Новое применение 1,3-пропандиольных производных

 

Применение соединения формулы I, где R₁ обозначает необязательно замещенную прямую или разветвленную углеродную цепь с 12-22 атомами углерода, которая может быть прервана необязательно замещенным фениленом, и R₂, К₃, R₄ и R₅ каждый независимо друг от друга обозначает Н или низший алкил, в свободной форме или в форме фармацевтически приемлемой соли для предупреждения или лечения хронического отторжения алло- или ксенотрансплантата органа или ткани у реципиента или строго отторжения ксенотрансплантата у реципиента. Изобретение позволяет реализовать указанное назначение. Фармацевтическая и терапевтическая композиция, содержащие эти соединения. 4 с. и 3 з. п. ф-лы.

Настоящее изобретение относится к новому применению соединений из группы, включающей 2-амино-1,3-пропандиольные производные.

Соединения, предназначенные для применения по изобретению, представляют собой соединения формулы I (I) где R₁ обозначает необязательно замещенную прямую или разветвленную углеродную цепь с 12-22 атомами углерода, которая может включать необязательно замещенный фенилен, R₂, R₃, R₄ и R₅ каждый независимо друг от друга обозначает Н или (низш. )алкил, в свободной форме или в форме фармацевтически приемлемой соли.

Когда углеродная цепь, такая, как R₁, является замещенной, она предпочтительно замещена галогеном, нитро-, амино-, гидрокси- или карбоксигруппой. Когда углеродная цепь включает необязательно замещенный фенилен, эта углеродная цепь предпочтительно является незамещенной. Когда фрагмент фенилена является замещенным, он предпочтительно замещен галогеном, нитро-, амино-, метокси-, гидрокси- или карбоксигруппой.

Такие соединения описаны в заявке ЕР 627406 А1, описание к которой в части, касающейся указанных соединений, включено в настоящее описание в качестве ссылки.

Предпочтительными соединениями формулы I являются соединения, в которых R₁ обозначает прямую или разветвленную, предпочтительно прямую алкильную цепь с 13-20 атомами углерода, необязательно замещенную нитрогруппой, галогеном, амино-, гидрокси- или карбоксигруппой, а наиболее предпочтительны соединения, в которых R₁ обозначает фенилалкил, замещенный прямой или разветвленной ₆-С₁₄ алкильной цепью, необязательно замещенной галогеном, и алкильный фрагмент обозначает С₁-С₆ алкил, необязательно замещенный гидроксигруппой. Более предпочтительно R₁ обозначает фенил С₁-С₆ алкил, замещенный в фенильном радикале прямой или разветвленной, предпочтительно прямой С₆-С₁₄ алкильной цепью. C₆-С₁₄ алкильная цепь может находиться в орто-, мета- или пара-положении, предпочтительно в пара-положении.

Предпочтительно каждый из радикалов R_2-R₅ обозначает Н.

Примерами фармацевтически приемлемых солей соединений формулы I являются соли неорганических кислот, такие как гидрохлорид, гидробромид и сульфат, соли органических кислот, такие как ацетат, фумарат, малеат, бензоат, цитрат, малат, метансульфонат и бензолсульфонат, и когда присутствует карбоксигруппа, соли металлов, таких как натрий, калий, кальций и алюминий, соли аминов, таких как триэтиламин, и соли двухосновных аминокислот, таких как лизин. Соединения и соли по изобретению могут находиться в форме гидратов или сольватов.

Следует отметить, что когда соединения формулы I имеют в молекуле один или несколько асимметричных центров, то под объем настоящего изобретения подпадают различные оптические изомеры, а также рацематы, диастереоизомеры и их смеси.

Особенно предпочтительными соединениями формулы I являются 2-амино-2-тетрадецил-1,3-пропандиол и, в частности, 2-амино-2-[2-(4-октилфенил)этил] -1,3-пропандиол (обозначенный далее в настоящем описании как соединение А), например, в форме гидрохлорида.

Было обнаружено, что соединения формулы I на основе присущей им активности, например, описанной в ЕР 627406 А1, могут применяться, например, в качестве иммунодепрессантов, например для лечения острого отторжения аллотрансплантата.

Трансплантаты органов, таких как печень, почка, легкое и сердце, в настоящее время обычно применяют для лечения конечной стадии заболевания органа. Используют как аллотрансплантаты, так и ксенотрансплантаты. Однако из-за проблем, связанных с отдаленным хроническим отторжением, трансплантация органа еще не является радикальным решением проблемы, связанной с необратимым заболеванием органа. Хроническое отторжение, которое определяется как прогрессивная и необратимая дисфункция трансплантата, приводит к потере трансплантата органа, а в некоторых случаях уже через один год после операции. Клиническая проблема хронического отторжения становится очевидной на основании данных о времени выживания трансплантатов: примерно половина аллотрансплантатов почек отторгается через 5 лет после трансплантации, и аналогичная картина наблюдается у пациентов с аллотрансплантатами сердца.

Хроническое отторжение рассматривается как многофакторный процесс, в котором определенную роль играет не только иммунная реакция по отношению к трансплантату, но и реакция стенок кровеносного сосуда в трансплантированном органе на повреждение ("реакция на повреждение"). Вариантом хронического отторжения с наихудшим прогнозом является напоминающее атеросклероз изменение, которое также называют связанной с трансплантацией вазопатией сосудов трансплантата, атеросклерозом трансплантата, коронарным заболеванием трансплантата и т. д. Это повреждение сосудов характеризуется миграцией и пролиферацией клеток гладкой мускулатуры под влиянием факторов роста, которые наряду с другими веществами синтезируются эндотелием. Вероятно, это также происходит в результате повторного повреждения эндотелия, вызванного среди прочего антителами хозяина или комплексами антиген-антитело, и вследствие пролиферации и утолщения интимы происходит гипертрофическое восстановление клеток гладкой мускулатуры, что в конечном итоге приводит к постепенной облитерации полости. Определенную роль также играют так называемые неиммунологические факторы типа гипертензии, гиперлипидемии, гиперхолестеринемии и т.д.

Хроническое отторжение, вероятно, является очень серьезным и неконтролируемым, поскольку отсутствует эффективное лечение или профилактический метод воздействия на него. Таким образом, сохранятся необходимость в поиске пути лечения, эффективном с точки зрения предупреждения, контроля или реверсии симптомов хронических заболеваний сосудов трансплантата.

Согласно настоящему изобретению неожиданно было установлено, что соединения формулы I в свободной форме или в форме фармацевтически приемлемой соли ингибируют заболевание сосудов трансплантата и наиболее пригодны для предупреждения или лечения хронического отторжения трансплантированного органа.

Кроме того, также было установлено, что соединения формулы I в свободной форме или в форме фармацевтически приемлемой соли подавляют отторжение ксенотрансплантата.

В соответствии с конкретными данными, полученными в результате проведенных при создании настоящего изобретения исследований, в изобретении предлагаются: 1.1. Способ предупреждения или лечения симптомов хронического отторжения, например, с целью избежать, уменьшить или ограничить хроническое отторжение у реципиента, которому трансплантирован алло- или ксенотрансплантат органа или ткани, например такой трансплантат, как сердце, легкое, комбинация сердце-легкое, печень, почка или поджелудочная железа, включающий введение указанному реципиенту терапевтически эффективного количества соединения формулы I в свободной форме или в форме фармацевтически приемлемой соли, 1.2. Способ предупреждения или лечения сосудистых заболеваний трансплантата, например вазопатии трансплантата, артериосклероза или атеросклероза трансплантата, у реципиента, которому трансплантирован алло- или ксенотрансплантат органа или ткани, например, такой трансплантат, как сердце, легкое, комбинация сердце-легкое, печень, почка или поджелудочная железа, включающий введение указанному реципиенту терапевтически эффективного количества соединения формулы I в свободной форме или в форме фармацевтически приемлемой соли.

Другими особыми или альтернативными объектами настоящего изобретения также являются: 2. Способ предупреждения или контроля острого отторжения ксенотрансплантата у реципиента, например, у пациента, которому пересажен ксенотрансплантат сердца, легкого, комбинация сердце-легкое, почки, печени, костного мозга, поджелудочной железы, кишки, кожи или роговицы, включающий введение указанному реципиенту терапевтически эффективного количества соединения формулы I в свободной форме или в форме фармацевтически приемлемой соли.

В качестве альтернативы к вышесказанному в настоящем изобретении также предлагается: 3. Соединение формулы I в свободной форме или в форме фармацевтически приемлемой соли, предназначенное для применения согласно любому способу, указанному выше в пунктах 1 или 2, или
4. Соединение формулы I в свободной форме или в форме фармацевтически приемлемой соли, предназначенное для приготовления фармацевтической композиции для применения согласно любому способу, указанному выше в пунктах 1 или 2, или
5. Фармацевтическая композиция, предназначенная для применения согласно любому способу, указанному выше в пунктах 1 или 2, включающая соединение формулы I в свободной форме или в форме фармацевтически приемлемой соли вместе с одним или с несколькими фармацевтически приемлемыми разбавителями или носителями.

Применимость соединений формулы I в свободной форме или в форме фармацевтически приемлемой соли при хроническом отторжении, а также их применимость для лечения заболеваний и состояний, указанных выше в настоящем описании, может быть продемонстрирована в опытах на животных, например, согласно методам, приведенным ниже в настоящем описании, а также в клинических испытаниях, в которых, например, трансплантированные орган или ткань могут быть подвергнуты регулярному контролю посредством биопсии, а в случае трансплантата сердца - дополнительно ультразвуковому сканированию.

А. Предупреждение сосудистого заболевания трансплантата
Экспериментальные животные
Используют инбредные линии крыс DA (RT1³, доноры) и Lewis (RT1¹, реципиенты аллотрансплантатов) весом 200-350 г. До и после операции животные имеют неограниченный доступ к корму и воде.

Трансплантация сонной артерии
Крыс анестезируют с помощью изофлуорана (фирма Abbott) (4-5%-ный раствор для вводного наркоза, 1,5-2%-ный раствор для поддержания) и после вводного наркоза инъецируют подкожно 300 мкг атропинсульфата. Высвобождают левую сонную артерию. Артерию зажимают проксимально и дистально и удаляют сегмент длиной примерно 7-10 мм. Удаленный участок заменяют аллотрансплантатом, который также ранее подвергают 45-минутной ишемии с помощью холода. В качестве шовного материала используют этилон 10/0. Окончательные швы на кожу накладывают из шовного материала 4/0. При необходимости затем подкожно в спину имплантируют осмотический мининасос типа Alzet (Alza Corp., Palo Alto, Калифорния) (в альтернативном варианте животных обрабатывают оральным путем). Крыс подвергают одному из следующих режимов обработки: одно соединение формулы I в дозах 0,1-10 мг/кг или в сочетании с циклоспорином А в дозе 0,03, 0,3 или 1 мг•кг^-1•день^-1 вводят в течение 8 недель либо с помощью имплантированных подкожно осмотических мининасосов типа Alzet, либо в альтернативном варианте путем орального введения. Через 8 недель крыс умерщвляют и сонные артерии подвергают перфузии в течение 1 мин 0,1М забуференным фосфатом физиологическим раствором (ЗФР, рН 7,4), а затем в течение 15 мин 2,5%-ным глутаровым альдегидом в фосфатном буфере (рН 7,4). После этого сонные артерии иссекают и окрашивают в растворе Гимза для гистологического исследования.

Морфометрический анализ предусматривает измерение толщины медии (средней оболочки кровеносных сосудов) и интимы (внутренней оболочки кровеносных сосудов). Количественный анализ морфологических изменений предусматривает оценку по 0-3-балльной шкале адвентициальной инфильтрации одноядерных клеток и некроза (дегенерация вакуолей, гипертрофия клеток), количества ядер клеток гладкой мускулатуры (КГМ) в медии (количества ядер 0-10, <100, >100 и >>100 соответствуют баллам 0, 1, 2 и 3), некроза КГМ (дегенерация вакуолей и гипертрофия КГМ) и инфильтрации одноядерных клеток в интиму (13).

В обоих экспериментах соединения формулы I, в частности соединение А в виде гидрохлорида, в значительной степени ингибирует инфильтрацию трансплантата и образование новой интимы.

Б. Ксенотрансплантация сердца in vivo (от хомячка к крысе)
Комбинация "ксенотрансплантат от хомячка к крысе" представляет собой так называемую трудную конкордантную комбинацию. Крысы не имеют природного антитела против хомячка в достаточных количествах для того, чтобы вызвать немедленное гиперактивное отторжение, что характерно для конкордантных комбинаций; однако отторжение у реципиентов, не подвергнутых лечению, происходит через 3-4 дня под действием антител в сочетании с комплементом. Это видно при гистологическом исследовании по деструкции кровеносных сосудов, экссудации и экстравазации эритроцитов и притоку многоядерных гранулоцитов; часто наблюдаются симптомы кровоизлияния и тромбоза. В случае когда это отторжение было преодолено эффективным ингибированием синтеза антител или инактивацией комплемента, в последующем может проявиться отторжение на клеточном уровне. Это видно при гистологическом исследовании по притоку одноядерных клеток, включая лимфоциты, лимфобластоидные клетки и макрофаги, и по деструкции паренхимы миоцитов. Для ингибирования клеточного отторжения необходимо более сильное подавление иммунного ответа, чем в случае аллотрансплантата. У крыс с врожденным отсутствием тимуса (rnu/rnu) отсутствует компетент (тимусзависимый) клеточной иммунной системы, и они обычно не способны отторгать аллотрансплантат. Такие животные отторгают ксенотрансплантат хомячка через 3-4 дня аналогично тому, как это происходит у крыс, имеющих тимус, что свидетельствует о том, что синтез антител против хомячка (по крайней мере частично) происходит у крыс в результате ответа независящих от тимуса В-клеток. Такие реципиенты пригодны для пересадки ксентрансплантатов хомячка с целью оценки отторжения, опосредованного независящими от тимуса антителами.

Сердце сирийского хомячка гетеротопикально трансплантируют в брюшную область самцов крыс линии Lewis (RT1¹) с помощью анастомозов между аортой донора и реципиента и правой легочной артерией донора и нижней полой веной реципиента. Трансплантат обследуют каждый день путем пальпации брюшной области. Заключение об отторжении делают в случае прекращения ударов сердца. Животных еженедельно взвешивают. Серии данных экспериментов прекращают к 28 дню. Животных подвергают аутопсии; помимо трансплантата взвешивают и производят гистологическое исследование тимуса, селезенки, печени, семенных пузырьков и яичка. Берут анализ крови и подвергают обработке с получением сыворотки с целью определения цитолитической активности эритроцитарных антител против хомячка и гемолитической активности комплемента.

Соединения растворяют в воде и вводят каждый день орально в дозе 2 мл/кг веса тела. Введение 5-30 мг/кг/день соединения формулы I, например соединения А в форме гидрохлорида, приводит к удлинению жизни трансплантата как у реципиентов без тимуса, так и у крыс, имеющих тимус.

Суточные дозы, необходимые для практического осуществления способа по настоящему изобретению, могут существенно варьироваться в зависимости, например, от конкретно используемого соединения формулы I, хозяина, метода введения, серьезности состояния, подлежащего лечению, и необязательно сопутствующего использования лекарства с иммуносупрессивной активностью, например, CysA. Предпочтительный диапазон суточных доз составляет приблизительно 0,03-2,5 мг/кг/день, в частности 0,1-2,5 мг/кг/день, например 0,5-2,5 мг/кг/день в виде однократной дозы или разделенных доз. Пригодные суточные дозы для пациентов составляют, например от 1 до 100 мг перорально. Пригодные стандартные дозируемые формы для орального введения включают приблизительно 1-50 мг, как правило, 5-30 мг действующего вещества, например соединения А, например, в форме гидрохлорида, вместе с одним или с несколькими фармацевтически приемлемыми разбавителями или носителями. В альтернативном варианте соединение формулы I в свободной форме или в форме фармацевтически приемлемой соли также может вводиться дважды или трижды в неделю, например, в дозе, указанной выше.

Соединения формулы I могут вводиться любым обычным методом, в частности энтерально, например орально, например в форме растворов для питья, таблеток или капсул, или парентерально, например в форме растворов либо суспензий для инъекций. Фармацевтические композиции, включающие соединения формулы I, могут быть изготовлены по общепринятой технологии, например, как это описано в ЕР 627406 А1.

Соединения формулы I могут вводиться в качестве единственного действующего вещества или вместе с другими лекарствами, применяемыми в иммуномодулирующих режимах, или с другими противовоспалительными агентами. Например, соединения формулы I могут применяться в сочетании с циклоспоринами, рапамицинами или аскомицинами либо их аналогами, обладающими иммуносупрессивной активностью, например, с циклоспорином А, циклоспорином G, FK-506, рапамицином, 40-О-(2-гидрокси)этилрапамицином и т.д., с кортикостероидами, циклофосфамидом, азатиопреном, метотрексатом, брехвинаром, лефлуномидом, мизорибином, микофенольной кислотой, микофенолятом мофетила, 15-дезоксиспергуалином, с иммуносупрессивными моноклональными антителами, например моноклональными антителами к рецепторам лейкоцитов, например, к МНС, CD2, CD3, CD4, CD7, CD25, CD28, В7, CD40, CD45 или CD58 или к их лигандам, или совместно с другими иммуномодулирующими соединениями, например, CTLA4-Ig.

Когда соединения формулы I используют в сочетании с другой иммуносупрессивной/иммуномодулирующей терапией, например, для предупреждения или лечения хронического отторжения, как указано выше в настоящем описании, дозы применяемого совместно иммунодепрессанта или иммуномолулирующего соединения, как очевидно, должны варьироваться в зависимости от типа совместно применяемого лекарства, например, от того, представляет он собой стероид или циклоспорин, от конкретного используемого лекарства, от состояния, подлежащего лечению, и т.д. Согласно вышеизложенному в настоящем изобретении также предлагается:
6. Способ, как определено выше, включающий совместное введение, например, одновременно или последовательно, терапевтически эффективного количества соединения формулы I и второго лекарственного средства, которое представляет собой иммунодепрессант или иммуномодулирующее лекарство, например, из указанного выше ряда,
7. Набор или упаковка для использования в любом способе, указанном выше в пунктах 1 или 2, включающие соединение формулы I в свободной форме или в форме фармацевтически приемлемой соли и по крайней мере одну фармацевтическую композицию, включающую иммунодепрессант или иммуномодулирующее лекарство; при этом указанные набор или упаковка могут содержать инструкции по их применению.

Пример препаративной формы: капсулы с мягким покрытием, состав, мг:
Соединение формулы I, например соединение А - 30
Полиэтиленгликоль 300 - 300
Полисорбат 80 - 20
Всего - 350
Соединения формулы I в свободной форме или в форме фармацевтически приемлемой соли хорошо переносятся в дозах, необходимых для применения согласно изобретению. Например, значение ЛД₅₀ в остром опыте составляет >10 мг/кг при пероральном введении крысам и обезьянам.

Формула изобретения

1. Применение соединения формулы I

где R₁ обозначает необязательно замещенную прямую или разветвленную углеродную цепь с 12-22 атомами углерода, которая может быть прервана необязательно замещенным фениленом;

R₂, R₃, R₄ и R₅ каждый независимо друг от друга обозначает H или низший алкил,

в свободной форме или в форме фармацевтически приемлемой соли для приготовления фармацевтической композиции, предназначенной для предупреждения или лечения сосудистых заболеваний у реципиента, имеющего алло- или ксенотрансплантат органа или ткани.

2. Применение соединения формулы I

где R₁ обозначает необязательно замещенную прямую или разветвленную углеродную цепь с 12-22 атомами углерода, которая может быть прервана необязательно замещенным фениленом;

R₂, R₃, R₄ и R₅ каждый независимо друг от друга обозначает Н или низший алкил,

в свободной форме или в форме фармацевтически приемлемой соли для приготовления фармацевтической композиции, предназначенной для предупреждения или контроля острого отторжения ксенотрансплантата у реципиента.

3. Применение по п.1 или 2, где соединение формулы I представляет собой 2-амино-2-[2-(4-октилфенил)этил]-1,3-пропандиол в свободной форме или в форме фармацевтически приемлемой соли.

4. Фармацевтическая композиция, предназначенная для предупреждения или лечения сосудистых заболеваний у реципента, имеющего алло- или ксенотрансплантат органа или ткани, или для предупреждения, или контроля острого отторжения ксенотрансплантата у реципиента, включающая соединение формулы I по п.1 в свободной форме или в форме фармацевтически приемлемой соли вместе с одним или более фармацевтически приемлемыми разбавителями или носителями.

5. Композиция по п.4, где соединение формулы I представляет собой 2-амино-2-[2-(октилфенил)этил]-1,3-пропандиол в свободной форме или в форме фармацевтически приемлемой соли.

6. Композиция по п.5 для использования в комбинации с циклоспорином А, рапамицином, 40-О-(2-гидроксиэтил)рапамицином, микофеноловой кислотой, мофетилмикофенолятом, 15-дезоксипергуалином, моноклональными антителами в отношении рецепторов лейкоцитов, выбранных из CD2, CD3, CD4, CD7, CD25, CD28, В7, CD40, CD45, или их лигандам, или CTLA4-Ig.

7. Терапевтическая композиция, включающая 2-амино-2-[2-(4-октилфенил)этил]-1,3-пропандиол, в свободной форме или в форме фармацевтически приемлемой соли и рапамицин, 40-О-(2-гидроксиэтил)рапамицин или CTLA4-Ig.