Агент для лечения заболеваний сальной железы и фармацевтическая композиция на его основе

 

Изобретение относится к медицине и касается применения 1α-фтор-25-гидрокси-16-ен-23-ин-холекальциферола в качестве агента для лечения заболеваний сальной железы, таких, как угревая сыпь или себорейный дерматит. Он может быть получен удалением силильных защитных групп из соответствующего соединения с защищающими гидроксилсилильными группами. Предложена также фармацевтическая композиция на его основе. Предложенный агент более эффективен при лечении указанных заболеваний. 2 с. и 4 з.п. ф-лы, 3 табл.

Изобретениеотноситсяксоединению1α-фтор-25-гидрокси-16-ен-23-ин-холекальциферолу, которое может быть охарактеризовано формулой: и которое используется в качестве агента для лечения заболеваний сальной железы, таких, как угревая сыпь или себорейный дерматит.

Изобретение относится также к фармацевтическим композициям, содержащим соединение формулы I, и применению этого соединения для получения лекарственных препаратов для лечения вышеуказанных заболеваний.

1α-фтор-25-гидрокси-16-ен-23-ин-холекальциферол может быть получен по реакционной схеме, приведенной в конце описания.

По этой реакционной схеме соединение формулы 1 преобразуют в соединение формулы 3 путем взаимодействия с соответствующим соединением формулы: Реакцию проводят при -60^oC - 90^oC, предпочтительно -75^oC, в полярном апротонном органическом растворителе, таком, как сухой эфир или более предпочтительно сухой тетрагидрофуран, в присутствии сильного основания, такого, как алкиллитий, подобный бутиллитию. Соединение формулы 2 известно (J. Org. Chem. 1990, 55, 243) или может быть получено в соответствии с известными способами.

Защитные группы соединения формулы 3 удаляют с помощью соли фтора, такой, как тетрабутиламмоний фторид, в полярном органическом растворителе, таком, как эфир или более предпочтительно тетрагидрофуран, с получением соответствующего соединения формулы I.

1α-фтор-25-гидрокси-16-ен-23-ин-холекальциферол используется в качестве агента для лечения заболеваний сальной железы, таких, как угревая сыпь или себорейный дерматит.

При лечении заболеваний сальной железы, таких, как угревая сыпь или себорейный дерматит, пациенту, нуждающемуся в таком лечении, 1α-фтор-25-гидрокси-16-ен-23-ин-холекальциферол может быть назначен наружно. Более конкретно, при лечении заболеваний сальной железы, таких, как угревая сыпь или себорейный дерматит, 1α-фтор-25-гидрокси-16-ен-23-ин-холекальциферол может быть назначен наружно человеку в дозах, которые находятся в пределах от 0,01 до 100 мкг на грамм состава для наружного применения в день.

При лечении заболеваний сальной железы, таких, как угревая сыпь или себорейный дерматит, пациенту, нуждающемуся в таком лечении, 1α-фтор-25-гидрокси-16-ен-23-ин-холекальциферол может быть назначен орально. Более конкретно, при лечении заболеваний сальной железы, таких, как угревая сыпь или себорейный дерматит, 1α-фтор-25-гидрокси-16-ен-23-ин-холекальциферол может быть назначен орально в дозах, которые находятся в пределах от 0,01 до 10 мкг в день.

Полезная активность 1α-фтор-25-гидрокси-16-ен-23-ин-холекальциферола в качестве агента для лечения заболеваний сальной железы, таких, как угревая сыпь или себорейный дерматит, может быть показана в следующих исследованиях, известных специалистам.

Методы 1. In vitro Жировые клетки выделяют из сальной железы взрослого человека согласно J. Invest. Dermatol. 96: 341-348 (1991) и культивируют на слое, задерживающем рост ЗТЗ фибробластов мышей.

Клетки культивируют в среде Искова (Iscove), содержащей 10% сыворотки зародыша теленка и 4 мкг/мл дексаметазона.

Клетки помещают в среду без 1α-фтор-25-гидрокси-16-ен-23-ин- холекальциферола. Через 24-48 часов после начала посева культуры помещают в свежую среду, содержащую соединение по изобретению. Каждые 48 часов культуры помещают в свежую среду, содержащую соединение по изобретению. В день харвестирования культуры промывают 0,03%-ной ЭДТА (этилендиаминтетрауксусная кислота) в ЗФР (забуференный фосфатом физиологический раствор) для удаления только ЗТЗ фибропластов. Оставшиеся колонии себоцитов инкубируют в 0,05%-ном трипсине/0,03%-ной ЭДТА для получения однородной клеточной суспензии себоцитов. Клетки разбавляют, интенсивно перемешивают для сохранения однородной клеточной суспензии и подсчитывают на гемоцитометре.

С исследуемыми соединениями работают следующим образом. Растворы штаммов приготавливают в виде 10^-2 М растворов в дегазированном этаноле и хранят при -20^oC в темноте. Растворы никогда не используют после хранения более чем в течение одного месяца. При экспериментальном применении растворов, которые являются аликвотными, их оттаивают один раз и используют путем разбавления непосредственно в полной среде до подходящей концентрации 10^-6, 10^-7, 10^-8 и 10^-9 М. Исследуемые соединения: (1) 1,25-дигидроксихолекальциферол; и (2) 1α-фтор-25-гидрокси-16-ен-23-ин-холекальциферол.

Результаты Соединения исследованы на ингибирование пролиферации жировых клеток in vitro при следующих концентрациях: 10^-6, 10^-7, 10^-8 и 10^-9 М. 1,25-дигидроксихолекальциферол является агентом, уменьшающим размер сальных желез на ушах самцов сирийский хомяков.

Результаты сведены в таблицу 1 в виде количества соединения, необходимого для ингибирования пролиферации жировых клеток на 50% по сравнению с контролем (ED₅₀). Контролем являются культуры, подвергнутые только разбавлению.

Результаты показывают, что соединение по изобретению ингибирует пролиферацию человеческих себоцитов in vitro. Поэтому соединение по изобретению является полезным в качестве агента для лечения воспаления сальной железы.

2. Модель in vivo на ухе хомяка
а. Метод локального изучения
Соединение оценивают на местную противоугревую активность в отношении сальной железы на модели сальной железы уха хомяка. Для этих исследований соединение растворяют в ацетоне. Пятьдесят (50) мкл содержащего препарат раствора наносят ежедневно (5 дней в неделю) на заднюю часть правого уха хомяка. Контрольные хомяки получают 50 мкл ацетона. Животных забивают через 4 недели. Уши отделяют и проводят гистологическую оценку. Вентральную поверхность отделяют от остатка уха. В 5 мм от верхней части уха берут пункцию размером 2 мм и окрашивают в течение ночи 0,1%-ным судановым черным В (Sudan Black В), растворенным в 100%-ном пропиленгликоле. После обесцвечивания определяют площадь сальных желез на поперечных срезах с помощью визуального анализа с использованием системы визуального анализа Donsato Image Analysis System. Данные выражены в процентном изменении относительно контрольных животных для 80-120 сальных желез на дозу. Результаты сведены в таблицу 2.

б. Оральное исследование
Целью исследования является оценка действия соединения по изобретению на сальные железы уха хомяка после орального введения соединения. 200 мкл соединения по изобретению, растворенное в Твине 20/воде/этаноле (50/40/100), вводят ежедневно (5 дней в неделю) посредством желудочного зонда самцам золотых сирийских хомяков. Животных забивают через 4 недели и уши подвергают гистологической оценке. Одно ухо фиксируют 10%-ным забуферированным формалином, подвергают заливке парафином, рассекают и окрашивают гематоксилином и эозином. Площадь сальных желез измеряют на гистологически приготовленных поперечных срезах уха с помощью визуального анализа с использованием системы Leitz TAS Plus. Данные, полученные при этом исследовании, представлены ниже. Данные приведены в средних площадях 48 сальных желез на дозу.

Вышеприведенные данные показывают, что соединение по изобретению является полезным в качестве агента для лечения заболеваний сальной железы, таких, как угревая сыпь или себорейный дерматит.

Оральные дозированные формы, содержащие 1 α -фтор-25-гидрокси-16-ен-23-ин-холекальциферол, могут быть в составе капсул, таблеток и т.п. с фармацевтически приемлемым материалом носителя.

Примерами фармацевтически приемлемых материалов носителя, которые могут входить в состав капсул и т.п., являются следующие: связующее, такое, как трагакантовая камедь, смола акации, кукурузный крахмал или желатин; наполнитель, такой, как дикальцийфосфат; разрыхлитель, такой, как кукурузный крахмал, картофельный крахмал, альгиновая кислота и тому подобное; смазывающий агент для таблетирования, такой, как стеарат магния; подслащивающий агент, такой, как сахароза, лактоза или сахарин; корригент, такой, как мята, масло грушанки или вишни. Могут быть представлены различные другие материалы в качестве покрытия или для другой модификации физической формы или дозированной единицы. Например, таблетки могут быть покрыты шеллаком, сахаром или и тем, и другим. Сироп или эликсир может содержать активное соединение, сахарозу в качестве подслащивающего агента, метил- и пропилпарабены в качестве консервантов, краску и корригент, такой, как вишневый или апельсиновый корригент.

Дозированные формы для наружного применения, содержащие 1 α - фтор-25-гидрокси-16-ен-23-ин-холекальциферол, включают мази или кремы на основе составов, содержащих жировые, способные всасываться, водорастворимые и эмульсионного типа основы, такие, как петролатум, ланолин, полиэтиленгликоли и т.п.

Лосьоны являются жидкими составами и варьируются от простых растворов до водных или гидроспиртовых составов, содержащих тонко измельченные вещества. Лосьоны могут содержать суспендирующие или диспергирующие агенты, например, производные целлюлозы, такие, как этилцеллюлоза, метилцеллюлоза и т.п.; желатин или смолы, которые содержат активный ингредиент в растворителе, таком, как вода, спирт, глицерин и т.п.

Гели являются полутвердыми составами, полученными желатинированием раствора или суспензии активного ингредиента в растворе носителя. Растворы, которые могут быть водными или безводными, желатинируют с использованием желатинирующего агента, такого, как карбоксиполиметилен, и нейтрализуют до надлежащей гелевой консистенции с использованием щелочей, таких, как гидроксид натрия, и аминов, таких, как полиэтиленкокоамин.

Термин "наружный", используемый в описании, обозначает использование активного ингредиента в составе с пригодным фармацевтическим носителем и применяется на участке воспаления для усиления местного действия. Таким образом, композиции для наружного применения включают такие фармацевтические формы, в которых соединение применяется наружно при прямом контакте с кожей. Дозированные формы для наружного применения включают гели, кремы, лосьоны, мази, пудры, аэрозоли и другие обычные формы для медицинского применения на коже, полученные смешением соединения формулы I с известным фармацевтическим материалом носителя для наружного применения. В дополнение к применению на коже композиции для наружного применения по настоящему изобретению могут быть также использованы при лечении воспалений слизистых оболочек в тех местах, где такие оболочки являются доступными для наружной лекарственной обработки. Например, композиция для наружного применения может быть использована на слизистом покрове рта или нижней части толстой кишки.

Пример 1
(1α,3β, 5Z, 7E)-1-фтор-3-[[(1,1-диметилэтил)диметилсилил] окси] -25- [(триметилсилил)окси]-9,10-секохолеста-5,7,10(19),16-тетраен-23-ин
К раствору 217 мг (0,461 ммоль) [3S-(1Z, 3α,5β ]-[2-[3-фтор-5- [[(1,1-диметилэтил)диметилсилил] окси] -2-метиленциклогексилиден] этил]дифенилфосфиноксида в 6 мл сухого тетрагидрофурана прибавляют по каплям при -75^oC 0,27 мл (0,43 ммоль) 1,6 М раствора н-бутиллития в гексане. После перемешивания смеси в течение 6 минут прибавляют по каплям 120 мг (0,346 ммоль) [1(R^*), 3aR^* - 3aβ,7aα ]-3,3a,5,6,7,7a- гексагидро-1-(1,5-диметил-5-[(триметилсилил)окси] -3-гексинил)-7а-метил-4Н- инден-4-она в 5 мл сухого тетрагидрофурана. Смесь перемешивают при -75^oC в течение 1,5 часа и гасят добавлением смеси 1: 1 1М водного калиево-натриевого тартрата и 2М водного бикарбоната калия. Смесь экстрагируют этилацетатом и органическую фазу промывают насыщенным раствором соли, сушат (Na₂SO₄), фильтруют и упаривают досуха. Осадок очищают колоночной хроматографией на силикагеле с использованием этилацетата-гексана (1: 15) с получением 136 мг (66%) (1α,3β, 5Z,7E)-1-фтор-3-[[(1,1-диметилэтил)диметилсилил] окси] -25- [(триметилсилил)окси] -9,10-секохолеста-5,7,10(19), 16-тетраен-23-ина в стеклообразном виде: ИК (CHCl₃) 2230, 840 см^-1; ¹H ЯМР (CDCl₃) δ 0,08 (с, 6H), 0,17 (с, 9H), 0,72 (с, 3H), 0,88 (с, 9H), 1,13 (д, J=8 Гц, 1H), 5,37 (с, 2H), 6,10 (д, J=12 Гц, 1H), 6,34 (д, J=12 Гц, 1H), масс-спектр, m/e 578 (M⁺-HF).

Пример 2
1α-фтор-25-гидрокси-16-ен-23-ин-холекальциферол)
К раствору 132 мг (0,220 ммоль) (1 1α,3β, 5Z,7E)-1-фтop-3- [[(1,1-диметилэтил)диметилсилил] окси] -25-[(триметилсилил)окси] -9,10- секохолеста-5,7,10(19), 16-тетраен-23-ина в 8 мл сухого тетрагидрофурана прибавляют 1,38 мл (1,38 ммоль) 1М тетрабутиламмонийфторида в тетрагидрофуране. Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 16 часов. После разбавления водой смесь экстрагируют этилацетатом. Органическую фазу промывают водой, насыщенным раствором соли, сушат (Na₂SO₄) и упаривают досуха. Осадок очищают колоночной хроматографией на силикагеле с использованием этилацетата-гексана (1: 13) в качестве элюента с получением 81 мг (89%) 1α-фтор-25-гидрокси-16-ен-23-ин-холекальциферола в стеклообразном виде: [α]²_D⁰ +74,7 (с 0,15, МеОН); ИК (CHCl₃) 3600, 2230, 1649 см^-1; УФ_макс. (EtOH)242, 267 нм; ¹H ЯМР (CDCl₃) δ 0,72 (с, 3H), 1,13 (д, J=8 Гц, 1H), 1,48 (с, 6H), 2,63 (м, 1H), 2,83 (м, 1H), 4,24 (ушир. с, 1H), 5,12 (с, 1H), 5,14 (дм, J=48 Гц, 1H), 5,38 (с, 1H), 5,40 (с, 1H), 6,12 (д, J=12 Гц, 1H), 6,41 (д, J=12 Гц, 1H); масс-спектр, m/e 392 (M⁺ -HF).

Пример 3
Оральные дозированные формы мягких желатиновых капсул A и B
A - мг/капсулу
1α-фтор-25-гидрокси-16-ен-23-ин-холекальциферол - 0,00001-0,010
Бутилированный гидрокситолуол (БГТ) - 0,016
Бутилированный гидроксианизол (БГА) - 0,016
Myglyol® -812 или полиэтиленгликоль 400 qs - 160
B - мг/капсулу
1α-фтор-25-гидрокси-16-ен-23-ин-холекальциферол - 0,00001-0,010
α -токоферол - 0,016
Myglyol® -812 или полиэтиленгликоль 400 qs - 160-

Формула изобретения

1. Применение 1α-фтор-25-гидрокси-16-ен-23-ин-холекальциферола в качестве агента для лечения заболеваний сальной железы.

2. Применение по п.1, в котором указанным заболеванием является угревая сыпь.

3. Применение по п.1, в котором указанным заболеванием является себорейный дерматит.

4. Фармацевтическая композиция для лечения заболеваний сальной железы, отличающаяся тем, что содержит эффективное количество 1α-фтор-25-гидрокси-16-ен-23-ин-холекальциферола и фармацевтически приемлемый носитель.

5. Композиция по п.4, отличающаяся тем, что указанным заболеванием является угревая сыпь.

6. Композиция по п.4, отличающаяся тем, что указанным заболеванием является себорейный дерматит.

РИСУНКИ

Рисунок 1, Рисунок 2, Рисунок 3, Рисунок 4