Способ получения сульфатированных гликозаминогликанов

 

Согласно изобретению роговицы сельскохозяйственных животных помещают в смесь равных частей физраствора и дистилированной воды в соотношении роговицы и водной смеси 1:1, трехкратно замораживают при 0^oC, измельчают до частиц размером 0,1·0,1 мм, добавляют этанол до концентрации 1%, гемогенизируют, повторно добавляют этанол до конечной концентрации 5%, после чего кипятят в течение 5 - 10 мин. Способ обеспечивает получение конечного продукта с высоким содержанием гликозаминогликанов, практически лишенного белка и других балластных веществ.

Изобретение относится к области медицины, а конкретно к офтальмологии, и может быть использовано при приготовлении лекарственных форм для лечения заболеваний и повреждений роговицы глаза.

Известен способ выделения сульфатированных гликозаминогликанов из роговой оболочки глаза, включающий обработку роговицы сельскохозяйственных животных водными растворами и этанолом с последующим кипячением (патент N 2056851). Недостатками способа является обработка роговицы ферментами - папаином, что приводит к разрушению первичной структуры остова ткани и частичной потере гликозаминогликанов, при диализе часть гликозаминогликанов остается в осадке, в частности кератан-сульфат.

Задачей изобретения является разработка щадящего способа получения сульфатированных гликозаминогликанов (сГАГ).

Техническим результатом изобретения является получение конечного продукта с высоким содержанием сульфатированных гликозаминогликанов (сГАГ), практически лишенного белка и других балластных веществ.

Технический результат достигается тем, что в способе получения сГАГ, заключающемся в обработке роговицы сельскохозяйственных животных водными растворами и этанолом с последующим кипячением, согласно изобретению роговицы сельскохозяйственных животных помещают в смесь равных частей физраствора и дистиллированной воды в соотношении роговицы и водной смеси 1:1, трехкратно замораживают при 0^oC, измельчают до частиц размером 0,1·0,1 мм, добавляют этанол до концентрации 1%, гомогенизируют, повторно добавляют этанол до конечной концентрации 5%, после чего кипятят в течение 5-10 мин.

Трехкратное замораживание и размораживание тканей в смеси воды и физраствора позволяет осадить практически все гликозаминогликаны, связанные с белком из межуточного вещества, при этом выход их составляет не менее 95%, последующее измельчение тканей и гомогенизация позволяет увеличить выход сГАГ, интимно связанных с коллагеновым остовом стромы роговицы.

Проведенные экспериментальные исследования показали, что при данном способе экстрагируется более 96,5% всех сГАГ роговицы.

Способ осуществляется следующим образом.

К свежим роговицам свиней или крупного рогатого скота добавляют раствор, состоящий из равных частей физраствора и дистиллированной воды, перемешивают стеклянной палочкой, после чего смесь помещают в холодильную камеру, после полного замораживания смеси ее оставляют при комнатной температуре до полного размораживания. данный процесс повторяют еще два раза, после последнего размораживания смесь измельчают механическим способом на ультраизмельчателе фирмы "Aiko" Япония, до частиц 0,1·0,1 мм, после чего добавляют 96,6% этанола до концентрации 1%, смесь гомогенизируют ультраизмельчителем, повторно добавляют 96,6% этанола до конечной концентрации 5%, смесь инкубируют в течение 24 ч, после чего кипятят в течение 5-10 мин.

Полученный таким образом гомогенат центрифугируют, надосадок сливают, лиофилизируют. В полученном порошке определяют содержание сГАГ известным способом, например по Фарндейлу.

Пример 1. Из глаз свиней острой бритвой вырезают роговицы, отступая 4 мм от лимба, помещают в стеклянный сосуд до массы 1 кг, заливают 1 л дистиллированной воды и физраствора, взятых в соотношении 1:1, перемешивают стеклянной палочкой, после чего смесь помещают в холодильную камеру, после полного замораживания смеси ее оставляют при комнатной температуре до полного размораживания, данный процесс повторяют еще два раза, после последнего размораживания смесь измельчают механическим способом до частиц размеров 0,1·0,1 мм, после чего добавляют 20,0 мл 96,6% этанола, смесь гомогенизируют, повторно добавляют 80 мл 96,6% этанола, смесь инкубируют в течение 24 ч, после чего кипятят в течение 5-10 минут. Полученный гомогенат центрифугируют, надосадок сливают, лиофилизируюте

Формула изобретения

Способ получения сульфатированных гликозаминогликанов, заключающийся в обработке роговицы сельскохозяйственных животных водными растворами и эталоном с последующим кипячением, отличающийся тем, что роговицы сельскохозяйственных животных помещают в смесь равных частей физраствора и дистиллированной воды в соотношении роговицы и водной смеси 1 : 1, трехкратно замораживают при 0^oC, измельчают до частиц размером 0,1x0,1 мм, добавляют этанол до концентрации 1%, гомогенизируют, повторно добавляют этанол до конечной концентрации 5%, после чего кипятят в течение 5 - 10 мин.