Фунгицидный состав

 

Использование: изобретение относится к сельскому хозяйству, а именно к ветеринарии, и может быть применено в качестве фунгицидного состава при лечении дерматомикозов животных. Сущность изобретения: заключается в том, что используют состоящий из смеси 4-нитро и 6-нитро-5, 7-дихлорбензофуроксанов (Д. в. ), поверхностно-активного вещества (ПАВ) и дистиллированной воды при следующем соотношении компонентов, мас.%: смесь 4-нитро- и 6-нитро-5, 7-дихлорбензофуроксанов 0,25 - 1,00; ПАВ 0,50 - 2,00; дистилированная вода - остальное. Фунгицидный состав, основным действующим веществом которого является смесь 4-нитро- и 6-нитро-5, 7-дихлорбензофуроксанов не обладает раздражающим, аллергизирующим, кожно-резорбтивным и кумулятивным действием. 8 табл.

Изобретение относится к сельскому хозяйству, в частности к ветеринарии, и может быть использовано в качестве фунгицидного состава при лечении дерматомикозов (трихофитии и микроспории) животных.

Паразитарные болезни кожи домашних животных, крупного и мелкого рогатого скота, вызванные патогенными грибами дерматофитами, весьма распространены и приносят значительный экономический ущерб.

Известно применение для лечения трихофитии и микроспории животных препаратов йода, хлора, антимикобиотиков (гризеофульвин, леворин, нистатин), серы, которые требуют длительного и многократного применения и не всегда обеспечивают высокий лечебный эффект.

Известно, что 4-нитро-5,7-дихлорбензофуроксан I и 6-нитро-5,7-дихлорбензофуроксан II O O обладают фунгицидной активностью по отношению к фитопатогенным грибам возбудителям плесневения и дереворазрушающего гриба. Данные виды грибов не вызывают заболеваний кожи животных и не представляют опасности для человека и животных. Все данные по фунгицидной активности I и II относятся к чистым веществам и испытаны только на чистых культурах грибов. Ранее выявленная активность по отношению к фитопатогенным грибам заведомо не предопределяют установленную активность по отношению к патогенным грибам, поражающим животных и людей и наносящим большой экономический ущерб.

Данные о лечении дерматомикозов животных, а именно трихофитии и микроспории, средствами на основе смеси 4-нитро- и 6-нитро-5,7-дихлорбензофуроксанов (III) в литературе отсутствуют.

Целью изобретения является разработка фунгицидного состава для лечения дерматомикозов животных (микроспории и трихофитии).

Цель достигается тем, что фунгицидный состав для лечения дерматомикозов животных содержит смесь 4-нитро- и 6-нитро-5,7-дихлорбензофуроксанов (Д. в. III), эмульгатор (ПАВ) и разбавитель (Р) в следующих соотношениях компонентов, мас. приведенных в табл. 1: Д. в. 0,25-1,00 ПАВ 0,500-2,00 Р 97,00-99,25 В качестве эмульгаторов применяются неионогенные поверхностно-активные вещества (ПАВ): ОП-7, ОП-10 моноалкилфениловые эфиры полиэтиленгликоля на основе полимердистиллята; Неонол натрий алкилполиоксиэтиленсульфат; Стеарокс-6 полиэтиленгликоль моностеарат.

Полученный состав на основе смеси 4-нитро- и 6-нитро-5,7-дихлорбензофуроксанов (III), ПАВ и разбавителя позволяет получить новое лечебное средство, а именно состав, обладающий более высоким фунгицидным и лечебным действием и превосходящий по своему лечебному эффекту применяемые в настоящее время средства.

П р и м е р 1. Приготовление смеси 4-нитро- и 6-нитро-5,7-дихлорбензофуроксанов (Д. в. III) готовят путем механического смешивания компонентов 4-нитро-5,7-дихлорбензофуксана (I) и 6-нитро-5,7-дихлорбензофуроксана (II) в соотношении I:II соответственно 70-20:30-80 мас.

П р и м е р 2. Получение фунгицидного состава.

В фарфоровую ступку помещают 0,50 г III, тщательно растирают при помощи пестика. Затем в ступку добавляют 1,00 г ПАВ и растирают при комнатной температуре до получения однородной консистенции. После чего порциями при тщательном перемешивании добавляют 98,50 г разбавителя до получения однородной массы.

Рецептура остальных составов приведена в табл. 1.

П р и м е р 3. Активность смеси III в отношении возбудителей трихофитии, микроспории, кандидоза и лечение трихофитии и микроспории животных.

Противогрибковую активность изучают на чистых культурах патогенных грибов и на животных, больных трихофитией и микроспорией. Эффективность смеси III определяют по отношению роста мицелия чистых культур патогенных грибов, возбудителей трихофитии Trichophyton rubrum, Trichophyton gypseum; микроспории Micrоsporum casin, Microsporum lanosum по известной методике. Наблюдения проводят в течение 14 дн при температуре 26^оС. Чувствительность к препарату определяют его минимальной дозой, при которой роста гриба не наблюдается. Фунгицидность III определяют путем пересева инокулята гриба из пробирок, в которых роста гpиба не наблюдалось, на чистую среду Сабуро. Наблюдения проводят в течение 30 дн, фиксируя отсутствие или наличие роста гриба.

Активность по отношению дрожжеподобного гриба Candida albicans изучают методом серийных разведений по методике. Результаты опытов учитывают через 24 ч в течение 5 сут, регистрируя наличие роста (помутнение) или задержку роста культуры в среде. Результаты исследований представлены в табл. 2.

Лечение больных трихофитией и микроспорией животных проводят составами на основе смеси III в концентрациях от 0,10 до 1,00% Состав тщательно втирают со здорового участка к центру поражения однократно в течение 5-7 дней. О эффективности лечения судят по лабораторным исследованиям (люминесценция, микроскопия и культивирование). Полученные результаты приведены в табл. 3.

Как видно из приведенных в табл. 2 данных, смесь III обладает высоким фунгистатическим и фунгицидным действием по отношению к патогенным грибам, возбудителям трихофитии, микроспории и кандидоза, в концентрациях 0,00626-0,01% По данному показателю смесь III превосходит эталонный фунгицид "октатион".

Лечение животных, больных трихофитией и микроспорией составами с концентрацией Д. в. в них 0,50-1,00% привело к полному выздоровлению животных. Уменьшение концентрации Д. в. до 0,25% ведет к снижению лечебного эффекта. Лечение эталоном привело лишь к частичному выздоровлению животных.

Таким образом, фунгицидный состав, содержащий смесь 4-нитро- и 6-нитро-5,7-дихлорбензофуроксанов (III), эмульгатор и разбавитель, обладает высоким фунгицидным эффектом, превосходящим эталон. При лечении не отмечено никаких отклонений физиологического состояния животных.

П р и м е р 4. Токсикологические исследования смеси 4-нитро- и 6-нитро-5,7-дихлорбензофуроксанов (Д. в. III).

1. Исследование токсичности при введении в желудок.

При однократном введении III в желудок определяют параметры токсичности и изучают симптомы острого отравления. Острую токсичность изучают на белых крысах весом 170-200 г. Смесь III вводят в желудок в виде водной суспензии. В качестве эмульгаторов используют ОП-7 или ОР-10. Животным контрольной группы вводят в соответствующих количествах эмульсию, содержащую только эмульгатор. Учитывают следующие показатели: внешний вид и поведение животных, состояние шерстного покрова и видимых слизистых оболочек, отношение к корму, подвижность, рост и частоту дыхания, время возникновения и характер интоксикации, ее тяжесть, обратимость, сроки гибели животных или их выздоровления. Наблюдения за клиническим состоянием животных приводят в течение 14 дн. Для оценки токсичности определяют максимально переносимую воду МПД; дозу, вызывающую гибель 50% животных ЛД₅₀ и абсолютно смертельную дозу ЛД₁₀₀. ЛД₅₀ и ее доверительные границы вычисляют по методу Литчфилда и Уилкоксона. Результаты исследований приведены в табл. 4.

2. Исследование токсичности при нанесении на кожу.

При однократном нанесении смеси III на кожу определяют параметры токсичности и симптомы острого отравления. На предварительно выстриженный участок кожи крыс (на спине) размером 2х2 см наносят смесь III в дозах от 500 до 5000 мг/кг. Наблюдения за клиническим состоянием животных проводят в течение 14 дн. Результаты исследований приведены в табл. 4.

Местное действие III исследуют на белых крысах массой 120-160 г по методикам. Для изучения раздражающего действия смеси III опытных крыс делят на 8 групп. Первой группе животных наносят ежедневно однократные аппликации водных суспензий III в концентрациях 0,25% 0,50% 1,00% 5,00% на наружную поверхность ушной раковины. Второй группе животных водные суспензии в тех же концентрациях наносят на предварительно выстриженный участок кожи спины размером 2х2 см. Животным контрольных групп наносят дистиллированную воду с ПАВ. Обработку крыс всех групп проводят в течение 10 дн. По истечении указанного времени берут кровь из хвоста для определения количества эритроцитов и лейкоцитов в камере Горяева, гемоглобина, выведения лейкоцитарной формулы по общепринятым методикам. Учитывают следующие показатели: появление на месте аппликации гиперемии, отека, утолщения кожной складки и расчетов. Полученные данные обрабатывают статистически. При исследовании местного действия на слизистые оболочки III в виде суспензии в тех же концентрациях вносят однократно в конъюнктивный мешок кролика в количестве 1-2 капель в течение 7 дн. При внесении оттягивают внутренний угол конъюнктивального мешка, затем в течение 1 мин прижимают слезноносовой канал. Отмечают появление и выраженность гиперемии, отечность, инъекцию сосудов склеры и роговицы, измеряют ширину зрачка. Обращают внимание на состояние век. Оценивают влияние III на слизистую оболочку по характеру конъюнктивита (поверхностный, глубокий), кератита.

Количественную оценку кожно-резорбтивного действия III проводят на крысах. Животных фиксируют, выстригают на спине шерсть и препарат в виде суспензии наносят на выстриженные участки. Проводят учет клинических признаков отравления от разных доз III. Результаты исследований приведены в табл. 5-7.

3. Изучение аллергенных свойств.

Исследование сенсибилизирующих свойств проводят по методике на белых крысах массой 120-160 г и кроликах массой 2-2,5 кг. Перед опытом оценивают первично-раздражающее действие III на крысах путем накожных аппликаций в виде водной суспензии в концентрациях 0,25; 0,50; 1,00; 5,00 и 10,00% У животных предварительно выстригают волосы на участке спины размером 2х2 см у крыс, 5х5 см у кроликов. Крысам аппликации делают в направлении от задней трети спины к голове, кроликам в направлении от шеи к хвосту. Опытных крыс делят в равных количествах на 8 групп. Первым трем группам на поверхность кожи наносят и втирают однократно соответственно 0,25% 0,50% 1,00% суспензии в течение 15 дней; вторым трем группам по той же схеме применяют разбавитель с эмульгатором. Всего животным наносят на один и тот же участок кожи 10-30 аппликаций. Через 10 дней после нанесения последней аппликации на кожу свежевыстриженного участка спины наносят разрешающие дозы смеси III в тех же концентрациях.

Опытным кроликам выстригают два участка кожи с двух сторон от позвоночного столба, обрабатывают 70% спиртом и наносят скарификатором царапины. Затем на одну сторону наносят 0,01% раствор гистамина гидрохлорида, а на другую соответственно исследуемые концентрации 0,25% 0,50% и 1,00% суспензии III. Наблюдения за состоянием кожи животных проводят через 30 мин, 24, 48 и 72 ч. Учитывают возникновение эритем, инфильтрации, изъязвления, некроза ткани. Результаты исследований приведены в табл. 6 и 7.

4. Изучение кожно-резорбтивного действия.

Исследование кожно-резорбтивного действия смеси III приводят по известной методике. Реакцию организма крыс изучают в концентрациях 0,25% 0,50% и 1,00% путем часовой экспозиции хвоста крыс в пробирках с суспензией III три температуре 28^оС. Хвосты контрольных животных помещают в пробирки с водой и ПАВ. Все пробирки находят в водяной бане. О кожно-резорбтивном действии III судят по ежедневному наблюдению за физиологическим состоянием крыс в течение 14 дней.

5. Изучение кумулятивных свойств смеси III.

Кумулятивные свойства III изучают на белых крысах массой 120-160 г с использованием теста субхронической токсичности. Смеси III в дозе, составляющей 0,1 от ранее установленной ЛД₅₀, наносят накожно животным опытной группы первые 4 дня. Затем каждые 4 дня дозу III повышают в 1,5 раза и наносят животным. Длительность опыта 24±4 дня. К концу опыта нанесенная доза достигает 8,5 ЛД₅₀. Оценивают результаты исследования по отношению к средним эффективным дозам острого и подострого действия. В течение опыта наблюдают за животными, учитывают: состояние (возбуждение, угнетение), характер и степень активности и координацию движений, реакцию животного на ориентировочные, тактильные и болевые раздражения, наличие тремора, судорог, парезов, параличей, выделений из глаз, носа, изменение цвета кожных покровов, изменение массы тела, пищевая возбудимость.

Проведенные токсикологические исследования показали, что смеси 4-нитро- и 6-нитро-5,7-дихлорбензофуроксанов (III) имеет следующие параметры токсичности (табл. 4). При нанесении однократно на кожу опытным крысам смесь III в дозах 500, 1000, 2500 и 5000 мг/кг не вызывает гибели животных.

Полученные данные позволят отнести изучаемую смесь III к третьему классу умеренно опасных веществ при внутреннем введении и к четвертому классу малоопасных веществ при наружном применении.

Как видно из полученных данных табл. 5, смесь III в концентрациях 0,25; 0,50 и 1,00% не оказывают на кожу раздражающего действия и не изменяют физиологическое состояние крыс.

Изучение аллергенных свойств смеси III показало отсутствие контактного дерматита у крыс от концентраций 0,25-1,00% Кожа крыс оставалась в течение 72 ч гладкой и блестящей. Показателем силы аллергенного воздействия, кроме местной реакции кожи, является общая реакция организма, проявляющаяся в увеличении числа эозинофилов в периферической крови. Как видно, табл. 6 и 7, даже 30%-ные концентрации смеси III не вызывали повышения количества эозинофилов в периферической крови и оставлялись на уровне контрольных показателей. Количество эритроцитов и лейкоцитов, гемоглобин остаются в пределах нормы контроля от применения 5 и 10%-ных концентраций III.

В опытах по определению аллергической реакции организма кроликов в ответ на 0,25-0,50% концентрации смеси III не наблюдалось реакции. После аппликаций 1,00% -ной концентрации III через 24 ч появился незначительный валик (уплотнение) по ходу царапины, который исчез через 24 ч.

Проведенные исследования показывают, что смесь III в концентрациях 0,25-0,50% не обладает аллергизирующим действием. Увеличение концентрации III до 1,00% может вызвать незначительную реакцию организма.

Как показывали результаты по изучению кожно-резорбтивного действия, исследуемая смесь III в концентрациях 0,25, 0,50 и 1,00% не оказала токсического действия на физиологическое состояние животных. На коже хвостов не отмечено отека, покраснений, шелушения, подкожной инфильтрации, деструктивных явлений.

Однократное накожное применение смеси III даже в дозе 50000 мг/кг не вызывает гибели крыс. Местное действие характеризовалось гиперемией, шелушением кожи и выпадением волос.

В опытах по определению кумулятивных свойств смеси III при надкожном применении не удалось вызвать гибели ни одной крысы, хотя каждое животное получило III суммарно в дозе 3813 мг/кг.

Таким образом, смесь 4-нитро- и 6-нитро-5,7-дихлорбензофуроксанов (III) в исследованных концентрациях и дозах не обладает раздражающим, аллергизирующим, кожно-резорбтивным и кумулятивным действием. Следовательно, фунгицидный состав, основным действующим веществом которого является смесь 4-нитро- и 6-нитро-5,7-дихлорбензофуроксанов, не обладает раздражающим, аллергизирующим, кожно-резорбтивным и кумулятивным действием.

Компоненты составов, взятые в качестве контроля и приведенные в табл. 8, не оказывали никакого лечебного действия.

Формула изобретения

ФУНГИЦИДНЫЙ СОСТАВ для лечения дерматомикозов домашних животных, включающий активно-действующее вещество, отличающийся тем, что в качестве активно-действующего вещества он содержит смесь 4-нитро- и 6-нитро-5,7-дихлорбензофуроксанов соответственно 70 20 30 80 и дополнительно поверхностно-активное вещество и дистиллированную воду при следующем соотношении компонентов, мас.

Смесь 4-нитро- и 6-нитро-5,7-дихлорбензофуроксанов 0,25 1,0 Поверхностно-активное вещество 0,50 2,0 Дистиллированная вода Остальное

РИСУНКИ

Рисунок 1, Рисунок 2, Рисунок 3, Рисунок 4, Рисунок 5