Неинвазивный способ определения проницаемости кишечной стенки

 

Изобретение может быть использовано в медицине для неинвазивного определения проницаемости кишечной стенки. Способ заключается в спектрофотометрическом определении отношения содержания маннита и лактулозы в моче после пероральной нагрузочной пробы, основанном на реакции с 2.3.5-трифенилтетразолием. Благодаря способу сокращается время определения и повышается воспроизводимость и точность полученных результатов. 2 табл.

Изобретение относится к области медицины, преимущественное применение найдет в аллергологии, гастроэнтерологии и лабораторной диагностике и может быть использовано для неинвазивного определения проницаемости кишечной стенки.

Известны способы определения проницаемости кишечной стенки, основанные на скорости абсорбции в кровь различных инертных газов (ксенон, гелий, радон и др. ) после их энтерального введения [4]. Однако данные способы приемлемы скорее для исследовательских целей, чем для клинической практики, вследствие их материалоемкости и дороговизны.

Известны способы определения проницаемости кишечной стенки, основанные на скорости абсорбции из кишечника различных радиоактивных и флюоресцентных меток, полимеров различной молекулярной массы [1], однако они неприемлемы в клинической практике, поскольку данные соединения не включены в Фармакопею России.

Наиболее близким к заявляемому является способ определения проницаемости кишечной стенки [2, 3] , основанный на различиях во всасывании инертного дисахарида и моносахарида или гомологичного ему полиспирта. Авторы прототипа использовали эквимолярную смесь лактулозы и маннита. В моче, собранной в течение 3 часов после приема пациентом смеси, определялись концентрации маркерных веществ трехкратной одномерной восходящей хроматографией на пластинках Silufol. Используемая система растворителей, необходимость трехкратного хроматографирования делает пробу достаточно трудоемкой и снижает воспроизводимость результатов. Замена способа определения маннита и лактулозы в смеси на высокоэффективную жидкостную хроматографию не представляется возможным из-за значительного удорожания определения.

Целью изобретения является сокращение времени определения и повышение воспроизводимости и точности полученных результатов.

Сущность предлагаемого способа заключается: 1. Проведение нагрузочной пробы жидкостью, содержащей лактулозу и маннит.

2. Сбор мочи в течение 3 часов после приема тестирующей смеси.

3. Спектрофотометрическое определение содержания в моче восстанавливающих сахаров.

4. Спектрофотометрическое определение содержания в моче полиспиртов.

5. Вычисление показателя проницаемости кишечной стенки.

Для осуществления заявляемого способа необходимо перорально ввести пациенту или экспериментальному животному эквимолярную смесь (по 0.025 М/л) лактулозы в виде препарата "Нормазе"(MOLTE-NI SAS, PHARM Italla) и маннита (Днепропетровский ХФЗ) из расчета 5 мл/кг массы. Затем в течение 3 часов осуществлять сбор мочи.

Для определения содержания восстанавливающих сахаров (до 90% из которых в условиях проводимой нагрузочной пробы составляет лактулоза) к 2 мл мочи прибавляют 1 мл 2н. раствора NaOH и 1 мл 0.3% водного раствора 2.3.5-трифенилтетразолия. Оставляют на 5 минут при комнатной температуре. Появляющуюся розовую окраску закрепляют прибавлением 1 мл 2М раствора уксусной кислоты (проба Л).

Для определения содержания полиспиртов (подавляющую часть которых в условиях проводимой нагрузочной пробы составляет маннит) параллельно, в другой пробирке (проба М), к 2 мл мочи прибавляют 0.1 мл 0.03М раствора метапериодата натрия, оставляют на 5 минут, а затем проводят реакцию, как с пробой Л.

Обе пробы спектрофотометрируют против разбавленной физиологическим раствором (1:1) мочи при длине волны 485 нм.

Показатель проницаемости кишечной стенки вычисляют как отношения разности экстинций пробы М и пробы Л к экстинции пробы Л.

Пример 1. Проведена нагрузочная проба у кроликов - 5 интактных животных и 5 животных с 30-минутной ишемией и 120-минутной реперфузией кишечника. Лактулоза (1) и маннит (m) определены в моче по прототипу и заявляемым способом. Полученные результаты представлены в табл.1 и свидетельствуют об имеющихся преимуществах заявляемого способа. В частности, об этом свидетельствует меньший разброс в сериях у заявляемого способа по сравнению с прототипом.

Пример 2. Проведена нагрузочная проба у 10 здоровых детей и 15 детей с обострением атонического дерматита с пищевой сенсибилизацией при поступлении в стационар и после курса лечения энтеросорбентами (полисорб, 10 дней). Лактулоза (1) и маннит (m) определены в моче по прототипу и заявляемым способом. Определена корреляция показателей между заявляемым способом и прототипом.

Полученные результаты представлены в табл.2 и свидетельствуют о высокой воспроизводимости предлагаемого способа. Полученные на основе заявляемого способа данные о снижении проницаемости кишечной стенки при приеме энтеросорбента согласуются с клинико-лабораторными показателями и литературными сведениями.

Литература 1. Гасанов П. О., Шамов И.А. Способ определения всасывательной функции (градиента всасывания) тонкой кишки. //Лаб. дело. - 1988. - N11. - 27-30.

2. Andre С. , Andre F., Colln L., Cavagna S. Measurement of intestinal permeability to mannitol and lactulose as a means of diagnosing food allergy and evaluating therapeutic effect of disodium chromoglycate. //Ann. Allergy. - 1987. - Vol. 59 (suppl). - P. 127-130.

3. Caffarelli С., Cavagnl G., Menzies I. et al. Elimination diet and intestinal permeability in atopic eczema: a preliminary study. //Clin. Exp. Allergy. - 1993. - Vol.23. - P. 28-31.

4. Mortensen P.E., Olsen J.I., Bulow J. et al. Mucosal/submucosal blood flow in the gut wall determinal by local washout of 133-Xenon. //Acta Physlol. Scand. - 1991. - Vol. 143, N603. - P. 75-84.

Формула изобретения

Способ определения проницаемости кишечной стенки путем проведения нагрузочной пробы жидкостью, содержащей эквимолярную смесь лактулозы и маннита, сбора мочи в течение 3 ч после приема тестируемой смеси, отличающийся тем, что определение лактулозы проводят с помощью реакции с 2.3.5-трифенилтетразолием, определение маннита проводят той же реакцией после предварительного окисления метапериодатом натрия, окрашенные продукты определяют спектрофотометрически, при длине волны 485 нм и рассчитывают показатель проницаемости кишечной стенки как отношение экстинций проб.

РИСУНКИ

Рисунок 1, Рисунок 2