Способ получения средства, стимулирующего репаративные процессы

 

Изобретение относится к медицине, в частности к способам получения лекарственного средства для косметологии и лечения ран, трофических язв. Для получения лекарственного средства сырье животного происхождения, преимущественно ноги свежезабитых цыплят-бройлеров в возрасте 8-9 недель, очищают, промывают, измельчают и полученную массу замораживают при температуре не выше минус 18^oС на срок от 10 до 90 сут. Затем размораживают и погружают в 1%-ный водный раствор ледяной уксусной кислоты в соотношении 1:1 по массе на 8-12 ч при 18-25^oС, и периодическом перемешивании. После этого с массы сливают раствор и промывают ее до чистой воды. Полученную массу вновь обрабатывают слабой органической кислотой в соотношении 1:1 по массе в течение 30-40 мин, извлекая при этом растворенные активные пептиды, аминокислоты и минеральные соединения. Затем производят центрифугирование, удаление жира и фильтрацию раствора. Полученный субстрат используют в виде геля,либо подвергают высушиванию в лиофильных или распылительных сушилках и используют в виде порошка.

Изобретение относится к медицине, косметологии и может быть использовано для получения лекарственного средства для нанесения на поверхность ран, ожогов, трофических язв и прочих повреждений, а также неповрежденную кожу.

Известен способ изготовления белкового гидролизата для заживления травмированных участков, включающий измельчение сырья животного происхождения (в качестве которого используют ноги свежезабитых бройлеров или другие источники белка незрелых свежезабитых животных, не обладающих антигенными свойствами), растворение его белков с помощью слабой органической кислоты, удаление жира и извлечение растворенного белка и минеральных соединений как белкового гидролизата (см.источник).

Для повышения эффективности лекарственного средства за счет увеличения селективного выхода растворенного белка на 30% сырье животного происхождения измельчают до размеров частиц от 4 до 10 мм и полученную массу замораживают при температуре не выше -18^oС на срок от 10 до 90 сут размораживают, обрабатывают слабой органической кислотой, извлекают растворенные активные пептиды, аминокислоты и минеральные соединения.

Способ осуществляют следующим образом. Сырье животного происхождения, преимущественно ноги свежезабитых цыплят-бройлеров в возрасте 8-9 недель очищают, промывают, измельчают до размеров частиц от 4 до 10 мм, и полученную массу замораживают при температуре не выше -18^oС на срок от 10 до 90 сут. Затем размораживают и погружают в 1%-ный водный раствор ледяной уксусной кислоты в соотношении 1:1 по массе на 8-13 ч при 18-25^oС, и периодическом перемешивании. После этого с массы сливают раствор и промывают ее до чистой воды. Полученную массу вновь обрабатывают слабой органической кислотой при 54-60^oС, имеющей рН 4,6-4,8 в соотношении 1:1 по массе в течение 30-40 мин, извлекая при этом растворенные активные пептиды, аминокислоты и минеральные соединения. Затем производят центрифугирование, удаление жира и фильтрацию раствора. Полученный субстрат используют в виде геля либо подвергают высушиванию в лиофильных или распылительных сушилках и используют в виде порошка.

Применение предварительного замораживания измельченных ног цыплят-бройлеров позволяет увеличить выход растворимого белка на 30% в субстрат без повышения температуры и увеличения продолжительности обработки; в свою очередь увеличение выхода растворимого белка позволяет увеличить влагоудерживающие свойства, положительно влияет на липидный обмен, ускорить заживления раны на 7 сут, по сравнению с незамороженным образцом.

Экономически более целесообразна транспортировка и хранение замороженного измельченного сырья с позиций использования специализированных предприятий по выработке медицинской продукции для получения препарата.

Определение эффективности лекарственного препарата, полученного по предлагаемому способу (препарат N 2) и способу-прототипу (препарат N 1) проведено в серии экспериментов на животных (крысы). При проведении опытов экспериментаторам были даны два препарата без указания способа их получения.

Для определения эффективности применения предлагаемого средства в косметологии была проведена экспериментальная апробация в Косметологической лечебнице Института красоты. При длительном накожном применении водно-масляных эмульсий, содержащих 5-20% препарата N 2 не обнаружено общетоксического воздействия на организм крыс, констатировано отсутствие раздражающего и аллергизирующего действия. Морфологические исследования биоптатов кожи и печени крыс не выявили патологических изменений в их структурах. Биохимическими опытами установлено, что водно-масляные эмульсии, содержащие 5 и 20% препарата N 2 увеличивали содержание общих суммарных липидов в среднем на 14% (препарат N 1 на 9,8%), уровень общих растворимых белков увеличивался на 6% под влиянием 20%-ной концентрации препаратов (для препарата N 1 возрастание концентрации общих растворимых белков статистически недостоверно). Гистологическая экспертиза биоптатов кожи показала, что препарат N 2 проявляет влагоудерживающее действие, стимулирует увеличение волосяных фолликулов, размеров сальных желез. При остром опыте на мышах установлено, что препарат безвреден, т. к. относится к УI классу токсичности по классификации К.К.Сидорова.

Так как процессы ранозаживления в основном регламентированы состоянием и развитием грануляционной ткани важнейшего показателя репаративной функции соединительной ткани, предпринято комплексное исследование грануляционной ткани в динамике, сопоставление изменения ее биохимического состава с морфологическими и другими характеристиками ранозаживления.

Проведен сравнительный морфологический анализ влияния препаратов N 1 и N 2 на заживление хирургической раны, определение функциональной активности фагоцитов в ткани (факторов иммунной защиты непосредственно в зоне очага) и изучение изменения функциональной активности факторов гуморального механизма неспецифической защиты организма под действием препаратов.

Работа проведена на крысах-самцах массой 150-170 г, с экспериментальными ранами: полнослойная кожная вырезанная рана 2,5·2 см под повязкой и полнослойная кожная вырезанная рана в области спины со вшиванием тефлонового кольца диаметром 2,5 см по Слуцкому Л.И.

Определяли содержание в клетках гликозаминоглианов (ГАГ), рибонуклеопротеидов (РНП), активность щелочных фосфотаз в фибробластах и лейкоцитах, активность сукцинатдегидрогеназы (СДГ) в фибробластах и макрофагах, содержание нуклеиновых кислот (ДНК и РНК) и коллагена в грануляционно ткани в процессе заживления. Отмечено очищение раны от наложений фибрина, эритроцитов и лейкоцитов на 3-5 сут лечения, максимально выражено развитие грануляций количество активных макрофагов с высокой активностью СДГ в цитоплазме, пролиферация кровеносных капилляров и увеличение числа функционирующих их форм, дальнейшая дифференциация клеточных элементов грануляций с увеличением числа зрелых активных фибробластов с высокой активностью ЩФ в цитоплазме и высоким содержанием РНП, СДГ, а в межуточной ткани накапливаются ГАГ и начинается фибриллогенез в виде тонких нитей коллагена при применении препарата N 2 значительно превышает таковое в группе, леченных препаратом N 1.

К 10 сут эксперимента процесс очищения ран полностью завершен, причем процесс проходил более быстро при препарате N 2, что обусловливает уменьшение количества макрофагов, обеспечивает более эффективное созревание фибробластов и, как следствие, усиление фибриллогенеза. Таким образом, по отношению к уровню коллагена в грануляционной ткани препарат N 2 более активен, чем препарат N 1.

При определении активности факторов иммунной защиты в зоне очага под влиянием препаратов 1 и 2 в качестве объекта исследования использовали гомогенат ткани из области поражения и изучали интенсивность миграции нейтрофилов и уровень хемилюминесцентного ответа. При этом выявлена наибольшая эффективность препарата N 2: уровень функциональной активности фагоцитов был достоверно выше в образцах с препаратом N 1 22,8 + 0,3 мВ/с/г, с препаратом N 2 10,7 + 0,09 мВ/с/г (Р <0,05). Миграция нейтрофилов была соответственно 1,9·10 кл/г из клеток, что говорит о замене клеточного состава ткани при использовании препарата N 2 и соответственно лучшей регенерации раны.

Таким образом, препарат по предлагаемому способу безвреден, не обладает раздражающим и аллергизирующим действием, оказывает положительное влияние на липидный обмен, проявляет влагоудерживающее действие, биологически активен. Препарат рекомендован для использования в косметических изделиях в концентрации от 5 до 20% Кроме того, доказаны высокая биологическая активность и лечебный эффект при использовании препарата по предлагаемому способу при лечении ран, ожогов, трофических язв.

Формула изобретения

Способ получения средства, стимулирующего репаративные процессы, путем измельчения конечностей цыплят в возрасте не более 9 недель, обработку сырья при комнатной температуре 1%-ным раствором уксусной кислоты при соотношении 1:1, отделение надосадочной жидкости, промывку водой, повторную обработку 1% -ным раствором уксусной кислоты в течение 30 мин, отделение целевого продукта центрифугированием с последующим его фильтрованием и сушкой, отличающийся тем, что после измельчения сырье замораживают при температуре не выше 18^oС, в результате целевой продукт дополнительно обладает влагоудерживающим, омолаживающим косметическим действием.

NF4A Восстановление действия патента Российской Федерации на изобретение

Номер и год публикации бюллетеня: 10-2004

Извещение опубликовано: 10.04.2004