Питательная среда для выделения лактобактерий

 

Изобретение относится к биотехнологии, а именно к клинической микробиологии, и может быть использовано при бактериологической диагностике дисбактериоза кишечника. Среда содержит в качестве источника азотистого питания микробов панкреатический гидролизат казеина сухой, в качестве источника витаминов группы В экстракт кормовых дрожжей сухой, в качестве растворителя белковых компонентов натрий лимоннокислый трехзамещенный, в качестве ингибитора сопутствующих грамотрицательных энтеробактерий и кокковой микрофлоры натрий уксуснокислый плавленный, Д(+) глюкозу, железо и магний сернокислые 7-водные, кристаллвиолет и полимиксин М сульфат, цитрат аммония, поваренную соль, цистеин, воду дистиллированную. Среда сохраняет основные биологические свойства лактобактерий, то есть на ней отсутствует, в отличие от контрольной среды Рогозы, полиморфизм выросших колоний. Предлагаемая среда не требует стерилизации и дополнительных условий культивирования, проста в приготовлении. 1 табл.

Изобретение относится к медицине, а именно клинической микробиологии, и может быть использовано для выделения и количественного учета лактобактерий при диагностике дисбактериоза кишечника.

Известно использование для культивирования лактобактерий среды МРС (1) и для выделения лактобактерий из испражнений среды Рогозы (2).

Недостатком этих сред является трудоемкость их приготовления в лабораторных условиях.

Наиболее близким решением задачи того же назначения к заявляемому изобретению по совокупности признаков является среда Рогозы (2), содержащая в качестве азотистого питания молоко по Богданову (1, 3), в качестве источника витаминов группы В дрожжевой автолизат, Д (+) глюкозу, аминокислоту цистеин, соли аммония, калия, ацетата, магния, марганца, железа, ледяную уксусную кислоту, агар.

К причинам, препятствующим достижению указанного ниже технического результата при использовании известной среды, принятой за прототип, является то, что среда Рогозы требует дополнительных условий культивирования (присутствия СО₂ или светильного газа при 37^oС в течение 4-5 сут). Среда стерилизуется автоклавированием.

Задача предлагаемого изобретения - сохранение основных биологических свойств растущих на среде лактобактерий и упрощение условий культивирования посевного материала.

Указанный технический результат при осуществлении изобретения достигается тем, что предлагаемая среда содержит сернокислые соли железа и магния, цитрат аммония, калий фосфорнокислый однозамещенный, агар, поваренную соль, в качестве источника азотистого питания сухой панкреатический гидролизат казеина, в качестве комплекса витаминов группы В экстракт кормовых дрожжей, в качестве углевода Д (+) глюкозу, в качестве аминокислоты, обладающей ростовой активностью, цистеин, в качестве растворителя белковых компонентов среды трехзамещенный цитрат натрия, в качестве ингибитора сопутствующих грамотрицательных энтеробактерий и кокковой микрофлоры натрий уксуснокислый плавленный, кристалл-виолет и полимиксин М сульфат при следующем соотношении компонентов, г/л: Панкреатический гидролизат казеина сухой - 15,0 - 30,0 Экстракт кормовых дрожжей сухой - 3,0 - 7,0 Д(+) глюкоза - 17,0 - 25,0 Цистеин - 0,1 - 0,3 Железо сернокислое 7-водное - 0,03 - 0,06 Магний сернокислый 7-водный - 0,6 - 1,0 Цитрат аммония - 1,5 - 3,5 Калий фосфорнокислый однозамещенный - 4,0 - 8,0 Натрий лимоннокислый трехзамещенный - 6,0 - 8,5
Натрий уксуснокислый плавленный - 7,0 - 8,0
Агар микробиологический - 7,0 - 12,0
Поваренная соль - 3,0 - 8,0
Кристаллвиолет - 0,002 - 0,0025
Полимиксин М сульфат - 0,04 - 0,06 (40000-60000 Ед)
Среду получают следующим образом:
Пример 1. В 1 л дистиллированной воды последовательно растворяют 15,0 г панкреатического гидролизата казеина сухого, 3,0 г экстракта кормовых дрожжей сухого, 17,0 Д (+) глюкозы, 0,1 г цистеина, 0,03 г железа сернокислого 7-водного, 0,6 г магния сернокислого, 1,5 г цитрата аммония, 4,0 г калия фосфорнокислого однозамещенного, 6,0 г натрия лимоннокислого трехзамещенного, 7,0 г натрия уксуснокислого плавленного, 7,0 г агара микробиологического, 3,0 г поваренной соли, 0,002 г кристаллвиолета, 0,04 г (40000 Ед) полимиксина М сульфата.

Смесь нагревают до полного расплавления агара, кипятят 2 мин, фильтруют через ватный фильтр, после фильтрации снова доводят до кипения.

Среду остужают до 50^oС и разливают в стерильные чашки Петри слоем 3-5 мм, оставляют на столе при закрытых крышках на 40-60 мин для застывания агара. Затем чашки со средой и крышки раздельно подсушивают в термостате в течение 1,5 ч до высыхания конденсационной влаги на крышках чашек, после чего чашки закрывают крышками и среда готова для использования.

Контроль качества среды осуществляют путем посева тест-штамма Lactobacterium plantarum 8-РА-3, Staphylocoсcus aureus 209 p, Escherichia coli 3912/41, Pseudomonas aeruginosa H₈, Proteus vilgaris Hx 19 222.

Учет результатов производят через (46±2) ч инкубации посевов при (37±1)^oС.

Пример 2. Отличается от примера 1 тем, что в 1 л воды растворяют 20,0 г панкреатического гидролизата казеина сухого, 5,0 г экстракта кормовых дрожжей, 22,0 г Д (+) глюкозы, 0,2 г цистеина, 0,04 г железа сернокислого 7-водного, 0,8 г магния сернокислого, 2,0 г цитрата аммония, 6,0 г калия фосфорнокислого однозамещенного, 7,0 г натрия лимоннокислого трехзамещенного, 7,5 г натрия уксуснокислого плавленного, 10,0 г агара микробиологического, 5,0 г поваренной соли, 0,002 г кристаллвиолета, 0,05 г (50000 Ед) полимиксина М сульфата.

Пример 3. Отличается от примера 1, 2 тем, что в 1 л воды растворяют 30,0 г панкреатического гидролизата казеина сухого, 7,0 г экстракта кормовых дрожжей, 25,0 г Д (+) глюкозы, 0,3 г цистеина, 0,06 г железа сернокислого 7-водного, 1,0 г магния сернокислого, 3,5 г цитрата аммония, 8,0 г калия фосфорнокислого однозамещенного, 8,5 г натрия лимоннокислого трехзамещенного, 8,0 г натрия уксуснокислого плавленного, 12,0 г агара микробиологического, 8,0 г поваренной соли, 0,0025 г кристаллвиолета, 0,06 г (60000 Ед) полимиксина М сульфата.

Далее согласно примеру 1.

Результаты бактериологического контроля предлагаемой и контрольной сред представлены в таблице.

Из таблицы видно, что предлагаемая среда сохраняет основные биологические свойства: культура L. plantarum 8-PA-3 росла в виде колоний размером 1,0-1,2 мм, в то время как на контрольной среде наблюдался полиморфизм - размер колоний этой же культуры был от 0,1 до 1,0 мм.

Предлагаемая среда не требует стерилизации и дополнительных условий культивирования. Среда экономически выгодна, проста в приготовлении, не требует дополнительных затрат. Использование предлагаемой среды в практике здравоохранения будет способствовать улучшению диагностики дисбактериоза кишечника и правильной тактики его лечения.

Источники информации
1. Регламент производства лактобактерина сухого, 1975 (г. Пермь).

2. Ленцнер А.А., Тоом М.А., Микельсаар М.Э. К методике выделения лактобацилл из испражнений. Микробиология, 9, 1964, с.146.

3. Богданов В.М. Микробиология молока и молочных продуктов. М., "Пищевая промышленность". 1969, с.296.

Формула изобретения

Питательная среда для выделения лактобактерий, содержащая источник азотистого питания, источник витаминов группы В, Д(+) глюкозу, железо сернокислое 7-водное, магний сернокислый 7-водный, цистеин, цитрат аммония, калий фосфорнокислый однозамещенный, агар микробиологический, поваренную соль, воду дистиллированную, отличающаяся тем, что она дополнительно содержит натрий лимоннокислый трехзамещенный, натрий уксуснокислый плавленный, кристаллвиолет, полимиксин М сульфат, в качестве источника азотистого питания - панкреатический гидролизат казеина сухой, а в качестве источника витаминов группы В-экстракт кормовых дрожжей сухой при следующем соотношении компонентов, в г/л дистиллированной воды:
Панкреатический гидролизат казеина сухой - 15,0 - 30,0
Экстракт кормовых дрожжей сухой - 3,0 - 7,0
Д(+) глюкоза - 17,0 - 25,0
Цистеин - 0,1 - 0,3
Железо сернокислое 7-водное - 0,03 - 0,06
Магний сернокислый 7-водный - 0,6 - 1,0
Цитрат аммония - 1,5 - 3,5
Калий фосфорнокислый однозамещенный - 4,0 - 8,0
Натрий лимоннокислый трехзамещенный - 6,0 - 8,5
Натрий уксуснокислый плавленный - 7,0 - 8,0
Агар микробиологический - 7,0 - 12,0
Поваренная соль - 3,0 - 8,0
Кристаллвиолет - 0,002 - 0,0025
Полимиксин М сульфат - 0,04 - 0,06п

РИСУНКИ

Рисунок 1

PD4A - Изменение наименования обладателя патента Российской Федерации на изобретение

(73) Новое наименование патентообладателя:
Федеральное государственное унитарное предприятие “Научно-производственное объединение по медицинским иммунобиологическим препаратам “Микроген”

Извещение опубликовано: 27.10.2004        БИ: 30/2004