Питательная среда для накопления сальмонелл

 

Изобретение относится к медицинской микробиологии. Может быть использовано для бактериологической диагностики брюшного тифа, паратифов, сальмонеллеза. Питательная среда содержит, г/л: панкреатический гидролизат рыбы 6,6-6,8; пептон ферментативный сухой 4,9-5,1; экстракт кормовых дрожжей 2,4-2,6; хлорид натрия 3,2-3,4; тиосульфат натрия 39,0-41,0; бриллиантовый зеленый 0,009-0,011; раствор Люголя 18,0-22,0; натрия карбонат 0,45-0,55; воду дистиллированную до 1 л. Питательная среда позволяет полностью ингибировать рост сопутствующей микрофлоры при сохранении высоких накопительных свойств. 1 табл.

Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано для бактериологической диагностики брюшного тифа, паратифов, сальмонеллеза.

В настоящее время для данного целевого назначения используется сухая селенитовая среда для накопления сальмонелл и шигелл [1].

Недостатком данной среды является незначительное накопление культур и слабая ингибиция кишечной палочки.

Наиболее близким решением задачи того же назначения к заявляемому изобретению по совокупности признаков является Тетратионатный бульон (Tetrationate broth), содержащий в качестве азотистого питания пептон из мяса, мясной и дрожжевой экстракты, а также хлорид натрия, тиосульфат натрия, карбонат кальция, селективные агенты - бриллиантовый зеленый, сухую желчь и раствор Люголя [2].

Отечественный вариант Тетратионатного бульона - среда Мюллера-Кауфмана, готовится на мясопептонном бульоне, содержащем 0,5% хлорида натрия с добавлением тех же ингредиентов, а вместо сухой желчи в среду вводят нативную бычью желчь [3].

К причинам, препятствующим достижению нижеуказанного технического результата при использовании известной среды, принятой за прототип, является то, что среда Мюллера-Кауфмана недостаточно селективная среда, кроме того, в состав среды входит нерастворимая углекислая соль кальция, образующая плотный белый осадок, вследствие чего возникают неудобства в ее использовании.

Задача предлагаемого изобретения - повышение селективных свойств среды, улучшение ее прозрачности и растворимости.

Указанный технический результат при осуществлении изобретения достигается тем, что в качестве источника азотистого питания она содержит панкреатический гидролизат рыбы и пептон ферментативный, в качестве углекислой соли - карбонат натрия, хлорид натрия, придающий среде изотонические свойства, в качестве ингибитора посторонней микрофлоры - раствор Люголя, тиосульфат натрия, бриллиантовый зеленый, в качестве стимулятора роста и источника витаминов группы В - дополнительно содержит экстракт кормовых дрожжей, при следующем соотношении компонентов, г/л: Панкреатический гидролизат рыбы - 6,6-6,8 Хлорид натрия - 3,2-3,4 Пептон ферментативный, сухой - 4,9-5,1 Экстракт кормовых дрожжей - 2,4-2,6 Тиосульфат натрия - 39,0-41,0 Карбонат натрия - 0,45-0,55 Бриллиантовый зеленый - 0,009-0,011 Раствор Люголя - 18,0-22,0 Вода дистиллированная - До 1 л
Содержание в данной среде тиосульфата натрия, раствора Люголя и бриллиантового зеленого полностью подавляет рост сопутствующей флоры (кишечная палочка, грамположительные кокки). Среда обладает высокой чувствительностью, отмечается рост и накопление культур при посеве из разведения 10^-7. Эффективность накопления в среде составляет 10⁶ раз. Время генерации культуры от 30 до 40 минут. Среда сконструирована из отечественных гостированных ингредиентов на основе сухого питательного бульона, имеющего промышленный выпуск на предприятии НПО "Питательные среды" [4].

Среду получают следующим образом.

Пример 1. В колбу с 0,6 л дистиллированной воды вносят следующие ингредиенты, взятые в количестве: панкреатический гидролизат рыбы - 6,6 г, хлорид натрия - 3,2 г, пептон ферментативный, сухой - 4,9 г, экстракт кормовых дрожжей - 2,40 г, тиосульфат натрия - 39,0 г, карбонат натрия - 0,45 г, бриллиантовый зеленый - 0,009 г. Навески сухих ингредиентов тщательно размешивают, объем смеси доводят дистиллированной водой до 1 л, полученную суспензию доводят до кипения, pН среды 7,6±0,2, что соответствует минимальной концентрации ингредиентов. Среду разливают во флаконы, стерилизуют при 110^oС 20 минут. Охлаждают до температуры 45-50^oС и вносят 18 мл раствора Люголя (йод металлический - 4,0 г, йодистый калий - 5,0 г, вода дистиллированная - 20 мл). Тщательно перемешивают, разливают в стерильные пробирки по 9 мл. Среда после внесения раствора Люголя засевается сразу тест-культурами и не подлежит хранению. После посева микробной взвеси тест-штамма пробирки с питательным бульоном перемешивают и инкубируют при температуре 37^oС в течение 22±2 часа.

Пример 2. Отличается от примера 1 тем, что в 0,6 л дистиллированной воды растворяют панкреатический гидролизат рыбы - 6,7 г, хлорид натрия - 3,3 г, пептон ферментативный, сухой - 5,0 г, экстракт кормовых дрожжей - 2,5 г, тиосульфат натрия - 40,0 г, карбонат натрия - 0,5 г, бриллиантовый зеленый - 0,01 г. Объем смеси доводят дистиллированной водой до 1 л, pН среды 7,6±0,2, что соответствует оптимальной концентрации ингредиентов.

Пример 3. Отличается от примера 1 и 2 тем, что в 0,6 л дистиллированной воды растворяют панкреатический гидролизат рыбы - 6,8 г, хлорид натрия - 3,4 г, пептон ферментативный - 5,1 г, экстракт кормовых дрожжей - 2,6 г, тиосульфат натрия - 41,0 г, карбонат натрия - 0,55 г, бриллиантовый зеленый - 0,011 г. Объем смеси доводят дистиллированной водой до 1 л, pН 7,6±0,2, что соответствует максимальной концентрации ингредиентов.

Биологические показатели предлагаемой и известных питательных сред для накопления сальмонелл представлены в таблице.

Из таблицы видно, что предлагаемая среда имеет преимущество по сравнению с контрольной средой (прототипом - средой Мюллера-Кауфмана). На среде Мюллера-Кауфмана ингибиция кишечной палочки составляет 10%, на селенитовой среде - 20%, тогда как на предлагаемой питательной среде наблюдается полная 100% ингибиция кишечной палочки, при сохранении высоких накопительных свойств. Эффективность накопления на предлагаемой и контрольной среде составляет 10⁶ paз.

Питательная среда разработана на основе сухих отечественных ингредиентов, проста в применении, дешевле среды прототипа.

Источники информации
1. ВФС 42-4ВС-85 Питательная среда для накопления сальмонелл, сухая (селенитовая среда Лейфсона).

2. Г.П. Калина, В.Л. Шиганова. Среда с хлористым магнием для обнаружения сальмонелл. Лаб. дело, 1972, 4, с. 240-243.

3. А. С. Лабинская. Микробиология с техникой микробиологических исследований. М.: Медицина, 1978, с. 348-349, 361.

4. ФС 42-224ВС-88. Питательный бульон для культивирования микроорганизмов, сухой.

Формула изобретения

Питательная среда для накопления сальмонелл, содержащая питательную основу, углекислую соль, хлорид натрия, тиосульфат натрия, бриллиантовый зеленый, раствор Люголя, дистиллированную воду, отличающаяся тем, что в качестве питательной основы она содержит панкреатический гидролизат рыбы и пептон ферментативный сухой, в качестве углекислой соли - натрия карбонат, дополнительно содержит экстракт кормовых дрожжей в качестве стимулятора роста при следующем соотношении компонентов, г/л:
Панкреатический гидролизат рыбы - 6,6-6,8
Хлорид натрия - 3,2-3,4
Пептон ферментативный сухой - 4,9-5,1
Экстракт кормовых дрожжей - 2,4-2,6
Тиосульфат натрия - 39,0-41,0
Натрия карбонат - 0,45-0,55
Бриллиантовый зеленый - 0,009-0,011
Раствор Люголя - 18,0-22,0
Вода дистиллированная - До 1 л

РИСУНКИ

Рисунок 1

TK4A - Поправки к публикациям сведений об изобретениях в бюллетенях "Изобретения (заявки и патенты)" и "Изобретения. Полезные модели"

Страница: 450

Напечатано: Адрес для переписки: 367025, Респ. Дагестан, г. Махачкала, ул. Леваневского, 24, Научно-производственное объединение "Питательные среды"

Следует читать: Адрес для переписки: 119021, Москва, Зубовский б-р, 4, ФГУП "НПО "Микроген", патентно-лицензионный отдел

Номер и год публикации бюллетеня: 31-2002

Код раздела: FG4A

Извещение опубликовано: 27.04.2005        БИ: 12/2005

---