Гемостатическая губка, основанная на коллагене, способ ее получения, повязка для ран, включающая такую губку, и набор для приготовления повязки для ран

 

Изобретение относится к медицине, а именно к гемостатическим губкам, основанным на коллагене и активаторе или проактиваторе свертывания крови, равномерно распределенным в нем, которая сушится и содержит по крайней мере 2% воды, предпочтительно в пределах от 2 до 25%, более предпочтительно от 10 до 20%, и к способу получения подобной губки. Губка обладает повышенной пластичностью и механической стабильностью. Губка дополнительно может содержать фармакологически активные вещества. 4 с. и 17 з.п.ф-лы.

Изобретение относится к гемостатическим (кровоостанавливающим) губкам, основанным на коллагене и тромбине, и к способам их получения, а также к повязкам для ран, включающим названную губку, и к набору компонентов для изготовления данной повязки для ран.

Биологические клеи, основанные на коагулирующих факторах человеческого или животного происхождения, известны давно. Способы получения тканевых клеев, основанных на фибриногене и факторе ХIII, описаны в патентах США 4362567, США 4298598 и США 4377572. Тканевые клеи обычно применяются вместе с отдельными компонентами, содержащими тромбин, который ферментативно воздействует на фибриноген с образованием фибрина, и на фактор ХIII с образованием активного фактора ХII 1а, который поперечно сшивает фибрин для получения стабильного фибринового сгустка.

При применении на обширном кровоточащем участке тканевые клеи обычно наносятся на коллагеновый лист непосредственно перед тем, как этим листом покрывают рану.

В патенте США 4600574 описан тканевый клей, основанный на коллагене в сочетании с фибриногеном и фактором ХIII. Этот материал предлагается в лиофилизированной форме, готовой к употреблению. Фибриноген и фактор ХIII соединяются с коллагеном путем пропитки плоского коллагенового материала раствором, содержащим фибриноген и фактор ХIII, сопровождающейся лиофилизацией названного материала.

Тканевое герметичное хирургическое покрытие на коллагеновой основе в соответствии с ЕР 0049469 получают подобным же образом, соединяя лиофилизацией коллаген и фибриноген и необязательно антибиотик.

Гемостатические губки, которые содержат натуральный бычий коллаген, коммерчески доступны, например, Colgen® (IMMUNO AG) в виде повязки для кровоточащих ран. Эти продукты воздействуют на внутренний и внешний гемостатические пути без образования клея, что делает их довольно медленно действующими. Однако их твердая структура придает им механическую прочность.

Когда коллаген объединяют с фибриногеном и тромбином, как описано в ЕР 0059265, материал нуждается в тщательном приготовлении путем исключения любого присутствия воды. В присутствии малейшего количества воды фибриноген может быть превращен в фибрин, и вещество в дальнейшем не будет пригодным для герметичного покрытия тканей. Вследствие этого подобные материалы обычно предлагаются в лиофилизированной форме герметически упакованными вместе с десеикантом (осушителем).

Когда фибриноген в гемостатической губке отсутствует, тромбин или его предшественник может быть абсорбирован на пористую структуру, биологически способного к абсорбции коллагена в соответствии с WO 90/13320. Это вещество имеет общее содержание воды ниже 50% по массе. Его получают путем инъекции водного раствора тромбина или его предшественника вместе с тромбинстабилизирующим агентом в твердый материал в нескольких местах. Тромбинстабилизирующие агенты предпочтительно являются аминокислотами, ПЭГ (полиэтиленгликолем) или полисахаридами. Относительно высокое содержание воды получается из-за введения в коллагеновую губку раствора тромбина. Хотя губка может быть высушена при повышенной температуре, проводится только умеренное высушивание из-за риска денатурации тромбина и коллагена.

Ввиду введения тромбина путем инъекций его распределение в губке слишком неоднородно, что снижает возможность ее точного повторения и надежность повязки для ран.

Гомогенную смесь диспергирующегося или растворимого коллагена с тромбином получают в соответствии с патентом США 4515637. Раствор сушат замораживанием и получают свободный от влаги устойчивый при хранении продукт. Хотя сухие коллагеновые губки обладают высокой механической прочностью, они оказываются довольно непластичными и, таким образом, при использовании хирургом могут разрушиться. Однако высушивание до получения абсолютно свободного от влаги продукта кажется весьма важным для исключения проблем со стабильностью тромбина.

Альтернативное использование композиции гемостатической коллагеновой пасты, содержащей водный раствор тромбина, описывается в ЕР 0372966. Эта паста упаковывается в тюбики или шприцы. Пасту, однако, трудно использовать для остановки кровотечения на обширном кровоточащем участке.

Когда больному назначается материал человеческого или животного происхождения, существует риск перенесения патогенных веществ, происходящих из сырья, служащего источником материала. Тромбин обычно получают из плазмы крови человека или животного, причем существует риск перенесения вирусов, находящихся в крови, таких как вирус СПИДа, вирус гепатита и паравирус. Вследствие этого применяются меры по инактивации любого вируса, который может присутствовать во фракциях плазмы, таких как препараты тромбина. В патенте ЕР 0541507 описываются способы получения препаратов тромбина, свободных от вируса, происходящих из фракций плазмы крови человека.

Кроме предварительной обработки высокими концентрациями щелочи материала, служащего источником коллагена, сам коллаген обычно обрабатывают бета- или гамма-облучением. Эти обычные меры по инактивации любого вируса или приона, который может присутствовать в сырье.

Коммерчески пригодный продукт, TachoComb®, который получают способом в соответствии с патентом ЕР 0059265, обрабатывают гамма-облучением после упаковки готового листа. Обнаружено, что обработка облучением разрушает нативную структуру фибриногена. Денатурированный фибриноген с трудом свертывается. Таким образом, этот материал менее эффективен, чем in situ приготовленное сочетание коллагена и тканевого клея, основанного на фибриногене, компоненты которых предлагаются в виде набора, и при этом их легко подвергнуть обработке для инактивации вируса по отдельности.

Настоящее изобретение обеспечивает готовую к использованию губку-компресс, содержащую рассасывающийся коллагеновый материал, который не имеет вышеописанных недостатков, особенно в отношении пластичности и механической стабильности материала.

В соответствии с изобретением предлагается кровоостанавливающая губка, основанная на коллагене и гомогенно распределенном в нем активаторе или проактиваторе свертывания крови. Эта губка предлагается в сухом виде, что может быть достигнуто сушкой воздухом или лиофилизацией. Однако она все же содержит некоторое количество воды, по крайней мере 2%, предпочтительно в пределах от 2 до 25%. Особенно предпочтительно, чтобы содержание воды было в пределах от 10 до 20% для того, чтобы улучшить стабильность губки при хранении при повышенных температурах.

Неожиданно обнаружено, что определенное содержание воды делает губку гибкой, сохраняя при этом ее физико-химическую структуру и механическую прочность.

Также важно, чтобы тромбин или предшественник тромбина был равномерно распределен в материале для того, чтобы предупредить местную нестабильность или повышенную коагулирующую способность материала. Несмотря на содержание воды, активность тромбина на удивление стабильна, возможно из-за тесного контакта тромбина и коллагена в гомогенной смеси.

Тем не менее, в соответствии с изобретением могут быть использованы стабилизаторы тромбина, предпочтительно выбранные из группы, состоящей из полиола, полисахарида, полиалкиленгликоля, аминокислот или их смеси. Предпочтительно типичное использование сорбита, глицерина, полиэтиленгликоля, полипропиленгликоля, моно- или дисахаридов, таких как глюкоза или сахароза, или любых сахаров, или сульфонированных аминокислот, способных к стабилизации активности тромбина.

Губка предлагается в виде стабильного при хранении твердого продукта, который может быть использован даже после хранения в течение 6 месяцев, предпочтительно 2 лет или даже большего количества лет при комнатной температуре.

Под тромбином или предшественником тромбина понимается белок, обладающий тромбиновой активностью, и который индуцирует активность тромбина при контакте с кровью или после применения пациентом соответственно. Его активность выражается как активность тромбина (NIH -Единица) или как эквивалентная тромбину активность, соответствующая определенной NIH-Единице. Под тромбиновой активностью понимается одновременно и активность тромбина, и любая другая эквивалентная активность. Белок, обладающий тромбиновой активностью, может быть выбран из группы, состоящей из альфа-тромбина, мезо-тромбина, производных тромбина или рекомбинантов тромбина. Подходящий предшественник может быть выбран из группы, состоящей из протромбина, фактора Ха, необязательно, вместе с фосфолипидами, фактора 1ха, активированного протромбинового комплекса, FЕ1ВА, любого активатора или проактиватора внутреннего или внешнего свертывания, или их смесей.

В соответствии с изобретением гемостатическая губка может быть использована вместе с добавочными физиологическими веществами. Например, предпочтительно, чтобы губка дополнительно содержала фармакологически активные вещества, среди которых можно назвать антифибринолитики, такие как ингибитор активатора плазминогена или ингибитор плазмина, или инактиватор фибринолитиков. Предпочтительные антифибринолитики выбирают из группы, состоящей из апротинина или производных апротинина, альфа-2-макроглобулина, ингибитора или инактиватора протеина С или активированного протеина С, субстрата имитационно присоединяющего плазмин, который действует конкурентно с природными веществами, или антител, ингибирующих фибринолитическую активность.

В соответствии с изобретением в качестве дополнительного фармакологически активного вещества вместе с губкой может быть использован антибиотик, такой как антибактериальный или антигрибковый, предпочтительно в виде равномерно распределенного в губке компонента. Предпочтительны дополнительные комбинации со специфическими ферментами или ингибиторами ферментов, которые могут регулировать, то есть ускорять или тормозить резорпцию губки. Среди них - коллагеназа, ее ускорители и ингибиторы. Также подходящие консерванты могут использоваться вместе с губкой или могут содержаться в губке.

Хотя предпочтительное воплощение относится к использованию коллагеновой губки, которая содержит активатор или проактиватор свертывающей системы крови в качестве единственного активного компонента, могут включаться дополнительные вещества, которые влияют на скорость коагуляции крови, гемостаз и качество герметичности, что включает такие показатели, как предел прочности на разрыв, внутренняя (адгезивная) сила и долговечность (продолжительность срока службы). Могут быть использованы прокоагулянты, которые усиливают или улучшают внутреннюю или внешнюю свертываемость, такие как факторы или кофакторы свертывания крови, фактор ХIII, тканевый фактор, протромбиновый комплекс, активированный протромбиновый комплекс или части комплексов, комплекс протромбиназы, фосфолипиды и ионы кальция. В случае хирургических процедур, при которых необходима тщательная герметизация, предпочтительно пролонгировать период работы после того, как гемостатическая губка накладывается больному и до образования сгустка. Пролонгирование реакции сгусткообразования будет обеспечено, если губка в соответствии с изобретением содержит ингибиторы свертывания крови в соответствующих количествах. Предпочтительны такие ингибиторы, как антитромбин III необязательно вместе с гепарином или любой другой ингибитор серин-протеазы.

Коллаген губки в соответствии с изобретением предпочтительно животного происхождения, предпочтительно бычий или конский. Однако человеческий коллаген также может быть использован в случае гиперчувствительности больного к ксеногенным белкам. Предпочтительно, чтобы дополнительные компоненты губки были человеческого происхождения, что делает губку пригодной именно для применения человеку.

Медицинская область назначения губки в соответствии с изобретением довольно широка. Губка может быть использована не только для остановки кровотечения на очень больших кровоточащих участках с высоким кровяным давлением, но также для остановки медленного кровотечения. Следующие внутренние и наружные хирургические процедуры успешно проводятся с использованием гемостатической губки в соответствии с изобретением: общая хирургия, например хирургия паренхиматозных органов (печени, почки, селезенки и т.д.), кардиоваскулярная хирургия, грудная хирургия, трансплантационная хирургия, ортопедическая хирургия, костная хирургия, пластическая хирургия, хирургия уха, горла и носа, нейрохирургия, урологическая и гинекологическая хирургия, также как и проведение гемостаза, как, например, при обработке ран.

Губка может предусматриваться в виде компресса. Несмотря на содержание воды в гемостатической губке, она способна к абсорбции большого количества крови при накладывании на раны. Введение аутологичной или гетерологичной крови, фибриногена или производных крови стимулирует свертывание крови, и для остановки кровотечения образуется фибрин и покрывает рану.

Более того, губка в соответствии с изобретением может наноситься на рану вместе с препаратами фибриногена. Поэтому также предполагается набор для изготовления губки или повязки для ран до или непосредственно во время нанесения на рану. Набор кроме губки содержит по крайней мере фибриногеновый компонент, предпочтительно в устойчивой при хранении форме. Фибриноген может быть в форме фибринового герметика, такого как коммерческий продукт тканевого клея (адгезива), основанного на фибриногене, например TISSEEL® (IMMUNO AG). В набор также могут быть включены дополнительные фармакологически активные вещества, такие как описанные выше, в виде одного или нескольких компонентов набора, или в виде отдельных компонентов.

Как оказалось, губка предпочтительно характеризуется толщиной по крайней мере в 3 мм или по крайней мере от 5 мм до 20 мм в зависимости от назначения. Когда относительно тонкая пластичная губка накладывается на рану важно, чтобы кровь и фибриноген могли абсорбироваться через губку до образования фибрина, который может действовать как барьер для абсорбции дальнейших выделений из раны. Следовательно, губка в соответствии с изобретением предпочтительно обладает определенной тромбиновой активностью, которая обеспечивает как абсорбцию жидкостей организма через губку, так и быстродействующую эффективную герметизацию раны. Доказано, что 1000 - 10 000, предпочтительно 5000 - 8000 Единиц/г необходимо для эффективного гемостаза и лечения ран.

В соответствии с изобретением предпочтительное рН губки находится в пределах от 6 до 8. Когда нейтральное рН доводится в коллагеновом растворе или геле, существует проблема с осаждением коллагена, которое проявляется в виде образования коллагеновых волокон. Невозможно каким-либо образом достичь абсолютно однородного распределения тромбина в коллагеновом материале в суспензии, в которой образовались коллагеновые волокна. Таким образом, для того, чтобы добиться однородного распределения активатора или проактиватора свертывания крови, следует преодолеть проблему образования волокон. Гомогенная смесь получается только в том случае, когда коллаген сохраняется в растворимом состоянии или в виде геля и, находясь в гелеобразном состоянии, необязательно лиофилизированным или высушенным воздухом.

Способ получения губки в соответствии с изобретением включает подкисление неочищенного коллагенового материала для получения коллагенового геля, в котором коллаген находится в нерастворенном состоянии. Подкисленный материал имеет рН в границах от 1,5 до 4, предпочтительно от 2 до 2,5. Для подкисления предпочтительно использовать слабую кислоту, такую как лимонная кислота. Неожиданно обнаружено, что гелеподобное состояние достигается без образования волокон даже после нейтрализации, когда применяется строгий температурный контроль между 1 и 8^oС, предпочтительно от 2 до 5^oС. Такая низкая температура предупреждает осаждение коллагена, но она должна поддерживаться в течение всех стадий получения губки до высушивания или лиофилизации. Дополнительные компоненты губки могут быть перемешаны для достижения однородного распределения до и после нейтрализации. Нейтрализация выполняется предпочтительно добавлением щелочного раствора, такого как NaOH или Са(ОН)₂.

Важным для изобретения приемом является высушивание или лиофилизация продукта, так как необходимо, чтобы после высушивания сохранялось определенное количество воды. Предпочтительно губка может быть или высушена воздухом или лиофилизирована в течение относительно короткого периода, который обеспечивается для того, чтобы содержание воды осталось на вышеописанном уровне. Альтернативная процедура включает лиофилизацию до получения сухой губки, которая затем увлажняется добавлением воды или путем длительной инкубации в среде с относительной влажностью более 80% и до 100%. Для облегчения высушивания или процесса лиофилизации предпочтительно включить гидрофильное вещество, которое способно сохранять определенное количество воды после тщательной и аккуратной лиофилизации или после активной абсорбции влаги. Предпочтительным веществом может быть полиол или полисахарид, которые могут также действовать на лабильные компоненты как защищающие вещества.

Конкретное воплощение относится к губке вместе с одним или большим количеством дополнительных гемостатических слоев различной структуры и/или к композиции для получения сложной повязки для ран. Дополнительные слои могут состоять по существу из коллагена для повышения механической прочности повязки для ран. Предпочтительно дополнительные материалы для подобного сочетания выбирают из группы, состоящей из модифицированного или поперечно-сшитого коллагена, модифицированной целлюлозы, такой как оксицеллюлоза, тканей человека и викрила (Company Ethnor). Полученная в результате повязка для ран предпочтительно полностью рассасывается, но обладает тем не менее высокой механической прочностью. С другой стороны, она также может содержать фибриноген при условии, что фибриноген не будет входить в прямой контакт с тромбином. Когда в составной повязке для ран в соответствии с изобретением необходимо использовать тромбин и фибриноген, предпочтительно, чтобы дополнительный слой коллагена размещался между слоем тромбина и слоем фибриногена.

Повязка для ран, состоящая из губки в соответствии с изобретением, и одного или нескольких дополнительных слоев предпочтительно получать путем наслоения губки. Несколько гемостатических слоев коллагенового материала можно приготовить и после этого соединять один за другим. Предпочтительно склеивание слоев путем последовательного или одновременного замораживания или лиофилизации, также известных как совместная заморозка или совместная лиофилизация. Дополнительные способы соединения включают перекрестное сшивание или склеивание. Различные слои могут быть получены охлаждением губки в соответствии с изобретением ниже 0^oС, предпочтительно в пределах между -10^o и -1^oС, и распылением или заливкой жидкости, содержащей жидкость, которая образует верхний или наложенный на другой слой при дальнейшем замораживании и/или лиофилизации.

Для лиофилизации смесь коллагена и дополнительных компонентов предпочтительно переносят в определенную форму, в которой получаются листы определенного размера. Примерные формы - в виде подушки, лоскута неправильной формы, листа, бруска, трубки, конуса и волокон, которые могут быть спрессованы или сформированы в желаемую структуру. Структура может иметь поры или быть проницаемой для воздуха. Кроме того, предпочтительно использовать определенный вид коллагена, выбранный из группы, состоящей из типов I, II, III, IV, VII и X. Тип IV особенно предпочтителен при использовании коллагена человека. Кроме того, может быть использован фрагментированный нативный коллаген или коллаген, обработанный ферментами, например пепсином или пектином.

Структура и механическая прочность коллагеновых слоев, кроме того, характеризуется их концентрацией. Предпочтительно готовить губку с концентрацией коллагена от 1 до 15 мг/см³.

Предпочтительно готовить комбинацию коллагена и факторов свертывания крови в присутствии небольшого количества коллагена, выраженного концентрацией от 1 до 2 мг/см². Во время сушки такой комбинации замораживанием необходима подложка (поддерживающая структура) и окружение, подобное таковому у чистого лиофилизированного коллагена.

Лиофилизированная губка в соответствии с настоящим изобретением предпочтительно не совсем белая, выглядящая как вата, которая пластична и прочна.

Высушенная воздухом губка в большинстве случаев полностью прозрачна.

Для обеспечения стерильности губки в соответствии с изобретением предпочтительна стерилизация облучением, более предпочтительно после ее высушивания, бета- или гамма-лучами подходящего источника энергии с подходящей длиной волны. Кроме самой губки также можно облучать исходный материал, который является коллагеновыми фракциями в твердом виде. Коллагеновый неочищенный материал может поэтому быть предложен как коллагеновый порошок, готовый к стерилизации облучением.

В соответствии с конкретным воплощением компоненты губки обрабатывают отдельно для инактивации любого возможного патогенного присутствия, предпочтительно используя химическую или физическую обработку, предпочтительно тепловую обработку, например, в соответствии с ЕР 0159311. В любом случае предпочтительно дополнительно стерилизовать приготовленную губку общепринятыми способами.

Далее изобретение иллюстрируется следующими примерами, но не ограничивается ими.

Пример 1: Изготовление коллагенового геля Эквивалент, соответствующий 1 г сухого коллагена (из жидкого, пастообразного, волокнистого или порошкообразного коллагенового материала) растворяли в 100 мл 0,01 М лимонной кислоты. Смесь встряхивали до получения однородного и жидкого геля. Доводили рН до 7,2 добавлением раствора NaOH при постоянном перемешивании при 4^oС. Этот гель содержал 1% коллагена. Таким же образом получали 0,25% коллагеновый гель.

Пример 2: Получение и лиофилизация коллагенового геля, содержащего тромбин 60 мл 1% коллагенового геля, полученного в соответствии с примером 1, смешивали с 5 мл 1000 1U/мл раствора тромбина (ЧЕЛОВЕЧЕСКИЙ ТРОМБИН, IMMUNO AG) при 4^oС. Гомогенную смесь выливали в 10 • 10 см лоток, предварительно охлажденный до 4^oС. Лоток затем переносили в морозильную камеру сушильного холодильника, предварительно охлажденную до 4^oС. Затем начинают цикл заморозки до -20^oС, и продукт сушат замораживанием до достижения 15% содержания воды.

Продукт представлял собой пластичное хлопкоподобное ворсистое полотно, которое разрезают до желаемого размера. Это ворсистое полотно имело следующие характеристики.

Продукт I: Коллаген: - 8,55 мг/см² Тромбин: - 50 1U/см² Размер - 10 • 10 Толщина - 0,6 см Пример 3: Получение повязки для ран, содержащей несколько слоев 60 мл 1% коллагенового геля, полученного в соответствии с примером 1, выливали в 10 • 10 см лоток, предварительно охлажденный до 4^oС. Лоток затем переносили в морозильную камеру сушильного холодильника, предварительно охлажденного до 4^oС. Затем начинали цикл заморозки до -5^oС и продукт замораживали при -5^oС.

После этого 20 мл 0,25% коллагенового геля, полученного в соответствии с примером 1, смешивали с 5 мл 1000 1U/мл раствора тромбина (ЧЕЛОВЕЧЕСКИЙ ТРОМБИН, IMMUNO AG) и перемешивали при 4^oС до получения гомогенной смеси. Смесь выливали равномерно на поверхность замороженного коллагенового листа, который все еще лежал в лотке, и был предварительно заморожен до -5^oС. Лоток быстро переносили в сушильный холодильник и начинали цикл заморозки до -20^oС. Сушка замораживанием имела место до достижения конечной десорбционной температуры от 25^oС до 30^oС. Продукт содержал 14% воды. Полученный в результате продукт состоял из 2 прочно склеенных слоев и его было легко разрезать и упаковывать.

Продукт II: Первый слой:
Коллаген - 8,55 мг/см²
Размеры: - 10 • 10 см
Толщина: - 0,6 см
Второй слой:
Коллаген: - 1,7 мг/см²
Тромбин: - 50 1U/см²
Размеры: - 10 • 10 см
Толщина: - 0,2 см
Верхний слой фибриногена, сочетающийся с низкими концентрациями коллагена, получали следующим образом: 20 мл 0,25% коллагенового геля, полученного в соответствии с примером 1, смешивали с 6,5 мл 80 мг/мл раствора фибриногена (ЧЕЛОВЕЧЕСКИЙ ТРОМБИН, IMMUNO AG) при 4^oС. Смесь равномерно выливали на поверхность замороженного коллагентромбинового листа, который был ранее размещен в лотке, предварительно замороженном до -5^oС. Лоток переносили в морозильное отделение сушильного холодильника и начинали цикл заморозки до -20^oС. Конечная десорбционная температура составляла от 20^oС до 30^oС, конечное содержание воды около 15%. Полученный в результате продукт состоял из 3 прочно склеенных слоев, и его было легко разрезать и упаковывать. Продукт имел следующие характеристики:
Продукт III:
Первый слой:
Коллаген: - 8,55 мг/м²
Размеры: - 10 • 10 см
Толщина - 0,6 см
Второй слой:
Коллаген - 1,7 мг/см²
Тромбин: - 50 1U/см²
Размеры: - 10 • 10 см
Толщина: - 0,2 см
Третий слой:
Коллаген - 1,7 мг/см²
Фибриноген: - 10 мг/см²
Размеры: - 10 • 10 см
Толщина: - 0,2 см
Этот процесс может быть использован в производстве спрессованных губок, состоящих из различных коллагеновых слоев, назначение слоев может меняться в соответствии с желаемым уровнем эффективности. Используя этот процесс, получали продукт со следующими характеристиками:
Смесь 20 мл 0,25% коллагенового геля и 5 мл 1000 IU/мл раствора тромбина и 1 мл 40 М раствора хлорида кальция перемешивали при 4^oС и замороженный коллагеновый слой готовили как описано выше. Начинали цикл заморозки до -5^oС в течение 1 часа. Следующий слой готовили, как описано выше, используя 20 мл 0,25% коллагенового геля, причем цикл заморозки продолжался до -5^oС. Дополнительный слой получали, используя 20 мл 0,25% коллагенового геля в смеси с 6,5 мл 80 мг/мл раствора фибриногена. В течение сушки замораживанием достигалась конечная десорбционная температура от 20 до 30^oС. Продукт имел следующие характеристики.

Продукт IV:
Первый слой:
Коллаген: - 1,77 мг/см²
Тромбин: - 50 IU/см²
Размеры: - 10 •10 см
Толщина: - 0,2 см
CaCl₂: - 1 мл 40 ммол/л раствора
Второй слой:
Коллаген: - 1,7 мг/см²
Размеры: - 10 • 10 см
Толщина: - 0,2 см
Третий слой:
Коллаген - 1,7 мг/см²
Фибриноген: - 10 мг/см²
Размеры: - 10 • 10 см
Толщина: - 0,2 см
Пример 4: Применение губки на модели свиньи и сравнение с коммерчески доступным продуктом (TachoComb®.).

Используя модель резекции печени у гепаринизированных свиней, проводилось сравнение между продуктом 1, полученным в соответствии с примером 2, коллагеновым продуктом, не содержащим тромбина и TachoComb® (Nycomed).

Когда использовался коллагеновый продукт, не наблюдалось гемостаза, что приводило к кровотечению со смертельным исходом. Также не наблюдалось гемостаза при использовании TachoComb®. Наблюдалось, что при прекращении резекции участка начиналось повторное кровотечение, что и приводило к смерти свиньи.

При использовании продукта 1 гемостаз происходил в течение 5 минут. Свиньи наблюдались в послеоперационном периоде в течение 3 дней. После этого их забивали. При аутопсии в брюшной полости не было обнаружено крови.

Формула изобретения

1. Гемостатическая губка, основанная на коллагене и равномерно распределенном в нем активаторе или проактиваторе свертывания крови, которая высушивается и содержит воду в количестве по крайней мере 2%, предпочтительно в пределах от 2 до 25%, более предпочтительно от 10 до 20%.

2. Губка по п.1, отличающаяся тем, что губка высушена замораживанием или воздухом.

3. Губка по п.1 или 2, характеризующаяся уровнем рН от 6 до 8.

4. Губка по любому из пп.1-3, отличающаяся тем, что названный активатор или проактиватор свертывания крови выбирают из группы, состоящей из тромбина, протромбина, активированного фактора X, активированного протромбинового комплекса, FE1BA, ионов кальция и их смеси.

5. Губка по любому из пп.1-4, характеризующаяся толщиной по крайней мере 3 мм, предпочтительно по крайней мере от 5 до 10 мм.

6. Губка по любому из пп.1-5, характеризующаяся содержанием активатора или проактиватора в 1000-10000, предпочтительно 5000-8000U/тромбиновых эквивалентов на грамм.

7. Губка по любому из пп.1-6, которая дополнительно содержит стабилизатор тромбина, предпочтительно выбранный из группы, состоящей из полиола, полисахарида, полиалкиленгликоля, аминокислоты или их смеси.

8. Губка по любому из пп.1-7, которая дополнительно содержит вещество, которое стабилизирует содержание воды, предпочтительно такое, как полисахариды или полиолы.

9. Губка по любому из пп.1-8, которая дополнительно содержит фармакологически активное вещество, такое как консервант, антифибринолитик, антиботик, такой как антибактериальный или антигрибковый фактор роста, фермент или ингибитор фермента.

10. Повязка для ран, которая включает губку в соответствии с любым из пп.1-9 и дополнительный слой, который предпочтительно также является гемостатическим и который склеен с названной губкой.

11. Повязка для ран по п.10, отличающаяся тем, что дополнительный слой по существу состоит из коллагена.

12. Повязка для ран по п.10, отличающаяся тем, что дополнительный слой содержит фибриноген, предпочтительно в смеси с коллагеном.

13. Набор для приготовления повязки для ран содержит а) губку, согласно любому из пп.1-9, б) фибриноген, предпочтительно в стабильной при хранении форме, и при необходимости, с) фармакологически активное вещество.

14. Способ получения губки по любому из пп.1-9, включающий подкисление неочищенного коллагенового материала для получения коллагенового геля, нейтрализации геля, смешивание геля с активатором или проактиватором свертывания крови для получения однородной смеси, нейтрализации смеси, сушки данной смеси предпочтительно лиофилизацией или воздухом до содержания воды по крайней мере 2%, предпочтительно в пределах от 2 до 25%, более предпочтительно от 10 до 20% и стерилизации целевого продукта.

15. Способ по п.14, отличающийся тем, что гель или смесь нейтрализуется добавлением раствора щелочи, такой как NaOH или Са(ОН)₂.

16. Способ по п.14 или 15, отличающийся тем, что смесь лиофилизуется для получения сухой губки, которую затем увлажняют.

17. Способ по любому из пп.14-16, отличающийся тем, что смесь лиофилизуется в присутствии вещества, которое сохраняет содержание воды.

18. Способ по любому из пп.14-17, отличающийся тем, что смесь лиофилизуется в определенной форме.

19. Способ по любому из пп.14-18, отличающийся тем, что в смесь добавляют дополнительное вещество, такое как тромбин, стабилизатор или физиологически активное вещество.

20. Способ по любому из пп.14-19, отличающийся тем, что неочищенный коллагеновый материал, такой как коллагеновый порошок, гель в твердой форме и/или губка стерилизуются облучением.

21. Способ по любому из пп.14-20, отличающийся тем, что дополнительный слой соединяется с губкой путем последовательного или одновременного замораживания, лиофилизацией, поперечным сшиванием или склеиванием.