Способ получения энтомопатогенного препарата

 

Использование: сельскохозяйственная микробиология, производство средств защиты растений от вредителей, в частности грибных энтомопатогенных препаратов. Сущность изобретения: готовят стерильную питательную среду, содержащую 0,3-2% глицерина, 0,3-2,0% глюкозы, 8-10% гидролизата белково-витаминного концентрата, 0,3-0,8% мела, воду до 100%. Засевают среду одним из штампов грибов вида Verticillium Lesapii или Beauveria bassiana, или Metarrhizium anisopliae и культивируют при аэрации. При использовании штаммов грибов Beauveria и Metarrhizium в среду дополнительно вносят фосфорнокислый калий в количестве 0,04-0,06%. В процессе культивирования при естественном снижении pH культуральной жидкости до 3,7-5,9 добавляют глицерин в количестве 0,3-1%. Культивирование осуществляют до максимального спорообразования и достижения значений коэффициента преломления 1,4-1,44. Полученную культуральную жидкость концентрируют и получают из концентрата препарат в жидком или сухом виде. Для получения концентрата в жидком виде в концентрат вводят 4-10% глицерина и 1-3% поливинилпироллидона или 0,1-1,0% полиэтиленоксида. Для получения сухого энтимопатогенного препарата в концентрат культуральной жидкости вводят смесь цеолита типа NaX и монтмориллонита или полыгорскита в соотношении 1:2 в количестве 10-30% к сухим веществам, смесь гранулируют и высушивают. 4 з.п. ф-лы.

Изобретение относится к сельскохозяйственной микробиологии и касается производства средств защиты растений от вредителей, в частности способа получения грибных энтомопатогенных препаратов.

Известны способы получения энтомопатогенных препаратов путем глубинного культивирования микроскопических грибов, таких как Verticilium lecanii, Beauveria bassiana на питательных средах, содержащих источники углерода, азота и минеральные соли, с последующим концентрированием и сушкой концентрата [1] Наиболее близким техническим решением к изобретению является способ получения энтомопатогенного препарата путем глубинного культивирования микроскопического гриба Verticillium lecanii на питательной среде, содержащей глицерин, гидролизат белково-витаминного концентрата, мел и воду, концентрирование культуральной жидкости, введение в концентрат естественного цеолита клиноптилолита, гранулирование смеси, высушивание и измельчение гранул [2] Недостатком известного способа является сравнительно низкое содержание в препарате активного начала за счет сравнительно низкой влагосвязывающей способности используемого клиноптилолита.

Целью изобретения является повышение содержания активного начала в препарате, а также возможность использования единой технологии для разных видов микроскопических грибов и получения таких энтомопатогенных препаратов, как вертициллин, боверин и метаризин, как в жидком, так и сухом виде.

Сущность способа заключается в следующем.

Готовят стерильную питательную среду, содержащую, мас. Глицерин 0,3-2,0 Глюкоза 0,3-2,0 Гидролизат бел- ково-витамин- ного концентра- та (БВК) 8-10 Мел 0,3-0,8 Вода Остальное.

Засевают одним из штаммов грибов Verticillium Lecanii или Beauveria bassiana, или Metarrhizium anisopliae и культивируют при перемешивании и аэрации. При использовании штаммов грибов вида Metarrhizium anisopliae и Beauveria bassiana в среду дополнительно вносят фосфорнокислый калий в количестве 0,04-0,06% В процессе культивирования при естественном снижении рН культуральной жидкости до 3,7-5,9 добавляют глицерин в количестве 0,3-1% Культивирование осуществляют в течение 3-5 сут. до максимального спорообразования и достижения показателя коэффициента преломления 1,4-1,44.

Полученную культуральную жидкость концентрируют.

Для получения жидкого препарата в концентрат культуральной жидкости вводят 4-10% глицерина и 1-3% поливинилпироллидона или 0,1-1,0% полиэтиленоксида.

Для получения сухого энтомопатогенного препарата в концентpат культуральной жидкости вводят смесь цеолита типа NaX и монтмориллонита или палыгорскита в соотношении 1:2 в количестве 10-30% к сухим веществам, полученную смесь гранулируют и высушивают.

П р и м е р 1. Готовят 3 м³ стерильной питательной среды, содержащей, мас. Глицерин 0,3 Глюкоза 2,0 Гидролизат БВК 10 Мел 0,8 Вода Остальное рН среды 6,7.

Засевают среду посевным материалом из расчета 3% от объема среды штамма гриба Verticillium lecanii N 9 и культивируют в ферментере объемом 5 м³ при аэрации и перемешивании. В процессе культивирования рН культуральной жидкости снижается и при достижении рН 5,9 в культуральную жидкость вводят стерильный глицерин в количестве 0,5% (15 кг на 3 м³) и продолжают культивировать до достижения значения коэффициента преломления культуральной жидкости 1,40.

Получают культуральную жидкость с титром спор 1,5 ˙10³ спор/мл.

По известному способу получают 0,9 ˙10³ спор/мл.

Культуральную жидкость разделяют на две части, одну из которых используют для получения жидкого препарата, а другую сухого.

Получение препарата в жидком виде.

Полученную культуральную жидкость концентрируют фильтрацией, получая 90 кг пасты, содержащей мицелий, остатки питательной среды и бластоспоры (титр 13˙10⁹ спор/г).

В пасту добавляют 10% (9 кг) глицерина и 0,1% (0,1 кг) смоченного полиэтиленоксида, перемешивают и охлаждают.

Полученный энтомопатогенный препарат, представляющий собой стойкую нерасслаивающуюся суспензию, имеет следующую характеристику: титр бластоспор 11˙10⁹ спор/мл, биологическая эффективность 80% на личинках оранжерейной белокрылки при рабочей концентрации 10 ˙10⁶ спор/мл, срок хранения до трех месяцев при температуре не выше 10^оС.

Получение препарата в сухом виде.

В пасту добавляют 3,4 кг (10%) смеси цеолита типа NaX и монтмориллонита в соотношении 1:2, выдерживают при перемешивании для перераспределения влаги и пропускают через гранулятор 2Р-75. Гранулы высушивают, фасуют и маркируют.

Полученный препарат представляет собой гранулы от светло-серого до темно-коричневого цвета, которые в процессе хранения и транспортирования не слеживаются. Биологическая эффективность препарата на личинках оранжерейной белокрылки 70% при рабочей концентрации 10 ˙10⁶ спор/мл, число жизнеспособных спор 15 ˙10⁹ спор/г.

П р и м е р 2. Получение энтомопатогенного препарата боверин. Готовят 3,0 м³ стерильной питательной среды, содержащей, мас. Глицерин 2 Глюкоза 0,3 Гидролизат БВК 8,0 Мел 0,3 Калий фосфорно- кислый 0,04 Вода Остальное Засевают среду штаммов Beauveria bassiana 124/1. Процесс культивирования и концентрирования осуществляют как описано в примере 1, но глицерин вводят при рН культуральной жидкости 3,7 в количестве 1% Полученную культуральную жидкость также разделяют на две части (по 100 кг). Получение жидкого препарата осуществляют, как описано в примере 1, но в пасту вводят 4 л (4%) глицерина и 1,0 кг смоченного поливинилпироллидона.

Получают энтомопатогенный препарат боверин, представляющий собой устойчивую суспензию и имеющий следующую характеристику:
титр жизнеспособных бластоспор 10 ˙10⁹ спор/мл;
биологическая эффективность в рабочей концентрации 90% на трипсе и оранжерейной белокрылке.

Для получения сухого препарата в пасту вносят смесь цеолита типа NaX и монтмориллонита в количестве 20%
Получают боверин в виде гранул от светло-серого до темно-коричневого цвета, которые в процессе хранения и транспортирования не слеживаются. Биологическая эффективность на трипсе в рабочей концентрации 85% (число жизнеспособных спор 8 ˙10⁹ спор/г).

П р и м е р 3. Готовят 3 м³ питательной среды, содержащей, мас. Глицерин 1,5 Глюкоза 1,5 Гидролизат БВК 9 Мел 0,6 Фосфорнокислый калий 0,06 Вода Остальное
Засев осуществляют штаммом Metarrhizium anisopliae N 2 (коллекция УкрНИЗР).

Процесс культивирования и концентрирования культуральной жидкости осуществляют, как описано в примере 1, но глицерин в процессе культивирования вводят при рН 5,0 в количестве 0,3% для получения жидкого препарата метаризина в пасту вводят 6% глицерина и 1,0% полиэтиленоксида, а для получения сухого препарата в пасту вводят смесь цеолита типа NaX и палыгорскита в количестве 30%
Жидкий препарат имеет следующую характеристику:
титр жизнеспособных бластоспор 2 ˙10⁹ спор/мл,
биологическая эффективность в рабочей концентрации 85% на трипсе и оранжерейной белокрылке.

Сухой препарат гранулы от светло-серого до темно-коричневого цвета, не слеживающиеся в процессе хранения и транспортирования; биологическая эффективность в рабочей концентрации 80% (на трипсе и оранжерейной белокрылке), титр жизнеспособных бластоспор 2 ˙10⁹ спор/г.

П р и м е р 4. Готовят 3 м³ питательной среды, содержащей, мас. Глицерин 1,8 Глюкоза 0,5 Гидролизат БВК 9 Мел 0,5 Фосфорнокислый калий 0,05 Вода Остальное
Засев производят штаммом гриба Beauveria bassiana N 124/1.

Процесс культивирования и концентрирования культуральной жидкости осуществляют, как описано в примере 1, но глицерин в процессе культивирования вводят при рН 4,2 в количестве 0,4% для получения жидкого препарата боверина в пасту вводят 8% глицерина и 3% поливинилпироллидона, а для получения сухого препарата вводят смесь цеолита типа NaX и палыгорскита в количестве 15%
Жидкий препарат имеет следующую характеристику:
титр жизнеспособных бластоспор 11 ˙10⁹ спор/мл,
биологическая эффективность в рабочей концентрации 90% на трипсе и оранжерейной белокрылке.

Сухой препарат гранулы от светло-серого до темно-коричневого цвета, не слеживается в процессе хранения и транспортирования;
биологическая эффективность в рабочей концентрации 85% на трипсе и оранжерейной белокрылке, титр жизнеспособных бластоспор 9 ˙10⁹ спор/г.

Формула изобретения

1. СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЭНТОМОПАТОГЕННОГО ПРЕПАРАТА путем глубинного культивирования микроскопических грибов на питательной среде, содержащей глицерин, гидролизат белково-витаминного концентрата, мел и воду, с последующим концентрированием культуральной жидкости, отличающийся тем, что в питательную среду дополнительно вносят глюкозу, а в процессе культивирования при снижении pH культуральной жидкости до 3,7 5,9 дополнительно вводят глицерин в количестве 0,3 1,0 мас. при этом компоненты в питательной среде используют в следующем соотношении, мас.

Глюкоза 0,3 2,0
Глицерин 0,3 2,0
Гидролизат белково-витаминного концентрата 8 10
Мел 0,3 0,8
Вода Остальное
2. Способ по п.1, отличающийся тем, что из микроскопических грибов используют один из видов грибов Verticillium lecanii, Beauveria bassiana или Metarrhizium anisopliae.

3. Способ по пп.1 и 2, отличающийся тем, что при использовании грибов вида Beauveria bassiana или Metarrhizium anisopliae в среду дополнительно вносят фосфорнокислый калий в количестве 0,04 0,06% от массы среды.

4. Способ по пп.1 3, отличающийся тем, что в концентрат культуральной жидкости вводят 4 10 мас. глицерина и 0,1 1,0 мас. полиэтиленоксида или 1 3 мас. поливинилпироллидона.

5. Способ по п.1, отличающийся тем, что концентрирование культуральной жидкости осуществляют до содержания сухих веществ 20 30% в полученный концентрат вводят смесь цеолита типа NaX и монтморрилонита или палыгорскита в соотношении 1 2 в количестве 10 30% к сухим веществам.