Способ получения иммуномодулирующего средства

Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности. В качестве сырья используют траву эхинацеи пурпурной свежую. Извлечение целевых веществ осуществляют 40-70% этиловым спиртом при соотношении сырье:экстракт 1:1-1:2 методом модифицированной мацерации, сочетающей экстракцию при комнатной температуре с последующими двумя экстракциями при нагревании в интервале температур 80-90°С. Изобретение позволяет повысить выход продукта. 4 табл., 1 ил.

 

Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности, в частности к способу получения средства "Настойка эхинацеи пурпурной", обладающего иммуномодулирующими свойствами.

Известны способы получения лекарственных средств из травы эхинацеи пурпурной [Echinacea purpurea (L.) Moench.] и эхинацеи узколистной (Echinacea angustifolia Moench.) с использованием в качестве экстрагента 40%, 20-70% (настойка), 55% этилового спирта ("Настойка эхинацеи доктора Тайсса"), а также путем получения сока из свежесобранного сырья с последующим добавлением 20% этилового спирта в качестве консерванта ("Эхинацин ликвидум", "Иммунал" и др.) [3, 5, 9, 12, 13, 16, 17].

Однако недостатком известных способов является сложность технологического процесса, неполная экстракция целевых веществ (фенилпропаноиды и полисахариды) и, как следствие, низкий выход целевого продукта, дороговизна получаемых лекарственных средств. Кроме того, все зарубежные аналоги - дорогостоящие препараты, что значительно ограничивает возможности широкого их применения в медицинской практике. Данное обстоятельство становится особенно важным на фоне растущей потребности здравоохранения в иммуномодуляторах. Одним из главных факторов этой тенденции является ухудшающаяся экологическая ситуация, приводящая к росту заболеваний с профпатологией и экопатологией, причиной или следствием которых являются иммунодефицитные состояния. Наличие эффективного отечественного иммуномодулирующего средства, доступного широким слоям населения, могло бы способствовать смягчению вредного воздействия экологических и других неблагоприятных факторов и, следовательно, оздоровлению населения Российской Федерации.

В настоящее время трава эхинацеи пурпурной [Echinacea purpurea (L.) Moench.], эхинацеи узколистной (Echinacea angustifolia Moench.) и других видов служит источником получения таких препаратов, как "Эхинацея-Галенофарм", "Эхинацин", "Иммунал" (сок и таблетки), "Эхинафорс", "Пародонтакс" и др. [5, 7, 10, 13, 16]. С учетом имеющейся сырьевой базы эхинацеи пурпурной в Российской Федерации (плантации в Самарской, Белгородской областях, Краснодарском крае), а также потребности практического здравоохранения в доступных широким слоя населения растительных иммуномодулирующих препаратах представляется актуальной проблема создания лекарственных средств на основе сырья данного растения, а также совершенствования способов их получения.

По данным отечественных и немецких ученых [7, 10, 14, 15, 18-22], в траве эхинацеи пурпурной содержатся три группы биологически активных соединений (БАС) - фенилпропаноиды, в частности цикориевая кислота (1), полисахариды и алкиламиды, обладающие иммуностимулирующим, противовирусным, противовоспалительным, антимикробным и антибластомным действием. Это обстоятельство учитывалось нами при разработке технологического способа получения настойки эхинацеи пурпурной.

За прототип изобретения нами взят способ получения настойки эхинацеи пурпурной из воздушно-сухой травы с использованием 40% этилового спирта и метода модифицированной мацерации [9]. Сущность этого метода заключается в том, что растительное сырье заливают 40% этилового спирта, извлекают настаиванием в течение 24 ч в каждом перколяторе и последующей 2-кратной экстракцией 40% спиртом с использованием термического воздействия. Недостатками этого метода являются неполная экстракция сырья и, как следствие, невысокий выход целевых веществ, а также финансовые издержки, связанные с подготовкой сырья - сушкой травы эхинацеи пурпурной.

Цель изобретения - повышение выхода целевых веществ из травы эхинацеи пурпурной и их содержания в целевом продукте, а также снижение себестоимости получаемого средства.

Сущность заявляемого способа заключается в том, что в качестве сырья используют траву эхинацеи пурпурной свежую, а извлечение целевых веществ осуществляют 40...70% этиловым спиртом методом модифицированной мацерации, сочетающей экстракцию при комнатной температуре и при нагревании в интервале температур 80-90°С. Данный метод позволяет, с одной стороны, в щадящем режиме получать наиболее обогащенные вытяжки, а с другой, - достигать исчерпывающей экстракции (выход целевых веществ составляет 98,7% по сравнению с 93,0% в прототипе).

Проведенный заявителем поиск по научно-техническим и патентным источникам информации и выбранный из перечня аналогов прототип [9] позволили выявить отличительные признаки в заявляемом техническом решении. Следовательно, заявляемый способ получения удовлетворяет критерию изобретения "новизна".

Проведенный заявителем дополнительный поиск известных технических решений [1-3, 5, 6, 11-13, 15-17] с целью обнаружению в них признаков, сходных с признаками отличительной части формулы заявляемого способа получения, показал, что эти признаки отсутствуют, следовательно, заявляемое техническое решение удовлетворяет критерию "изобретательский уровень".

Критерий изобретения "промышленная применимость" подтверждается тем, что предлагаемый способ получения настойки эхинацеи пурпурной позволяет получить в промышленном производстве лекарственный препарат, достаточно простой в изготовлении и относительно дешевый из-за отсутствия в технологической схеме производства дорогостоящего оборудования, но обладающий выраженными иммуномодулирующими свойствами. Кроме того, в Самарской области имеются и другие объективные предпосылки для производства доступных и эффективных экопротекторов на основе травы эхинацеи пурпурной, так как на Средне-Волжской зональной опытной станции НПО "ВИЛАР" (пос.Антоновка) и в специализированном предприятии "Кентавр" (с.Березовка) созданы промышленные плантации этого растения.

Разработанный способ получения иллюстрируется примерами 1 и 2, а также чертежом технологической схемы получения настойки эхинацеи пурпурной.

Пример 1. 1500,0 г травы эхинацеи пурпурной свежей распределяют по 500,0 г в 3 экстрактора. В 1-й экстрактор заливают двукратное количество 70% этилового спирта (1000 мл) для экстракции сырья в течение 24 часов при комнатной температуре. Во 2-й экстрактор помещают 150 мл 70% этилового спирта для замачивания и оставляют на 24 ч.

Через 24 ч (2-ой день) из 1-го экстрактора переливают 900 мл извлечения во 2-ой экстрактор и оставляют на 24 ч при комнатной температуре. В данную мацерационную паузу в 1-й экстрактор помещают 500 мл 70% спирта и проводят термическую экстракцию (2t) с обратным холодильником при температуре 80-90°С в течение 30 мин. Полученное извлечение (2t-1) из 1-го экстрактора переливают в приемник 1 и используют на последующих стадиях для экстракции сырья во 2-ом экстракторе. В 3-ий экстрактор помещают 150 мл 70% этилового спирта для замачивания и оставляют на 24 ч.

Через 24 ч (3-й день) из 2-го экстрактора переливают 950 мл извлечения в 3-й экстрактор и оставляют на 24 ч для экстракции при комнатной температуре. В данную мацерационную паузу в 1-й экстрактор помещают 500 мл 70% спирта и проводят термическую экстракцию (3t) с обратным холодильником при температуре 80-90°С в течение 30 мин. Полученное извлечение (3t-1) из 1-го экстрактора переливают в приемник 1 и используют на последующих стадиях для экстракции сырья во 2-м экстракторе. Извлечение (2t-1) из приемника 1 переносят в экстрактор 2 и осуществляют термическую экстракцию с обратным холодильником при температуре 80-90°С в течение 30 мин. Полученное извлечение (2t-2) из 2-го экстрактора переливают в приемник 2 и используют на последующих стадиях для экстракции сырья во 3-м экстракторе. Полученное извлечение (3t-1) из 1-го экстрактора переливают в приемник 1 и используют на последующих стадиях для экстракции сырья во 2-м экстракторе.

Через 24 ч (4-й день) осуществляют слив извлечения из 3-го экстрактора в сосуд с готовой продукцией (1000 мл). Извлечение (2t-2) из 2-го приемника (500 мл) переливают в 3-й экстрактор и осуществляют термическую экстракцию с обратным холодильником при температуре 80-90°С в течение 30 мин. 500 мл извлечения (2t-3) из 3-го экстрактора отфильтровывают в сосуд с готовым продуктом. Затем извлечение (3t-1) из приемника 1 переносят во 2-й экстрактор и осуществляют термическую экстракцию (3t) с обратным холодильником при температуре 80-90°С в течение 30 мин. Полученное извлечение (3t-2) из 2-го экстрактора отфильтровывают в приемник 3, переносят его в 3-й экстрактор и сразу проводят термическую экстракцию с обратным холодильником при температуре 80-90°С в течение 30 мин. Полученное извлечение (3t-3) из 3-го экстрактора отфильтровывают в сборник с готовым продуктом и при этом получают в общей сложности 1500 мл готового продукта.

Полученный готовый продукт (1500 мл) выдерживают при температуре 8°С в течение 2-3 дней и фильтруют.

Содержание суммы фенилпропаноидов (целевые вещества) в готовом продукте, определенное с использованием описанной в литературе методики анализа [8], составляет в пересчете на цикориевую кислоту 0,78%. Выход целевых веществ составляет 98,7% от теоретического (содержание суммы фенилпропаноидов в траве эхинацеи пурпурной составляет 3,95%). Сухой остаток, определенный в соответствии с ГФ СССР XI издания [4], составляет 12,9%.

Пример 2. 1500,0 г травы эхинацеи пурпурной свежей распределяют по 500,0 г в 3 экстрактора. В 1-й экстрактор заливают двукратное количество 40% этилового спирта (1000 мл) для экстракции сырья в течение 24 часов при комнатной температуре. Во 2-й экстрактор помещают 150 мл 40% этилового спирта для замачивания и оставляют на 24 ч. Далее технологический процесс осуществляют в соответствии с примером 1, используя в качестве экстрагента 40% этиловый спирт.

Содержание суммы фенилпропаноидов (целевые вещества) в готовом продукте, определенное с использованием описанной в литературе методики анализа [8], составляет в пересчете на цикориевую кислоту - 0,76%. Выход целевых веществ составляет 96,2% от теоретического (содержание суммы фенилпропаноидов в траве эхинацеи пурпурной составляет 3,95%). Сухой остаток, определенный в соответствии с ГФ СССР XI издания [4], составляет 13,7%.

Пример 3. 1500,0 г травы эхинацеи пурпурной свежей распределяют по 500,0 г в 3 экстрактора. В 1-й экстрактор заливают однократное количество 70% этилового спирта (500 мл) для экстракции сырья в течение 24 часов при комнатной температуре. Во 2-й экстрактор помещают 150 мл 70% этилового спирта для замачивания и оставляют на 24 ч. Далее технологический процесс осуществляют в соответствии с примером 1, используя в качестве экстрагента 70% этиловый спирт в соотношении сырье:экстрагент 1:1.

Содержание суммы фенилпропаноидов (целевые вещества) в готовом продукте, определенное с использованием описанной в литературе методики анализа [8], составляет в пересчете на цикориевую кислоту 0,77%. Выход целевых веществ составляет 97,4% от теоретического (содержание суммы фенилпропаноидов в траве эхинацеи пурпурной составляет 3,95%). Сухой остаток, определенный в соответствии с ГФ СССР XI издания [4], составляет 12,7%.

Пример 4. 1500,0 г травы эхинацеи пурпурной свежей распределяют по 500,0 г в 3 экстрактора. В 1-й экстрактор заливают однократное количество 40% этилового спирта (500 мл) для экстракции сырья в течение 24 часов при комнатной температуре. Во 2-й экстрактор помещают 150 мл 40% этилового спирта для замачивания и оставляют на 24 ч. Далее технологический процесс осуществляют в соответствии с примером 1, используя в качестве экстрагента 40% этиловый спирт в соотношении сырье:экстрагент 1:1.

Содержание суммы фенилпропаноидов (целевые вещества) в готовом продукте, определенное с использованием описанной в литературе методики анализа [8], составляет в пересчете на цикориевую кислоту 0,75%. Выход целевых веществ составляет 95,0% от теоретического (содержание суммы фенилпропаноидов в траве эхинацеи пурпурной составляет 3,95%). Сухой остаток, определенный в соответствии с ГФСССР XI издания [4], составляет 13,3%.

Исследование запредельных параметров технологического процесса дает следующие результаты. Использование концентрации спирта ниже 40%, в частности 30% этилового спирта (пример 5), на стадии экстракции приводит к резкому снижению выхода целевых веществ (76,0% от теоретического содержания суммы фенилпропаноидов в сырье) и, следовательно, к снижению содержания фенилпропаноидов в настойке эхинацеи пурпурной (0,60%), хотя показатель "сухой остаток" за счет извлечения полисахаридов достаточной высокий (13,9%).

Использование 80% и 96% этилового спирта (примеры 6 и 7) на стадии экстракции также приводит к снижению выхода целевых веществ (соответственно 85,0% и 73,0% от теоретического содержания суммы фенилпропаноидов в сырье) и, следовательно, к снижению содержания фенилпропаноидов в настойке эхинацеи пурпурной (0,65% и 0,53% соответственно). Кроме того, в случае примеров 6 и 7 резко снижается показатель "сухой остаток" (8,5% и 6,7% соответственно), что свидетельствует о неполной экстракции второй группы БАС - полисахаридов.

Следовательно, оптимальными параметрами способа получения являются: экстракция травы эхинацеи пурпурной свежей 40...70% этиловым спиртом в соотношении сырье:экстрагент в интервале 1:1-1:2. Данные параметры позволяют получать целевой продукт из травы эхинацеи пурпурной свежей (примеры 1-4) с высоким выходом целевых веществ, с высоким содержанием действующих веществ в препарате (табл.1 и 2).

Сравнительная характеристка заявляемого способа и способа прототипа (табл.1 и 2) свидетельствуют о том, что заявляемый способ обеспечивает более высокий выход фенилпропаноидов (в 1,06 раза) из травы эхинацеи пурпурной свежей, а получаемый препарат дешевле лекарственного средства, получаемого по способу прототипа, в 1,7 раза, а зарубежных аналогов - в 13-17 раз (табл.1 и 2).

Таблица 1 Выход целевых веществ и качество целевого продукта в зависимости от способа получения настойки эхинацеи пурпурной и других препаратов
№№	Способ получения	Содержание фенилпропаноидов, %	Выход целевых веществ, %	Сухой остаток, %	Стоимость, руб.
1.	Заявляемый способ:
	Пример 1. 70% спирт (1:2)	0,78	98,7	12,9	9=00
	Пример 2. 40% спирт (1:2)	0,76	96,2	13,7	8=00
	Пример 3. 70% спирт (1:1)	0,77	97,4	12,7	8=00
	Пример 4. 40% спирт (1:1)	0,75	95,0	13,3	7-00
2.	Прототип	0,71	93,0	11,6	15=00
3.	Эхинацея-Галенофарм (Россия)	0,70	92,0	9,0	30=00
4.	Иммунал (Словения) (способ прессования: сок + 20% спирта)	0,106		5,2	120=00
5.	Эхинацин Ликвидум (Германия) (способ прессования: сок + 22% спирта)	0,064		4,8	150=00

Таблица 2 Сравнительная характеристика заявляемого способа и способа прототипа
№№ п/п	Параметры способа	Заявляемый способ	Прототип	Преимущества заявляемого способа
1.	Экстрагент	Этиловый спирт (40%...70%)	Этиловый спирт (40%)	Шире диапазон концентрации спирта
2.	Выход действующих веществ, в %	98,7	93,0	Более высокий выход фенилпропаноидов (в 1,06 раза)
3.	Сырье	Трава эхинацеи пурпурной свежая	Трава эхинацеи пурпурной (воздушно-сухая)	На 30% уменьшены финансовые издержки, связанные с сушкой сырья
4.	Себестоимость препарата (упаковка - 30 мл)	8-9 руб.	15 руб.	Дешевле в 1,7 раза

Примечательно, что настойка эхинацеи пурпурной значительно (в 7-10 раз) превосходит по содержанию целевых веществ такие зарубежные препараты на основе сока свежей травы эхинацеи пурпурной, как "Эхинацин" (содержание фенилпропаноидов 0,064%) и "Иммунал" (содержание фенилпропаноидов 0,106%) (табл.1). Более чем в 2 раза целевой продукт, полученный заявляемым способом, превосходит зарубежные аналоги и по показателю "сухой остаток" (табл.1).

Использование заявляемого способа позволяет осуществлять производство в условиях фармацевтической фабрики и других фармацевтических предприятий, где отсутствует дорогостоящее оборудование, необходимое для получения очищенных субстанций и таблетированных лекформ на их основе. Положительный эффект заявляемого способа заключается в том, что выход целевых веществ из сырья увеличивается до 98,7% по сравнению с 93,0% в прототипе, а содержание целевых веществ (сумма фенилпропаноидов в пересчете на цикориевую кислоту) в готовом продукте составляет 0,78%, т.е. увеличивается в 1,10 раза по сравнению с аналогичным показателем в целевом продукте (0,71%), полученным способом, описанным в прототипе [9]. С этими данными коррелируют и результаты определения сухого остатка в целевом продукте, полученным заявляемым способом и способом прототипа - соответственно 12,9% и 11,6%.

Исходя из этого, можно сделать вывод о том, что внедрение заявляемого способа позволит получать простое в изготовлении и относительно дешевое конкурентоспособное иммуномодулирующее средство.

О целесообразности такого подхода к получению целевых веществ и, следовательно, о положительном эффекте свидетельствует также то обстоятельство, что полученная настойка обладает выраженными иммуномодулирующими свойствами (табл.3 и 4). Иммунологические исследования образцов настойки эхинацеи пурпурной, полученных заявляемым способом (примеры 1 и 2), выполнены в соответствии с рекомендациями ВОЗ и отечественных авторов (Петров Р.В., Хаитов P.M., Орадовская И.В. // Иммунология. - 1992, №4. - С.43-53) на базе отдела иммунологии НИЦ СамГМУ и Самарского областного профпатологического центра. Содержание Ig классов А, М, G и орозомукоида в сыворотке определяли методом Манчини (радиальная иммунодиффузия в геле с моноклональными антителами). Для оценки состояния нейтрофилов периферической крови использовали латекс производства Института биологического приборостроения (Москва); устанавливая процент клеток, фагоцитирующих частицы. Концентрацию фибронектина плазмы в нанограммах/миллилитр исследовали с помощью твердофазного иммуноферментного анализа на многоканальном спектрофотометре "Dynatech MR 5000" (США) при длине оптической волны 492 нанометра. Содержание лизоцима в сыворотке определяли турбидиметрическим методом с использованием ацетонированного микрококка и выражали в единицах активности. Одновременно проводили общий клинический анализ крови с подсчетом элементов лейкоцитарной формулы для определения абсолютного количества клеток иммунной системы. Иммунофлуоресценция оценивалась на проточном цитометре "Epics-Profile" фирмы "Coulter" и с помощью люминесцентной приставки к оптическому микроскопу ЛН-130 МС, изготовленной научно-производственной лабораторией "Медимакс" (Москва).

Таким образом, проведенные иммунологические исследования свидетельствуют о том, что настойка эхинацеи пурпурной, полученная заявляемым способом, обладает выраженными иммуномодулирующими свойствами, причем положительная динамика показателей гуморального иммунитета у пациентов с хроническим пылевым бронхитом (две группы больных) отмечена нами как после курса лечения, так и после перерыва в течение 1 года (табл.3 и 4).

Заслуживает внимания и то обстоятельство, что положительная динамика параметров иммунного гомеостаза происходит при дозировке 5 капель препарата на прием 2 раза в день, тогда как в случае эхинацина и иммунала в инструкции по применению данных средств рекомендуется использование до 40-50 (!) капель, причем каждый час на фоне обострения заболевания.

Таблица 3 Показатели гуморального иммунитета у пациентов с хроническим пылевым бронхитом (воспалительная форма), получавших иммунокорригирующую терапию настойкой эхинацеи пурпурной на 70% спирте (пример 1)
Показатель	До лечения (n=21)	Настойка эхинацеи пурпурной на 70% спирте(n=21)	Контрольная группа - здоровые доноры (n=64)	Через 1 год после лечения (n=21)
Фагоцитоз, %	57,0±7,0	70,0±9,0	78,0±6,0	66,0±5,0
IgA, г/л	1,67±0,18	2,23±0,15	1,83±0,37	2,01±0,09
IgM, г/л	1,21+0,11	1,3±0,10	1,39±0,02	1,4±0,11
IgG, г/л	11,53±1,35	18,45±1,22	14,78±0,23	15,33±1,19
Комплемент, е.а.	38,9±2,4	52,5±2,2	55,3±2,6	50,0±1,8
Лизоцим, е.а.	20,5±1,8	40,5±2,3	34,5±1,8	38,3±2,0
Орозомукоид, г/л	0,631±0,119	0,822±0,027	0,781±0,030	0,715±0,019
Фибронектин, нг/мл	177±25	351±19	286±20	367±22
Таблица 4 Показатели гуморального иммунитета у пациентов с хроническим пылевым бронхитом (воспалительная форма), получавших иммунокорригирующую терапию настойкой эхинацеи пурпурной на 40% спирте (пример 2)
Показатель	До лечения (n=21)	Настойка эхинацеи пурпурной на 40% спирте (n=21)	Контрольная группа - здоровые доноры (n=64)	Через 1 год после лечения (n=21)
Фагоцитоз, %	52,0±5,0	69,0±4,0	78,0±6,0	70,0±6,0
IgA, г/л	1,55±0,20	1,99+0,22	1,83±0,37	2,09±0,19
IgM, г/л	1,12±0,13	1,45±0,11	1,39±0,02	1,53±0,13
IgG, г/л	13,51±1,42	15,77±0,58	14,78±0,23	16,45±0,52
Комплемент, е.а.	42,7±3,0	52,1±2,2	55,3±2,6	53,0±1,8
Лизоцим, е.а.	18,1±1,4	26,1±1,9	34,5±1,8	27,2±1,7
Орозомукоид, г/л	0,544±0,122	0,688±0,111	0,781±0,030	0,721±0,092
Фибронектин, нг/мл	190±34	312±24	286±20	306±20

Таким образом, использование заявляемого способа дает следующие преимущества:

1. Использование в заявляемом способе травы эхинацеи пурпурной свежей, 40...70% этилового спирта в соотношении "сырье:экстрагент" в интервале значений 1:1÷1:2 позволяет повысить выход целевого продукта (фенилпропаноиды) из сырья данного растения до 98,7% по сравнению с 93,0% в случае прототипа.

2. Содержание целевых веществ в готовом продукте, полученным заявляемым способом, составляет 0,78% по сравнению с 0,71% в прототипе (увеличение в 1,10 раза).

3. Показатель "сухой остаток", позволяющий косвенно оценивать содержание полисахаридов - второй группы БАС, увеличивается в 1,11 раза (с 11,6% в прототипе до 12,9-13,7% в заявляемом способе).

4. Стоимость целевого продукта уменьшается в 1,7 раза по сравнению с прототипом и в 13-17 раз дешевле зарубежных аналогов, в частности, препаратов "Иммунал" и "Эхинацин Ликвидум", хотя по содержанию целевых веществ данные средства уступают настойке эхинацеи пурпурной соответственно в 7 и 10 раз и по показателю "сухой остаток" более чем в 2 раза.

5. Использование травы эхинацеи пурпурной свежей в заявляемом способе позволяет уменьшить себестоимость средства на 30% за счет исключения финансовых расходов, связанных с сушкой сырья.

ИСТОЧНИКИ ИНФОРМАЦИИ

1. Васильев В.Н., Черкас В.Я., Савченко А.Г., Горбатенко В.В., Дегтярь Н.И. Использование препаратов эхинацеи и элеутерококка для повышения иммунобиологической сопротивляемости и снижения признаков усталости // Изучение и использование эхинацеи: Материалы Международной научной конференции / Под ред. Самородова В.Н. и др. - Полтава: Верстка, 1998. - С.107-108.

2. Войтенко Г.Н., Лисица О.И., Яковлева Н.Ю., Усова Е.И. Применение настойки эхинацеи пурпурной в педиатрической практике // Изучение и использование эхинацеи: Материалы Международной научной конференции / Под ред. Самородова В.Н. и др. - Полтава: Верстка, 1998. - С.108-109.

3. Временная фармакопейная статья 42-2371-94. "Трава эхинацеи пурпурной". - М., 1994. - 8 с.

4. Государственная фармакопея СССР: Вып.2. Общие методы анализа. Лекарственное растительное сырье / МЗ СССР. - 11-е изд. - М.: Медицина, 1989. - 400 с.

5. Государственный реестр лекарственных средств. - Т.1. Официальное издание. - М.: ОАО "Издательство "Медицина", 2004. - 1404 с.

6. Зузук Б.М., Рыбак О.В., Дячок В.В. Биологически активные вещества эхинацеи пурпурной и проблема стандартизации ее сырья и препаратов // Изучение и использование эхинацеи: Материалы Международной научной конференции / Под ред. Самородова В.Н. и др. - Полтава: Верстка, 1998. - С.75.

7. Куркин В.А. Фенилпропаноиды - перспективные природные биологически активные соединения. - Самара, 1996. - 80 с.

8. Куркин В.А. Количественное определение суммы гидроксикоричных кислот в надземной части Echinacea purpurea (L.) Moench. / В.А. Куркин, О.И. Авдеева, П.Г. Мизина // Растительные ресурсы. - 1998. - Т.34. - Вып.2. - С.81-85.

9. Куркин В.А., Косарев В.В., Авдеева О.И., Авдеева Е.В., Мизина П.Г., Жестков А.В. Способ получения иммуномодулирующего препарата "Настойка эхинацеи пурпурной". - Патент РФ № 2134584. Бюл. № 23 от 20.08.99 г.

10. Куркин В. А. Фармакогнозия: учебник для студентов фармацевтических вузов. - Самара: OOO "Офорт", ГОУВПО "СамГМУ", 2004. 1180 с.

11. Муравьев И.А. Технология лекарств. Изд. 3-е, перераб. и доп. - Т.1. - М.: Медицина, 1980. - С.704 с.

12. Настойка Echinacea purpurea L., средство на основе Echinacea purpurea L. и способ их получения // ОАО "Фармацевтическая фабрика Санкт-Петербурга". - Патент РФ № 2163138. А 61 К 35/78. Опубл. 20.02.2001 г.

13. Регистр лекарственных средств России. Энциклопедия лекарств. - М.: OOO "РЛС-2003, 2003. - 1438 с.

14. Самородов В.Н. Фитохимический состав представителей рода эхинацея (Echinacea Moench.) и его фармакологические свойства (обзор) / В.Н.Самородов, С.В.Поспелов, Г.Ф.Моисеев и др. // Химико-фармац. журнал. - 1996. - Т.30, № 4. - С.32-37.

15. Самородов В.Н. Изучение и использование эхинацеи / В.Н. Самородов и др. // Материалы Международной научной конференции - Полтава: Верстка, 1998. - 156 с.

16. Справочник Видаль. Лекарственные препараты в России: Справочник. - М.: АстраФармСервис, 2005. - 1536 с.

17. Стихин В.А., Сенина Т.А., Алентьева О.Г., Климахин Г.И. Трава эхинацеи пурпурной - новое лекарственное растительное сырье // Первый международный симпозиум "Новые и нетрадиционные растения и перспективы их практического использования": Тезисы докладов. - Пущино, 1995. - С.786-788.

18. Bauer R., Wagner H. Echinacea: Handbuch fur Arzte Apotheker und andere Naturwissenschaftler. - Stuttgart: Wissenschaftliche Verlagsgeselschaft, 1990. - 182 s.

19. Cheminat A., Zawatzky R., Becker H. et al. Caffeoyl conjugates from Echinacea species: structures and biological activity // Phytochemistry. - 1988. - Vol.27, N.9. - P.2728-2794.

20. He X.-G., Lin L.-Z., Bemart M.W., Lian L.-Z. Analysis of alkamides in roots and achens of Echinacea purpurea by liquid chromatography-electrospray mass spectrometry // J. of Chromatography. - 1998. - Vol.815 A. - P.205-211.

21. Proksch A., Wagner H. Structural analysis of a 4-0-methylglucuronoarabinoxylan with immuno-stimulanting activity from Echinacea purpurea // Phytochemistry. - 1987. - Vol.26, N.7. - P.1989-1993.

22. Wagner H. Pharmazeutische Biologie. Drogen und ihre Inhaltsstoffe. - Stuttgart-New York: Gustav Fischer Verlag, 1993. - 522 s.

Способ получения настойки эхинацеи пурпурной [Echinacea purpurea (L.) Moench.], обладающей иммуномодулирующим действием, включающий экстракцию надземной части этиловым спиртом в условиях модифицированной мацерации, сочетающей экстракцию при комнатной температуре с последующими двумя экстракциями при нагревании, отличающийся тем, что используют траву эхинацеи пурпурной свежую, экстрагирование проводят 40-70%-ным этиловым спиртом при соотношении сырье: экстрагент 1:1-1:2, а нагревание осуществляют в интервале температур 80-90°С.