Штамм бактерий corynebacterium pseudotuberculosis, используемый в качестве референтного и для изготовления диагностических препаратов при казеозном димфадените овец

 

Использование: биотехнология, микробиология, диагностические препараты, казеозный лимфаденит овец. Сущность изобретения: получен штамм Corynebacterium pseudotuberculosis ВГНКИ N 209R-ДЕП для ускорения идентификации возбудителя казеозного лимфаденита при бактериологической, аллергической и серологической диагностике инфекции у овец. Молекулярные характеристики ДНК штамма: спектральная характеристика А 260/280 - 1,9, А 260/230 - 2,3, концентрация 3333 мкг/мл, величина содержания Г + Ц 45,1 мол.%. По гомологии нуклеотидных последовательностей ДНК среди штаммов этого вида отнесен к группе II. При постановке диагноза на заболевание овцам внутрикожно в одну из подхвостовых складок вводят аллерган, приготовленный из данного штамма. Через 24 ч проводят учет реакции. Если животное больное у него появляется воспалительная реакция в месте введения диагностикума. У здоровых животных воспаления в месте введения препарата не наблюдают. Данным методом в неблагополучных по казеозному лимфадениту овец хозяйствах удается дополнительно выявлять до 80% инфицированных животных, по сравнению с общеизвестным методом диагностики (пальпацией поверхностных лимфатических узлов).

Изобретение относится к микробиологии, эпизоотологии и может быть использовано в практике бактериологических лабораторий для изготовления антигенов в реакции бласттрансформации лимфоцитов и серологических реакциях, а также на биопредприятиях для изготовления аллергена.

Возбудитель казеозного лимфаденита мелкого рогатого скота обладает большой вариабельностью фенотипических свойств, поэтому бактериологическая диагностика инфекции часто затруднена ввиду невозможности идентификации вида.

В определителе бактерий Берги (1980) приводятся данные о генотипических свойствах, основанные на излучении штаммов из зарубежных коллекций микроорганизмов. В этом определителе указано на содержание Г+Ц в ДНК данного вида возбудителя инфекции 67,5 мол. а патогенных для человека и животных представителей рода Corynebacterium 57-60 мол.

До настоящего времени в коллекциях микроорганизмов, имеющихся в России, эталонных штаммов C. pseudotuberculosis нет.

Штамм C. pseudotuberculosis получен Заболотных М. В. Колычевым Н. М. Трофимовым И. Г. 06.10.1987 г. из гнойного содержимого абсцесса в печени овцы, принадлежащей совхозу "Ольгинский" Полтавского района Омской области.

Морфологические признаки следующие.

В мазках из чистых культур микроорганизмы представлены в виде грамположительных, толстых с закругленными концами палочек или овоидов длиной 1,07+0,04 мкм, толщиной 0,649+0,02 мкм.

Физиологические признаки следующие.

На кровяном теллуритовом агаре штамм восстанавливает металлический теллур, поэтому колонии приобретают черный цвет; матовые, хрупкие, сдвигаются по поверхности среды. Максимального размера они достигают через 2-3 сут культивирования при 37^оС.

На МПа при тех же условиях и в те же сроки образуются серо-белого цвета колонии R-форм. Края их ровные, вершина слегка приподнята, сухие, поверхность матовая, шероховатая. Возможно наличие пигмента желтого цвета.

На МПБ легкое помутнение среды, обильный зернистый осадок на дне пробирки; на поверхности бульона сплошная пленка, которая при встряхивании разбивается в равномерную суспензию, пристеночное кольцо. На третьи сутки культивирования образуется максимальное количество экзотоксина, что совпадает с понижением pH среды.

Штамм не редуцирует нитраты, ферментирует глюкозу, лактозу, сахарозу, мальтозу и в слабой степени сорбит. Содержит каталазу, не содержит уреазу и желатиназу. Внутрибpюшинное заражение морских свинок в дозе 10 МЕМ/мл вызывает поражение внутренних органов геморрагические очаги в легких, слипчивый плеврит, некротические узелки в селезенке, абсцедирующий орхит.

Молекулярные характеристики штамма.

Спектральная характеристика: А 260/280 1,9; А 260/230 2,3; Концентрация 3333 мкг/мл; Величина содержания Г+Ц 45,1 мол.

В реакции ДНК-ДНК гибридизации с несколькими десятками штаммов Corynebacterium pseudotyberculosis, штамм 209 R по уровню гомологий нуклеотидных последовательностей ДНК отнесен к группе II.

Штамму Corynebacterium pseudo- tuberculosis присвоен регистрационный номер N 209 R-ДЕП в коллекции микроорганизмов лаборатории контроля и стандартизации препаратов против туберкулеза, псевдо- и паратуберкулеза ВГНКИ ветпрепаратов.

Формула изобретения

Штамм бактерий Corynebacterium pseudotuberculosis ВГНКИ N 209R-ДЕП, используемый в качестве референтного и для изготовления диагностических препаратов при казеозном лимфадените овец.