Изолированная гомозиготная стволовая клетка (варианты), способ ее получения (варианты), способ получения требуемой клетки-родоначальника, дифференцированной клетки, группы дифференцированных клеток или типа ткани

Изобретение относится к плюрипотентным гомозиготным стволовым клеткам. Предложены гомозиготная стволовая (HS) клетка, а также способы и материалы для ее получения. Изобретение также обеспечивает способы дифференцировки HS-клеток в клетки-родоначальники (мультипотентные) или другие требуемые клетки, группы клеток или тканей. Предложенное изобретение может быть использовано в диагностике и лечении различных болезней (например, генетических заболеваний, нейродегенеративных заболеваний, нарушений, связанных с эндокринной системой, и рака), травматических повреждений, трансплантаций в косметических или терапевтических целях, генной терапии и клеточной заместительной терапии. 7 н. и 10 з.п. ф-лы, 19 ил.

 

Текст описания приведен в факсимильном виде.

1. Изолированная гомозиготная стволовая клетка, полученная способом, включающим

(a) получение митотически активированной гомозиготной постмейотической-I диплоидной зародышевой клетки путем допущения выталкивания второго полоцита и спонтанной саморепликации при культивировании в среде для культуры стволовых клеток;

(b) культивирование указанной активированной гомозиготной постмейотической-I диплоидной зародышевой клетки для образования бластоцистоподобной массы; и

(c) выделение гомозиготных стволовых клеток из внутренней клеточной массы указанной бластоцистоподобной массы.

2. Изолированная гомозиготная стволовая клетка по п.1, где указанная гомозиготная постмейотическая-I диплоидная зародышевая клетка митотически активируется путем активации двухвалентными катионами.

3. Способ получения гомозиготных стволовых клеток, включающий

(a) получение митотически активированной гомозиготной постмейотической-I диплоидной зародышевой клетки путем допущения выталкивания второго полоцита и спонтанной саморепликации при культивировании в среде для культуры стволовых клеток;

(b) культивирование указанной активированной гомозиготной постмейотической-I диплоидной зародышевой клетки для образования бластоцистоподобной массы;

(с) выделение гомозиготных стволовых клеток из внутренней клеточной массы указанной бластоцистоподобной массы.

4. Способ по п.3, где указанная гомозиготная постмейотическая-I диплоидная зародышевая клетка митотически активируется путем активации двухвалентными катионами.

5. Изолированная гомозиготная стволовая клетка, полученная способом, включающим

(a) выделение гомозиготной постмейотической-I диплоидной зародышевой клетки, где указанная зародышевая клетка является ооцитом, созревшим до метафазы II in vivo;

(b) митотическое активирование указанного ооцита метафазы II путем допущения выталкивания второго полоцита и спонтанной саморепликации при культивировании в среде для культуры стволовых клеток;

(c) культивирование указанного активированного ооцита метафазы II для формирования бластоцистоподобной массы; и

(d) выделение гомозиготных стволовых клеток из внутренней клеточной массы указанной бластоцистоподобной массы.

6. Изолированная гомозиготная стволовая клетка по п.5, где указанный ооцит метафазы II митотически активируется путем активации двухвалентными катионами.

7. Способ получения гомозиготных стволовых клеток, включающий

(a) выделение гомозиготной постмейотической-I диплоидной зародышевой клетки, где указанная зародышевая клетка является ооцитом, созревшим до метафазы II in vivo;

(b) митотическое активирование указанного ооцита метафазы II путем допущения выталкивания второго полоцита и спонтанной саморепликации при культивировании в среде для культуры стволовых клеток;

(c) культивирование указанного активированного ооцита метафазы II для формирования бластоцистоподобной массы; и

(d) выделение гомозиготных стволовых клеток из внутренней клеточной массы указанной бластоцистоподобной массы.

8. Способ по п.7, где указанный ооцит метафазы II митотически активируется путем активации двухвалентными катионами.

9. Изолированная гомозиготная стволовая клетка, полученная способом, включающим

(a) получение митотически активированной гомозиготной постмейотической-I диплоидной зародышевой клетки путем слияния двух ооцитов или двух сперматид, допущения выталкивания второго полоцита и спонтанной саморепликации при культивировании в среде для культуры стволовых клеток или путем пересадки ядер двух сперматозоидов или двух гаплоидных яйцеклеток в лишенный ядра ооцит;

(b) культивирование указанной активированной гомозиготной постмейотической-I диплоидной зародышевой клетки для формирования бластоцистоподобной массы;

(c) трансплантацию указанной бластоцистоподобной массы животному-хозяину для создания стволовой плазмы; и

(d) культивирование указанной стволовой плазмы in vitro для производства гомозиготных стволовых клеточных линий.

10. Изолированная гомозиготная стволовая клетка по п.9, дополнительно включающему скрининг на стволовые клетки, которые являются гомозиготными, путем генотипирования, когда митотически активированную постмейотическую-I зародышевую клетку получают (а) путем слияния двух ооцитов или двух сперматид или (b) путем пересадки ядер двух сперматозоидов или двух гаплоидных яйцеклеток в лишенный ядра ооцит.

11. Изолированная гомозиготная стволовая клетка по п.9, где указанную бластоцистоподобную массу трансплантируют под почечную капсулу.

12. Изолированная гомозиготная стволовая клетка по п.9, где указанную бластоцистоподобную массу, смешанную с MATRIGEL™, трансплантируют в заднюю конечность животного-хозяина.

13. Способ получения гомозиготных стволовых клеток, включающий

(a) получение митотически активированной гомозиготной постмейотической-I диплоидной зародышевой клетки путем слияния двух ооцитов или двух сперматид, допущения выталкивания второго полоцита и спонтанной саморепликации при культивировании в среде для культуры стволовых клеток или путем пересадки ядер двух сперматозоидов или двух гаплоидных яйцеклеток в лишенный ядра ооцит;

(b) культивирование указанной активированной гомозиготной постмейотической-I диплоидной зародышевой клетки для формирования бластоцистоподобной массы;

(c) трансплантацию указанной бластоцистоподобной массы в животного-хозяина для создания стволовой плазмы; и

(d) культивирование указанной стволовой плазмы in vitro для производства гомозиготных стволовых клеточных линий.

14. Способ по п.13, дополнительно включающий скрининг на стволовые клетки, являющиеся гомозиготными, путем генотипирования, когда митотически активированную постмейотическую-I зародышевую клетку получают (а) путем слияния двух ооцитов или двух сперматид или (b) путем переноса ядер двух сперматозоидов или двух гаплоидных яйцеклеток в лишенный ядра ооцит.

15. Способ по п.13, где указанную бластоцистоподобную массу трансплантируют под капсулу почки.

16. Способ по п.13, где указанную бластоцистоподобную массу, смешанную с MATRIGEL™, трансплантируют в заднюю конечность животного-хозяина.

17. Способ получения требуемой клетки-родоначальника, дифференцированной клетки, группы дифференцированных клеток или типа ткани, включающий индукцию у изолированных гомозиготных стволовых клеток, полученных способом по пп.1, 5 или 9, дифференцировки при соответствующих условиях.