Полиакриламидная капсула, содержащая антигенный материал, способ формирования иммунного ответа и способ иммунотерапии и иммунопрофилактики метастазирования раковых заболеваний

 

Изобретение относится к области медицины и касается полиакриламидной капсулы, содержащей антигенный материал, способа формирования иммунного ответа и способа иммунотерапии и иммунопрофилактики метастазирования раковых заболеваний. Сущность изобретения включает полиакриламидную капсулу, содержащую антигенный материал и образованную в условиях in vivo, представляющую собой полиакриламидный гель предпочтительно с размерами ячеек 0,4-0,8 мкм, окруженный и сращенный с оболочкой из соединительной ткани реципиента. Антигенный материал вносится в полиакриламидный гель после формирования оболочки из соединительной ткани. Предлагаемая капсула может быть использована для формирования длительного иммунного ответа, в том числе на опухолевые антигены. Преимущество изобретения заключается в сверхдлительной экспозиции антигенного материала в условиях in vivo. 3 с. и 16 з.п. ф-лы, 6 табл., 3 ил.

Изобретение относится к медицине, фармакологии, медицинской инженерии, иммунологии и иммуноонкологии, а именно к средствам и способам возбуждения длительного, предпочтительно клеточно-медиируемого, иммунитета, в частности на опухолевые антигены. В особенности изобретение относится к иммунотерапии и иммунопрофилактики метастазирования раковых заболеваний.

Методы молекулярной биологии позволяют получить практически любой антиген с достаточной простотой и высокой степени очистки, но в свободном виде они, как правило, быстро выводятся из организма и не дают сколько-нибудь значительного иммунного ответа. Принято считать, что для формирования иммунного ответа антиген должен быть поглощен антигенпредставляющими клетками (макрофагами или дендритными клетками), которые разрушают антиген и выставляют его антигенные фрагменты Т клеткам.

Таким образом, для формирования иммунного ответа антиген должен быть стабилизирован или защищен от деградации, пока он не будет распознан и эндоцитирован антигенпредставляющими клетками, а для формирования устойчивого иммунитета, как правило, необходимо, чтобы антиген был представлен иммунной системе более чем длительное время. Реализация этих подходов включает полимерные и липосомальные системы инкапсулирования антигенов.

Антигены могут быть инкапсулированы в полимерные микро- и наночастицы, микросферы и микрокапсулы, липосомы и фосфолипидные везикулы, полимерные пленки и гели, полимеры могут быть использованы в качестве адъювантов (пат. США № 6368631, 6312732, 6042820, 5811088, 5529777, 5312620, 5246707, 4912032, WO 02/053184, 94/15636, 88/06038 и др.) Общим недостатком для большинства таких систем следует признать недостаточную по времени экспозицию антигенного материала, ввиду чего требуются повторные вакцинации.

В последнее время для вакцинации начали использовать приемы и инструментарий трансплантологии, которые позволяют продлить время экспозиции антигенов до нескольких месяцев. Для этого используют капсулы из полимерных материалов, предпочтительно из коллагена, как материала наиболее подходящего и привычного для большинства трансплантируемых клеток (пат. США №4485096).

В патентах США №5906817 (патенты-аналоги ЕР 0702723, РСТ 94/24298), 5965125 (патенты-аналоги ЕР 0917428, РСТ 97/15195), 6419920 (патент-аналог РСТ 01/24842) описаны “гибридные” коллагеновые матрицы, которые содержат предпочтительно трансформированные клетки, которые в процессе длительного культивирования способны экспрессировать протеиновые, в частности противоопухолевые, антигены. Так в патенте США № 5906817 описаны “гибридные” коллагеновые матрицы, в которые включены политетрафторэтиленовые фибриллы. В патентах США № 5965125 и 6419920 описаны “гибридные” коллагеновые матрицы, которые сформированны с добавлением полимерных микрочастиц, например из полиакриламидного геля.

Все матрицы могут содержать вещества, способствующие лучшему их функционированию, например вещества, поддерживающие существование клеток (цитокины, ростовые факторы и др.), Полезные вещества секретируются клетками во внешнюю среду. В таких матрицах вырабатывается почти в два раза больше полипептидов и протеинов, чем просто в коллагеновой матрице. С помощью таких “гибридных” матриц клетки могут экспрессировать антигены в течение более шести месяцев.

К недостаткам таких трансплантационных капсул следует отнести то, что они формируются in vitro в готовое изделие и, таким образом, усложнено их введение пациенту.

К существенным недостаткам следует отнести то, что трансформированные клетки способны экспрессировать один, в лучшем случае несколько антигенов. В случае иммунотерапии раковых клеток этот недостаток может оказаться существенным, так как раковые клетки в процессе химиотерапии и иммунотерапии могут терять многие свои антигенные детерминанты и, таким образом, уходить от защитной иммунной атаки.

Этих недостатков лишено изобретение, в котором для иммунотерапии раковых заболеваний предлагается капсула из полиакриламидного геля, образованная в условиях in vivo и представляющая собой полиакриламидный гель, (инъецируемый под кожу) окруженный и сращенный с оболочкой из соединительной ткани реципиента (образующейся самопроизвольно). После образования такой капсулы в нее инъецируется культура опухолевых клеток, которые в процессе длительного культивирования образуют “нео-орган” или “нео-ткань”, причем по гистологическим исследованиям опухолевые клетки там частично теряют пролиферативные свойства (заявка РСТ № 01/41809 или ЕР №1151756). В основе иммунизации лежит механизм трансплантационного иммунитета на чужеродный орган или ткань, когда в качестве антигенных детерминант используется целая гамма антигенов раковой клетки. К недостаткам этой конструкции, как, впрочем, и упомянутых выше других трансплантационных капсул, следует отнести строгие требования к структурным свойствам этих полимерных “гибридных” матриц, вытекающих из необходимости длительного культивирования клеток. Эти свойства матриц должны быть таковы, чтобы в течение всего времени культивирования защищать эти клетки от иммунных атак со стороны клеток иммунной системы реципиента и быть, с другой стороны, проницаемы для экспрессирующихся продуктов и веществ, важных для жизнедеятельности клеток.

На фиг.1 представлен образец геля через 3 месяца после его введения животным. На препарате видна соединительнотканная капсула, фиброзные тяжи, разделяющие гель на участки. В геле отмечено небольшая нейтрофильная реакция и наличие единичных макрофагов.

На фиг.2 представлен образец гелевой капсулы с клетками меланомы больной Р. На препарате много пигмента, дистрофически измененных клеток плазмоцитарного типа и макрофагов, заполненных меланином.

На фиг.3 представлен образец гелевой капсулой с клетками перевивной культуры меланомы человека SK.MEL. - 28, на препарате отмечается лейкоцитарная инфильтрация, очаги некроза, присутствуют макрофаги, заполненные меланином.

Настоящее изобретение направлено на создание такой трансплантационной капсулы, содержащей антигенный материал, которая бы обладала преимуществами известных “гибридных” капсул, прежде всего возможностью сверхдлительной экспозиции антигенного материала, и была бы пригодной для большинства известных на настоящий момент антигенных материалов, таких как клетки, части или дезинтеграты клеток, конъюгаты органических и неорганических веществ с полимерами, белки, полипептиды, полисахариды, нуклеиновые кислоты, гликопротеины и др. Важно, что при этом антигенный материал, прежде всего клетки, не изменяют своих свойств, как это происходит в прототипе, что может быть важно при вакцинации, например при иммунопрофилактике метастазирования. Кроме того, для формирования иммунного ответа не используется механизм трасплантационного иммунитета, так как сама полиакриламидная капсула не вызывает иммунного ответа, а с капсулы с антигенным материалом снимается строгие требования, предъявляемые к трансплантационным капсулам, в которых происходит длительное культивирование клеток.

Неожиданно оказалось, что цель достигается, если в полиакриламидной капсуле, образованной в условиях in vivo и представляющей собой полиакриламидный гель, окруженный и сращенный с оболочкой из эндогенной соединительной ткани реципиента, использовать такой гель, размер ячеек которого не препятствует диффузии антигенпредставляющих клеток, прежде всего макрофагов, внутрь этой трансплантационной капсулы.

В качестве такого геля могут быть использованы известные полиакриламидные гели такого же типа, которые используют в косметологии и пластике мягких тканей, например описанные в патентах: ЕР 0742022, GB 2114578, GB 1320233, RU 2127128, 2152800 и др.

Такие гели также должны быть биосовместимыми не вызывать иммунных, в том числе аллергических реакций, не давать усадки после имплантации, должны прорастать соединительной тканью реципиента и др. Однако назначение этих гелей существенно отлично от предлагаемого, ввиду чего для известных гелей не предусмотрено то свойство, которое заявлено в данном изобретении.

Кроме того, заявителем было выявлено, что необходимый эффект достигается тогда, когда средний размер ячеек геля составляет предпочтительно 0,4-0,8 микрона (мкм). Такой средний размер ячеек не только обеспечивает необходимую проницаемость для сложной системы антигенного материала и клеток иммунной системы в самом геле, но обеспечивает формирование оболочки из эндогенной соединительной ткани реципиента с необходимыми для этой цели свойствами (толщина, плотность, проницаемость).

Таким образом, сверхдлительная экспозиция в предлагаемой капсуле антигенного материала, представляющего из себя клетки, части или дезинтеграты клеток, органические или неорганические молекулы, конъюгированные с полимерным носителем, белки, полипептиды, полисахариды, нуклеиновые кислоты, гликопротеины и др., достигается за счет структурных и реологических свойств самой капсулы в целом, особенностями ее формирования, а также способом введения антигенного материала. Только незначительная часть антигенного материала высвобождается во внешнюю среду, при этом антигенпредставляющие клетки идентифицируют антигены и начинают диффундировать внутрь капсулы. Такая направленная диффузия может замедлять или препятствовать свободной диффузии антигенного материала в окружающую среду и, как было установлено заявителем, ведет к тому, что взаимодействие антигенпредставляющих клеток с антигенным материалом происходит преимущественно внутри полиакриламидной капсулы, так что она используется как депо для антигенпредставляющих клеток с уже эндоцитированными антигенами (смотри гистологические данные примеров 1 и 2 и соответствующие графические изображения). В таких условиях длительное культивирование клеток исключено, они сохраняют свои первоначальные свойства а с самой капсулы снимаются строгие структурные требования, необходимые для культивирования клеток.

Таким образом, аспектом изобретения является новая полиакриламидная капсула, образованная в условиях in vivo и содержащая антигенный материал, представляющая собой полиакриламидный гель, окруженный и сращенный с оболочкой из соединительной ткани реципиента, размеры ячеек которого не препятствуют диффузии антигенпредставляющих клеток (прежде всего макрофагов) внутрь капсулы, и содержащая в качестве антигенного материала высокомолекулярные соединения (конъюгаты органических или неорганических соединений с полимером, белки, полипептиды, полисахариды, нуклеиновые кислоты, гликопротеины и др.), клетки, части клеток или их дезинтеграты, а также смеси указанных антигенных материалов.

Предпочтительно средний размер ячеек полиакриламидного геля лежит в пределах 0,4-0,8 мкм.

Другим аспектом изобретения является способ формирования иммунного ответа с помощью предлагаемой полиакриламидной капсулы, который преимущественно является клеточно-медиируемым иммунным ответом.

Другим важным аспектом изобретения является также способ иммунотерапии и иммунопрофилактики метастазирования, предпочтительно меланомы, рака почек, мочевого пузыря, который включает в качестве послеоперационного воздействия на больного вакцинацию соответствующим противоопухолевым антигенным материалом с помощью предлагаемой капсулы. В качестве антигенного материала предпочтительно капсула содержит ксеногенные или трансформированные раковые клетки, пул ксеногенного клеточного материала, дезинтеграты сингенных раковых клеток, что обеспечивает безопасность их использования и широкий спектр антигенных детерминант опухолевых клеток.

Клетки могут быть использованы из перевиваемой клеточной линии, полученной из одной или нескольких клеток раковой ткани, либо может быть использован пул клеточного материала, выделенного из ксеногенной опухолевой ткани.

В качестве антигенного материала капсула может содержать вирусы, бактериальные клетки, дезинтеграты вирусов и бактериальных клеток.

Изобретение иллюстрируется на модельных примерах ксеновакцинации опухолевыми клетками меланомы человека. В общем виде это осуществляют следующим образом. Мышам-самкам линии BDF₁ или C₅₇ Bl (вес 18-20 г) подкожно вводят 4% полиакриламидный гель (ПААГ) с размерами ячеек 0,4-0,8 мк в объеме 0,5 мл. Через 30-45 дней (период, когда вокруг геля уже сформирована соединительнотканная капсула) в ПААГ-капсулу трансплантируют суспензию ксеногенных опухолевых клеток - меланомы человека из первичных или перевивных культур. Первичные культуры клеток меланомы получают из операционного материала (опухолевая ткань человека) сочетанием механической и ферментативной обработки и помещают в полную ростовую среду (ПРС: RPMI-1640, 10% эмбриональной телячьей сыворотки (ЭТС), 10 мкг/мл гентамицина). Через 30-45 дней (период, в течение которого происходит “заселение” геля мыши макрофагами, дендритными клетками и лимфоцитами, встреча с опухолевыми клетками человека, представление опухолеспецифического антигена и т.д.) мышам опытных и контрольных групп прививают сингенную опухоль мышей - меланому В16. Контролем (в зависимости от задач эксперимента) служат: 1) интактные животные с меланомой В16; 2) животные с ПААГ и меланомой В 16; 3) животные с подкожным введением опухолевых клеток человека и меланомой В 16.

У животных всех групп оценивают сроки выхода опухолей В16, измеряют размеры опухолевых узлов в динамике эксперимента и рассчитывают величину торможения роста опухолей (ТРО) в опытных группах по сравнению с контролем (интактные мыши с меланомой В16) по формуле:

где V_конт - средний объем опухолей в контрольной группе животных;

V_оп - средний объем опухолей в опытной группе животных

Противоопухолевый эффект считают биологически значимым при величине ТРО ≥50%

Следующие примеры иллюстрируют осуществление изобретения, но не ограничивают его объем.

Пример 1. Противооухолевая эффективность ксеновакцинации на основе клеток меланомы человека, выделенных из операционного материала больной Р. 17 мышам-самкам линии BDF₁ вводят ПААГ подкожно справа в области грудной клетки в объеме 0,5 мл. Через 45 дней из операционной в лабораторию получают ткань меланомы (Б-ая Р., 67 лет, диагноз - меланома кожи стопы) в среде 199 с антибиотиками. На холоду образец измельчают и ставят на инкубацию (10 мин, 37°С) с ферментами: ДНК-азой (80 KU/мл), коллагеназой I (0,2%), проназой Е (0,25%). По истечении срока инкубации действие ферментов блокируют путем добавления 40% ЭТС в ростовой среде RPMI-1640, после чего суспензию опухолевых клеток пропускают через серию сит с уменьшающимся размером пор. Количество выделенных клеток меланомы из данного образца составляет 30 млн, жизнеспособность 80%. Опухолевые клетки (2,0·10⁶ клеток в 0,25 мл ПРС на мышь) трансплантируют в гелевую капсулу 11 из 17 мышам мышам. Через 45 дней этим 11 мышам, оставшимся 6-ти мышам с гелевой капсулой и 8 интактным животным прививают контрлатерально (относительно геля) меланому В16 в прививочной дозе 1,0·10⁶ кл/мышь. Пальпируемые первичные опухолевые узлы В16 у мышей начинают появляться с 7-го дня после прививки В16.

Динамику их выхода (табл. 1) и оценку величину ТРО (табл. 2) в группах животных осуществляют на 7-й, 9-й, 14-й, 17-й, 21-й, 24-й и 28-й дни эксперимента. В контрольных группах животных опухоли возникают у всех мышей к 14 дню эксперимента (100%), в то время как у животных опытной группы с заключенными в гелевую капсулу клетками меланомы Б-ной Р. - в 90% случаев. В этой группе мышей 100% выход опухоли отмечен на 28 сутки наблюдения. Величина параметра ТРО в опытной группе животных с 7 по 14 день наблюдения составляет в среднем 75%, в остальные сроки опыта снижается, оставаясь, тем не менее, биологически значимой (>50%) вплоть до 24 дня опыта. Сама гелевая капсула не влияет на рост В16 у животных.

Было проведено гистологическое исследование гелевой капсулы: через 3 месяца после введения ПААГ животным, фиг.1, и соответственно ПААГ капсулы с клетками первичной культуры меланомы Больной Р., фиг.2. На фигуре 1 обнаружена соединительнотканная капсула вокруг геля, фиброзные тяжи, разделяющие гель на участки, отмечена небольшая нейтрофильная реакция и наличие единичных макрофагов. В образце геля с клетками меланомы Больной Р. также обнаружены фиброзные тяжи, отмечается довольно выраженная лейкоцитарная инфильтрация, очаги некроза, многоядерные клетки, множество макрофагов с меланином.

Пример 2. Противоопухолевая эффективность ксеновакцинации на основе перевивной культуры опухолевых клеток.

Мышам-самкам линии BDF₁ (15 голов) подкожно вводят ПААГ в объеме 0,5 мл. После формирования соединительнотканной капсулы вокруг геля 10 животным из 15 в ПААГ трансплантируют клетки перевивной линии меланомы человека SK.MEL-28 (2,0·10⁶ клеток в 0,25 мл ПРС). Эти же клетки вводят подкожно и 10 интактным мышам. На заключительном этапе через 45 дней всем перечисленным выше животным и 10 контрольным мышам прививают меланому В16 (1,0·10⁶ кл/мышь). Таким образом, сформировано 4 группы животных: I гр. - мыши с меланомой В16 (n=10); II гр. - мыши с подкожным введением SK.MEL-28 и с В16 (n=10); III гр. - животные с гелевой капсулой и с В16 (n=5); IV гр. - мыши с клетками SK.MEL-28 в гелевой капсуле и с В16 (n=10). У контрольных животных (гр. I-III), используемая прививочная доза В16 приводит к формированию пальпируемых опухолевых узлов в 100% случаев к 10-му дню эксперимента, в то время как у животных опытной группы с заключенными в гелевую капсулу клетками SK.MEL-28 опухолевые образования пальпируются в эти сроки только у 70% мышей (табл.3). Остальные 30% опухолей появляются в течение следующих 2-х недель эксперимента. Величина ТРО (табл.4) у животных опытной группы превышает 75% с 7-го по 15-ый дни эксперимента и незначительно снижается в остальные сроки наблюдения, оставаясь на уровне 60% до 28 дня опыта. В II и III-ей контрольных группах мышей (гелевая капсула и В16; подкожное введение SK.MEL-28 и В 16;) биологически значимая величина этого параметра не получена.

В данном опыте на гистологическое исследование взят образец геля с клетками перевивной культуры меланомы человека SK.MEL-28 (фигура 3). В нем отмечается много пигмента, дистрофически измененных клеток плазмоцитарного типа, макрофагов, заполненных меланином, очаги некроза.

Пример 3. Формирование пролонгированного иммунного ответа.

Мышам-самкам линии BDF₁ (20 голов) подкожно вводят ПААГ в объеме 0,5 мл. После сформирования у животных соединительнотканной капсулы вокруг геля (на 45 сутки) в нее трансплантируют клетки перевивной линии меланомы человека SK.MEL-28 в концентрации 2,0·10⁶ клеток в 0,25 мл ПРС. Такому же количеству интактных мышей (20 голов) и в той же дозе клетки SK.MEL-28 вводят подкожно. Мышей (по 2 головы в каждой из групп) забивают под эфирным наркозом после инокуляции клеток через 0,5, 1, 2, 3, 5, 9, 12, 16, 20 и до 24 недель после вакцинации. У животных в асептических условиях извлекают селезенку, измельчают ее на холоду ножницами и с использованием стеклянного гомогенизатора готовят суспензию спленоцитов. Далее из полученной суспензии выделяют фракцию мононуклеарных лейкоцитов путем градиентного центрифугирования с использованием раствора Фиколл-Пака (30 мин, 400 g, 20°C), затем дважды промывают в фосфатно-солевом буфере, центрифугируя взвесь мононуклеаров 10 мин при 250 g. Отмытые спленоциты (клетки-эффекторы) переносят в ПРС и с помощью многоканальной пипетки вносят в 96 луночные планшеты в следующей последовательности: сначала вносят по 100 мкл культуральной среды, оставляя нижние ряды пустыми. После этого в нижние ряды помещают по 200 мкл подготовленных клеток-эффекторов в концентрации 4 млн/мл и с помощью многоканальной пипетки последовательно переносят 100 мкл во 2-й, 3-й....в 7-й ряд. Из 7-го ряда 100 мкл клеток отбрасывают. Два последних ряда служат контролем и не содержат клеток-эффекторов. В результате каждый ряд содержит 400, 200, 100, 50, 25, 12,5 и 6 тысяч клеток-эффекторов (соответственно). После этого осуществляют этап инкубации клеток-мишеней (меланома В16) с клетками-эффекторами. Для этого подготовленные клетки-мишени вносят в платы с различными разведениями клеток-эффекторов (в триплетах для каждого разведения), при этом соотношение мишень : эффектор составляет 1:80, 1:40, 1:20, 1:10, 1:5, 1:2, 1:1 (соответственно). Платы инкубируют 64 часа (5% СO₂, 37°С), после чего в лунки вносят свежую порцию ПРС, содержащую ³H тимидин (1 мкл/лунку) и продолжают инкубацию в течение 6 часов. Связанную с клетками радиоактивность измеряют на жидкостном сцинтилляционном β-счетчике. Уровень включения ³H-тимидина считают эквивалентным количеству живых клеток-мишеней (меланомы В 16). ЦТА рассчитывают по формуле:

где Д_конт. - уровень радиоактивности (имп/мин) в контрольных лунках (клетки линии В16 без добавления спленоцитов), Д_эксп. - уровень радиоактивности в опытных пробах.

Данные по ЦТА спленоцитов мышей, вакцинированных клетками SK.MEL-28 в ПААГ и подкожно, приведены в табл.5.

Видно, что однократная вакцинация животных клетками SK.MEL-28, трансплантированными в ПААГ, приводит к подъему ЦТА спленоцитов в отношении меланомы В16 до 91% через 1 неделю после начала вакцинации и постепенному снижению до 50% в остальные сроки эксперимента (табл.5). Подкожная вакцинация мышей клетками SK.MEL-28 приводит к аналогичному повышению ЦТА в отношении клеток меланомы В16 мышей через 1 неделю после вакцинации, сохранению уровня ЦТА в пределах 50% через 5 недель после начала вакцинации и снижению до 5% к 12-й недели эксперимента.

Пример 4. Модель иммунотерапии метастазирования меланомы.

Мышам-самкам линии BDF₁ (35 голов) подкожно вводят ПААГ в объеме 0,5 мл. Через 45 дней в ПААГ капсулу инокулируют клетки перевивной линии меланомы человека SK.MEL-28 (2,0·10⁶ в 0,25 мл ПРС). Через 45 дней мышам опытной и контрольных групп (без геля) прививают сингенный опухолевый штамм (меланому В16) в разных прививочных дозах: 0,5·10⁶ кл/мышь; 0,25·10⁶ кл/мышь; 0,125·10⁶ кл/мышь. Опухоли у животных начинают появляться в период с 7 по 20-е сутки эксперимента (табл.6), при снижении прививочной дозы (до 0,063·10⁶ клеток/мышь-модель метастазирования) выход опухолей снизился у опытных животных до 22%.

За животными наблюдают в течение 70 дней. В этот срок новых опухолей ни в контроле, ни в опыте не отмечено.

Таким образом, при прививочной дозе В16 0,063·10⁶ кл/мышь в группе животных с заключенными в гелевую капсулу клетками меланомы человека SK.MEL-28 в 78% случаев можно говорить об условном излечении животных от меланомы В16, то есть об эффективной иммунотерапии метастазирования.

Формула изобретения

1. Полиакриламидная капсула для формирования иммунного ответа, образованная в условиях in vivo и содержащая антигенный материал, представляющая собой полиакриламидный гель, окруженный и сращенный с оболочкой из соединительной ткани реципиента, отличающаяся тем, что полиакриламидный гель имеет средний размер ячеек, который не препятствует диффузии антигенпредставляющих клеток внутрь полиакриламидной капсулы и составляет 0,4-0,8 мкм, а в качестве антигенного материала она содержит высокомолекулярные соединения, части или дезинтеграты клеток, клетки либо смеси указанных антигенных материалов.

2. Полиакриламидная капсула по п.1, отличающаяся тем, что в качестве высокомолекулярных соединений она содержит конъюгаты органических и неорганических соединений с полимерами.

3. Полиакриламидная капсула по п.1, отличающаяся тем, что в качестве высокомолекулярных соединений она содержит белки, полипептиды, полисахариды, нуклеиновые кислоты, гликопротеины.

4. Полиакриламидная капсула по п.1, отличающаяся тем, что в качестве антигенного материала она содержит вирусы, бактериальные или раковые клетки в клональной или гетерогенной популяции.

5. Полиакриламидная капсула по п.1, отличающаяся тем, что в качестве антигенного материала она содержит ксеногенные раковые клетки.

6. Полиакриламидная капсула по п.1, отличающаяся тем, что в качестве антигенного материала она содержит ксеногенные раковые клетки меланомы, предстательной железы, почек, мозга.

7. Полиакриламидная капсула по п.1, отличающаяся тем, что в качестве антигенного материала она содержит трансформированные вирусные, бактериальные или раковые клетки, обеспечивающие безопасность использования.

8. Полиакриламидная капсула по п.1, отличающаяся тем, что в качестве антигенного материала она содержит компоненты или дезинтеграты вирусов, бактериальных или сингенных раковых клеток.

9. Полиакриламидная капсула по п.1, отличающаяся тем, что в качестве антигенного материала она содержит ксеногенный пул клеточного материала, выделенного из опухолевой ткани.

10. Способ формирования иммунного ответа на инкапсулированный в полиакриламидной капсуле антигенный материал, заключающийся в подкожном введении полиакриламидного геля, формирования из него в условиях in vivo полиакриламидной капсулы, окруженной сращенной оболочкой из эндогенной соединительной ткани, и в инъекции в капсулу антигенного материала, отличающийся тем, что используют полиакриламидный гель с размерами ячеек, не препятствующими диффузии антигенпредставляющих клеток внутрь полиакриламидной капсулы и составляющими 0,4-0,8 мкм, а в качестве антигенного материала используют высокомолекулярные соединения, части или дезинтеграты клеток, клетки либо смеси указанных антигенных материалов.

11. Способ формирования иммунного ответа по п.10, отличающийся тем, что формируют предпочтительно клеточную составляющую иммунного ответа.

12. Способ формирования иммунного ответа по п.10, отличающийся тем, что условия инкапсулирования не предполагают культивирование клеток.

13. Способ формирования иммунного ответа по п.10, отличающийся тем, что клетки иммунной системы замедляют или препятствуют свободной диффузии антигенного материала из полиакриламидной капсулы в окружающую среду.

14. Способ формирования иммунного ответа по п.10, отличающийся тем, что взаимодействие антигенпредставляющих клеток с антигенным материалом происходит преимущественно внутри полиакриламидной капсулы так, что она используется как депо для антигенпредставляющих клеток с эндоцитированными антигенами, обеспечивающее длительность формируемого иммунного ответа.

15. Способ иммунотерапии и иммунопрофилактики метастазирования, включающий в качестве послеоперационного воздействия на больного вакцинацию инкапсулированным противоопухолевым антигенным материалом, отличающийся тем, что ее осуществляют с помощью предлагаемой капсулы по пп.1-9.

16. Способ иммунотерапии и иммунопрофилактики метастазирования по п.15, отличающийся тем, что он включает вакцинацию против метастазов меланомы, рака почек, мочевого пузыря.

17. Способ иммунотерапии и иммунопрофилактики метастазирования по п.15, отличающийся тем, что в качестве антигенного материала используют ксеногенные раковые клетки.

18. Способ иммунотерапии и иммунопрофилактики метастазирования по п.15, отличающийся тем, что в качестве антигенного материала используют компоненты или дезинтеграты сингенных раковых клеток.

19. Способ иммунотерапии и иммунопрофилактики метастазирования по п.15, отличающийся тем, что в качестве антигенного материала используют ксеногенный пул клеточного материала, выделенного из опухолевой ткани.

РИСУНКИРисунок 1, Рисунок 2, Рисунок 3