Полипептид с il-10 подобными свойствами (варианты), конъюгат полипептида, фармацевтическая композиция, способ модуляции иммунного ответа у млекопитающего

 

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано для получения полипептида с IL-10 подобными свойствами. Полипептид содержит не более 100 аминокислот и включает последовательность Thr-X₄-Lys-X₅-Arg-X₆, где Х₄ и Х₅ могут быть Met, Ile, Leu, Val и Х₆ может быть Asn, Asp, Gln, Glu. Полипептид обладает, по крайней мере, одним из следующих свойств: индуцирует подавление IL-8, индуцирует подавление IL-1β, индуцирует образование человеческими моноцитами белка, индуцирует хемотаксическую миграцию CD8⁺-T-лимфoцитoв, десенсибилизирует CD8⁺-T-клeтки, супрессирует хемотаксический ответ человеческих моноцитов, не подавляет экспрессию молекул МНС класса II на моноцитах, индуцирует образование IL-4, понижает образование α-TNF. Фармацевтическая композиция для модуляции иммунного ответа у млекопитающего содержит полипептид с IL-10 подобными свойствами. Изобретение позволяет разрабатывать средства для лечения заболеваний, патогенез которых связан с изменением функции медиаторов иммуноподавления. 11 с. и 29 з.п. ф-лы, 13 ил. , 4 табл.

Текст описания в факсимильном виде (см. графическую часть). Т

Формула изобретения

1. Полипептид с IL-10-подобными свойствами длиной самое большее в 100 аминокислотных остатков, который включает в себя следующую последовательность:

Thr-X₄-Lys-X₅-Arg-X₆ (SEQ ID №: 19),

где Х₄ и Х₅ независимо выбраны из группы, состоящей из Met, Ile, Leu и Vаl;

Х₆ выбран из группы, состоящей из Asn, Asp, Gln и Glu,

и который обладает по меньшей мере одним из нижеследующих свойств: а) индуцирует ингибирование спонтанной продукции IL-8 моноцитами человека, б) индуцирует ингибирование IL-1β-индуцируемой продукции IL-8 мононуклеарными клетками периферической крови человека (РВМС), в) индуцирует продукцию белка-антагониста рецептора интерлейкина-1 (IRAP) моноцитами человека, г) индуцирует in vitro хемотаксическую миграцию CD8⁺-T-лимфoцитoв человека, д) десенсибилизирует CD8⁺-T-клeтки человека, приводя к ареактивности в отношении rhIL-10, е) вызывает супрессию хемотаксического ответа CD4⁺-T-лимфoцитoв человека на IL-8, ж) вызывает супрессию хемотаксического ответа моноцитов человека на MCAF/MCP-1, з) индуцирует продукцию IL-4 культивируемыми CD4⁺-T-клeткaми здоровых людей, и) снижает продукцию TNFα в реакции смешанных лейкоцитов человека.

2. Полипептид с IL-10-подобными свойствами по п.1, отличающийся тем, что включает в себя следующую последовательность:

X₃-Thr-X₄-Lys-X₅-Arg-X₆ (SEQ ID №: 20),

где Х₃, Х₄ и Х₅ независимо выбраны из группы, состоящей из Met, He, Leu и Val;

Х₆ выбран из группы, состоящей из Asn, Asp, Gln и Glu.

3. Полипептид с IL-10-подобными свойствами по п.1, отличающийся тем, что содержит следующую последовательность:

X₂-X₃-Thr-X₄-Lys-X₅-Arg-X₆ (SEQ ID №:21),

где Х₂ представляет собой Туr или Phe,

Х₃, Х₄ и Х₅ независимо выбраны из группы, состоящей из Met, Ile, Leu и Val; и

Х₆ выбран из группы, состоящей из Asn, Asp, Gin и Glu.

4. Полипептид с IL-10-подобными свойствами по п.1, отличающийся тем, что включает в себя следующую последовательность:

X₁-X₂-X₃-Thr-X₄-Lys-X₅-Arg-X₆ (SEQ ID №:22),

где X₁ представляет собой Ala или Gly;

Х₂ представляет собой Туr или Phe;

Х₃, Х₄ и Х₅ независимо выбраны из группы, состоящей из Met, He, Leu и Val;

Х₆ выбран из группы, состоящей из Asn, Asp, Gln и Glu.

5. Полипептид с IL-10-подобными свойствами по любому из пп.1-4, содержащий по меньшей мере 12 аминокислот.

6. Полипептид с IL-10-подобными свойствами по любому из пп.1-4, содержащий по меньшей мере 15 аминокислот.

7. Полипептид с IL-10-подобными свойствами по любому из пп.1-4, содержащий по меньшей мере 11 аминокислот.

8. Полипептид с IL-10-подобными свойствами по любому из пп.1-4, содержащий по меньшей мере 10 аминокислот.

9. Полипептид с IL-10-подобными свойствами, имеющий формулу

X₁-X₂-X₃-Thr-X₄-Lys-X₅-Arg-X₆ (SEQ ID №: 22),

где X₁ представляет собой Ala или Gly;

Х₂ представляет собой Туr или Phe;

Х₃, Х₄ и Х₅ независимо выбраны из группы, состоящей из Met, Ile, Leu и Val;

Х₆ выбран из группы, состоящей из Asn, Asp, Gln и Glu.

10. Полипептид по любому из пп.4-9, отличающийся тем, что X₁ представляет собой Ala.

11. Полипептид с IL-10-подобными свойствами, имеющий формулу

X₂-X₃-Thr-X₄-Lys-X₅-Arg-X₆ (SEQ ID №:21),

где Х₂ представляет собой Туr или Phe;

Х₃, Х₄ и Х₅ независимо выбраны из группы, состоящей из Met, Ile, Leu и Val;

Х₆ выбран из группы, состоящей из Asn, Asp, Gln и Glu.

12. Полипептид по любому из пп.4-9 или 11, отличающийся тем, что X₁ представляет собой Gly.

13. Полипептид с IL-10-подобными свойствами, имеющий формулу

X₃-Thr-X₄-Lys-X₅-Arg-X₆ (SEQ ID №: 20),

где Х₃, Х₄ и Х₅ независимо выбраны из группы, состоящей из Met, Ile, Leu и Val;

Х₆ выбран из группы, состоящей из Asn, Asp, Gln и Glu.

14. Полипептид с IL-10-подобными свойствами, имеющий формулу

Thr-X₄-Lys-X₅-Arg-X₆ (SEQ ID №: 19),

где Х₄ и Х₅ независимо выбраны из группы, состоящей из Met, Ile, Leu и Val;

Х₆ выбран из группы, состоящей из Asn, Asp, Gln и Glu.

15. Полипептид по любому из пп.3-9 или 10-12, отличающийся тем, что Х₂ представляет собой Туr.

16. Полипептид по любому из пп.3-9 или 10-12, отличающийся тем, что X₂ представляет собой Phe.

17. Полипептид по любому из пп.2-14, 15 или 16, отличающийся тем, что Х₃ представляет собой Met.

18. Полипептид по любому из пп.2-14, 15 или 16, отличающийся тем, что Х₃ представляет собой Ilе.

19. Полипептид по любому из пп.2-14, 15 или 16, отличающийся тем, что Х₃ представляет собой Leu.

20. Полипептид по любому из пп.2-14, 15 или 16, отличающийся тем, что Х₃ представляет собой Val.

21. Полипептид по любому из пп.1-20, отличающийся тем, чти Х₄ представляет собой Met.

22. Полипептид по любому из пп.1-20, отличающийся тем, что Х₄ представляет собой Ilе.

23. Полипептид по любому из пп.1-20, отличающийся тем, что Х₄ представляет собой Leu.

24. Полипептид по любому из пп.1-20, отличающийся тем, что Х₄ представляет собой Val.

25. Полипептид по любому из пп.1-24, отличающийся тем, что Х₅ представляет собой Met.

26. Полипептид по любому из пп.1-24, отличающийся тем, что Х₅ представляет собой Ilе.

27. Полипептид по любому из пп.1-24, отличающийся тем, что Х₅ представляет собой Leu.

28. Полипептид по любому из пп.1-24, отличающийся тем, что Х₅ представляет собой Val.

29. Полипептид по любому из пп.1-28, отличающийся тем, что Х₆ представляет собой Asp.

30. Полипептид по любому из пп.1-28, отличающийся тем, что Х₆ представляет собой Gln.

31. Полипептид по любому из пп.1-28, отличающийся тем, что Х₆ представляет собой Glu.

32. Полипептид по любому из пп.1-28, отличающийся тем, что Х₆ представляет собой Asn.

33. Полипептид с IL-10-подобными свойствами, имеющий аминокислотную последовательность Ala-Tyr-Met-Thr-Met-Lys-Ile-Arg-Asn (SEQ ID №:1).

34. Полипептид с IL-10-подобными свойствами, выбранный из группы, состоящей из

Ala-Tyr-Met-Thr-Ilе-Lys-Met-Arg-Asn (SEQ ID №:2),

Ala-Phe-Met-Thr-Leu-Lys-Leu-Arg-Asn (SEQ ID №:3),

Ala-Tyr-Met-Thr-Met-Lys-Val-Arg-Glu (SEQ ID №:4),

Glu-Tyr-Met-Thr-Met-Lys-Ile-Arg-Asp (SEQ ID №:5),

Ala-Phe-Met-Thr-Met-Lys-Ile-Arg-Asp (SEQ ID №:6),

Ala-Tyr-Ile-Thr-Met-Lys-Ile-Arg-Asp (SEQ ID №:7),

Ala-Tyr-Leu-Thr-Met-Lys-Ile-Arg-Asp (SEQ ID №:8),

Ala-Tyr-Val-Thr-Met-Lys-Ile-Arg-Asp (SEQ ID №:9),

Ala-Tyr-Met-Thr-Ile-Lys-Ile-Arg-Asp (SEQ ID №:10),

Ala-Tyr-Met-Thr-Leu-Lys-Ile-Arg-Asp (SEQ ID №:11),

Ala-Tyr-Met-Thr-Val-Lys-Ile-Arg-Asp (SEQ ID №:12),

Ala-Tyr-Met-Thr-Met-Lys-Ile-Arg-Asp (SEQ ID №:13),

Ala-Tyr-Met-Thr-Met-Lys-Met-Arg-Asp (SEQ ID №:14),

Ala-Tyr-Met-Thr-Met-Lys-Val-Arg-Asp (SEQ ID №:15),

Ala-Tyr-Met-Thr-Met-Lys-Ile-Arg-Gln (SEQ ID №:16) и

Ala-Tyr-Met-Thr-Met-Lys-Ile-Arg-Glu (SEQ ID №:17).

35. Конъюгат полипептида с IL-10-подобными свойствами, содержащий полипептид по п.1, коньюгированный с полиэтиленгликолем или сахарным остатком.

36. Полипептид с IL-10-подобными свойствами по любому из пп.1, 9, 11, 13, 14 и 33 или коньюгат полипептида по п.35, отличающийся тем, что обладает по меньшей мере одним из свойств (а)-(и), указанных в п.1.

37. Полипептид или конъюгат по любому из пп.1-36 в существенно чистом виде.

38. Фармацевтическая композиция для модуляции иммунного ответа у млекопитающего, содержащая полипептид с IL-10-подобными свойствами по любому из пп.1, 9, 11, 13, 14 и 33 или конъюгат полипептида с IL-10-подобными свойствами по п.35 в эффективном количестве.

39. Полипептид с IL-10-подобными свойствами, представляющий собой полипептид с IL-10-подобными свойствами по любому из пп.1, 9, 11, 13, 14 и 33 или конъюгат полипептида с IL-10-подобными свойствами по п.35, для модуляции иммунного ответа у млекопитающего в процессе лечения или профилактики заболевания, выбранного из группы, состоящей из преждевременных родов, вызванных инфекцией или другими состояниями, ревматоидного артрита, артрита Лима, подагры, септического синдрома, гипертермии, неспецифического язвенного колита или энтероколита, остеопороза, цитомегаловируса, заболевания периодонта, гломерулонефрита, хронического неинфекционного воспаления легких (например, саркоидоз и легкие курильщика), образования гранулемы, фиброза печени, фиброза легких, отторжения трансплантата, заболевания “трансплантат против хозяина”, хронического миелоидного лейкоза, острого миелоидного лейкоза, других неопластических заболеваний, бронхиальной астмы, сахарного диабета типа 1 (инсулинзависимого), артериосклероза/атеросклероза, псориаза, хронического В-лимфоцитарного лейкоза, общей вариабельной иммунной недостаточности, побочных действий других модификаторов биологического ответа, диссеминированной внутрисосудистой коагуляции, системного склероза, энцефаломиелита, воспаления легких, синдрома-гипер-IgE-глобулинемии, энтероколитов, ракового метастазирования и роста, адаптивной иммунной терапии, приобретенного респираторного дистресс-синдрома, сепсиса, реперфузионного синдрома, постхирургического воспаления, трансплантации органов и алопеции.

40. Способ модуляции иммунного ответа у млекопитающего в процессе лечения и/или профилактики заболевания, выбранного из группы, состоящей из преждевременных родов, вызванных инфекцией или другими состояниями, ревматоидного артрита, артрита Лима, подагры, септического синдрома, гипертермии, неспецифического язвенного колита или энтероколита, остеопороза, цитомегаловируса, заболевания периодонта, гломерулонефрита, хронического неинфекционного воспаления легких (например, саркоидоз и легкие курильщика), образования гранулемы, фиброза печени, фиброза легких, отторжения трансплантата, заболевания “трансплантат против хозяина”, хронического миелоидного лейкоза, острого миелоидного лейкоза, других неопластических заболеваний, бронхиальной астмы, сахарного диабета типа 1 (инсулинзависимого), артериосклероза/атеросклероза, псориаза, хронического В-лимфоцитарного лейкоза, общей вариабельной иммунной недостаточности, побочных действий других модификаторов биологического ответа, диссеминированной внутрисосудистой коагуляции, системного склероза, энцефаломиелита, воспаления легких, синдрома гипер-IgЕ-глобулинемии, энтероколитов, ракового метастазирования и роста, адаптивной иммунной терапии, приобретенного респираторного дистресс-синдрома, сепсиса, реперфузионного синдрома, постхирургического воспаления, трансплантации органов и алопеции, включающий в себя введение млекопитающему терапевтически или профилактически эффективного количества полипептида с IL-10-подобными свойствами по пп.1, 9, 11, 13, 14 и 33 или конъюгата полипептида с IL-10-подобными свойствами по п.35.

РИСУНКИ

Рисунок 1, Рисунок 2, Рисунок 3, Рисунок 4, Рисунок 5, Рисунок 6, Рисунок 7, Рисунок 8, Рисунок 9, Рисунок 10, Рисунок 11, Рисунок 12, Рисунок 13, Рисунок 14, Рисунок 15, Рисунок 16, Рисунок 17, Рисунок 18, Рисунок 19, Рисунок 20, Рисунок 21, Рисунок 22, Рисунок 23, Рисунок 24, Рисунок 25, Рисунок 26, Рисунок 27, Рисунок 28, Рисунок 29, Рисунок 30, Рисунок 31, Рисунок 32, Рисунок 33, Рисунок 34, Рисунок 35, Рисунок 36, Рисунок 37, Рисунок 38, Рисунок 39, Рисунок 40, Рисунок 41, Рисунок 42, Рисунок 43, Рисунок 44, Рисунок 45, Рисунок 46, Рисунок 47, Рисунок 48, Рисунок 49, Рисунок 50, Рисунок 51, Рисунок 52, Рисунок 53, Рисунок 54, Рисунок 55, Рисунок 56, Рисунок 57, Рисунок 58, Рисунок 59, Рисунок 60, Рисунок 61, Рисунок 62, Рисунок 63, Рисунок 64, Рисунок 65, Рисунок 66, Рисунок 67, Рисунок 68, Рисунок 69, Рисунок 70, Рисунок 71, Рисунок 72, Рисунок 73, Рисунок 74, Рисунок 75, Рисунок 76, Рисунок 77, Рисунок 78, Рисунок 79, Рисунок 80, Рисунок 81, Рисунок 82, Рисунок 83, Рисунок 84, Рисунок 85, Рисунок 86, Рисунок 87, Рисунок 88, Рисунок 89, Рисунок 90, Рисунок 91, Рисунок 92, Рисунок 93, Рисунок 94, Рисунок 95, Рисунок 96, Рисунок 97, Рисунок 98, Рисунок 99, Рисунок 100, Рисунок 101, Рисунок 102, Рисунок 103, Рисунок 104, Рисунок 105, Рисунок 106