Применение антиэстрогенных соединений, а также фармацевтически приемлемых солей и сольватов для уменьшения концентрации глюкозы в крови и фармацевтический препарат

 

Предложено новое средство и фармацевтическая композиция на его основе для снижения уровня глюкозы в крови. Это антиэстроганные соединения и их фармацевтически приемлемые соли и сольваты : [6-гидрокси-2-(4-гидроксифенил)бензо[b] тиен-3-ил][4-[2-(1-пиперидинил)этокси]фенил]метанон или [6-гидрокси-2(4-гидpoкcифeнил)бeнзo[b] тиен-3-ил] [4-[2-(1-пирролидинил)этокси]фенил] метанон. Изобретение расширяет арсенал средств и фармацевтических композиций указанного назначения. 2 c. и 1 з.п.ф-лы, 3 табл.

Изобретение относится к способу уменьшения содержания глюкозы в крови людей, особенно больных диабетами.

Сахарный диабет - это системное заболевание, характеризующееся нарушением действия инсулина и других регуляторных гормонов в метаболизме углеводов, жиров и белков, а также в структуре и функции кровеносных сосудов. Первичным симптомом диабетов является гипергликемия, часто сопровождаемая глюкозурией (присутствием в моче большего количества глюкозы) и полиурией (выделением большого объема мочи). Дополнительные симптомы появляются в хронических и длительных диабетах. Эти симптомы включают дегенерацию стенок кровеносных сосудов. Хотя многие различные органы поражаются такими изменениями сосудов, как оказалось, нервы, глаза и почки наиболее восприимчивы. Как таковые, длительные сахарные диабеты, даже при лечении инсулином, приводят к слепоте.

Известны два типа диабетов. Диабеты I типа являются юношескими, связаны с кетозом, развиваются в ранний период жизни, имеют тяжелые симптомы и в близкой перспективе поражение сосудов. Регуляция этого типа диабетов затруднена и требует экзогенного введения инсулина. Сахарные диабеты типа II свойственны взрослым, устойчивы к кетозу, развиваются в поздний период жизни, протекают мягче и более медленно.

Один из наиболее значительных успехов в истории медицинской науки пришел в 1922 году, когда Бэнтинг и Бест продемонстрировали терапевтические эффекты инсулина на больных диабетом собаках. Однако даже сегодня картина основных биохимических нарушений, вызванных заболеванием, не ясна и диабеты остаются важной проблемой медицины. Полагают, что 12% населения США поражено разными формами диабета. Пероральное введение гипогликемических средств стало важным достижением в лечении гипергликемии. Пероральные гипергликемические средства обычно используют для лечения диабетов взрослых людей. Наблюдение метаболизма глюкозы у модельных животных и у людей, больных диабетом типа II, наводит на мысль, что половые стероиды играют разрешающую роль в фенотипной экспрессии гипергликемии. Эти наблюдения побудили изучение влияния андрогенов и экстрогенов на уровень глюкозы в крови. Введение тестостерона нормальным самкам крыс или самкам крыс с удаленным яичником приводит к заметной устойчивости к инсулину, которая коррелирует с морфологическими изменениями в мышцах, Холман и др. , Am. J. Physiol., 259, E555-560 (1990); там же, 262, E851-855 (1992). У стрептозотоциновых диабетических крыс имплантированный тестостерон является антагонистом способности остаточного инсулина поддерживать гликемический контроль, Ле и др., Endocrinology, 116, 2450-2455 (1985). Напротив, глюкозурия исчезает у кастрированных диабетических КК мышей и появляется вновь, при замещении андрогенов у этих мышей, Нонака и др. Jpn. J. Vet. Sci. , 50, 1121-1123 (1988); Хигуичи и др., Exp. Anim., 38, 25-29 (1989).

Результаты введения эстрогенов также подтверждают гипотезу о том, что равновесие между андогенами и эстрогенами является решающим фактором для развития гипергликемии. Ежедневное введение эстрадиола диабетическим КК мышам нормализует уровень глюкозы в крови и устраняет глюкозурию, Тоширо и др., Jpn. J. Vet. Sci., 51, 823-826 (1989). Эстрадиол также понижает уровень глюкозы в крови у мышей C57BL-6J-ob/ob, Дюбюк, Proc. Soc. Exp. Biol. Med., 180, 468-473 (1985) и C57BL/KsJ-db/db, Гаррис, Anatomical Record, 225, 310-317 (1989).

Настоящее изобретение предлагает способ уменьшения концентрации глюкозы в крови млекопитающих, нуждающихся в уменьшении концентрации глюкозы в крови, который заключается во введении терапевтически эффективного количества антиэстрогенного соединения или его фармацевтически приемлемой соли или сольвата.

Термин "антиэстроген", используемый в этом описании и формуле изобретения, обозначает неэндогенное, нестероидное химическое соединение, которое показывает антиэстрогенную активность (как дополнительно определено ниже), но в то же самое время обладает гормональной или эстрогенной активностями в некоторых селективных тканях и органах. Исторически литература говорит об антиэстрогенах как о соединениях, которые связываются с рецепторами эстрогенов (например, конкурируют с эстрадиолом за эти рецепторы) и ингибируют реакцию матки или груди на эстроген, in vivo. Многие из этих соединений, как было показано, применимы в качестве средств против оплодотворения, противораковых средств или средств против других патологических состояний, для которых полезно ингибирование эстрогенной активности. Многие из этих соединений, как было отмечено, являются смесью агонисты-антагонисты, то есть при некотором уровне дозы ведут себя как агонисты эстрогена, в то время как при более высоких дозах являются антагонистами эстрогена. Способы определения классических антиэстрогенов хорошо известны опытным специалистам, например, описаны в работе: Хэйис и др., J.A. Endocrinology, 1981, 108, 164-172. Недавно было обнаружено, что некоторые химические классы исторически установленных антиэстрогенов имеют способность действовать благоприятно на некоторые ткани и органы, реагирующие на эстроген, в то время как являются антагонистами эстрогенной реакции у других (тканей и органов). Не ясно, можно ли это различие объяснить количественным действием смеси агонист-антагонист или качественно отличным механизмом действия. Примером благоприятного дифференциального действия является Ралоксифен, обладающей способностью снижать уровень липидов сыворотки и уменьшать резорбцию костей без нежелательных маточных эффектов у постклимактерических женщин.

Следует заметить, что не все соединения, которые могут быть антиэстрогенами согласно классическому определению, сделанному выше, могут обладать активностью и полезностью, описанными в изобретении.

В общем, антиэстрогенные соединения, заявленные в этом изобретении, являются теми соединениями, которые являются антиэстрогенными в классическом смысле, и которые обладают полезными эстрогенными свойствами. Наиболее обычными соединениями являются химический класс триарилэтилена или Z-триарилпропенонамины. Другие антиэстрогенные химические классы базируются на их достоинствах.

Предпочтительными и наиболее предпочтительными соединениями этого изобретения являются те, которые демонстрируют наибольший гипогликемический эффект, и которые также показывают наименьший нежелательный эстрогенный побочный эффект в органах, таких как груди и матка, Джонс и др., J. Med. Chem., 1984, 27, 1057-1066. Дополнительно, предпочтительные соединения этого изобретения, которые имеют весьма пониженную активность агонистов эстрогена, должны быть наиболее полезны при лечении мужских особей, чтобы избежать побочных эффектов феминизации, таких как гинекомастия.

Антиэстрогены, рассматриваемые в рамках настоящего изобретения, являются соединениями, имеющими очевидное связывающее сродство к рецепторам эстрогена, обычно обозначаемое величиной KI, значение которой больше 0,05 нМ и меньше 5000 нМ, рассчитанное из ингибирующей величины IC₅₀ с помощью уравнения Ki = IC₅₀/[1+(L/Kd)], где L - концентрация меченого лигенда и Ko - константа диссоциации комплекса лиганд-рецептор, определенная в условиях насыщения или из ингибирования связывания "холодного" лиганда.

Методики выполнения анализа на связываемость для определения антиэстрогенной и эстрогенной активности известны опытным специалистам, например, Блэк и Гуд, Life Sciences, 26, 1453-1458 (1980); Блэк и Гуд, Endocrinology, 109, 987-989 (1981); Блэк и др., Life Sciences, 32, 1031-1036 (1983). Также известна взаимосвязь между кажущимся (относительным) сродством связывания и ингибирующим значением IC₅₀, концентрацией меченого лиганда и диссоциацией комплекса лиганд-рецептор, приведенными в формуле выше.

Предпочтительный метод определения эстрогенной/антиэстрогенной активностей изложен в методиках, приведенных далее.

В настоящем изобретении предложены следующие классы антиэстрогенов, полезных, как полагают, в методах изобретения: 1) триарилэтилены; 2) 2,3-диарил-2H-1-бензопираны; 3) 1-аминоалкил-2-фенилиндолы; 4) 2-фенил-3-ароилбенэтиофены; 5) 1-замещенные-2-арилдигидронафталины; и 6) 2-замещенные-3-арилбензофураны. Каждый из этих классов ниже описан подробно.

Общие химические термины, используемые в описании соединений этого изобретения, имеют свое обычное значение, например, термин "алкил" сам по себе или как часть другого заместителя обозначает алкильный радикал с нормальной или разветвленной цепью, имеющий установленное число атомов углерода, такой как метил, этил, пропил, изопропил и высшее гомологи и изомеры, если указано.

Термин "алкокси" обозначает алкил с установленным числом атомов углерода, связанный с основной молекулой атомом кислорода, например, метокси-, этокси-, пропокси-, бутокси-, пентилокси- и гексилоксигруппа и также включает структуры с разветвленной цепью, например, изопропокси- и изобутоксигруппу.

Термин "C₁-C₇-алканоилокси" обозначает группу -O-O(O)-R^a, где R^a - водород или C₁-C₆-алкил и включает формилокси-, ацетокси-, пропаноилокси-, бутаноилокси-, пентаноилокси- и гексаноилоксигруппу и им подобные группы и также включает изомеры с разветвленной цепью, например, 2,2-диметилпропаноилокси- и 3,3-диметилбутаноилоксигруппа.

Аналогично, термин "C₄-C₇-циклоалканоилокси" обозначает группу -O-C(O)-C₃-C₆-циклоалкил, где C₃-C₆-циклоалкил включает циклопропил, циклобутил, циклопентил и циклогексил.

Термин "C₁-C₆-алкокси-C₁-C₇- алканоилокси" обозначает группу -O-C(O)-R^b-O- C₁-C₆-алкил, где R^b - связь, C₁-C₆-алкоксикарбонилоксигруппа или C₁-C₆-алкандиил, и включает, например, метоксикарбонилокси-, этоксикарбонилокси-, пропоксикарбонилокси-, бутоксикарбонилокси-, метоксиацетокси-, метоксипропаноилокси-, метоксибутаноилокси-, метоксипентаноилокси-, метоксигексаноилокси-, этоксиацетокси-, этоксипропаноилокси-, этоксибутаноилокси-, этоксипентаноилокси-, этоксигексаноилокси-, пропоксиацетокси-, пропоксипропаноилокси- и пропоксибутаноилоксигруппу и им подобные группы.

Термин "незамещенный или замещенный арилокси" обозначает группу -O-C(O)-арил, где арил - фенил, нафтил, тиенил или фурил, причем каждая группа незамещенная или монозамещенная гидроксигруппой, галогеном, C₁-C₃-алкилом или C₁-C₃-алкоксигруппой.

^* Термин "галоген" обозначает хлор, фтор, бром или иод.

^* Термин "незамещенный или замещенный арилоксикарбонилокси" обозначает группу -O-C(O)-O-арил, где арил - фенил, нафтил, тиенил или фурилгруппа, причем каждая группа замещенная или незамещенная гидроксигруппой, галогеном, C₁-C₃-алкил или C₁-C₃-алкокси.

Термин "фармацевтически приемлемые соли" относится к солям соединений вышеприведенных классов, которые практически нетоксичны для живых организмов. Типичные фармацевтически приемлемые соли включают соли, полученные реакцией соединений вышеприведенных классов с фармацевтически приемлемыми неорганическими или органическими кислотами или фармацевтически приемлемыми щелочными металлами или органическими основаниями, в зависимости от типа присутствующего в соединении заместителя.

Примеры фармацевтически приемлемых неорганических кислот, которые можно использовать для фармацевтически приемлемых солей, включают хлористоводородную, фосфорную, серную, бромистоводородную, иодистоводородную и фосфористую кислоты и им подобные кислоты. Примеры фармацевтически приемлемых органических кислот, которые можно использовать для получения фармацевтически приемлемых солей, включают алифатически моно- и дикарбоновые кислоты, щавелевую, угольную, лимонную и янтарную кислоты, фенилзамещенные алкановые кислоты, алифатические и ароматические сульфокислоты и другие кислоты. Фармацевтически приемлемые соли, полученные из неорганических и органических кислот, включают, таким образом, хлоргидраты, бромгидраты, нитраты, сульфаты, пиросульфаты, бисульфаты, сульфиты, бисульфиты, фосфаты, моногидрофосфаты, дигидрофосфаты, метафосфаты, пирофосфаты, иодгидраты, фторгидраты, ацетаты, пропионаты, формиаты, оксалаты, цитраты, лактаты, п-толуолсульфонаты, метансульфонаты, малеаты и другие.

Многие соединения из вышеприведенных классов, которые содержат карбоксигруппу, карбонил, гидроксигруппу и сульфоксидную группу, можно превратить в фармацевтически приемлемые соли реакцией с фармацевтически приемлемым щелочным металлом или органическим основанием. Примеры фармацевтически приемлемых органических оснований, которые можно использовать для получения фармацевтически приемлемых солей, включают аммиак, амины, такие как триэтаноламин, триэтаноламин, этиламин и другие. Примеры фармацевтически приемлемых оснований щелочных металлов включают соединения формулы MOZ, где M - щелочной металл, например, натрий, калий или литий, и Z - водород или C₁-C₄-алкил.

Следует понимать, что отдельно взятый анион или катион, образующий часть любой соли этого изобретения не является опасным, пока соль, как целое, фармакологически приемлемое и пока анион или катион не вносят нежелательного качества.

В дополнение, некоторые из соединений, предложенные как полезные в методах настоящего изобретения, могут образовывать сольваты с водой или обычными органическими растворителями. Такие сольваты находятся в рамках настоящего изобретения.

Первый класс антиэстрогенов представляет собой триарилэтилены. Эти соединения широко известны, предложены и получены по методикам, описанным в патентах США 4536516 и 2914563; Огава и др., Chem. Pharm. Bull., 39 (4), 911 (1991), которые все включены в качестве ссылок. Характерные показательные соединения этого класса включают Тамоксифен, Кломифен и (z)-4-{1-[4-(2-диметиламино)этокси)фенил]-2- (4-изопропилфенил)-1-бутенил}фенилмонофосфат.

Триарилэтилены охватывают соединения формулы I в которой R - основная эфирная группа формулы -OC_nH_2nA, где n = 2, 3 или 4 и A - диалкиламиногруппа, где алкил содержит 1-4 атома углерода, или циклическая группа, выбранная из N-пиперидинила, N-пирролидинила, N-морфолинила и N-гексаметилениминогруппы; каждый из R¹ независимо является водородом, гидроксигруппой, галогеном или метоксигруппой, и их фармацевтически приемлемые соли и сольваты.

Патент США N 4536516 описывает Тамоксифен - триарилэтилен формулы 1a и его фармацевтически приемлемые соли присоединения кислоты и сольваты и способы его получения.

Также патент США N 2914563 описывает триарилэтилены формулы II, в которой R - основная эфирная группа формулы -OC_nH_2nA, где n = 2, 3 или 4 и A - диалкиламиногруппа, где алкильные группы независимо 1-4 атомов углерода, или циклическая группа, такая как N-пиперидинил, N-пирролидинил или N-морфолинил. Группа -OC_nH_2nA связана с фенилом в п-положении относительно углерода, связанного с этиленом. Каждая из R¹ независимо является водородом, гидроксигруппой, галогеном или метоксигруппой; X - галоген, и их фармацевтически приемлемые соли и сольваты. Там же предложены способы получения таких соединений.

Огава и др., предложены триарилэтилены формулы III в которой R² и R³ независимо выбирают из водорода или метила; R⁴ - изопропил, изопропен-2-ил, моно- или дигидроксиизопропил; R⁵ - гидроксигруппа или фосфат (-OPO₃H₂), и их фармацевтически приемлемые соли и сольваты. Эта статья также предлагает способ получения таких соединений.

Второй класс антиэстрогенов представляет собой 2,3-диарил-2H-1-бензопираны. Эти соединения предложены и получены по методикам, описанным в EP 470 310A1 и в статьях Шарма и др., J. Med. Chem., 33, 3210, 3216, 3222 (1990), которые включены в качестве ссылки во всей полноте. Характерные соединения этого класса включают 2-{4-[2-(1-пиперидинил)этокси]фенил}-3-(4-гидрофксифенил)-2H-1- бензопиран; 2-{4-[2-(1-пиперидинил)этокси]фенил}-3-фенил)-7-метокси-2H-1- бензопиран; 2-{4-[2-(1-пиперидинил)этокси]фенил}-3-(4-гидроксифенил)-7-гидрокси- 2H-1-бензопиран.

EP 470310 A1 описывает бензопираны формулы IV
в которой R⁶ и R⁷ (могут быть одинаковыми или различными) - водород, гидроксигруппа, C₁-C₁₇-алкоксигруппа или C₂-C₁₈-алкоксикарбонил; R⁸-

и их фармацевтически приемлемые соли и сольваты, а также способы их получения.

Третий класс антиэстрогенов представляет собой 1-аминоалкил-2-фенилиндолы. Эти соединения предложены и получены по методикам, описанным фон Анжерером и др., J. Med. Chem., 33, 2635 (1990), которые включены сюда в качестве ссылки во всей полноте.

1-Аминоалкил-2-фенилиндолы, описанные фон Анжерером и др., это соединения формулы V,

в которой R⁹ - водород или метил; R¹⁰ и R¹¹ - метокси- или гидроксигрупп; n = от 4 до 8; Y - группа NR¹²R¹³, где R¹² и R¹³ независимо являются водородом, метилом или этилом или один из R¹² или R¹³ - водород, а другой - бензил, или вместе с атомом азота образуют пирролидинил, пиперидинил или морфолинил, и их фармацевтически приемлемые соли и сольваты. Способы синтеза этих соединений известны из ссылок или предложены здесь.

Четвертый класс антиэстрогенов представляет собой 2-фенил-3-ароилбензо/b/тиофены; (Z-триарилпропеноны). Эти соединения предложены и получены по методикам, описанным в патентах США N 4133814 и 4418068 и в статье Джонса и др. , J. Med. Chem., 27, 1057-1066 (1984), которые включены сюда в качестве ссылки во всей полноте. Характерные соединения этого класса включают Ралоксифен {6-гидрокси-2-(4-гидроксифенил)бензо/b/тиен-3-ил}{4-2-(1-пиперидинил) этокси/фенил}метанон хлоргидрат, ранее кеоксифен) и /6-гидрокси-2-(4-гидроксифенил)бензо/b/тиен-3-ил/-/4-2-(1-пиперидинил) этокси/фенил} метанон хлоргидрат.

2-фенил-3-ароилбензо/b/тиофаны приведены в патенте США N 4133814 и имеют формулу VI

в которой R¹⁶ - водород, гидрокси-, C₁-C₅-алкокси-, C₁-C₇-алканоилокси-, C₃-C₇-циклоалканоилокси-, C₁-C₆-алкокси-C₁-C₇-аканоилокси-, замещенная или незамещенная ароилокси- или замещенная или незамещенная арилоксигруппа;
R¹⁷ - водород, хлор, бром, гидрокси-, C₁-C₅-алкокси-, адамантоилокси, C₁-C₇-алканоилокси-,C₃-C₇-циклоалканоилокси-,C₁-C₆-алкокси-C₁-C₇-алканоилокси-, замещенная или незамещенная ароилокси- или замещенная или незамещенная арилоксикарбонилоксигруппа;
R¹⁸ - группа -OCH₂CH₂-X'-NR¹⁹R²⁰, где X' - связь или -CH₂, R¹⁹ и R²⁰ - C₁-C₄-алкил или вместе с атомом азота образуют пирролидинил, пиперидинил, гексаметилениминил или морфолинил, и их фармацевтически приемлемые соли и сольваты.

Способы получения этих соединений предложены в патенте США N 4133814. Ралоксифен и способ его получения описаны в патенте США N 4418068.

Пятый класс антиэстрогенов представляет собой 1-замещенные-2-арилдигидронафталины. Эти соединения были предложены и получены по методикам, описанным в патентах США N 4400543, 4323707, 4230862 и 3274213, которые полностью включены в качестве ссылки. Характерными соединениями этого класса являются Нафоксиден и Триоксифен.

Примеры 1-замещенных-2-арилдигидронафталинов приведены в патенте США N 4230862, который описывает соединения формулы VII

в которой Z - CH₂-CH₂- или -CH= CH-; R¹⁶ - водород, гидрокси- или C₁-C₅-алкоксигруппа; R¹⁷ - водород, хлор, бром, гидрокси-, C₁-C₅-алкокси-, C₁-C₅-ацилокси-, C₁-C₅-алкоксикарбонилокси-, или адамантоилоксигруппа; R¹⁸ - C₁-C₅-алкоксигруппа или группа -OCH₂-CH₂NR¹⁹R²⁰, где R¹⁹ и R²⁰ независимо являются C₁-C₄-алкилом или вместе с атомом азота, с которым они связаны. образуют пирролидинил, пиперидинил, гексаметилениминогруппу или морфолинил, с тем ограничением, что если R¹⁷ - водород, то R¹⁶ - водород, гидрокси- или C₁-C₅-алкоксигруппа и по меньшей мере один из R¹⁶ и R¹⁷ отличен от водорода, и их фармацевтически приемлемые кисло-аддитивные соли и сольваты, а также способы получения таких соединений.

Примеры 1-замещеных-2-арилдигидронафталинов также приведены в патенте США N 3274213, который описывает соединения формулы VIII,

в которой R¹⁹ и R²⁰ - C₁-C₈-алкил или вместе с атомом азота, с которым они связаны, образуют 5-7-членный насыщенный гетероциклический радикал, выбранный из пирролидинила, 2-метилпирролидинила, 2,2-диметилпирролидинила, пиперазинила, 4-метилпиперазинила, 2,4-диметилпиперазинила, морфолинила, пиперидинила, 2-метилпепиридинила, 3-метилпепиридинила, гексаметиленимила, гомопиперазинила и гомоморфолинила; q = 2-6; p = 1-4; P²¹ - C₁-C₈-алкоксигруппа, и их фармацевтически приемлемые соли и сольваты. Способ получения этих соединений описан в том же патенте.

Шестой класс антиэстрогенов представляет собой 2-замещенные-3-арилбензофураны. Эти соединения предложены и получены по методикам, описанным в статье Тео и др., J. Med. Chem., 35, 1330-1339 (1992), которая включена сюда в качестве ссылки. Предложенные Тео и др., J. Med. Chem., 35, 1330-1339 (1992) 2-замещенные-3-арилбензофураны включают соединения формулы IX

где X² - галоген; Y² - связь или метилен; R²² - водород или метил; R²³ - группа -NR¹⁹R²⁰, где R¹⁹ и R²⁰ независимо являются C₁-C₄-алкилом или вместе с атомом азота, с которым они связаны, образуют пиролидинил, пиперидинил, гексаметилениминил или морфолинил, и их фармацевтически приемлемые соли и сольваты. Там же предложены способы получения этих соединений.

Предпочтительным классом соединений, полезных в методах настоящего изобретения, являются бензтиофены. Наиболее предпочтительными являются бензтиофены формулы X

в которой X¹ - связь или метилен; R¹⁶ - гидрокси-, метокси-, C₁-C₇-алканоилокси-, C₃-C₇-циклоалканоилокси, C₁-C₆-алкокси-C₁-C₇-алканоилокси, замещенная или незамещенная ароилокси-, или замещенная или незамещенная арилоксикарбонилоксигруппа; R¹⁷ - водород, хлор, бром, гидрокси-, метокси-, C₁-C₇-алканоилокси, C₃-C₇-циклоалканоилокси-, C₁-C₆-алкокси-C₁-C₇-алканоилокси-, замещенная или незамещенная арилокси-, или замещенная или незамещенная арилоксикарбонилоксигруппа; Y¹ - гетероциклическое кольцо, выбранное из пирролидинила, пиперидинила или гексаметиленимила, и их фармацевтически приемлемые соли и сольваты. Особенно предпочтителен Ралоксифен и его пирролидиниловый аналог.

Настоящее изобретение предлагает способ понижения уровня глюкозы в крови млекопитающих, заключающийся во введении терапевтически эффективного количества антиэкстрогенного соединения или его фармацевтически приемлемой соли или сольвата. Термин "терапевтически эффективное количество", принятый в описании, обозначает количество соединения, необходимое для достижения гипогликемического эффекта после введения, предпочтительно людям, страдающим или восприимчивым к диабетам взрослых. Гипогликемический эффект, рассматриваемый в настоящем способе, включает как медицинское терапевтическое, так и (или) профилактическое лечение. Также в рамках настоящего изобретения рассматривают сопутствующее лечение пероральными гипогликемическими средствами, инсулином или производными инсулина. Такие дополнительные терапевтические средства должны определяться лечащим врачом с учетом обстоятельств.

Гипогликемическую активность соединений настоящего изобретения определяли тестированием эффективности in vivo на самцах жизнеспособных желтых мышей с диабетом тучных. Методика теста описана ниже.

Использовали 5-6-месячных самцов, жизнеспособных желтых мышей (VY/WfL-A^VY/a, с врожденным диабетом тучных, далее называемых диабетическими мышами из колонии фирмы Лилли. Штамм VY, несущий мутацию A^VY, был передан доктором Волфом исследовательской лаборатории Лилли около 20 лет назад. Колония поддерживалась скрещиванием сестра х брат между мышами A^VY и а/а. Самцы жизнеспособных желтых мышей являются тучными, гипергликемическими, гиперинсулинемическими и устойчивыми к инсулину.

Мышей содержали по 6 в пластмассовой клетке с подстилкой, водой и кормом Пурина Формулаб 5008 (Пурина Миллс, Сент-Луис, МО) сколько угодно. Температуру в комнатах для животных поддерживали 23 ± 2^oC. Свет в комнатах с животными был 600-1800 часов.

Антиэстрогены испытывали в различных дозах как примеси к пище. Каждую дозу антиэстрогена испытывали на 6 мышах, содержащихся в одной клетке. Соединения подмешивали в измельченный корм, который затем гранулировали. Контрольным мышам давали гранулированный корм без какого-либо испытываемого соединения. Образцы крови отбирали из хвостовой вены перед самым опытом и через неделю после начала опыта. Концентрацию глюкозы в крови определяли методом глюкозоксидазы на быстропоточном анализаторе 300 Алпкем (Клэкэмаус, ОР).

Цифры, приведенные в табл. 1-3 (см. в конце описания), являются средними значениями, полученными в каждом опыте, в то время как каждая таблица описывает отдельный опыт. Дозы являются средними дозами, основанными на фактическом потреблении пищи и на массе тела. Таблица 2 описывает результаты, полученные с 1C1 164384 - антиэстрогеном, не имеющими эстрогенной активности, и выпадающие из рамок настоящего изобретения. Статистический анализ данных был выполнен методом значащей разницы, основанном на анализе вариаций.

Следующие методики описывают предпочтительные методы определения эстрогенной/антиэстрогенной активности соединений, описанных выше.

Плотность бедренной кости
Семидесятипятидневные самки крыс Спрэг Доули (интервал массы 225-275 г) были получены из Чарльз Ривер Лаборитории (Портэдж, М1). Крыс содержали группами по 3 и давали сколько угодно пищи (содержание кальция приблизительно 1%) и воды. Температуру в комнате поддерживали 22,2±1,7^oC при минимальной относительной влажности 40%. Световой период в комнате был 12 часов света и 12 часов темноты.

Через одну неделю после прибытия крыс подвергали двустороннему удалению яичников (овариектомия) под анестезией (44 мг/кг Кетамина и 5 мг/кг Ксилазина (Батлер, Индианаполис, IN) внутримышечно). Лечение носителем, эстрогеном или испытываемым соединением начинают в день хирургического вмешательства после восстановления от анастазии. Пероральную дозировку осуществляют зондовым питанием в 0,5 мл 1% карбоксиметилцеллюлоза или 20% циклодекстрина. Массу тела определяют во время хирургической операции и неделей после и дозировку согласуют с изменением массы тела. Овариэктомизированных (овекс) крыс и неовариэтокмизированных (интактных) крыс, обработанных носителем или эстрогеном, оценивают параллельно в каждой группе для негативного и позитивного контроля.

Крыс обрабатывают ежедневно в течение 35 дней (6 крыс на обрабатываемую группу) и умерщвляют асфиксией диоксидом углерода на 36-й день. Период времени в 35 дней достаточен для максимального уменьшения плотности костей у овариэктомизированных крыс, измеренного как описано здесь. При умерщвлении, матки удаляют, свободными от посторонних тканей, и жидкое содержимое удаляют перед определением мокрой массы для подтверждения недостаточности эстрогена, связанной с полной овариэктомией. Масса матки обычно уменьшается на 75% в ответ на овариэктомию. Матки затем помещают в 10%-ный нейтральный буферный формалин для последующего гистологического анализа.

Правые бедренные кости ампутируют и сканируют при дистальном метафизе 1 мм из фиссуры надколенника однофотонной абсорбциометрией. Результаты денситометрических измерений представляют расчет плотности кости в зависимости от содержания минералов и ширины кости.

Овариэктомия крыс вызывает уменьшение плотности бедренной кости на 25% по сравнению с интактной контрольной группой, обработанной носителем. Эстроген, введенный в перорально активной форме этинилэстрадиола (ЭЭ₂), предотвращает эти потери кости в зависимости от дозы, но также проявляется стимулирующее действие на матку, приводящее к тому, что масса матки приближается к массе матки интактных крыс при дозе 100 мкг/кг.

Гистологические параметры матки
Увеличение высоты эпителия является признаком эстрогенности терапевтических средств и может быть связано с повышенным распространением рака матки. Принято сравнивать увеличение высоты эпителия относительно овариэктомизированной контрольной группы. Лечение эстрадиолом увеличивает высоту эпиталия до толщины, большей чем у интактных крыс. Эстрогенность также определяют, оценивая неблагоприятную реакцию проникновения эозинофила в слой стромы матки. Эстрадиол, как ожидали, вызывает большое увеличение проникновения эозинофила.

Измеряли также толщину стромы и миометрия. Эстроген вызывает увеличение обоих этих параметров. Полное определение эстрогенности возможно по сумме всех четырех параметров.

Некоторые данные можно описать как процент ингибирования потерь кости и процент прироста массы матки, которые рассчитываются следующим образом:
Процент ингибирования потерь кости равен (плотность кости обработанных овекс животных - плотность кости необработанных овекс животных) + (плотность кости леченых эстрогеном овекс животных - плотность кости нелеченых овекс животных) · 100. Процент прироста массы матки равен (масса матки обработанных овек животных - масса матки овекс животных) + (масса матки леченых эстрогеном овекс животных - масса матки овекс животных) · 100.

Уровень липидов в сыворотке
Семидесятипятидневных самок крыс Спрэг Лоули (интервал массы 200-225 г) получали из Чарлз Ривер Лэборэторис (Портэдж, М1). Животных подвергали либо двусторонней овариэтокмии (OVX), либо хирургической процедуре Шэма в Чарлз Лэборэторис и перевозили через одну неделю. После прибытия животные содержались в висячих металлических клетках группами по 3 или 4 в клетке и получали сколько угодно пищи (содержание кальция приблизительно 0,5%) и в течение одной недели. В комнате поддерживали температуру 22,2±1,7^oC с минимальной относительной влажностью 40%. Световой режим в комнате составлял 12 часов света и 12 часов темноты.

Режим дозировки/Сбор тканей
По прошествии однонедельного периода акклиматизации (две недели после OVX) начинали ежедневную дозировку испытываемого соединения. Все соединения вводили перорально в количестве 1 мл/кг массы тела. 17 β -Эстрадиол вводили подкожно в 20% растворе полиэтиленгликоля как носителе, 17 α -этинилэстрадиол и испытываемое соединение давали перорально в виде суспензии в 1% карбоксиметилцеллюлозе или 20% циклодекстрине. Животным давали дозы ежедневно в течение 4 дней. Вслед за режимом дозировки животных взвешивали и анестезировали смесью Кетамин: Ксилазин (2:1 об/об) и образец крови собирали пункцией сердца. Животных затем умерщвляли асфикцией диоксидом углерода, матку удаляли через разрез и определяли мокрую массу.

Анализ холестерина
Образцам крови позволяли свертываться при комнатной температуре в течение 2 часов и сыворотку получали последующим центрифугированием в течение 10 минут при 300 об/мин. Холестерин сыворотки определяли, используя высокохарактеристический анализ холестерина Берингер Манхайм Дайэностикс. Вкратце, холестерин окисляли до холест-4-ан-3-она и пероксида водорода. Пероксид водорода затем вводили в реакцию с фенолом и 4-аминофеназоном в присутствии пероксидазы для получения п-хинониминового красителя, который легко определять спектрофотометрически при 500 нм. Концентрацию холестерина затем рассчитывали по стандартной кривой. Весь анализ автоматизируют с применением прибора Виомек Аутомэйтед Уоркстэйшн.

Анализ эозинофилпероксидазы (ЭПО) матки
Матки выдерживают при 4^oC до времени ферментативного анализа. Матки гомогенизируют в 50 объемах буфера 50 мМ Трис (pH 8,0), содержащем 0,005% Тритона Х-100. После добавления 0,01% пероксида водорода и 10 мМ о-фенилендиамина (конечная концентрация) и буфер Трис в течение одной минуты наблюдают увеличение поглощения при 450 нм. Наличие эозинофила в матке является указанием на эстрогенную активность соединения. Максимальную скорость в 15 секундном интервале установили на начальном, линейном участке реакционной кривой.

Экспериментальные группы
Все экспериментальные группы содержали 5-6 животных. Овариэктомия у крыс вызывала увеличение холестерина в сыворотке по сравнению с интактными контрольными животными, обработанными носителем. Эстроген, введенный в перорально активной форме этинилэстрадиола (ЭЭ₂), вызывает уменьшение холестерина в сыворотке в зависимости от дозы, но он также оказывает стимулирующую активность на матку, приводящую к тому, что масса матки приближается к массе матки интактных крыс при дозе 100 мкг/кг/день.

Гистологические параметры
Гистологические оценки выполняют как описано выше.

Ингибирующую активность соединений на эстрогензависимые опухоли млекопитающих, оценивают согласно методам, описанным в патентах США N 4133814 и 4418068.

Соединения, используемые в методах настоящего изобретения, эффективны в широких интервалах доз. Например, ежедневные дозы будут находиться в интервале 10-1000 мг/кг массы тела. Для лечения взрослых людей предпочтителен интервал 50-600 мг/кг в виде единой или разделенной доз. Однако следует понимать, что количество фактически вводимых соединений будет определяться врачом в зависимости от обстоятельств, включающих излечиваемое состояние, выбор вводимого соединения, возраст, массу и реакцию индивидуального пациента, серьезность симптомов у пациента и выбранный путь введения. Таким образом, вышеуказанные интервалы доз не ограничивают рамки изобретения. В то время как настоящие соединения предпочтительно вводят перорально, их можно также вводить различными другими путями, такими как трансдермальный, подкожный, интранесальный, внутримышечный и внутривенный пути.

Хотя возможно применение соединений изобретения непосредственно, но предпочтительно использовать их в форме фармацевтических препаратов, содержащих фармацевтически приемлемый носитель, разбавитель или наполнитель и соединение изобретения. Такие препараты будут содержать от 0,01 до 99% соединения изобретения.

При изготовлении препаратов настоящего изобретения активный компонент будут обычно смешивать с по меньшей мере одним носителем или разбавлять по меньшей мере одним носителем или помещать внутри носителя в форме капсулы, мешочка, бумажки или другого контейнера. Если носитель служит разбавителем, то он может быть твердым, полутвердым или жидким материалом, действующим как носитель, наполнитель или среда для активного компонента. Таким образом, препараты могут быть в форме таблеток, гранул, пилюль, порошков, лепешек, мешочков, крахмальных капсул, элексиров, эмульсий, растворов, сиропов, суспензий, аэрозолей (твердых или в жидкой среде) и мягких и жестких желатиновых капсул.

Примеры подходящих носителей, разбавителей и наполнителей включают лактозу, декстрозу, сахарозу, сорбит, маннит, крахмалы, гуммиарабик, фосфат кальция, вальгинаты, жидкий парафин, силикат кальция, микрокристаллическую целлюлозу, поливинилпирролидон, целлюлозу, трагакант, желатин, патоку, метилцеллюлозу, метил- и пропилгидроксибеноаты, растительные масла, такие как оливковое масло, пригодные для инъекций органические эфиры, такие как этилолеат, тальк, стеарат магния, воду и минеральные масла. Препараты также могут включать смачиватели, смазывающие, эмульгирующие и суспендирующие средства, консерванты, подслащивающие средства, отдушки, стабилизаторы и вкусовые средства. Препараты могут быть составлены таким образом, чтобы обеспечить быстрое, пролонгированное или замедленное выделение активного компонента после введения пациенту с помощью хорошо известных методик.

Для перорального введения соединение этого изобретения можно идеально смешать с носителями и разбавителями и сформовать в таблетки или заключить в желатиновые капсулы.

Препараты предпочтительно составляют в форме стандартной дозы, причем каждая доза содержит 1-500 мг, обычно 5-300 мг, активного компонента. Термин "форма стандартной дозы" относится к физически дискретным единицам, пригодным в качестве единичных доз для человека и других млекопитающих, причем каждая единица содержит предопределенное количество активного материала, рассчитанного для произведения желаемого терапевтического эффекта, в смеси с подходящим фармацевтическим носителем, разбавителем или наполнителем.

Для более полной иллюстрации изобретения приведены следующие примеры препаратов. Примеры имеют только иллюстративное значение и не ограничивают рамки изобретения. Препараты могут использовать в качестве активных соединений любое из антиэстрогенных соединений, описанных выше.

Препарат 1
Твердые желатиновые капсулы получают, используя компоненты, приведенные в конце описания.

Приведенные компоненты смешивают и помещают в твердую желатиновую капсулу в количестве 460 мг.

Препарат 2
Капсулы, каждая из которых содержит по 20 мг медикамента, делают следующим образом (см. в конце описания).

Активный компонент, целлюлозу, крахмал и стеарат магния смешивают, просеивают через сито N 45 меш. США и помещают в твердые желатиновые капсулы.

Препарат 3
Капсулы, каждая из которых содержит по 100 мг активного компонента, получают по схеме, приведенной в конце описания.

Приведенные компоненты тщательно перемешивают и помещают в пустую желатиновую капсулу.

Препарат 4
Таблетки, каждая из которых содержит 10 мг активного компонента, получают по схеме, приведенной в конце описания.

Активный компонент, крахмал и целлюлозу просеивают через сито N 45 меш. США и тщательно перемешивают. С образующимся порошком смешивают раствор поливинилпиролидона и смесь просеивают через сито N 14 меш. США. Образующиеся гранулы высушивают при 50-60^oC и просеивают через сито N 18 меш. США. Затем к гранулам добавляют натрийкарбоксиметилкрахмал, стеарат магния и тальк, предварительно просеянные через сито N 60 меш. США, перемешивают и прессуют на таблеточной машине, получая таблетки массой 100 мг.

Препарат 5
Таблетированные препараты можно получать, используя компоненты, приведенные в конце описания.

Компоненты смешивают и прессуют в форме таблеток, каждая массой 665 мг.

Препарат 6
Суспензии, каждая из которых содержит 5 мг медикамента в дозе 40 мл, получают следующим образом, на 5 мл суспензии:
Активный компонент - 5 мг
Натрийкарбоксиметилцеллюлоза - 50 мг
Патока - 1.25 мл
Бензойная кислота раствор - 0.10 мл
Вкусовое средство - По усмотрению
Краситель - По усмотрению
Вода - сколько понадобится до 5 мл
Медикамент просеивают через сито N 45 США и смешивают с натрийкарбоксиметилцеллюлозой и патокой до образования однородной пасты. Раствор бензойной кислоты, вкусовое средство и краситель разбавляют некоторым количеством воды и добавляют при перемешивании. Затем добавляют достаточное количество для достижения требуемого объема.

Препарат 7
Приготавливают аэрозольный раствор, содержащий компоненты при следующей концентрации,%:
Активный компонент - 0.25
Этанол - 29.75
Пропеллент 22 - 70.00
Хлордифторметан - 100.00
Активное соединение смешивают с этанолом и смесь добавляют к части пропеллента 22, охлажденной до -30^oC, и переносят в наполняющее устройство. Требуемое количество загружают затем в контейнер из нержавеющей стали и разбавляют дополнительно оставшимся количество пропеллента. Затем контейнер снабжают клапаном.

Формула изобретения

1. Применение [6-гидрокси-2-(4-гидроксифенил) бензо [b] тиен-3-ил] [4-[2-(1-пиперидинил) этокси] фенил] метанона или [6-гидрокси -2(4-гидроксифенил) бензо [b] тиен-3-ил] [4-[2-(1-пирролидинил) этокси] фенил] метанона и их фармацевтически приемлемых солей и сольватов для снижения концентрации глюкозы в крови.

2. Применение по п.1, где указанное соединение является гидрохлоридной солью.

3. Фармацевтическая композиция для снижения концентрации глюкозы в крови человека, отличающаяся тем, что содержит 1 - 500 мг соединения по п.1 или 2 в смеси с одним или более фармацевтически приемлемым носителями, разбавителями или наполнителями.

РИСУНКИ

Рисунок 1, Рисунок 2, Рисунок 3, Рисунок 4, Рисунок 5, Рисунок 6, Рисунок 7