Способ ранней диагностики невынашивания беременности

 

Назначение: медицина, акушерство, для доклинической диагностики невынашивания беременности. Сущность: в пробе периферической венозной крови беременной женщины определяют относительное содержание нейтрофилов, имеющих на своей поверхности структуры, реагирующие с трофобластическим β₁-гликопротеидом, и при их уровне выше или равном 29% диагностируют угрозу невынашивания беременности у женщин, не имеющих клинической картины данной патологии. 1 табл.

Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству, и может быть использовано для доклинической диагностики невынашивания беременности.

Актуальность разработки определяется отсутствием высокоэффективных способов доклинической диагностики такой часто встречающейся акушерской патологии, как невынашивание беременности (от 30 до 60%) [1][4] Известен способ диагностики угрозы невынашивания беременности по определению сенсибилизации лимфоцитов матери к эмбриональному антигену (ЭАГ) и наличию блокирующих антител в сыворотке крови женщины (БАТ) [2] Суть способа состоит в определении сенсибилизации к ЭАГ и наличия БАТ и при показателях сенсибилизации менее 30% и БАТ более 2 4% судят об угрозе прерывания беременности.

Однако данный способ обладает рядом существенных недостатков: блокирующие антитела, определяемые данным способом, выявляются лишь у 50 67% беременных женщин [2] наличие БАТ не отражает состояние иммунной системы; результаты реакции могут искажаться за счет изменения блокирующей способности сыворотки; антиген, используемый в реакции, изготавливается лабораторным путем и не является стандартным, поэтому содержит большое количество неидентифицированных антигенных детерминант, снижающих специфичность метода; наличие неспецифической адгезии; не во всех случаях действие антигена проявляется в торможении прилипания лимфоцитов.

Наиболее близким по техническому решению к заявляемому способу является способ оценки состояния иммунной системы беременной женщины по определению в венозной крови T_γ-лимфоцитов и влиянию их содержания на характер течения беременности [7] Сущность данного способа заключается в изменении содержания T_γ-лимфоцитов при осложненной беременности, а именно снижении их уровня менее 20% при угрозе невынашивания беременности.

Данный способ позволяет достаточно эффективно с точностью до 69,05% прогнозировать изменения в характере течения беременности, но имеет ряд существенных недостатков: при угрозе неавынашивания беременности в 1 триместре у женщин нормальные значения показателя встречаются в 32% случаев;
результаты реакции не учитывают воздействие факторов, под влиянием которых происходят изменения в иммунной системе беременной женщины при развитии осложнений беременности;
данный способ является менее точным (69,05%) и специфичным (58,33%), чем заявляемый.

Целью изобретения является повышение точности и специфичности доклинической диагностики угрозы прерывания беременности на ранних сроках (до 20 недель).

Поставленная цель достигается исследованием в периферической венозной крови беременной женщины относительного содержания нейтрофилов, имеющих на своей поверхности структуры, реагирующие с трофобластическим b₁-гликопротеидом (ТБГ) (Н-ТБГ-РОК), и при их уровне большем или равном 29% прогнозируется развитие угрозы невынашивания беременности у женщин, не имеющих клинической картины данной патологии, в 83,33% случаев.

Способ осуществляется следующим образом. Из локтевой вены забирают 2 мл крови в пробирку с гепарином из расчета 25 ед. на 1 мл крови. Кровь помещают в термостат под углом 45^o и отстаивают 45 мин при 37^oC. Отстоявшуюся плазму отбирают и центрифугируют при 1500 об/мин 10 мин. Осадок клеток отмывают добавлением 10 мл среды 199 и центрифугированием при 1500 об/мин 10 мин. Клетки ресуспендируют в среде 199 и доводят их концентрацию до 2 х 10⁶/мл. К 0,1 мл клеточной суспензии добавляют 0,1 мл эритроцитарного диагностикума, содержащего 1% эритроцитов быка, проинкубированных с препаратом ТБГ (концентрация препарата 60 мкг/мл) в течение 1 ч при комнатной температуре. Клетки с диагностикумом центрифугируют 5 мин при 1500 об/мин и помещают в термостат на 20 мин при 37^oC. Образовавшиеся розетки фиксируют 0,05 мл 3%-ного глютарового альдегида и делают мазок на предметном стекле. После окраски мазка по Романовскому производят подсчет нейтрофилов, образовавших розетки с 3 и более эритроцитами диагностикума ТБГ-бык, путем светового микроскопирования. Постановка методики от момента забора крови до оценки результатов занимает 2 ч.

Новизна заявляемого способа заключается в том, что впервые предлагается диагностировать угрозу невынашивания беременности у женщин с отсутствием выраженной клинической картины данной патологии по определению в периферической венозной крови относительного содержания нейтрофилов, несущих на своей поверхности структуры, реагирующие с ТБГ.

Н-ТБГ-РОК были обнаружены в периферической крови женщин с физиологическим течением беременности, ранее данный параметр для диагностики угрозы невынашивания не использовался [5]
Состояние иммунной системы беременной женщины отражает суть регуляторных механизмов, обеспечивающих физиологическое течение беременности и нормальное развитие плода. Иммунологические реакции во время беременности в большинстве своем находятся под контролем специфических плацентарных белков, одним из которых является ТБГ [9] Воздействие ТБГ на иммунную систему осуществляется через специфические структуры на поверхности иммунокомпетентных клеток [6] Данные структуры в настоящее время обнаружены на всех популяциях иммунокомпетентных клеток. Однако особый интерес в плане прогнозирования угрозы невынашивания беременности представляет популяция Н-ТБГ-РОК, так как нейтрофилы являются наиболее реактивными клетками иммунной системы, способными реагировать на малейшие изменения внутренней среды организма, в том числе и на изменение концентрации ТБГ в крови при развитии угрозы невынашивания. Содержание белка в сыворотке крови беременных резко снижается за несколько дней до самопроизвольного выкидыша [3,8] Однако изменения структуры мембраны нейтрофилов обнаруживаются, по нашим данным, раньше за 3 4 недели до развития угрозы невынашивания.

Существенными отличиями заявляемого способа являются использование иного, чем в способе-прототипе, иммунологического показателя Н-ТБГ-РОК и определение его содержания для ранней диагностики невынашивания беременности.

Пример 1. Беременная В. 22 г. беременность вторая, желательная. Первая беременность закончилась в 5 недель медицинским абортом, без осложнений. Нарушения менструальной функции, а также гинекологических и соматических заболеваний не выявлено. На учет в женской консультации встала в 7 недель беременности. Обследована при взятии на учет. Жалоб не предъявляла. При осмотре: шейка матки без дефектов, наружный зев сомкнут. Матка увеличена до 7-недельного срока беременности, мягковатой консистенции, безболезненная, тонус нормальный, возбудимость не повышена. Придатки не определяются. Выделения слизистые, умеренные. Содержание ТБГ, ПЛ, эстриола, прогестерона в крови в пределах нормы. Диагноз: беременность 7 недель.

Обследование по способу-прототипу: содержание T_γ-лимфоцитов 21% (при норме 20% и более)
Заключение прогнозируется физиологическое течение беременности.

Обследование по заявляемому способу: содержание Н-ТБГ-РОК 48% (при норме менее 29%).

Заключение диагностируется угроза невынашивания беременности.

Женщина по рекомендации специалиста-иммунолога взята на особый контроль. При повторном обследовании в 10 недель у женщины появились тянущие боли внизу живота и пояснице, отмечался повышенный тонус матки. УЗ-исследование: беременность 10 недель, умеренный тонус по задней стенке, повышенный тонус в области плацентации. Женщина с диагнозом угроза невынашивания беременности была направлена на лечение в стационар. В настоящее время беременность протекает без осложнений.

Пример 2. Беременная Е. 29 лет, резус-отрицательная принадлежность крови, беpеменность третья. Первая и вторая беременности закончилась родами в срок и рождением здорового ребенка, резус-конфликт не отмечался. Из анамнеза нарушений менструальной функции, гинекологических и соматических заболеваний не выявлено. На учет в Ж/К встала в 8 недель беременности. Жалоб не предъявляла. При осмотре: шейка матки без дефектов, наружный зев сомкнут.Матка увеличена до 8-недельного срока беременности, мягковатой консистенции, безболезненная при пальпации, тонус нормальный, возбудимость не повышена. Придатки не определяются. Выделения слизистые, умеренные. Показатели биохимических, гормональных исследований в пределах нормы. Уровень ТБГ, ПАМГ-1 соответствуют показателям физиологического течения беременности. Резус-антитела не выявлены. Диагноз: беременность 8 недель. Резус-отрицательная принадлежность крови.

Обследование по способу-прототипу: содержание T_γ-лимфоцитов 27%
Заключение прогнозируется физиологическое течение беременности.

Обследование по заявляемому способу: содержание Н-ТБГ-РОК 11%
Заключение прогнозируется физиологическое течение беременности.

В настоящее время беременность в сроке 26 недель протекает без осложнений.

Пример 3. Больная М. 20 лет, первобеременная. Беременность желательная. Из анамнеза нарушений менструальной функции, гинекологических и соматических заболеваний не выявлено. На учете по беременности в Ж/К состоит с 7 недель. Обследована: жалоб не предъявляла. При осмотре: шейка матки без дефектов, чистая, наружный зев сомкнут. Матка увеличена до 7-недельного срока беременности, мягковатой консистенции, безболезненная при пальпации, тонус матки не повышен, возбудимость обычная. Придатки не определяются. Выделения слизистые, умеренные. Исследования эстриола мочи, прегнандиола на уровне нормы. Содержание ТБГ, ПЛ в сыворотке крови снижено. Диагноз: беременность 7 недель.

Обследование по способу-прототипу: содержание T_γ-лимфоцитов 21%
Заключение прогнозируется физиологическое течение беременности.

Обследование по заявляемому способу: содержание Н-ТБГ-РОК 29%
Заключение риск развития угрозы невынашивания беременности.

С 10 недель беременности появились клинические признаки развития угрозы невынашивания беременности: тянущие боли внизу живота, мажущие кровянистые выделения из половых путей, повышение тонуса матки, наружный зев пропускал кончик пальца. Женщина госпитализирована в специализированный стационар, где ей проводилась сохраняющая терапия. Беременность закончилась преждевременными родами в сроке 36 недель и рождением ребенка с оценкой по шкале Апгар 7 8 баллов.

Проводилось иммунологическое обследование 42 женщин в ранние сроки беременности (до 20 недель). Угроза невынашивания по способу-прототипу диагностировалась у 25 женщин, диагноз подтвердился у 15 из них. По заявляемому способу угроза прерывания беременности диагностировалась у 18 женщин, диагноз подтвердился у 16 из них. Данные сравнительного анализа точности, специфичности, чувствительности заявляемого способа и способа-прототипа представлены в таблице.

Таким образом, заявляемый способ позволяет осуществлять раннюю диагностику невынашивания до появления клинической картины данной патологии, что дает возможность своевременно осуществить коррегирующую терапию и предотвратить развитие угрозы прерывания беременности. Применение метода способствует снижению частоты акушерской патологии и снижению экономических затрат на лечение.

Список литературы
1. Ариас Ф. Беременность и роды высокого риска. М. Медицина.-1989, с. 117.

2. Говалло В. И. и Сидельникова В.М. Иммунизация беременных женщин аллогенными лимфоцитами мужа как метод профилактики самопроизвольных выкидышей. Акушерство и гинекология, 1983, N 12, с.25-27.

3. петрунин Д.Д. Специфические белки плаценты человека. дис. докт. мед. наук М. 1989, с.204.

4. сидельникова В.М. Нвынашивание беременности. М. Медицина, 1986, с.5.

5. Сотникова Н. Ю. Бабакова Л.А. и Петров Р.В. Рецепторы лимфоцитов к трофобластическому бетагликопротеиду//Бюл. эксп. биол. и мед. 1985, N 3, c. 236-327.

6. Сотникова Н.Ю. Гуморальные, клеточные и рецепторные критерии иммунологического благополучия беременной женщины и новорожденного: Дис. докт. мед. наук. М. 1992, с.395.

7. Чернышов В.П. Радыш Т.В. и Валецкий В.Л. Характеристика Т-супрессоров при физиологической беременности и угрозе невынашивания беременности//Вопр. охр. мат.-1989, N 11, c.48-52.

8. Абрамова Л.В. и Татаринов Ю.С. Применение иммунодиффузионного теста на трофобластический бета-I-глобулин при невынашивании беременности//Акуш. и гинек. 1979, N 4, c.10-11.

9. Татаринов Ю. С. Масюкович В.Н. Иммунохимическая идентификция нового бета-I-глобулина в сыворотке крови беременных женщин//Бюл. эксп. биол. 1970, N 6, с.66.

Формула изобретения

1 Способ ранней диагностики невынашивания беременности, включающий забор периферической крови, постановку реакции розеткообразования с эритроцитами быка, определение диагностически значимого показателя, отличающийся тем, что предварительно эритроциты быка инкубируют с препаратом трофобастического бета₁-гликопротеида (ТБГ) в концентрации 60 мкг/мл, определяют содержание нейтрофилов, образовавших розетки с эритроцитами диагностикума ТБГ-быка, и диагностируют угрозу невынашивания беременности при уровне этого показателя выше или равном 29%

РИСУНКИ

Рисунок 1