Способ иммунокоррекции у коров
Владельцы патента RU 2289402:
Государственное научное учреждение Научно-исследовательский ветеринарный институт Нечерноземной зоны РФ Российской академии сельскохозяйственных наук (RU)
Изобретение относится к ветеринарии, а именно к способу иммунокоррекции у коров, включающему введение смеси янтарной и аскорбиновой кислоты в соотношении 1:1 в дозе от 0,5 до 1,5 г на голову в сутки per os в течение 20-25 дней до и 20-25 дней после отела. Технический результат изобретения - иммунокоррекция у сухостойных коров с одновременной профилактикой нарушений воспроизводительной функции у коров в послеродовом периоде. 1 з.п. ф-лы, 4 табл.
Изобретение относится к ветеринарии, касается способа иммунокоррекции у коров, направленного на предотвращение (профилактику) различных нарушений воспроизводительной функции коров в послеотельный период.
Ослабление защитно-адаптационных механизмов организма - основной предрасполагающий фактор в этиопатогенезе послеродовых заболеваний у коров.
Постоянство клеточного и гуморального состава (гомеостаз) организма контролируется иммунной системой. Работа иммунной системы определяется иммунокомпетентными клетками, из которых основными являются лейкоцит во всем многообразии его популяций и субпопуляций и тканевые макрофаги. Все иммунокомпетентные клетки действуют комплексно (клеточная кооперация) в соответствии с их функцией. Так, фагоциты (моноциты, нейтрофилы и тканевые макрофаги) обеспечивают киллинг и элиминацию чужеродного агента, развитие вспомогательных процессов и запуск многих механизмов специфических реакций, активизирующих или подавляющих иммунный ответ, Т-лимфоциты - клеточный, а макрофаги и В-лимфоциты - гуморальный иммунитет. Под воздействием различного рода иммунодепрессантов развивается недостаточность механизмов иммунитета (клеточного или гуморального или отдельных его звеньев) [1, 2].
Для восполнения иммунологической недостаточности применяют различные группы препаратов - неспецифических иммуностимуляторов (корпускулярные иммуностимуляторы: липосомы, латекс, микроцеллюлоза и др.; препараты микробного, вирусного происхождения и их синтетические аналоги: продигиозан, зимозан, ликопид и др.; препараты из тканей человека и животных и их синтетические аналоги: тимоген, спленин, пантокрин, препараты из крови и сыворотки и др.; препараты растительного происхождения: чайного дерева, лимона, чеснока, эхинацеи и др.; синтетические иммуномодуляторы: дибазол, метилурацил, левамизол и др.; гормоны: эстрадиол, синэстрол, тироксин, тиреоидин и др.; витамины, микроэлементы и их соли) [3]. Многие витамины и микроэлементы участвуют в иммунологических реакциях, активизируя (или супрессируя) действия различных ферментов, например соединения селена, в частности натрий селенит [4], барий селенистокислый [5], селенопиран [6].
В основе механизмов действия каждого иммуностимулятора лежат особенности его химического строения, в зависимости от которых активизируется та или иная система организма. В то же время патогенез различных болезней не одинаков, поэтому при выборе иммуностимулятора необходимо иметь четкое представление о том, какие системы наиболее задействованы в данной патологии и какие он может активизировать.
Совокупность неблагоприятно воздействующих организационно-технологических факторов с физиологическими изменениями повышает окислительную нагрузку на организм отельных коров, что вызывает окислительный стресс. В предварительных исследованиях нами установлена взаимосвязь между окислительным стрессом и иммунобиохимическим гомеостазом у стельных коров, указывающая на то, что в этиопатогенезе массовых послеродовых патологий лежит состояние стрессовой дезадаптации. У коров с акушерской патологией отмечали нарушение иммунобиохимического гомеостаза за 15 дней до отела (снижение показателей гемоглобина, эритроцитов, лейкоцитов, Т- и В-лимфоцитов, общего белка сыворотки крови (ОБС), нарушение межфракционных соотношений, повышение уровня общих липидов и холестерина, снижение уровня общих иммуноглобулинов, витамина Е, лизоцимной, бактерицидной активности сыворотки крови и фагоцитарной активности нейтрофилов) при значительном по сравнению с коровами с нормальным течением родов и послеродового периода повышении продуктов перекисного окисления (ПОЛ), в частности малонового диальдегида. Следовательно, накопление в организме высокоактивных продуктов ПОЛ является одной из причин, приводящих к супрессии факторов неспецифической иммунологической резистентности организма, т.е. иммунологической недостаточности (таблица 1).
Техническим результатом изобретения является разработка способа иммунокоррекции у сухостойных коров с одновременной профилактикой нарушений воспроизводительной функции коров в послеродовом периоде.
Технический результат достигается тем, что в способе иммунокоррекции, включающем введение биологически активных веществ, в качестве биологически активных веществ используют антиоксиданты, в качестве которых используют янтарную и аскорбиновую кислоты, при этом янтарную и аскорбиновую кислоты вводят в виде смеси в соотношении 1:1, а введение осуществляет per os в течение 20-25 дней до отела и 20-25 дней после отела. Кроме того, в данном способе смесь антиоксидантов вводят в дозе 1,0 г на голову в сутки.
Сравнение заявленных технических решений с известными позволило выявить отличные от них признаками, следовательно, данные технические решения соответствуют критерию "новизна".
| Таблица 1. | |||
| Показатели иммунобиохимического гомеостаза коров за 15 дней до отела | |||
| Показатели | Норма | Группы коров | |
| с нормальным течением послеродового периода | с послеродовой патологией | ||
| Гемоглобин, г/л | 99,0-129,0 | 101.0±1,5 | 89,5±1,8 |
| Эритроциты, 1012/л | 5,0-8,0 | 6,1±0,2 | 4,7±0.1 |
| Лейкоциты, 109 л | 4,5-12,0 | 7,7±0,4 | 5,0±0,5 |
| Т-лимфоциты, % | 45-60 | 42.9±0,5 | 31,2±1,9 |
| В-лимфоциты, % | 8-15 | 12,8±0,8 | 7,4±0,6 |
| Иммуноглобулины общие, г/л | 15-25 | 18,9±0,3 | 15,5±0.2 |
| Бактерицидная активность сыворотки крови, % | 65-85 | 66,8±0,7 | 60,2±1,1 |
| Лизоцимная активность сыворотки крови, % | 6-9 | 6,9±0,7 | 4,9±0,5 |
| Фагоцитарная активность нейтрофилов крови, % | 50-60 | 51,2±1,5 | 45,2±1,4 |
| Общий белок сыворотки крови, г/л | 72-86 | 76,0±1,5 | 72,2±1,7 |
| Альбумины, % | 40 (30-50) | 46,0±1,5 | 41,2±1,4 |
| Глобулины, % | 60 | ||
| - альфа | 17(12-20) | 13,7±0,9 | 12,1±0,6 |
| - бета | 13(10-16) | 14,9±1,1 | 13,2±0,8 |
| - гамма | 30(25-40) | 25,4±1,3 | 33,5±1,5 |
| Глюкоза, ммоль/л | 2,2-3,3 | 2,24±0,2 | 2,09±0,1 |
| Общие липиды, г/л | 3,5-4,5 | 4,0±0,4 | 5,9±0,6 |
| Общий холестерин, ммоль/л | 2,34-4,68 | 4,03±0,02 | 12,9±0,02 |
| Витамин Е, мкм/л | 14-33 | 25,2±1,2 | 12,9±1,1 |
| Малоновый диальдегид, мкм/л | 0,59-0,95 | 0,89-0,03 | 1,79±0,02 |
Анализ технических решений показал, что заявленная совокупность существенных признаков неизвестна из уровня техники, следовательно, данные технические решения соответствуют критерию "изобретательский уровень".
Осуществимость и эффективность способа иммунокоррекции определяли в научно-производственных экспериментах на сухостойных коровах черно-пестрой породы с молочной продуктивностью 3500-3800 кг в условиях хозяйства с высокой (более 90%) заболеваемостью репродуктивных органов после отела. Состояние иммунобиохимического гоместаза оценивали по уровню следующих показателей: гемоглобина, эритроцитов, ОБС, общих иммуноглобулинов (определяли общепринятыми методами), глюкозы (определяли ортотолуидиновым методом), общих липидов (определяли по Криницкому в модификации Волгина,1969), продуктов ПОЛ - диеновые конъюгаты и кетодиены (определяли по Плацерту,1976), малоновый диальдегид (определяли с тиобарбитуровой кислотой), лизоцимной активности сыворотки крови (определяли по В.Г.Дорофейчук), бактерицидной активности сыворотки крови (определяли по О.В.Смирновой и Т.А.Кузьминой), фагоцитарной активности нейтрофилов крови (определяли по B.C.Гостеву).
Результаты исследований подвергали биометрической обработке и корреляционному анализу с применением компьютерной программы.
Сущность способа поясняется примерами.
Пример 1. Эффективность смеси янтарной и аскорбиновой кислот в соотношении 1:1 как иммунокорректора изучали на 5 группах сухостойных коров, сформированных по принципу аналогов, из них одна - контрольная. Все животные содержались в одинаковых условиях на рационах, сбалансированных по питательным, витаминным и минеральным веществам. В течение 20-25 дней до предполагаемого отела и 20-25 дней после отела коровам опытных групп применяли внутрь янтарную кислоту и смесь янтарной и аскорбиновой кислот в соотношении 1:1 по следующей схеме: первая группа - янтарная кислота в дозе 1,0 г на голову в сутки; вторая, третья и четвертая группы: смесь янтарной и аскорбиновой кислот в соотношении 1:1 в дозе 0,5, 1,0 и 1,5 г на голову в сутки соответственно. Перед проведением опыта и на 2-3 день после отела брали кровь для изучения иммунобиохимического гомеостаза. Результаты приведены в таблице 2.
| Таблица 2. | |||||
| Иммунокорригирующая эффективность янтарной и аскорбиновой кислот (1:1) | |||||
| ПОКАЗАТЕЛИ | Группы коров | ||||
| 1-ая | 2-ая | 3-ая | 4-ая | 5-ая | |
| Янтарная кислота 1,0 г на голову в сутки | Смесь янтарной и аскорбиновой кислот (1:1), г на голову в сутки | Контроль (без препаратов) | |||
| 0,5 | 1,0 | 1,5 | |||
| Гемоглобин, г/л | 93,7±2,0 | 94,4±1,9 | 95,0±2,5 | 93,9±2,5 | 95,7±3,0 |
| 112,0±2,5 | 114,0±1,1 | 119,0±2,0 | 119,0±2,0 | 98,0±2,0 | |
| Эритроциты, 1012/л | 5,4±0,25 | 5,4±0,1 | 5,2±0,25 | 5.2±0.25 | 5,2±0,24 |
| 5,9±0,3 | 6,1±0,2 | 6,0±0,2 | 6,0±0,1 | 5,3±0,15 | |
| ОБС, г/л | 72,0+1,3 | 72.3+1.5 | 70,7±1,1 | 72,0±1,4 | 72,2±1,5 |
| 76,7±1,4 | 77,3±1,7 | 79,0±1,2 | 79,0±1,2 | 73,0±1,1 | |
| Гамма-глобулины, % | 23,1±1,6 | 23.5±1,2 | 23,0±2,0 | 22,9±1,5 | 23,9±1,7 |
| 28,0±1,3 | 28,5±1,2 | 29,9±1,3 | 29,8±2,0 | 21,0±1,4 | |
| Глюкоза, м моль/л | 2,03±0,3 | 2.01±0.2 | 2,09±0,2 | 2,05±0,2 | 2,15±0,3 |
| 2,45±0,2 | 2,46±0,1 | 2.64±0,2 | 2,58±0,2 | 1,13±0,4 | |
| Общие липиды, г/л | 5.69±0.5 | 5.70±0.5 | 5.61+0.3 | 5.65±0.5 | 5.72±0.5 |
| 4,98±0,5 | 4,99±0,4 | 4,87±0,5 | 4,93±0,4 | 5,96±0,6 | |
| Лизоцимная | 3,3±0,1 | 3,5+0,2 | 3,6+0,1 | 3,4±0,3 | 3,5±0,3 |
| активность, % | 4,2±0,2 | 4,4±0,2 | 4,8±0,2 | 4,4±0,2 | 2,0±0,2 |
| Бактерицидная | 64,4±1,7 | 64,0±1,6 | 63,0±1,5 | 64,5±1,8 | 65,5±1,7 |
| активность, % | 73,0±1,7 | 74,2±1,7 | 79,7±1,8 | 79,0±1,9 | 60,7±1,6 |
| Фагоцитарная активность | 45,7±1,8 | 45,0±1,4 | 43,5±1,3 | 44,0±1,5 | 45,8±1,5 |
| нейтрофилов, % | 49,0±0,2 | 51,0±1,5 | 52,2±1,5 | 51.5±1,6 | 38,9±1,4 |
| Примечание: в числителе - показатели за 20-25 дней до отела; в знаменателе - показатели на 2-3 день после отела |
Полученные данные подтвердили стимулирующее действие янтарной кислоты и смеси янтарной и аскорбиновой кислот в соотношении 1:1 на показатели иммунобиохимического гомеостаза, которое было наиболее выраженным при применении смеси янтарной и аскорбиновой кислот в соотношении 1:1, причем оно оказалось дозозависимым. Так, средняя доза (1,0 г на голову в сутки) обеспечивала максимальные показатели иммунной активности. Максимальная доза (1,5 г на голову в сутки) обеспечивала показатели выше минимальной (0,5 г на голову в сутки), но ниже или на уровне средней дозы, что делало повышение дозы нецелесообразным. Результаты, полученные при испытании граничных значений доз, позволили рекомендовать дозу 1,0 г на голову в сутки как оптимальную для применения на практике.
Пример 2. Профилактическую эффективность смеси янтарной и аскорбиновой кислот в соотношении 1:1 в сравнении с известными способами изучали на 4 группах сухостойных коров, сформированных по принципу аналогов, из них одна - контрольная. Все животные содержались в одинаковых условиях на рационах, сбалансированных по питательным, витаминным и минеральным веществам. В 1-й группе коровам за 20-25 дней до отела вводили внутримышечно однократно 0,5% раствор селенита натрия (способ-аналог), во 2-й группе коровам за 20-25 дней до и в первые 20 дней после отела вводили внутримышечно тетравит один раз в 10 дней (базовый способ), в 3-й группе коровам в течение 20-25 дней до и 20-25 дней после отела давали внутрь смесь янтарной и аскорбиновой кислот в соотношении 1:1 в дозе 1,0 г на голову в сутки. За животными вели наблюдения, отмечали характер течения предродового, родов и послеродового периодов, проводили клинико-гинекологические обследования коров, учитывали количество заболевших животных, сроки инволюции репродуктивных органов и осеменения. Состояние иммунобиохимического гомеостаза определяли, как в примере 1. Результаты представлены в таблицах 3, 4.
| Таблица 3. | ||||
| Состояние иммунобиохимического гомеостаза | ||||
| Показатели | Группы коров | |||
| 1-я | 2-я | 3-я | 4-я | |
| Примененный способ | Аналог: натрия селенит внутримышечно | Базовый: тетравит внутримышечно | Заявленный: смесь янтарной и аскорбиновой кислот (1:1) внутрь | Без препаратов |
| Гемоглобин, г/л | 93,7±2,0 | 94,0±2,2 | 95,0±2,5 | 95,7±3,0 |
| 112,0±2,5 | 101,0±2,0 | 119,0±2,0 | 98,0±2,0 | |
| Эритроциты, | 5,4±0,25 | 5,2±0,3 | 5,2±0,25 | 5,2±0,24 |
| 1012/л | 5,9±0,3 | 5,7±0,2 | 6,0±0,2 | 5,3±0,15 |
| Общий белок | 72,0±1,3 | 71,0±1,2 | 70,7±1,1 | 72,2±1,5 |
| сыворотки, г/л | 76,7±1,4 | 75,2±1,5 | 79,0±1,2 | 73,0±1,1 |
| Гамма-глобулины, | 23.1±1.6 | 22.8±1.3 | 23.0±2.0 | 23,9±1.7 |
| % | 28,0±1,3 | 26,2±1,5 | 29,9±1,3 | 21,0±1,4 |
| Глюкоза, ммоль/л | 2,03±0,3 | 2.20±0.4 | 2,09±0,2 | 2,15±0,3 |
| 2,45±0,2 | 2,87±0.3 | 2,64±0,2 | 1,13±0,4 | |
| Лизоцимная | 3,3±0,1 | 3,4±0,3 | 3,6±0,1 | 3,5±0,3 |
| активность, % | 4,2±0,2 | 4,0±0.1 | 4,8±0.2 | 2,0±0,2 |
| Бактерицидная | 64,4±1,7 | 66,3±1,6 | 63,0±1,5 | 65,5±1,7 |
| активность, % | 73,0±1,7 | 75,5±1,7 | 79,7±1,8 | 60,7±1,6 |
| Фагоцитарная | 45,7±1,8 | 44.8±1.4 | 43.5±1.3 | 45,8±1.5 |
| активность нейтрофилов, % | 49,0±0,2 | 49,2±1,5 | 52,2±1,5 | 38,9±1,4 |
| Диеновые конъюгаты, | 0,24±0,02 | 0,24±0,02 | 0,23±0,03 | 0,22±0,03 |
| ед. А/мл | 0,28±0,02 | 0,32±0,03 | 0,24±0,01 | 0,36±0,04 |
| Кетодиены, ед. А/мл | 0.055±0.001 | 0.055±0.001 | 0.056±0.001 | 0,056±0,001 |
| 0,065±0,002 | 0,065±0,002 | 0,061±0,002 | 0,098±0,001 | |
| Малоновый | 2,72±0,03 | 2,73±0,002 | 2,74±0,02 | 2,72±0,03 |
| диальдегид, мкмоль/л | 2,76±0,02 | 3,00±0,03 | 2,76±0,02 | 3,60±0,03 |
| Таблица 4. | ||||
| Сравнительная эффективность способов профилактики послеродового эндометрита коров | ||||
| Показатели | Группы коров | |||
| 1-я | 2-я | 3-я | 4-я | |
| Аналог: натрия селенит | Базовый: тетравит | Заявленный: смесь янтарной и аскорбиновой кислот (1:1) | Без препаратов | |
| Количество коров, подвергнутых профилактической обработке, гол. | 32 | 27 | 33 | 10 |
| Заболело послеродовым эндометритом, гол. | 11 | 16 | 3 | 10 |
| Профилактическая эффективность, % | 65,6 | 40,7 | 90,9 | 0 |
| Сроки инволюции половых органов, дни | 26,7±2,5 | 34,2±4,5 | 23,3±1,9 | 49,7±5,0 |
| Период от отела до осеменения, дни | 64,4±3,2 | 72,2±3,7 | 48,2±2,5 | 93,5±8,5 |
Иммунобиохимический статус коров за 20-25 дней до отела характеризовался низкими показателями гемоглобина (на 3,3-5,6% ниже уровня нижней границы физиологической нормы), эритроцитов (на 10-13% ниже уровня нижней границы физиологической нормы), ОБС (на уровне нижней границы физиологической нормы), гамма-глобулинов (на 4,4-8,8% ниже уровня нижней границы физиологической нормы), глюкозы (на уровне нижней границы физиологической нормы), лизоцимной, бактерицидной активности сыворотки крови и фагоцитарной активности нейтрофилов крови (на уровне нижней границы физиологической нормы) на фоне высокого уровня продуктов ПОЛ: диеновых конъюгатов (в 1,59-1,74 раза выше физиологической нормы), кетодиенов (в 1,08-1,1 раза выше физиологической нормы), малонового диальдегида (в 4,59-4,64 раза выше физиологической нормы). После отела у коров контрольной группы отмечалось дальнейшее снижение показателей иммунологической реактивности (лизоцимная активность сыворотки крови понизилась на 42,9%, бактерицидная активность сыворотки крови - на 7,3%, фагоцитарная активность нейтрофилов крови - на 15%) при более выраженном, чем в опытных группах, повышении показателей продуктов ПОЛ. Так, уровень диеновых конъюгатов повысился на 63,6% по сравнению с 16,7% (способ-аналог), 33,3% (базовый способ) и 4,4% (заявленный способ), уровень кетодиенов - на 75,0% по сравнению с 18,2% (способ-аналог), 54,2% (базовый способ), 8,9% (заявленный способ), уровень малонового диальдегида - на 32,4% по сравнению с 1,5% (способ-аналог), 9,9% (базовый способ) и 0,7% (заявленный способ). Во всех опытных группах проявилась тенденция к нормализации иммунобиохимических показателей. Более ярко выраженные изменения нормализующего характера установлены в третьей опытной группе (заявленный способ). Так, лизоцимная активность сыворотки крови повысилась на 33,3% по сравнению с 21,9% (способ-аналог) и 17,7% (базовый способ), бактерицидная активность сыворотки крови - на 26,5% по сравнению с 14,8% (способ-аналог) и 13,9% (базовый способ) и фагоцитарная активность нейтрофилов крови - на 20% по сравнению с 8% (способ-аналог) и 9,8% (базовый способ) (таблица 3). Эффективность профилактики послеродового эндометрита у коров в третьей группе составила 90,9% по сравнению с 65,6% в первой группе (способ-аналог), 40,7% во второй группе (базовый способ) и 0% в четвертой группе (таблица 4).
Результаты проведенных исследований подтвердили, что при реализации заявленной совокупности существенных признаков достигается технический результат - иммунокоррекция у сухостойных коров, проявляющаяся нормализацией основных показателей иммунобиохимического гомеостаза, включая показатели естественной резистентности, что обеспечивает нормальное течение родов и послеродового периода.
Источники информации
1. Притулин П.И., Калмыкова Т.П. Инфекционные проблемы иммунодефицита животных //Вестник сельскохозяйственной науки. - 1989. - №2. - С.95-100.
2. Игнатов П.Е. Иммунитет и инфекция. Возможности управления. - М.: Время, 2002. - 350 с.
3. Теория и практика использования биологически активных веществ в животноводстве, Киров, 6-7 октября 1998 г.: Тез. докл. науч. конф. Киров, 1998. - 98 с.
4. Соколов В.Д. Фармакология, 2-е изд., исправленное и дополненное. М.: Колос, 2000. - С.360-361.
5. RU 2201237 C2, 27.03.2003.
6. RU 2212888 C2, 07.09.2003.
1. Способ иммунокоррекции у коров, включающий введение смеси янтарной и аскорбиновой кислот в соотношении 1:1 в дозе от 0,5 до 1,5 г на голову в сутки per os в течение 20-25 дней до и 20-25 дней после отела.
2. Способ по п.1, отличающийся тем, что янтарную и аскорбиновую кислоты вводят в дозе 1,0 г на голову в сутки.
