Средство растительного происхождения с антиоксидантной активностью
Владельцы патента RU 2302252:
Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "БАШКИРСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ ФЕДЕРАЛЬНОГО АГЕНТСТВА ПО ЗДРАВООХРАНЕНИЮ И СОЦИАЛЬНОМУ РАЗВИТИЮ" (ГОУ ВПО БГМУ РОСЗДРАВА) (RU)
Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности, а именно к созданию средств, обладающих антиоксидантной активностью. Предложено применение 5%-ного водного экстракта из побегов багульника (Astragalus dasyanthus) в качестве антиоксидантного средства. Средство обладает выраженным антиоксидантным действием и может расширить арсенал антиоксидантных средств природного происхождения. 2 табл., 18 ил.
Изобретение относится к медицине, а именно к фармакологии, и может быть использовано для лечения и профилактики заболеваний, где основным патогенетическим фактором является нарушение процессов свободнорадикального перекисного окисления липидов, в частности токсические поражения печени, хронические неспецифические заболевания легких, церебральный атеросклероз, ишемическая болезнь сердца.
Известны фармакологические препараты, являющиеся синтетическими аналогами природных антиоксидантов (α-токоферол, аскорбиновая и нордигидроваяретовая кислоты, пропиловый, октиловый и додециловый эфиры галловой кислоты) и большая группа искусственных антиокислителей на основе серосодержащих и фенольных соединений (дибунол, бутилоксианизол) (И.В.Сорокина и др. Роль фенольных антиоксидантов в повышении устойчивости органических систем к свободнорадикальному окислению. - Новосибирск, 1997, с.20-26.). Синтетические фенолы не нашли широкого применения в лечебной практике. Отчасти это связано с наличием у некоторых из них определенной токсичности.
Перспективными антиоксидантами являются препараты, изготовленные из природного сырья. Их действие обусловлено синергическим эффектом входящих в них биологически активных соединений.
Аналогами изобретения являются препараты на основе природных флавоноидов: рутин, диквертин. Известны такие их свойства, как гепатопротекторные, гиполипидемические, капилляропротекторные. Механизм антитоксического действия обеспечивается, в основном, антиоксидантным эффектом (Ю.О.Теселкин и др. Антиоксидантное действие дигидрокверцетина при тетрахлорметановом гепатите у крыс. Вопросы медицинской, биологической и фармацевтической химии, 1999, №3, с.44-47.).
Наиболее близким аналогом является кверцетин, полученный из древесины лиственницы. Известны такие его свойства как антиоксидантное и гепатопротекторное. Из литературных источников известно, что флавоноид кверцетин проявлял в отдельных тестах мутагенный эффект (В.Н.Зиновьева и др. Коррекция мутагенного действия кверцстина природным и синтетическими антиоксидантами. - Вопросы медицинской, биологической и фармацевтической химии, 2005, №1, с.45-47).
Известны следующие фармакологические свойства препаратов из багульника: отхаркивающее, противококлюшное, мочегонное, дезинфицирующее, антисептическое. Отмечена высокая антимикробная активность препаратов из багульника. Растение считается мочегонным, потогонным, тонизирующим средством (В.Г.Кукес. Фитотерапия с основами клинической фармакологии. Справочник. - М.: Медицина, 1999, с.35-36.).
Данных об антиоксидантном воздействии препаратов из багульника в доступной научно-медицинской и патентной литературе не обнаружено.
Задачей изобретения является расширение области применения препаратов из побегов багульника, а также расширение арсенала антиоксидантных средств.
Технический результат при использовании изобретения - получение средства с выраженным антиоксидантным действием.
Указанный технический результат достигается за счет применения 5% водного экстракта из побегов багульника (Astragalus dasyanthus) в качестве антиоксидантного средства.
Сущность изобретения заключается в применении 5% водного экстракта из побегов багульника (Astragalus dasyanthus) в качестве антиоксидантного средства.
Приготовление водного экстракта производят следующим образом: 10,0 г (2 столовые ложки) растительного сырья помещают в эмалированную посуду, заливают 0,2 л (1 стакан) дистиллированной воды комнатной температуры, закрывают крышкой, настаивают на кипящей водяной бане 15 мин. Охлаждают при комнатной температуре в течение 45 минут, процеживают, оставшееся сырье отжимают. В полученный настой добавляют кипяченую дистиллированную воду до объема 0,2 л. Приготовленный настой хранят в прохладном месте не более 2 суток.
На фиг.1 изображена запись типичной картины хемилюминесценции модельной системы "Цитрат-фосфат-люминол" (активные формы кислорода) без добавления фитопрепарата (контрольный образец).
На фиг.2 изображена запись типичной картины хемилюминесценции модельной системы "Желточные липопротеиды" (перекисное окисление липидов) без добавления фитопрепарата (контрольный образец).
На фиг.3 изображена запись типичной картины влияния водного экстракта из побегов багульника на хемилюминесценцию модельной системы "Цитрат-фосфат-люминол" (доза ФП 0,5 мг/мл).
На фиг.4 изображена запись типичной картины влияния водного экстракта из побегов багульника на хемилюминесценцию модельной системы "Желточных липопротеидов" (доза ФП 0,5 мг/мл).
На фиг.5 изображена запись типичной картины влияния водного экстракта из побегов багульника на хемилюминесценцию модельной системы "Цитрат-фосфат-люминол" (доза ФП 1,25 мг/мл).
На фиг.6 изображена запись типичной картины влияния водного экстракта из побегов багульника на хемилюминесценцию модельной системы "Желточных липопротеидов" (доза ФП 1,25 мг/мл).
На фиг.7. изображена запись типичной картины хемилюминесценции модельной системы "Сыворотка крови больных с дислипидемиями" (перекисное окисление липидов) без добавления фитопрепарата (контрольный образец).
На фиг.8 изображена запись типичной картины влияния водного экстракта из побегов багульника на хемилюминесценцию модельной системы "Сыворотка крови больных с дислипидемиями" (доза ФП 0,5 мг/мл).
На фиг.9 изображена запись типичной картины влияния водного экстракта из побегов багульника на хемилюминесценцию модельной системы "Сыворотка крови больных с дислипидемиями" (доза ФП 1,25 мг/мл).
На фиг.10 изображена запись типичной картины хемилюминесценции модельной системы "Гомогенат сердца мышей" без добавления фитопрепарата (контрольный образец).
На фиг.11 изображена запись типичной картины влияния водного экстракта из побегов багульника на хемилюминесценцию модельной системы "Гомогенат сердца мышей" (доза ФП 0,5 мг/мл).
На фиг.12 изображена запись типичной картины влияния водного экстракта из побегов багульника на хемилюминесценцию модельной системы "Гомогенат сердца мышей" (доза ФП 1,25 мг/мл).
На фиг.13 изображена запись типичной картины хемилюминесценции модельной системы "Гомогенат мозга мышей" без добавления фитопрепарата (контрольный образец).
На фиг.14 изображена запись типичной картины влияния водного экстракта из побегов багульника на хемилюминесценцию модельной системы "Гомогенат мозга мышей" (доза ФП 0,5 мг/мл).
На фиг.15 изображена запись типичной картины влияния водного экстракта из побегов багульника на хемилюминесценцию модельной системы "Гомогенат мозга мышей" (доза ФП 1,25 мг/мл).
На фиг.16 изображена запись типичной картины хемилюминесценции модельной системы "Гомогенат печени мышей" без добавления фитопрепарата (контрольный образец).
На фиг.17 изображена запись типичной картины влияния водного экстракта из побегов багульника на хемилюминесценцию модельной системы "Гомогенат печени мышей" (доза ФП 0,5 мг/мл).
На фиг.18 изображена запись типичной картины влияния водного экстракта из побегов багульника на хемилюминесценцию модельной системы "Гомогенат печени мышей" (доза ФП 1,25 мг/мл).
В таблице 1 представлен анализ антиоксидантного действия водного экстракта из побегов багульника на хемилюминесценцию модельных систем.
В таблице 2 отражена эффективность антиокислительного действия экстракта из побегов багульника на показатели хемилюминесценции гомогенатов тканей при курсовом введении животным.
Метод исследования основан на регистрации хемилюминесценции биологического материала с использованием аппаратно-программного комплекса ХЛМ-003. Комплекс состоит из портативного хемилюминомера, процессорного блока и монитора.
Для оценки влияния экстрактов из побегов багульника на процессы свободнорадикального перекисного окисления липидов использовали модельные системы. Для их приготовления использовали фосфатно-солевой буферный раствор следующего состава: 20 мМ КН2PO4, 105 мМ KCl (рН 7,45). Инициировали процесс добавлением 1 мл соли FeSO4 (конечная концентрация ионов Fe2+ в среде инкубации составила 2,5 мМ).
Были созданы следующие модельные системы:
1) система, где имитируется генерация активных форм кислорода (АФК) - на основе фосфатно-солевого буферного раствора с цитратом натрия (2,5% раствор) с добавлением люминола (10-5 М), который резко повышает активность свечения;
2) система, где протекают реакции перекисного окисления липидов, состоящая из суспензии желточных липопротеидов, обладающая высокой окисляемостью;
3) для приготовления модельной системы сыворотки крови, ее забирали у больных с дислипидемиями II типа из локтевой вены натощак, форменные элементы осаждали центрифугированием при 1000 об/мин. Сыворотку отбирали и добавляли в объеме 0,5 мл в 19,5 мл ФСБ с цитратом натрия, перемешивали, вносили фитопрепарат в различных дозах и измеряли параметры ХЛ;
4) органотропные модельные системы (гомогената печени, сердца, мозга неинбредных белых мышей) готовили на холоду (+4°С). Для этого у декапитированных под эфирным наркозом животных выделяли поэтапно органы, гомогенизировали в соотношении 1:5 (вес/объем) с фосфатно-солевым буфером в тефлоновом гомогенизаторе. Полученный гомогенат фильтровали через капроновый фильтр, определяли содержание белка по Лоури. На исследование ХЛ отбирали 1 мл пробы (20 мг/мл белка), разводили в 19 мл охлажденного буфера с цитратом натрия); растворы ФП добавляли в исследуемую модельную систему за 1 мин до введения FeSO4. В качестве контроля служили модельные системы без добавления фитопрепарата (в тех же объемах добавляли физиологический раствор).
В 20 мл модельных систем вносили 5% водные экстракты в различных дозах (0,2; 0,5 и 1,0 мл, что в пересчете на сухое вещество соответствует: 0,5 мг/мл; 1,25 мг/мл; 2,5 мг/мл). Число опытов для каждой модельной системы составляло 25.
Для оценки влияния экстракта из багульника на антиоксидантный статус организма мышам со средней массой тела 20 г препарат вводили внутрижелудочно в течение 28 дней, один раз в сутки, из расчета 100 мг/ кг массы животного за 30 минут до кормления. Контрольным животным вводился физиологический раствор в том же объеме. Условия содержания животных были одинаковыми для опытной и контрольной групп. В каждой группе было по 20 животных.
Оценивали интегральный показатель хемилюминесценции светосумму свечения, которая выражалась в условных единицах (1 у.е.=3.06×105 квантов в сек). Результаты исследований подвергались статистической обработке методом критерия Фишера-Стьюдента. Достоверными считались различия при р≤0,05; 0,001. Показатели выражены в процентах от контрольного значения.
Анализ представленных в таблице 1 и фигурах 1-18 результатов показывает, что при добавлении в модельные системы, имеющие различный антиоксидантный статус, водного экстракта из побегов багульника происходит угнетение основного параметра хсмилюминесценции - светосуммы свечения. Во всех модельных системах отмечался статистически значимый антиоксидантный эффект при введении экстракта во всех дозах по сравнению с контрольными образцами, при этом с увеличением доз антиоксидантный эффект усиливался.
Изучение профилактического эффекта экстракта из побегов багульника для выявления антиоксидантой активности в модельном эксперименте на мышах при курсовом введении с профилактической целью (табл.2) показало, что во всех тканях происходило угнетение перекисного окисления липидов по сравнению с группой контрольных животных, не получавших экстракта.
Таким образом, на основании полученных результатов следует, что в различных модельных системах водный экстракт из побегов багульника оказывал прямое антиоксидантное действие, а при курсовом профилактическом введении лабораторным животным тормозил процессы перекисного окисления липидов в тканях, что обосновывает применение водного экстракта из багульника в качестве эффективного антиоксидантного средства для профилактики и лечения свободнорадикальных патологий.
| Таблица 1 | ||||||
| Анализ антиоксидантного действия водного экстракта из побегов багульника на хемилюминесценцию модельных систем | ||||||
| Доза экстракта (количество сухого вещества мг/мл) | Модельная система Цитратфосфат-люминол | Модельная система Желточные липопротеиды | Модельная система Гомогенат печени мышей | Модельная система Гомогенат сердца мышей | Модельная система Гомогенат мозга мышей | Модельная система Сыворотка крови больных с дислипидемиями (75 пациентов) |
| 0,2мл (0,5 мг/мл) | 37,54±1,13%** | 39,87±0,75 m% ** | 77,30±0,88% * | 64,95±2,59%* | 25,49±0,58%** | 88,57±2,69% |
| 0,5 мл (1,25 мг/мл) | 38,81±0,84%** | 32,11±0,44%** | 71,60±2,25%* | 49,23±0,48%* | 4,50±0,26%** | 66,99±1,27%* |
| 1,0 мл (2,50 мг/мл) | 34,15±0,21%** | 26,28±1,39%** | 70,20±1,45%* | 33,24±4,40%** | 2,42±0,17%** | 57,50±5,82%* |
| Контроль (модельные системы без ФП) | 100±1,99% | 100±7,68% | 100±8,22% | 100±6,03% | 100±7,21% | 100±15,53% |
| Результаты (светосумма свечения) выражены в процентах от контрольных образцов. | ||||||
| Наличие статистически достоверного различия между контролем и опытом (* р<0,05; ** р<0,001). |
| Таблица 2 | |||
| Эффективность антиокислительного действия экстракта из побегов багульника на показатели хемилюминесценции гомогенатов тканей при курсовом введении животным | |||
| Количество сухого вещества в экстракте из багульника при курсовом введении | Гомогенат печени мышей (светосумма свечения, % от контроля) | Гомогенат сердца мышей (светосумма свечения, % от контроля) | Гомогенат мозга мышей (светосумма свечения, % от контроля) |
| 100 мг/кг массы животного | 62,16±5,44%* | 58,94±3,24%* | 46,21±3,18%* |
| Контроль (физиологический раствор) | 100±5,78% | 100±6,82% | 100±7,26% |
| * Наличие статистически достоверного различия между контролем и опытом (р<0,05). |
Применение 5%-ного водного экстракта из побегов багульника (Astragalus dasyanthus) в качестве антиоксидантов средства.
