что в предлагаемом способе повышения степени угнетения репродукции вируса лихорадки Западного
Нила осуществляется путем воздействия низкочастотного переменного магнитного поля на зараженные вирусом клеточные культуры, Применение низкочастотных магнитных полей обусловлено, тем, что эти поля при низких индукциях не нарушают целостность мембранных систем и функционирования биосистем, по этому и используются в физиотерапевтической практике.
Исследования выполнялись на зараженных вирусом лихорадки Западного Нила клеточных культурах Чего и V-E-6. Исходный титр вируса 7,5 — 8,0 Ig. В экспериментах применялся вирус разведенный до 6,01g. Титр вируса в реакции гемагглютинации 1:5000—
1:10000. После заражения адсорбцию виру Ы „„1838405 А3 (54)(57) СПОСОБ УГНЕТЕНИЯ РЕПРОДУКЦИИ .ВИРУСА ЛИХОРАДКИ ЗАПАДНОГО
НИЛА, включающий выращивание монослоя культуры клеток с последующим заражением вирусом,отл ич а ю щи йся тем, что, с целью повышения степени угнетения репродукции вируса и сохранности нативного состояния, клетки через 3 — 24 ч после заражения обрабатывают переменным магнитным полем с частотой 100-50000 Гц, индукцией 0,0002 — 0,3 мГ и временем экспозиции 15-120 мин. са на клетки проводили при температуре
37 С в течение 1-1,5 ч. После чего неадсорбированные вирусы удаляли, а монослой клеток, помещенный в пенициллиновые флаконы, промывали и заливали средой поддержки и инкубировали в течение 3 и д
24 ч. После этого флаконы помещали в соленоид, где создавалось низкочастотное магнитное поле (частота 50 — 1000000 Гц; индукция 0,0001-0,5 мТ) при прохождении ОО синусоидального тока от генератора ГЗ-33.
В 6-часовой срок после воздействия полем ставили реакцию гемагглютинации (РГА) вирусосадержащей культуральной жидкости (ВКЖ) образцов и проверяли цитопатическое действие (ЦПД) магнитного поля. Зависимость титра вируса в РГА ВКЖ образцов (ф) от частоты и индукции приложенного поля представлена в табл. 1 и 2.
Как видно иэ таблиц, в широком диапазоне частот (100-50000 Гц), индукций (0,0002-0,3 мТ) поля по РГА вирус в В КЖ не обнаруживается. Отсутствие титра РГА указывает на полное угнетение репродукции
1838405 вирус лихорадки Западного Нила. Верхний Послепредельные величины; частота 55000 предел эффекта по индукции лимитируется Гц, индукция 0.35 мТ, экспозиция 130 мин.
ЦПД поля. Использовались следующие экс- Совместно с определением титра вирупоэиции поля: 5, 10, 15, 20, 30, 40, 50, 60, 70, са в РГА, присутствие вируса в ВКЖ образ80,90, 100, 110, 120, 130, 140. 150мин. При 5 цов проверяли по методу экспозиции меньше чем 15 мин и больше иммунофлк)оресценции. В образцах, где чем 150 мин в ВКЖ образцов, облученных при действии переменного магнитного повышеуказанными, угнетающими реплика- ля, отсутствует титр в РГА, отсутствует и цию характеристиками магнитного поля, по- специфическое свечение, иммунофлюоресявляется титр в РГА, а при 15-120 мин 10 ценция, характерное при присутствии вируотсутствует. Таким образом наблюдается сов, A в норме, так же как у необлученных полноеугнетениерепродукциивирусалихо- образцов, регистрируется свечение 30ф» радки Западного Нила при следующих ха- клеток интенсивностью 4, что подтверждарактеристиках переменного магнитного ет полное угнетение репродукции вируса поля: частота 100-50000 Гц, индукция 15 лихорадкизападногоНилапридействиипе0,0002-0,3 мТ, экспозиция 15-120 мин, До- ременных магнитных полей вышеуказанных предельные величины: частота 50 Гц, индук- характеристик на зараженные этим вирусом ция 0,0001 мТ, экспозиция 10 мин. клеточные культуры, .Табл ица 1
Зависимость титра РГА (я обратных величинах) от частоты и индукции переменного магнитного поля (при 3- часовой.инкубации зврвивнных культур) . Индукция, мТ
Частота, 1ц
0,0001 0,0002 0<0005 0,001 0,005 0,01 0,03 0,05 0,08 0,1 0,12 0,15 0,2 О,З 0,35 0,4
6 7 8 8 10 П 12 13 14 Ib 16
I 2 3 4 5
5О
40 ППД ЦПД
ШИ ШИ
1ОО
4G 40
2ОО
40 40 с
40 40. зоо
4 о
400
4О 40
600
4О 40
UILIL ШИ
UIUt UlLIL
4О 4О
40 4G
100О
2ОО0
lULIL UILIL
IULIL lULII зооо
80 80 »=
40ОО
8О 80
8 о BG -ю
5000
UIUi ШИ
UILII ШИ
ШИ ШИ
80 80
IOOOO
12000
BG 8О .
14000
16000
80 8о
25000
8О 80
30000
З50ОО
80 80
ШИ ШИ
160 ЦПД ШИ
160 ШИ ШИ
80 BG
Z80 Z6G 160 160 16G;160 160 160 160 160
I6O 160 160 160 160 160 160 160 160 т е титра РГА; UILIL — цитопвтпческое действие переменного м для необлученных обраэцов - 40 (в обратных величинах ) I60 160 IGG
160 160 160 вгнитного лола.
60000 — отсутстви
Титр РГА
40 40 40 40 40 40 40 40 40 40 40 40 40
1ULIL 1UUL
ШИ ШИ
ШИ ШИ
UlUL ШИ
ЦПД ЦПД вЂ” . ILILU IUUL
- ШИ ШИ
- ШИ ШИ
ШИ ШИ
lU jii LijLIL
UILU ШРД
1838405 атотв 11
1 мт
G,OO01 0,6002 0,0005 0,001 0,005 O,OI 0,03 0,05 О,ОВ О,I 0,12 0,15 0.2 0,3 0,35 0,4
2 3 4 5 6 V Е Э 10 И 12 13 14 15 16
IOO
I60 160
jIJjR
ЦПД
ЦПД
ЦПД
ЦПД
1RUj
jjIjR
Ш)Д
ljjR
ЦПД
ЦПД
ШЫ
I60 160
160 160, Ф
160 160
I60 160 и
I60 160 1
320 320 в
320 320
320 320
IOGO
2(JO0
3000
320 320
4000
320 320
32О 320
ЙЮОО
320 320
320 Зао
UIU1 — IjijR
ЦПД
ШИ
ЦПД
320 320
320 320
10000
320 320
12000
14000
16000
320 320
20000
ЗОООО
320 320
320 320
35000
320 320
320 320
45000
jj1jR
640 IIIIR
UJUi ЦЦД
Ц)Ц
640
55000
640
60000 отсутстви
Титр РГА
Редактор
Заказ 2905 Тираж Подписное
ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР
113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5
Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101
Таблица 2
Зависимость титра РГА (ь обратных величинах) от частоты и индукции
„ переменного магнитного полл (при 24- часовой инкубвцчи зараиенных культур) 1(0 160 160 ЩО 160 160 160 160 160 160 160 160 160 160 ЦПД
160 160 - а1
320 320
4 320 320
Ф
320 320
Э20 320.
320 640 640 640 640 640 640 640 640 640 640
640 64О 640 640 640 640 640 640. 640 640 640 е титра РГА; IIJIR — цитопатическое действие магнитного полл; для необлученных образцов — 160 (в обратных величинах) Составитель Н. Барнабишвили
Техред M. Моргентал Корректор Л. Филь
ШЦ1 цПД
jjIjR
IIIjR
Ш1Д
ШЩ
ЦПД
ЦПД
l1IjR цРД
lilU1
ШЫ
ШЦ(jIHJ1
Ш1Д
ЦПД 4
IRjR
ЦПД
Ш1Д
Ш1Д
ЦПД
ЦПД
1jIjR
UJjR
ЦПД
IjIjR
Ш1Д
lilUj
1ДД
Ш)Д
