Способ снижения обсемененности кишечника дождевого червя

Изобретение относится к микробиологии и может быть применено для фундаментальных научных исследований микробных сообществ кишечника дождевых червей и получения сырья для приготовления фармацевтических вермипрепаратов. Способ предусматривает пероральное введение дождевому червю 1,5-3,0% раствора перекиси водорода. Способ позволяет снизить время подготовки червя к исследованиям и сохранить его живым. 2 табл.

 

Предлагаемое изобретение относится к микробиологии и может быть применено для фундаментальных научных исследований микробных сообществ кишечника дождевых червей, и получения непосредственного сырья для приготовления фармацевтических вермипрепаратов, исследования возможности сохранения интродуцируемых микроорганизмов различных групп в кишечник дождевых червей.

Известен способ очистки кишечника дождевых червей /Патент США №5,186,944, А61К 35/56, 1993 г/. Способ включает чистку фекальной грязи в пищеварительном тракте червей, размещая их в кислотном водном растворе (Ph 3 - 6,5) от 0,1 до 5 часов; помещение в сосуд, который замораживают при температуре от -10° до -60°С. С последующей сушкой сублимацией при этой температуре от 5 до 12 часов под вакуумом. Вакуумную сушку осуществляют ступенчато от 5 до 15 часов при 20°-30°С и 0,01-0,2 мм рт.ст. или 10 до 20 часов при 35°-50°С и 0,1-0,5 мм рт.ст или от 0,1 до 19 часов при 70°-80°С и 0,001-5 мм рт.ст.

Известен способ очистки кишечника дождевых червей /Патент США №5024844, А61К 35/56, 1991 г/. Живых дождевых червей помещают в пресную воду или 0,1-0,3% водный раствор, по крайней мере, одного состава, включающего от органических кислот типа уксусной кислоты, лимонной кислоты, янтарной кислоты, яблочной кислоты, винной кислоты и молочной кислоты до минеральных кислот типа фосфорной кислоты, серной кислоты и соляной кислоты, и натрийные или калийные соли этих кислот на время от 0,5 до 72 часов, предпочтительно от 1 до 40 часов. Вышесказанный раствор может также быть характеризован как слегка кислотный водный раствор, имеющий водородный показатель от 3 до 6,5. Таким образом, пищеварительный тракт живых дождевых червей будет в основном освобожден от почвы.

Ближайшим аналогом является способ очистки кишечника дождевых червей /Патент США №5,128,148, А61К 35/56, 1992 г./, включающий помещение живых дождевых червей в 0,3% водный раствор, по крайней мере, одного состава, выбранного из группы, состоящей из органических кислот, минеральных кислот, солей натрия органических кислот, солей натрия минеральных кислот, калийных солей органических кислот, и калийных солей минеральных кислот, пока пищеварительный тракт не освобождается от почвы. Вышеуказанный раствор может также быть характеризован как слегка кислотный водный раствор, имеющий водородный показатель от 3 до 6,5. Эти живые дождевые черви оставляются там при температуре от 1° до 25°С, предпочтительно от 2° до 15°С, сроком от 0,5 до 72 часов, предпочтительно от 1 до 40 часов. Таким образом, пищеварительный тракт живых дождевых червей в основном освобождается от почвы их собственными усилиями.

Недостатком известных способов является то, что подготовка червей к исследованиям занимает значительное время и черви в основном погибают.

Задачей предлагаемого изобретения является создания способа очистки пищеварительного тракта дождевых червей, позволяющего снизить время для подготовки червей к исследованиям и сохранить живым исследуемый материал.

Поставленная задача достигается тем, что в способе снижения обсемененности кишечника дождевого червя, дождевому червю вводят перорально 1,5-3,0% раствор перекиси водорода.

При использовании концентрации перекиси водороды меньшей, чем 1,5%, эффект был значительно меньше, при использовании же большей концентрации, чем 3,0%, перекиси водорода черви погибали.

Способ осуществляется следующим образом.

Для снижения обсемененности кишечника Красного Калифорнийского Гибрида используют водные растворы перекиси водорода. После введения с помощью микроинъектора 0,03 мл 3% перекиси водорода перорально двигательная активность дождевого червя существенно снизилась. Спустя 5 минут после инокуляции червей вскрыли и высеяли содержимое кишечника. Анализ показал, что введение 3% перекиси водорода резко снижает численность микрофлоры кишечника: на чашках Петри выросли единичные колонии.

Во второй серии опытов объем инокулята оставляли прежним, а концентрацию перекиси водорода снизили до 1,5%. Данный уровень концентрации сохраняли в последующих опытах. В этом случае в течение всех опытов активность дождевого червя и его поведенческие реакции оставались на уровне нормы. Высев при 30 минутной экспозиции показал, что обсемененность в переднем и заднем отделе кишечника снизилась в 2 раза, а в заднем осталась прежней. Это связано, скорее всего, с тем, что пищевой комок перемещается от глотки до анального отверстия за 2,5-3 часа. Качественный состав доминирующих, наиболее часто выделяемых штаммов снизился с 20 до 6.

При экспозиции 60 минут титр (КОЕ/мл) гетеротрофных микроорганизмов снизился в переднем и среднем отделах кишечника на порядок (с 10³ на 10²), в заднем остался прежним по причинам, указанным выше. Разнообразие микрофлоры кишечника снизилось с 20 до 8 штаммов.

При 3-часовой экспозиции отмечали снижение титра во всех отделах кишечника также на порядок. Микробное разнообразие снизилось с 20 до 7 штаммов (табл.1, 2).

Пример. 1. Вводят 3% перекись водорода дождевому червю per os в объеме 0,03 мл. Отмечается снижение активности поведения дождевого червя. Вскрывают спустя 5 минут после инокуляции и высевают содержимое кишечника. Высев оказался очень скуден: выросли единичные колонии.

Пример 2. При введении 0,03 мл 1,5% перекиси водорода выдерживают червей 30 минут. Вскрытие показало, что обсемененность в переднем и заднем отделе кишечника снизилась в 1,5 раза, а в заднем осталась прежней, потому что пищевой комок перемещается от глотки до анального отверстии за 2,5-3 часа. Качественный состав доминирующих, наиболее часто выделяемых микроорганизмов снизился с 20 до 6.

Пример 3. При выдерживании 60 минут титр (КОЕ/мл) микроорганизмов снизился в переднем и среднем отделах кишечника, в заднем остался прежним по причинам, указанным выше. Титр в переднем кишечнике снизился в 5 раз, в среднем в 4 раза. Разнообразие снизилось до 8.

Пример 4. Выдерживают 3 часа и получили снижение титра в переднем отделе кишечника в 4 раза, в среднем - в 8 раз, в заднем - в 17 раза. Микробное разнообразие снизилось 7.

Предлагаемый способ позволяет сохранить червей живыми для проведения научных изысканий (исследования микрофлоры дождевых червей, ее выживаемость) для получения сравнительно микробиологически безопасного вермисырья.

Способ снижения обсемененности кишечника дождевого червя, отличающийся тем, что дождевому червю вводят перорально 1,5-3,0%-ный раствор перекиси водорода.