Средство, обладающее антигипоксическим действием

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, в частности к средству, обладающему антигипоксическим действием. Средство, обладающее антигипоксическим действием, полученное путем экстракции высушенной и измельченной травы живокости высокой этиловым спиртом при определенных условиях. Средство, обладающее антигипоксическим действием, полученное путем экстракции высушенной и измельченной травы живокости высокой хлороформом и представляющее собой сумму алкалоидов. Вышеописанные средства обладают выраженной антигипоксической активностью. 2 н. и 1 з.п. ф-лы, 1 табл.

 

Изобретение относится к области медицины, конкретно к фармакологии, и может быть использовано в качестве антигипоксического средства в терапии различных заболеваний, связанных с нарушением функций дыхательной, сердечно-сосудистой систем, печени, почек, транспортной функции крови, а также отравлении различными ядами [1, 2].

Наиболее близким по положительному эффекту (базовым) является α-токоферола ацетат. Этот препарат обладает антиоксэидантным действием, участвует в тканевом дыхании и других важнейших процессах тканевого метаболизма, но он является синтетическим препаратом и имеет ряд побочных эффектов [3]. Наиболее близким средством, обладающим антигипоксическим действием по природе происхождения, является: 10% настойка стеблей девясила высокого [4]. Однако в настоящее время вопрос расширения арсенала средств, обладающих антигипоксической активностью, из природного сырья является чрезвычайно актуальным.

Задачей предлагаемого изобретения является расширение арсенала средств, обладающих антигипоксическим действием, из природного сырья.

Поставленная задана достигается тем, что антигипоксическое средство содержит спиртовую вытяжку из надземной части (травы) живокости высокой (Delphinium elatum. L), в частности жидкую вытяжку из высушенной и измельченной надземной части (травы) живокости высокой 40%-ным этиловым спиртом при соотношении растительного сырья и экстрагента 1:10, и жидкую вытяжку из высушенной и измельченной надземной части (травы) живокости высокой 40%-ным этиловым спиртом при соотношении растительного сырья и экстрагента 1:2, а также сухую вытяжку суммы алкалоидов, выделенную из высушенной и измельченной надземной части (травы) живокости высокой.

Впервые показано, что средства, содержащие спиртовые вытяжки из высушенной и измельченной надземной части (травы) живокости высокой 40%-ным этанолом в предлагаемом соотношении, а также сумма алкалоидов оказывают антигипоксический эффект. Авторы не нашли в проанализированной ими литературе сведений о антигипоксинеском действии спиртовых вытяжек из надземной части (травы) живокости высокой. Ангигипоксическое действие спиртовых вытяжек из надземной части (травы) живокости высокой явным образом не вытекает из уровня техники в данной области и не является очевидным для специалиста. Экспериментально установлены новые свойства и возможность использования спиртовых вытяжек из высушенной и измельченной травы живокости высокой в качестве средства, обладающего антигипоксической активностью в медицине.

Таким образом, предлагаемое изобретение соответствует критериям патентоспособности "новизна", "изобретательский уровень", "промышленная применимость".

Средства, обладающие антигипоксическим действием, представляют собой спиртовые вытяжки из живокости высокой, содержащие комплекс действующих и сопутствующих веществ, извлекаемых из измельченной травы живокости высокой 40%-ным раствором этилового спирта с последующим отстаиванием и фильтрацией, а также алкалоидную вытяжку, извлекаемую хлороформом и содержащую сумму алкалоидов.

Предлагаемые нами средства получают следующим образом.

Пример 1. Извлечение ведут методом мацерации. Собранную в июле траву живокости высокой высушивают, измельчают до 3 мм, 10 г измельченной травы живокости высокой заливают 100 миллилитрами 40%-то этилового спирта и настаивают в темном месте в течение 10 дней, периодически помешивая. Затем спиртовую вытяжку из высушенной измельченной травы живокости высокой (настойку) процеживают, сырье хорошо отжимают, доводят извлечение до первоначального объема (100 мл) 40%-ным этиловым спиртом, отстаивают в прохладном месте в течение 3-х суток, затем фильтруют через обеззоленный фильтр. Получено 10% растительное средство - 10% настойка живокости высокой. Хранят спиртовую вытяжку из высушенной травы живокости высокой (настойку) в темном прохладном месте.

Пример 2. По 50 г высушенной и измельченной травы живокости высокой загружают в пять экстракторов и в первый из них подают сверху 40%-ный этанол в количестве, создающем слой над сырьем в 5-7 см, и оставляют на 24 часа. По истечении указанного срока жидкость из первого экстрактора сливают во второй, а в 1-й экстрактор подают 40%-ный этанол до получения исходного уровня. Через 24 часа производят последовательные сливы из 2-го экстрактора в 3-й, из 1-то во 2-й, а в первый подают свежий растворитель. Через каждые 24 часа повторяют указанные операции до заполнения 5-го экстрактора. Затем из 5-го экстрактора получают 100 мл экстракта, одновременно производя последовательные сливы го 1-го во 2-й, из 2-го в 3-й, из 3-го в 4-й, а из 4-го в 5-й экстрактор. Через интервал в 24 часа из 5-го экстрактора при аналогичной последовательности передвижки жидкости получаем порциями по 100 мл еще четыре раза жидкий экстракт. Полученные экстракты объединяют (500 мл). Получено растительное средство - экстракт живокости высокой жидкий. Хранят спиртовую вытяжку из высушенной травы живокости высокой (экстракт жидкий) в темном прохладном месте.

Пример 3. 100 г высушенной и измельченной травы живокости высокой обрабатывают 5% раствором натрия гидроксида (рН 9,0) и загружают в перколятор. Через 12 часов после загрузки заливают в него 2000 мл хлороформа. Экстракцию хлороформом проводят на лабораторной установке непрерывного действия, состоящей из перколятора, пленочного испарителя и прямого холодильника. Непрерывная циркуляция растворителя проводится со скоростью 2 л/ч. Продолжительность исчерпывающей экстракции 5 дней. Сконцентрированный хлороформный экстракт сливают через кран испарителя. Последняя порция хлороформного экстракта из перколятора сливается через нижний кран и концентрируется в испарителе. Далее хлороформное извлечение подвергают очистке путем переведения оснований алкалоидов в соли хлористоводородной кислоты и, наоборот, с последующей экстракцией их подходящими растворителями. Затем хлороформный экстракт фильтруют через осушитель (15 г безводного сульфата натрия). На последней стадии полученную сумму алкалоидов сгущают на роторном испарителе под вакуумом. Количественное определение по [5] показало, что выход суммы алкалоидов из надземной части живокости высокой составил 0,23% в пересчете на воздушно-сухое сырье. Получено растительное средство, содержащее сумму алкалоидов.

Антигипоксическое действие жидкой вытяжки из высушенной и измельченной травы живокости высокой 40%-ным этиловым спиртом при соотношении растительного сырья и экстрагента 1:10, и жидкой вытяжки из высушенной и измельченной травы живокости высокой 40%-ным этиловым спиртом при соотношении растительного сырья и экстрагента 1:2, а также сухой вытяжки суммы алкалоидов, выделенной из высушенной и измельченной травы живокости высокой, было найдено благодаря экспериментальным исследованиям.

В качестве препарата сравнения использовали α - токоферола ацетат (витамин Е), относящийся к группе жирорастворимых витаминов. Это базовый препарат, обладающий антиоксидантным и антигипоксическим действием [3]. Препаратом сравнения был также прототип - настойка стеблей девясила высокого. Экспериментальные исследования препарата из девясила высокого показали ряд положительных эффектов. Имеются данные о выраженной антигипоксической активности данного препарата на моделях однократных и повторных гипоксических воздействий [6].

Исследование антигипоксического действия растительных средств из надземной части (травы) живокости высокой проводили на модели острой тканевой гипоксии, которую создавали однократным внутрибрюшинным введением животным нитропруссида натрия в дозе 25 мг/кг. Эксперименты проведены на беспородных мышах-самцах массой 25-30 г. Животные первой категории, получены из коллекционного фонда НИЛ экспериментального биомоделирования ТНЦ СО РАМН НИИ фармакологии (сертификат имеется). Содержание животных осуществлялось в соответствии с правилами, принятыми Европейской конвенцией по защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и научных целей (г.Страсбург, 1986). Эвтаназию производили, соблюдая "Правила проведения работ с использованием экспериментальных животных", утвержденных Министерством Здравоохранения России. В эксперименте животные были распределены на группы: контрольная, сравнения, опытные. В группах сравнения в качестве препаратов сравнения использовали α-токоферола ацетат в дозе 100 мг/кг (базовый препарат) и настойку стеблей девясила высокого (прототип) в дозе 2,5 мл/кг. Контрольные животные получали растворитель в эквивалентном объеме. В опытных группах животные получали предлагаемое средство из высушенной и измельченной травы живокости высокой в разных концентрациях. Все растительные средства и препараты сравнения вводили внутрижелудочно в течение 5 дней, последний раз - за час до введения гипоксанта. Критерием оценки эффективности антигипоксического действия препаратов служила продолжительность жизни мышей.

Полученные результаты обрабатывали статистически, методами параметрической и непараметрической статистики. Различия считались достоверно значимыми при Р_u<0,05 и P_t<0,05 для количественных характеристик (критерий Вилконсона-Манна-Уигни и критерий Стьюденга соответственно) [7].

Пример конкретного выполнения эксперимента 1. В ходе выполнения эксперимента предлагаемое средство, содержащее спиртовую вытяжку из высушенной измельченной травы живокости высокой 40%-ным этиловым спиртом при соотношении растительного сырья и экстрагента 1:10, в дозах 0,6 и 2,5 мл/кг вводили опытным животным через зонд в желудок в течение 5 дней, последний раз - за час до введения нигропруссида натрия. В группах сравнения применяли α-токоферола ацетат в дозе 100 мг/кг (базовый препарат) и настойку стеблей девясила высокого (прототип) в дозе 2,5 мл/кг в аналогичном режиме. Контрольные животные получали растворитель в эквивалентном объеме. Оценивали антигипоксическое действие препаратов по продолжительности жизни мышей.

В результате проведенного исследования было показано, что жидкая вытяжка из травы живокости высокой 40%-ным этиловым спиртом при соотношении растительного сырья и экстрагенга 1:10 в дозах 0,6 и 2,5 мл/кг проявляет выраженное антигипоксическое действие, увеличивая продолжительность жизни мышей в 2 и 2,5 раза соответственно по сравнению с контролем (табл.1). Введение α-токоферола ацетата в 2,3 раза увеличивает время до наступления признаков терминальной стадии при сопоставлении с контролем. Препарат-прототип настойка стеблей девясила высокого в 1,2 раза увеличивала продолжительность жизни мышей (табл.1).

Таким образом, жидкая вытяжка из травы живокости высокой 40%-ным этиловым спиртом при соотношении растительного сырья и экстрагенга 1:10 проявляет антигипоксическую активность, сопоставимую с действием препарата сравнения α-токоферола ацетата (базового) и превосходит препарат-прототип настойку стеблей девясила высокого.

Пример конкретного выполнения эксперимента 2. В ходе выполнения эксперимента предлагаемое средство, содержащее спиртовую вытяжку из высушенной измельченной травы живокости высокой 40%-ным этиловым спиртом при соотношении растительного сырья и экстрагенга 1:2, в дозах 0,12 и 0,25 мл/кг вводили опытным животным через зонд в желудок в течение 5 дней, последний раз - за час до введения нигропруосида натрия. В группах сравнения применяли α-токоферола ацетат в дозе 100 мг/кг (базовый препарат) и настойку стеблей девясила высокого (прототип) в дозе 2,5 мл/кг в аналогичном режиме. Контрольные животные получали растворитель в эквивалентом объеме. Оценивали антигипоксическое действие препаратов по продолжительности жизни мышей.

Анализ полученных данных свидетельствует о том, что жидкая вытяжка из травы живокости высокой 40%-ным этиловым спиртом при соотношении растительного сырья и экстрагента 1:2 в дозах 0,12 и 0,25 мл/кг увеличивает продолжительность жизни мышей в 2 раза относительно контроля (табл.1). Введение α-токоферола ацетата в 2,3 раза, а настойки стеблей девясила высокого в 1,2 раза увеличивает время до наступления признаков терминальной стадии при сопоставлении с контролем (табл.1).

Таким образом, жидкая вытяжка из травы живокости высокой 40%-ным этиловым спиртом при соотношении растительного сырья и экстрагента 1:2 проявляет антигипоксическую активность, сопоставимую с действием препарата сравнения α-токоферола ацетата (базового) и превосходит препарат-прототип настойку стеблей девясила высокого.

Пример конкретного выполнения эксперимента 3. В ходе выполнения эксперимента предлагаемое средство, содержащее сухую вытяжку суммы алкалоидов, выделенную из высушенной и измельченной травы живокости высокой в дозах 0,05 и 1,5 мл/кг, вводили опытным животным через зонд в желудок в течение 5 дней, последний раз - за час до введения нитропруссида натрия. В группах сравнения применяли α-токоферола ацетат в дозе 100 мг/кг (базовый препарат) и настойку стеблей девясила высокого (прототип) в дозе 2,5 мл/кг в аналогичном режиме. Контрольные животные получали растворитель в эквивалентном объеме. Оценивали антигипоксическое действие препаратов по продолжительности жизни мышей.

В результате проведенного эксперимента установлено, что сухая вытяжка суммы алкалоидов, выделенная из высушенной и измельченной травы живокости высокой в дозах 0,05 и 1,5 мл/кг увеличивает продолжительность жизни мышей в 1,6 и 1,7 раз соответственно относительно контроля (табл.1). Использование α-токоферола ацетата и настойки стеблей девясила высокого в 2,3 и 1,2 раза соответственно удлиняет продолжительности жизни мышей (таблица).

Таблица
Влияние извлечений из надземной части живокости высокой (Delphinium elatum L) на выживаемость беспородных мышей-самцов в условиях острой тканевой гипоксии
Группа животных	Доза, мг/кг, мл/кг	Число животных	Продолжительность жизни, мин
Контроль	-	10	13,1±0,9
Настойка стеблей девясила высокого	2,5	5	15,7±0,2*
Контроль	-	10	9,0±1,2
Настойка	0,6	6	18,9±3,0*
2,5	6	22,1±1,8*
Экстракт	0,12	6	17,6±1,8*
0,25	6	17,0+1,6*
Сумма алкалоидов	0,05	6	14,8±0,6*
1,5	6	15,6±1,0*
α-токоферола ацетат	100,0	5	21,1±3,9*
Примечание: * - различия статистически достоверны по сравнению с контролем при Pt, Pu<0,05.

Таким образом, сухая вытяжка суммы алкалоидов, выделенная из высушенной и измельченной травы живокости высокой, оказывает менее выраженный антигипоксический эффект, чем препарат сравнения α-токоферола ацетат (базовый), но превосходит по активности препарат-прототип настойку стеблей девясила высокого.

Обобщая полученные результаты исследования, можно отметить, что все средства, содержащие вытяжки из высушенной и измельченной надземной части живокости высокой, оказывают достаточно высокое антигипоксическое действие, с наибольшей активностью у спиртовой вытяжки из травы живокости высокой 40%-ным этиловым спиртом при соотношении растительного сырья и экстрагенга 1:10 (настойки) в дозе 2,5 мл/кг.

Источники информации

1. Лукьянчук В.Д., Савченкова Л.В Антигипоксанты: состояние и перспективы // Эксперим. и клинич. Фармакол. 1998. Т.61. №4. С.72-79.

2. Поветьева Т.Н., Латинский В.Г. Особенности адаплогенного действия лекарственных растений. Томск, 2005. С.29.

3. Справочник Видаль: Лекарственные препараты в России. М., 2005. С.1473.

4. Зеленская К.Л., Поветьева Т.Н., Пашинский В.Г., Фомина Т.Л., Тимина Е.А., Перова А.Г. Стрессиндуцирующее действие гипоксии разного генеза и его коррекция вытяжкой из девясила высокого // Бюл. эксперим. биологии и медицины 2005. Т.139, №4. С.406-409.

5. Бешитаишвили Л.В., Султанходжаев М.И, Муджири К.С., Юнусов М.С. Алкалоиды Delphinium tamara // Химия природных соединений 1981. №2. С.199-201.

6. Зеленская К.Л., Пашинский В.Г., Поветьева Т.Н., Нестерова Ю.В. Девясил высокий - адаптоген и антигипоксант. Томск, 2004. С.69.

7. Гублер Е.В. Вычислительные методы анализа и распознавания патологических процессов. Л., 1978. С.72-75.

1. Средство, обладающее антигипоксическим действием, полученное путем экстракции высушенной и измельченной травы живокости высокой 40%-ным этиловым спиртом при соотношении растительное сырье: экстрагент 1:10.

2. Средство по п.1, полученное путем экстракции высушенной и измельченной травы живокости высокой 40%-ным этиловым спиртом при соотношении растительное сырье: экстрагент 1:2.

3. Средство, обладающее антигипоксическим действием, полученное путем экстракции высушенной и измельченной травы живокости высокой хлороформом и представляющее собой сумму алкалоидов.