Способ получения антибактериальной и антиоксидантной фракции из семян облепихи (hippophae rhamnoides l.)
Изобретение относится фармацевтической промышленности, в частности к способу получения антибактериальной и антиоксидантной фракции из семян облепихи (Hippophae rhamnoides L.). Способ получения антибактериальной и антиоксидантной фракции из семян облепихи (Hippophae rhamnoides L.) включает промывку семян облепихи (Hippophae rhamnoides L.) водой, сушку промытых семян, измельчение высушенных семян в порошок до определенного размера частиц, экстракцию измельченных высушенных семян метанолом, фильтрацию полученного экстракта для его отделения от частиц, дистилляцию отфильтрованного экстракта относительно температуры кипения в дистилляционной установке для регенерации растворителя, концентрирование дистиллированного экстракта в испарителе под вакуумом, сушку концентрированного сырого экстракта с получением фракции с антибактериальной или антиоксидантной активностью. Вышеописанный способ позволяет получить фракции с повышенной антибактериальной и антиоксидантной активностью соответственно. 8 з.п. ф-лы.
Настоящее изобретение относится к одностадийному способу получения антибактериальной и антиокислительной фракции из нетрадиционных частей облепихи (Hippophae rhamnoides L.).
В течение десятилетий порча пищевых продуктов из-за бактериального и грибкового загрязнений вызывает большую озабоченность и приводит к 50% потерь пищевых продуктов в мире (El-Ghaouth A. Journal of Industrial Microbiology and Biotechnology 1997; 19:160). С ростом информированности и сообщений о вредном действии синтетических химических веществ, содержащихся в пищевых продуктах, повышается потребность в создании нетоксичных консервантов. Сообщалось, что многие соединения, присутствующие в ягодах, являются биологически активными веществами с антибактериальными, лекарственными, антиокислительными, а также биорегуляторными свойствами такими, как активность в регенерации тканей (Xu Mingyu et al. 1993. A brief report on antibacterial experiment using seabuckthorn. "Seabuckthorn", 6: 28-29). Сообщалось о том, что ягоды облепихи обладают антибактериальной, антиокислительной, противовоспалительной, противоаллергической и болеутоляющей активностью (Benevente-Garcia O, Castillo J, Martin FR, Ortundo A, Del Rio JA. Journal of Agriculture and Food Chemistry 1997; 45: 4505). Облепиха является широко распространенным растением, принадлежащим к семейству Elaeagnaceae и роду Hippophae. Это растение используется в традиционной Тибетской и Монгольской медицине (Lu Rongsen, 1992. Seabuckthorn: A multiple plant species for fragile mountains. International center for integrated mountain development, ICIMOD occasional paper No. 20, Kathmandu, Nepal). Облепиха известна как удивительное растение, на двухлетних колючих побегах которого содержатся плоды, имеющие окраску от желтовато-оранжевой до красной. Плоды типа ягод развиваются из завязи или чашечки, соединенной с завязью. Ягоды содержат много биоактивных веществ и могут использоваться для лечения некоторых заболеваний, например сердечно-сосудистых болезней, рака, острой горной болезни и т.п. Описано более 300 различных медицинских препаратов, содержащих облепиху (Singh, 2001. International workshop on seabuckthorn, 18-21 Feb, New Delhi).
Обзор литературы показал, что отсутствуют сообщения о выделении антибактериальной и антиокислительной фракции из семян облепихи (Hippophae rhamnoides L.).
Основная задача настоящего изобретения состоит в разработке одностадийного способа получения биоактивной фракции, обладающей антибактериальной и антиокислительной активностью. Авторы изобретения разработали способ получения биоактивной фракции из нетрадиционных частей облепихи (Hippophae rhamnoides L.), которым до настоящего времени не придавалось коммерческого значения.
Другая задача изобретения заключается в разработке технологии получения антибактериальной и антиокислительной фракции из нетрадиционных частей облепихи (Hippophae rhamnoides L.), которая может служить потенциальным природным консервантом.
Еще одна задача настоящего изобретения состоит в разработке эффективного способа крупномасштабного производства антибактериальной и антиокислительной фракции из нетрадиционных частей облепихи (Hippophae rhamnoides L.).
Другая задача настоящего изобретения заключается в разработке одностадийного способа получения антибактериальной и антиокислительной фракции из нетрадиционных частей облепихи (Hippophae rhamnoides L.).
Еще одна задача изобретения состоит в применении простых экстракционных методов и способных к повторному использованию растворителей, при разработке эффективного способа получения антибактериальной и антиокислительной фракции из облепихи.
Настоящее изобретение предусматривает одностадийный способ получения антибактериальной и антиокислительной фракции, заключающийся в промывании семян облепихи (Hippophae rhamnoides L.) водопроводной водой для удаления земляного или постороннего материала с последующей сушкой при 40-50°С в течение 3-4 часов; измельчении семян облепихи (Hippophae rhamnoides L.) до порошкообразного состояния с размером частиц 60-80 меш; экстракции указанного материала растворителями леотропной (leotropic) серии (в порядке повышения эффекта элюирования) с последующей экстракцией метанолом в экстракторе Сокслета при температуре 55-60°С в течение 8-9 часов; фильтрации полученного экстракта через бумажный фильтр Whatman no. 41 с получением экстракта, не содержащего частиц; перегонке полученного экстракта в дистилляционной установке при 60-65°С для регенерации 80-90% растворителя, который рециркулируют в экстрактор Сокслета для дополнительной экстракции; концентрации не содержащего частиц экстракта в вакууме при давлении в испарителе 200-250 мбар и температуре 45-50°С с получением сырого метанольного экстракта; сушке концентрированного сырого экстракта вымораживанием для обеспечения антиокислительной активности или в вакуумной печи при давлении 174-200 мбар, температуре 40-50°С в течение 8-9 часов для обеспечения антибактериальной активности.
Высушенный продукт, полученный таким способом, обладает антибактериальной активностью 200-350, выраженной в минимальной ингибиторной концентрации (мкг/мл) против различных грамположительных и грамотрицательных бактерий, и антиокислительной активностью 40,379-93,473, выраженной в % улавливания свободных радикалов при концентрации акцептора 10-59 мкг/мл, определенной с помощью DPPH метода.
Согласно варианту выполнения скорость вращения колбы с метанольным экстрактом семян облепихи в испарителе составляет 80-100 об/мин при вакууме 200-250 мбар и температуре 60-65°С.
В соответствии с другим вариантом настоящего изобретения выход метанольного экстракта составляет 14,264 г/100 г после сушки вымораживанием и 14,4858 г/100 г после вакуумной сушки.
Способ по изобретению включает следующие стадии:
i. Промывку семян облепихи (Hippophae rhamnoides L.) водопроводной водой для удаления земляного и постороннего материала с последующей сушкой при 40-50°С в течение 3-4 часов.
ii. Измельчение семян облепихи (Hippophae rhamnoides L.) в порошок до размера частиц 60-80 меш.
iii. Экстракцию указанного выше материала растворителями леотропной серии (в порядке увеличения эффекта элюирования) с последующей экстракцией метанолом в экстракторе Сокслета при температуре 55-60°С в течение 8-9 часов.
iv. Фильтрацию полученного экстракта через бумажный фильтр Whatman no. 41 с получением экстракта, не содержащего частиц.
v. Дистилляцию полученного экстракта при 60-65°С с использованием дистилляционной установки для регенерации 80-90% растворителя, который возвращают в экстрактор Сокслета для дополнительной экстракции.
vi. Концентрацию не содержащего частиц экстракта в вакууме при давлении в испарителе 200-250 мбар и температуре 45-50°С с получением сырого метанольного экстракта.
vii. Сушку полученного концентрированного сырого экстракта вымораживанием для обеспечения антиокислительной активности или в вакуумной печи при давлении 175-200 мбар и 40-50°С в течение 8-9 часов для обеспечения антибактериальной активности.
Полученный таким образом высушенный продукт обладает антибактериальной активностью 200-350, выраженной в минимальной ингибиторной концентрации (мкг/мл) против различных грамположительных и грамотрицательных бактерий, и антиокислительной активностью 40,379-93,473, выраженной в % улавливания свободных радикалов при концентрации акцептора 10-59 мкг/мл, определенной с помощью DPPH метода.
Получение антибактериальных фракций из нетрадиционных частей облепихи (Hippophae rhamnoides L.) осуществляли в соответствии со следующей технологической схемой:
Семена облепихи (Hippophae rhamnoides L.)
↓
Промывка и сушка (40-50°С в течение 3-4 часов)
↓
Измельчение семян в порошок до размера частиц 60-80 меш
↓
Экстракция метанолом в экстракторе Сокслета при 60-65°С в течение 8-9 часов (Экстракция серией леотропных растворителей в порядке увеличения эффекта элюирования)
↓
Экстракция метанолом
↓
Фильтрация через фильтр Whatman no. 41
↓
Дистилляция для регенерации растворителя при 60-65°С
↓
Упаривание при пониженном давлении в испарителе 200-250 мбар
↓
Сушка вымораживанием или вакуумная сушка при 40-50°С и давлении в вакуумной печи 175-200 мбар
↓
Выход антибактериальной и антиокислительной фракций (14,4858- 14,264%)
Новизна способа заключается в следующем:
1. Это - первое сообщение о получении антибактериальной и антиокислительной фракции из нетрадиционных частей облепихи (Hippophae rhamnoides L.).
2. Настоящее изобретение представляет собой одностадийный процесс получения биоактивной фракции из нетрадиционных частей облепихи (Hippophae rhamnoides L.).
Следующие примеры приведены в целях иллюстрации и не ограничивают область настоящего изобретения. Специалист в данной области может осуществить различные вариации и изменения, не нарушающие область изобретения. Если не указано особо, то все части и проценты даны в массовом выражении.
Пример 1
100 г семян облепихи (Hippophae rhamnoides L.) промывали и сушили в вакуумной печи (давление 175 мбар) в течение 4 часов при 40°С, после чего материал измельчали в порошок в дробилке с перемешиванием со скоростью 18000 об/мин до образования частиц размером 60 меш. В течение 8 часов порошок экстрагировали 200 мл метанола при 60°С в экстракторе Сокслета. Метанольный экстракт фильтровали с использованием бумажного фильтра Whatman no. 41 с получением прозрачного экстракта, который перегоняли при 60°С с использованием дистилляционного аппарата для регенерации 160 мл растворителя. Сырой экстракт концентрировали в вакууме при давлении 200 мбар, при этом скорость вращения колбы в испарителе поддерживали на значении 100 об/мин в течение 2 часов, после чего экстракт сушили вымораживанием в течение 6 часов для определения антиокислительной активности и в течение 9 часов сушили в вакуумной печи при давлении 175 мбар и температуре 40°С для обеспечения антибактериальной активности. Выход вымороженного метанольного экстракта с антиокислительной активностью и высушенного в вакууме метанольного экстракта с антибактериальной активностью составил 14,264 г и 14,4558 г соответственно. Способность каждого антиоксиданта к захватыванию свободных радикалов оценивали с использованием стабильного свободного радикала, DPPH (1,1-дифенил-2-пикрилгидразил) в соответствии со способом Blois (Blois, 1958. Antioxidant determination by the use of stable free radical. Nature, 181: 1199-1200). Реакционная смесь содержала 0,5 мл 0,5 мМ раствора DPPH и 0,1 мл диметилсульфоксида, содержащего различные концентрации антиокислительного экстракта (10-50 мкг). Общий объем реакционной смеси доводили до 1,0 мл добавлением 100 мМ Трис-HCI буфера (рН 7,4). После протекания в течение 20 минут темновой реакции при комнатной температуре проводили количественное определение способности каждого антиоксиданта в результате обесцвечивания раствора при 517 нм. Способность к захвату радикалов из DPPH (%) при концентрации 10 мкг/мл составила 40,379. Анализ на антибактериальную активность экстракта облепихи (Hippophae rhamnoides L.) против Bacillus cereus проводили методом выливания на пластины по методике Negi et al. (J. Agricultural and Food Chemistry 47, 4297-4300, 1999). В колбы, содержащие 20 мл расплавленного питательного агара, добавляли различные концентрации испытуемого материала в пропиленгликоле. Эквивалентные количества пропиленгликоля использовали в качестве контрольных образцов. В асептических условиях в колбы инокулировали 100 мкл (около 103 кое/мл) культуры. После этого среду выливали на стерилизованные чашки Петри квадруплетом и инкубировали в течение 24 часов при 37°С для роста. Приведенное значение минимальной ингибиторной концентрации (MIC) представляет собой низшую концентрацию соединения, которая способна ингибировать полной рост испытуемой бактерии. Значение MIC семенного экстракта облепихи (Hippophae rhamnoides L.) по отношению к Bacillus cereus составило 200 м.д.
Пример 2
100 г семян облепихи (Hippophae rhamnoides L.) промывали и сушили в вакуумной печи давление 180 мбар) в течение 3 часов при 40°С, после чего материал измельчали в порошок в дробилке с перемешиванием со скоростью 18000 об/мин до образования частиц размером 70 меш. В течение 9 часов порошок экстрагировали 200 мл метанола при 55°С в экстракторе Сокслета. Метанольный экстракт фильтровали с использованием бумажного фильтра Whatman no. 41 с получением прозрачного экстракта, который перегоняли при 60°С с использованием дистилляционного аппарата для регенерации 170 мл растворителя. Сырой экстракт концентрировали в вакууме при давлении 250 мбар, при этом скорость вращения колбы в испарителе поддерживали на значении 100 об/мин в течение 2 часов, после чего экстракт сушили вымораживанием в течение 6 часов и в течение 8 часов сушили в вакуумной печи при давлении 200 мбар и температуре 50°С. Выход вымороженного метанольного экстракта с антиокислительной активностью и высушенного в вакууме метанольного экстракта с антибактериальной активностью составил 14,264 г и 14,4558 г соответственно. Способность каждого антиоксиданта к захватыванию свободных радикалов оценивали с использованием стабильного свободного радикала, DPPH (1,1-дифенил-2-пикрилгидразил) в соответствии со способом Blois (Blois, 1958. Antioxidant determination by the use of stable free radical. Nature, 181: 1199-1200). Реакционная смесь содержала 0,5 мл 0,5 мМ раствора DPPH и 0,1 мл диметилсульфоксида, содержащего различные концентрации антиокислительного экстракта (10-50 мкг). Общий объем реакционной смеси доводили до 1,0 мл добавлением 100 мМ Трис-HCI буфера (рН 7,4). После протекания темновой реакции в течение 20 минут при комнатной температуре проводили количественное определение способности каждого антиоксиданта в результате обесцвечивания при 517 нм. Способность к захвату радикалов из DPPH (%) при концентрации 20 мкг/мл составила 71,2277. Анализ на антибактериальную активность экстракта облепихи (Hippophae rhamnoides L.) против Bacillus cereus проводили методом выливания на пластины по методике Negi et al. (J. Agricultural and Food Chemistry 47, 4297-4300, 1999). В колбы, содержащие 20 мл расплавленного питательного агара, добавляли различные концентрации испытуемого материала в пропиленгликоле. Эквивалентные количества пропиленгликоля использовали в качестве контрольных образцов. В асептических условиях в колбы инокулировали 100 мкл (около 103 кое/мл) культуры. После этого среду выливали на стерилизованные чашки Петри квадруплетом и инкубировали в течение 20 часов при 37°С для роста. Приведенное значение минимальной ингибиторной концентрации (MIC) представляет собой низшую концентрацию соединения, которая способна ингибировать полной рост испытуемой бактерии. Значение MIC семенного экстракта облепихи (Hippophae rhamnoides L.) по отношению к Bacillus subtilis составило 300 м.д.
Пример 3
100 г семян облепихи (Hippophae rhamnoides L.) промывали и сушили в вакуумной печи (давление 200 мбар) в течение 3 часов при 45°С, после чего материал измельчали в порошок в дробилке с перемешиванием со скоростью 18000 об/мин до образования частиц размером 80 меш. В течение 8 часов порошок экстрагировали 200 мл метанола при 60°С в экстракторе Сокслета. Метанольный экстракт фильтровали с использованием бумажного фильтра Whatman no. 41 с получением прозрачного экстракта, который перегоняли при 60°С с использованием дистилляционного аппарата для регенерации 175 мл растворителя. Сырой экстракт концентрировали в вакууме при давлении 200-250 мбар, при этом скорость вращения колбы в испарителе поддерживали на значении 100 об/мин в течение 2 часов, после чего экстракт сушили вымораживанием в течение 6 часов и в течение 8 часов сушили в вакуумной печи при давлении 175-200 мбар и температуре 40°С. Выход вымороженного метанольного экстракта с антиокислительной активностью и высушенного в вакууме метанольного экстракта с антибактериальной активностью составил 14,264 г и 14,4558 г соответственно. Способность каждого антиоксиданта к захватыванию свободных радикалов оценивали с использованием стабильного свободного радикала, DPPH (1,1-дифенил-2-пикрилгидразил) в соответствии со способом Blois (Blois, 1958. Antioxidant determination by the use of stable free radical. Nature, 181: 1199-1200). Реакционная смесь содержала 0,5 мл 0,5 мМ раствора DPPH и 0,1 мл диметилсульфоксида, содержащего различные концентрации антиокислительного экстракта (10-50 мкг). Общий объем реакционной смеси доводили до 1,0 мл добавлением 100 мМ Трис-HCI буфера (рН 7,4). После протекания темновой реакции в течение 20 минут при комнатной температуре проводили количественное определение способности каждого антиоксиданта в результате обесцвечивания при 517 нм. Способность к захвату радикалов из DPPH (%) при концентрации 30 мкг/мл составила 85,1777. Анализ на антибактериальную активность экстракта облепихи (Hippophae rhamnoides L.) против Bacillus cereus проводили методом выливания на пластины по методике Negi et al. (J. Agricultural and Food Chemistry 47, 4297-4300, 1999). В колбы, содержащие 20 мл расплавленного питательного агара, добавляли различные концентрации испытуемого материала в пропиленгликоле. Эквивалентные количества пропиленгликоля использовали в качестве контрольных образцов. В асептических условиях в колбы инокулировали 100 мкл (около 103 кое/мл) культуры. После этого среду выливали на стерилизованные чашки Петри квадруплетом и инкубировали в течение 22 часов при 37°С для роста. Приведенное значение минимальной ингибиторной концентрации (MIC) представляет собой низшую концентрацию соединения, которая способна ингибировать полной рост испытуемой бактерии. Значение MIC семенного экстракта облепихи (Hippophae rhamnoides L.) по отношению к Bacillus coagulans составило 300 м.д.
Пример 4
100 г семян облепихи (Hippophae rhamnoides L.) промывали и сушили в вакуумной печи (давление 200 мбар) в течение 3 часов при 50°С, после чего материал измельчали в порошок в дробилке с перемешиванием со скоростью 18000 об/мин до образования частиц размером 80 меш. В течение 8 часов порошок экстрагировали 200 мл метанола при 60°С в экстракторе Сокслета. Метанольный экстракт фильтровали с использованием бумажного фильтра Whatman no. 41 с получением прозрачного экстракта, который перегоняли при 60°С с использованием дистилляционного аппарата для регенерации 175 мл растворителя. Сырой экстракт концентрировали в вакууме при давлении 250 мбар, при этом скорость вращения колбы в испарителе поддерживали на значении 100 об/мин в течение 2 часов, после чего экстракт сушили вымораживанием в течение 6 часов и в течение 8 часов сушили в вакуумной печи при давлении 200 мбар и температуре 40°С. Выход вымороженного метанольного экстракта с антиокислительной активностью и высушенного в вакууме метанольного экстракта с антибактериальной активностью составил 14,264 г и 14,4558 г соответственно. Способность каждого антиоксиданта к захватыванию свободных радикалов оценивали с использованием стабильного свободного радикала, DPPH (1,1-дифенил-2-пикрилгидразил) в соответствии со способом Blois (Blois, 1958. Antioxidant determination by the use of stable free radical. Nature, 181: 1199-1200). Реакционная смесь содержала 0,5 мл 0,5 мМ раствора DPPH и 0,1 мл диметилсульфоксида, содержащего различные концентрации антиокислительного экстракта (10-50 мкг). Общий объем реакционной смеси доводили до 1,0 мл добавлением 100 мМ Трис-HCI буфера (рН 7,4). После протекания темновой реакции в течение 20 минут при комнатной температуре проводили количественное определение способности каждого антиоксиданта в результате обесцвечивания при 517 нм. Способность к захвату радикалов из DPPH (%) при концентрации 40 мкг/мл составила 92,2185. Анализ на антибактериальную активность экстракта облепихи (Hippophae rhamnoides L.) против Bacillus cereus проводили методом выливания на пластины по методике Negi et al. (J. Agricultural and Food Chemistry 47, 4297-4300, 1999). В колбы, содержащие 20 мл расплавленного питательного агара, добавляли различные концентрации испытуемого материала в пропиленгликоле. Эквивалентные количества пропиленгликоля использовали в качестве контрольных образцов. В асептических условиях в колбы инокулировали 100 мкл (около 103 кое/мл) культуры. После этого среду выливали на стерилизованные чашки Петри квадруплетом и инкубировали в течение 20 часов при 37°С для роста. Приведенное значение минимальной ингибиторной концентрации (MIC) представляет собой низшую концентрацию соединения, которая способна ингибировать полной рост испытуемой бактерии. Значение MIC семенного экстракта облепихи (Hippophae rhamnoides L.) по отношению к Pseudomonas aeruginosa составило 300 м.д.
Пример 5
100 г семян облепихи (Hippophae rhamnoides L.) промывали и сушили в вакуумной печи (давление 200 мбар) в течение 3 часов при 50°С, после чего материал измельчали в порошок в дробилке с перемешиванием со скоростью 18000 об/мин до образования частиц размером 60 меш. В течение 8 часов порошок экстрагировали 200 мл метанола при 60°С в экстракторе Сокслета. Метанольный экстракт фильтровали с использованием бумажного фильтра Whatman no. 41 с получением прозрачного экстракта, который перегоняли при 65°С с использованием дистилляционного аппарата для регенерации 180 мл растворителя. Сырой экстракт концентрировали в вакууме при давлении 250 мбар, при этом скорость вращения колбы в испарителе поддерживали на значении 100 об/мин в течение 2 часов, после чего экстракт сушили вымораживанием в течение 6 часов и в течение 8 часов сушили в вакуумной печи при давлении 200 мбар и температуре 50°С. Выход вымороженного метанольного экстракта с антиокислительной активностью и высушенного в вакууме метанольного экстракта с антибактериальной активностью составил 14,264 г и 14,4558 г соответственно. Способность каждого антиоксиданта к захватыванию свободных радикалов оценивали с использованием стабильного свободного радикала, DPPH (1,1-дифенил-2-пикрилгидразил) в соответствии со способом Blois (Blois, 1958. Antioxidant determination by the use of stable free radical. Nature, 181: 1199-1200). Реакционная смесь содержала 0,5 мл 0,5 мМ раствора DPPH и 0,1 мл диметилсульфоксида, содержащего различные концентрации антиокислительного экстракта (10-50 мкг). Общий объем реакционной смеси доводили до 1,0 мл добавлением 100 мМ Трис-HCI буфера (рН 7,4). После протекания темновой реакции в течение 20 минут при комнатной температуре проводили количественное определение способности каждого антиоксиданта в результате обесцвечивания при 517 нм. Способность к захвату радикалов из DPPH (%) при концентрации 50 мкг/мл составила 93,473. Анализ на антибактериальную активность экстракта облепихи (Hippophae rhamnoides L.) против Bacillus cereus проводили методом выливания на пластины по методике Negi et al. (J. Agricultural and Food Chemistry 47, 4297-4300, 1999). В колбы, содержащие 20 мл расплавленного питательного агара, добавляли различные концентрации испытуемого материала в пропиленгликоле. Эквивалентные количества пропиленгликоля использовали в качестве контрольных образцов. В асептических условиях в колбы инокулировали 100 мкл (около 103 кое/мл) культуры. После этого среду выливали на стерилизованные чашки Петри квадруплетом и инкубировали в течение 20 часов при 37°С для роста. Приведенное значение минимальной ингибиторной концентрации (MIC) представляет собой низшую концентрацию соединения, которая способна ингибировать полной рост испытуемой бактерии. Значение MIC семенного экстракта облепихи (Hippophae rhamnoides L.) по отношению к Listeria monocytogenes составило 300 м.д.
Пример 6
100 г семян облепихи (Hippophae rhamnoides L.) промывали и сушили в вакуумной печи (давление 200 мбар) в течение 3 часов при 40°С, после чего материал измельчали в порошок в дробилке с перемешиванием со скоростью 18000 об/мин до образования частиц размером 60 меш. В течение 8 часов порошок экстрагировали 200 мл метанола при 60°С в экстракторе Сокслета. Метанольный экстракт фильтровали с использованием бумажного фильтра Whatman no. 41 для получения прозрачного экстракта, который перегоняли при 60°С с использованием дистилляционного аппарата для регенерации 180 мл растворителя. Сырой экстракт концентрировали в вакууме при давлении 200 мбар, при этом скорость вращения колбы в испарителе поддерживали на значении 100 об/мин в течение 2 часов, после чего экстракт сушили вымораживанием в течение 6 часов и в течение 9 часов сушили в вакуумной печи при давлении 175 мбар и температуре 40°С. Выход вымороженного метанольного экстракта с антиокислительной активностью и высушенного в вакууме метанольного экстракта с антибактериальной активностью составил 14,264 г и 14,4558 г соответственно. Анализ на антибактериальную активность экстракта облепихи (Hippophae rhamnoides L.) против Bacillus cereus проводили методом выливания на пластины по методике Negi et al. (J. Agricultural and Food Chemistry 47, 4297-4300, 1999). В колбы, содержащие 20 мл расплавленного питательного агара, добавляли различные концентрации испытуемого материала в пропиленгликоле. Эквивалентные количества пропиленгликоля использовали в качестве контрольных образцов. В асептических условиях в колбы инокулировали 100 мкл (около 103 кое/мл) культуры. После этого среду выливали на стерилизованные чашки Петри квадруплетом и инкубировали в течение 24 часов при 37°С для роста. Приведенное значение минимальной ингибиторной концентрации (MIC) представляет собой низшую концентрацию соединения, которая способна ингибировать полной рост испытуемой бактерии. Значение MIC семенного экстракта облепихи (Hippophae rhamnoides L.) по отношению к Yersinia enterocolitica составило 350 м.д.
Преимущества рассматриваемого способа состоят в следующем:
1. Простота способа и возможность регенерации используемых растворителей для их последующего использования.
2. В настоящее время данное сырье (семена облепихи) не представляет коммерческой ценности.
1. Способ получения антибактериальной и антиоксидантной фракции из семян облепихи (Hippophae rhamnoides L.), включающий промывку семян облепихи (Hippophae rhamnoides L.) водой, сушку промытых семян, измельчение высушенных семян в порошок до размера частиц 60-80 меш, экстракцию измельченных высушенных семян метанолом, фильтрацию полученного экстракта для его отделения от частиц, дистилляцию отфильтрованного экстракта относительно температуры кипения в дистилляционной установке для регенерации растворителя, концентрированно дистиллированного экстракта в испарителе под вакуумом, и сушку концентрированного сырого экстракта с получением фракции с антибактериальной или антиоксидантной активностью.
2. Способ по п.1, в котором промытые семена облепихи сушат при 40-50°С в течение 3-4 ч.
3. Способ по п.1, в котором экстракцию измельченных семян проводят в экстракторе Сокслета при температуре 55-60°С в течение 8-9 ч.
4. Способ по п.1, в котором фильтрацию экстракта осуществляют с использованием бумажного фильтра Whatman. no.41.
5. Способ по п.1, в котором дистилляцию проводят при 60-65°С для регенерации 80-90% растворителя.
6. Способ по п.5, в котором регенерированный растворитель рециркулируют в экстрактор Сокслета для дополнительной экстракции.
7. Способ по п.1, в котором отфильтрованный экстракт концентрируют при давлении в испарителе 200-250 мбар и температуре 45-50°С.
8. Способ по любому из пп.1-7, в котором сушку концентрированного сырого экстракта осуществляют вымораживанием с получением фракции, обладающей антиоксидантной активностью.
9. Способ по любому из пп.1-7, в котором сушку концентрированного сырого экстракта проводят в вакуумной печи при давлении 175-200 мбар и 40-50°С в течение 8-9 ч с получением фракции, обладающей антибактериальной активностью.
