Способ выделения индивидуальных соединений из смеси экдистероидов из надземной части растений serratula coronata

 

Изобретение предназначено для использования в области фармацевтической промышленности и технической энтомологии при получении индивидуальных экдистероидов из их смеси. Способ включает сорбцию смеси экдистероидов из раствора на гидрофобных сорбентах до достижения предельной емкости по экдизону и десорбцию, при этом сорбцию проводят из водно-органического раствора. Изобретение позволяет повысить производительность и снизить энергоемкость процесса. 1 з.п.ф-лы.

Изобретение относится к способам выделения биологически активных растительных веществ фармацевтической промышленности и технической энтомологии, а именно к технологии получения индивидуальных экдистероидов из их смеси.

Смесь экдистероидов из надземной части Serratula coronata состоит из 20-гидроксиэкдизона (75%), инокостерона (11%), экдизона (5%), а также макистеронов А и С, аюгостерона С, дакрихайнанстерона, присутствующих в следовых количествах (Володин В.В., Лукша В.Г., Дайнан Л. и др. "Инокостерон и макистерон А из Serratula coronata L.// Физиология растений.- 1998.- Т.45.- N 3.- С. 378-382; Volodin V.V., Alexeeva L.I., Kolegova N.A. "Further ecdysteroids of Serratula coronata L.// Biochemical systemat. and ecology.- 1998.- V.26.- issue 4.- P. 459-461).

Известен способ выделения экдизона из смеси экдистероидов, полученных из растений рода Serratula coronata, который осуществляется путем нанесения смеси экдистероидов на хроматографическую колонку с оксидом алюминия с последующим элюированием смесью органических растворителей, выпаркой и перекристаллизацией (a.с. CCCP 1146050. Способ получения β-экдизона из растения рода Serratula// А.М. Гродзинский, Ю.Д.Холодова, И.Ф.Митунин и др.).

Недостатками данного способа являются низкая производительность процесса, обусловленная использованием больших объемов растворителей и длительностью процесса.

Известен также способ получения 20-гидроксиэкдизона и экдизона из смеси экдистероидов, принятый за прототип. Способ основан на непрерывном элюировании водного раствора смеси экдистероидов через гидрофобный сорбент до выравнивания концентрации экдизона в растворе на выходе и в исходном растворе (Alekseeva L. , Volodin V., Luksha V. "A convenient method for ecdysteroids concentration// XIII-th Ecdysone Workshop.- Jena.- July 27-31, 1998: Programme and abstracts.- P. 16).

Недостатком данного способа является длительность процесса вследствие малой растворимости 20-гидроксиэкдизона в воде.

Задачей предлагаемого изобретения является повышение производительности процесса, снижение производительности и энергоемкости процесса.

Отличительными существенными признаками изобретения является использование в качестве элюента для нанесения экдистероидов на сорбент водных растворов органических растворителей, что увеличивает растворимость экдистероидов не менее чем в 5 раз и, таким образом, приводит к значительному уменьшению объема пропускаемого через сорбент раствора, снижению длительности процесса, а следовательно, делает процесс менее трудоемким.

Способ осуществляется следующим образом: Смесь экдистероидов, полученная из надземной части растения рода Serratula coronata, растворяется в водно-органическом растворе (1-25%). Полученный раствор экдистероидов непрерывно пропускают через слой гидрофобного сорбента (по прототипу) до достижения предельной емкости по экдизону, имеющему большее сродство к поверхности сорбента, чем 20-гидроксиэкдизон, инокостерон и макистерон. Достижение предельной емкости по экдизону контролируется методом тонкослойной хроматографии (ТСХ) или ВЭЖХ. Затем через слой сорбента элюируют 25-100%-ный водный раствор органических растворителей. В качестве органических растворителей используют метанол, этанол, изопропанол, н-бутанол, смесь этилацетата и метанола и др. Растворитель упаривают, а полученный таким образом концентрат, обогащенный экдизоном, очищают препаративной ВЭЖХ и перекристаллизацией.

Предлагаемый способ обогащения экдистероидной смеси неосновными компонентами упрощает их дальнейшее выделение известными методами препаративной оф-ВЭЖХ.

Пример осуществления способа.

В стеклянную колонку (50х100 мм) заливают суспензию 30 г сорбента Диасорб С-16/250 (АО "БиоХимМак", Россия) в 150 мл метанола. Колонку активируют 150-200 мл 20%-ного водного раствора метанола. 5 г смеси экдистероидов растворяют в 500 мл 20%-ного водного метанола и пропускают через слой активированного сорбента до обнаружения экдизона в элюате. Элюат собирают отдельными фракциями объемом по 20 мл. Контроль ведут методом ТСХ или ВЭЖХ. После обнаружения экдизона (фракция 33) через колонку пропускают по 70 мл 30, 40, 50, 60%-ного водного раствора метанола, а затем 50 мл метанола. Анализ фракций проводят методом ВЭЖХ. Фракции 15-21 содержат 20-гидроксиэкдизон; фракции 22-26 содержат смесь 20-гидроксиэкдизона и инокостeрона, обогащенную 20-гидроксиэкдизоном; фракции 27-32 - смесь 20-гидроксиэкдизона, инокостерона и макистерона А, обогащенную инокостeроном; фракции 33-39 - смесь 20-гидроксиэкдизона, инокостерона, макистерона А и экдизона, обогащенную инокостероном; фракции 40-46 - смесь экдистероидов, обогащенную экдизоном в 10 раз больше по сравнению с исходной смесью; фракция 47 - смесь макистерона С, аюгостерона С, дакрихайнанстерона.

По результатам анализа фракции объединяются и упариваются.

Дальнейшее выделение индивидуальных веществ ведется известным способом оф-препаративной ВЭЖХ.

После препаративной ВЭЖХ выделено: 20-гидроксиэкдизона - 3,6 г (Т_пл=241-242^oC), инокостерона - 0,5 г (Т_пл=255^oC), экдизона - 0,2 г (Т_пл=237-238^oC).

Формула изобретения

1. Способ выделения индивидуальных соединений из смеси экдистероидов из надземной части растений Serratula coronata, включающий сорбцию смеси экдистероидов из раствора на гидрофобных сорбентах до достижения предельной емкости по экдизону и десорбцию, отличающийся тем, что сорбцию проводят из водно-органического раствора.

2. Способ по п.1, отличающийся тем, что в качестве органических растворителей используют метанол, или этанол, или изопропанол, или н-бутанол, или смесь этилацетата и метанола.