Способ оценки процессов перекисного окисления липидов в организме

Изобретение относится к области медицины, а именно к лабораторной диагностике. Предложен способ определения первичных продуктов перекисного окисления липидов в слюне. Способ предусматривает забор биологического материала (слюну обследуемого человека). Первичные продукты перекисного окисления липидов экстрагируют из биологической жидкости смесью гептан - изопропиловый спирт в соотношении 1:1 и измеряют их концентрацию определением оптической плотности экстракта на спектрофотометре при длине волны 273 нм. Для вычисления концентрации используют молярный коэффициент экстинкции 28000 М^-1 см^-1. Способ обеспечивает упрощение и повышение эффективности диагностирования процессов перекисного окисления липидов в организме.

 

Изобретение относится к области медицины, в частности к лабораторной диагностике.

Процессы свободнорадикального перекисного окисления липидов играют значительную роль в развитии многих патологических процессов. Нарушения в данном звене метаболизма приводит к поражению мембран, что может привести к снижению резистентности организма к воздействию различных неблагоприятных факторов внешней и внутренней среды, а также создать предпосылки к развитию и углублению тяжести течения различных заболеваний печени, почек, желудка, сердца, легких и других жизненно важных органов.

Одним из важнейших первичных продуктов ПОЛ являются диеновые конъюгаты. Определение их концентрации в крови применяется для диагностики ряда заболеваний - сахарного диабета, хронического панкреатита, язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки, гепатита, холецистита, бронхита и других.

С учетом вышеизложенного актуальной является задача совершенствования способов оценки процессов перекисного окисления липидов в организме.

Наиболее близким по технической сущности и достигаемому результату является способ определения первичных продуктов перекисного окисления липидов (Большой специальный практикум по биохимии. Часть 1. Самара: Изд-во «Самарский университет», 1996. С.78-79).

Данный способ основан на том, что первичные продукты перекисного окисления липидов экстрагируют из биологической жидкости смесью гептан - изопропиловый спирт в соотношении 1:1 и измеряют концентрацию первичных продуктов перекисного окисления липидов, измеряя оптическую плотность экстракта на спектрофотометре и для вычисления концентрации используют молярный коэффициент экстинкции 28000 М^-1 см^-1, повышение концентрации которых свидетельствует об усилении процессов перекисного окисления липидов, а снижение их концентрации - о снижении активности процессов перекисного окисления липидов.

В клинической практике в качестве исследуемой биологической жидкости обычно используется кровь обследуемого больного (B.C.Камышников. Справочник по клинико-биохимической лабораторной диагностике. Минск: Беларусь, 2000. Т.2. С.205-206).

Недостатком известного способа является то, что в качестве биологического материала, который берется у людей при обследовании, используют кровь, забор которой является травматичным для человека и требует специально подготовленного помещения, обученный медицинский персонал, стерильные инструменты, что увеличивает стоимость обследования.

При массовых обследованиях на предприятиях многие люди отказываются от этой услуги.

В основу изобретения положена задача упрощения и удешевления способа оценки процессов перекисного окисления липидов в организме, снижения травматичности исследования при заборе биологической жидкости, повышения эффективности диагностирования.

Поставленный технический результат достигается тем, что в способе оценки процессов перекисного окисления липидов в организме, включающем забор биологического материала, определение в нем концентрации первичных продуктов перекисного окисления липидов, имеющих максимум оптической плотности при длине волны 273 нм и оценку усиления или снижения активности процессов перекисного окисления липидов в организме по возрастанию или уменьшению соответственно концентрации первичных продуктов перекисного окисления липидов, имеющих максимум оптической плотности при длине волны 273 нм, в качестве биологического материала используют слюну обследуемого человека, перед забором пробы которой обследуемый промывает ротовую полость кипяченой водой, просушивая полость салфеткой, сбор слюны производят в химически чистые пробирки в количестве 0,5-1 мл, для анализа в центрифужные пробирки наливают 2 мл смеси гептан - изопропиловый спирт в соотношении 1:1 по объему, добавляют 0,2 мл исследуемой слюны, встряхивают в течение 3 минут, добавляют 0,2 мл дистиллированной воды, встряхивают в течение 3 минут, затем центрифугируют в течение 10 минут при 3000 об/мин и удаляют верхнюю фазу (гептановую), отбирают 0,5 мл нижней фазы, добавляют 2,5 мл 96% этилового спирта, перемешивают, центрифугируют в течение 15 минут при 3000 об/мин и измеряют оптическую плотность при длине волны 273 нм на спектрофотометре и определяют концентрацию продуктов перекисного окисления липидов, используя молярный коэффициент экстинкции 28000 М^-1 см^-1.

Способ оценки процессов перекисного окисления липидов в организме осуществляют следующим образом.

В качестве биологической жидкости используют слюну человека, перед забором пробы которой обследуемый промывает ротовую полость кипяченой водой, просушивая полость салфеткой.

Сбор слюны производят в химически чистые пробирки в количестве 0,5-1 мл.

Для анализа в центрифужные пробирки наливают 2 мл смеси гептан - изопропиловый спирт в соотношении 1:1 по объему, добавляют 0,2 мл исследуемой слюны, встряхивают в течение 3 минут, добавляют 0,2 мл дистиллированной воды, встряхивают в течение 3 минут, затем центрифугируют в течение 10 минут при 3000 об/мин и удаляют верхнюю фазу (гептановую), отбирают 0,5 мл нижней фазы, добавляют 2,5 мл 96% этилового спирта, перемешивают, центрифугируют в течение 15 минут при 3000 об/мин и измеряют оптическую плотность при длине волны 273 нм на спектрофотометре и определяют концентрацию продуктов перекисного окисления липидов, используя молярный коэффициент экстинкции 28000 М^-1 см^-1. По возрастанию или уменьшению соответственно концентрации первичных продуктов перекисного окисления липидов, имеющих максимум оптической плотности при длине волны 273 нм, делают вывод об усилении или снижении соответственно активности процессов перекисного окисления липидов в организме.

В результате проведенных заявителем экспериментальных исследований выявлены ранее неизвестные свойства слюны человека, а именно: между концентрациями первичных продуктов перекисного окисления липидов, имеющих максимум оптической плотности при длине волны 273 нм (диеновых кетонов производных фосфолипидов), в крови и в слюне существует положительная корреляционная связь. Коэффициент корреляции составлял 0,84 у практически здоровых лиц и 0,67-0,76 у больных язвенной болезнью желудка и двенадцатиперстной кишки в зависимости от тяжести заболевания. Было установлено, что у практически здоровых людей концентрация диеновых кетонов производных фосфолипидов в слюне составляла от 1,50 до 1,90 мкмоль/л, у больных язвенной болезнью желудка и двенадцатиперстной кишки от 2,8 до 3,5 мкмоль/л в зависимости от тяжести заболевания.

Из данных литературы известно о том, что в слюне содержатся первичные продуктов перекисного окисления липидов, но при этом отсутствуют данные о взаимосвязи между уровнем данного биохимического показателя в крови и слюне. Полученными заявителем данными обосновывается возможность и целесообразность использования слюны для оценки процессов перекисного окисления липидов в организме по определению уровня первичных продуктов перекисного окисления липидов, имеющих максимум оптической плотности при длине волны 273 нм в слюне.

В связи с тем, что концентрация диеновых кетонов производных фосфолипидов в слюне ниже, чем в крови, заявителем были внесены изменения, направленные на повышение чувствительности метода определения диеновых кетонов производных фосфолипидов в слюне, для чего было изменено соотношение объемов экстрагирующих реактивов в реакционной смеси и подобрано их оптимальное соотношение для определения диеновых кетонов производных фосфолипидов в слюне.

Проведенный заявителем анализ уровня техники, включающий поиск по патентным и научно-техническим источникам информации, и выявление источников, содержащих сведения об аналогах заявляемого изобретения, позволили установить, что заявитель не обнаружил аналог, характеризующийся признаками, тождественными (идентичными) всем существенным признакам заявляемого изобретения.

Определение из перечня выявленных аналогов прототипа позволило выявить совокупность существенных по отношению к усматриваемому техническому результату отличительных признаков в заявляемом способе оценки процессов перекисного окисления липидов в организме, изложенных в формуле изобретения.

Следовательно, заявляемое изобретение соответствует критерию "Новизна".

Для проверки соответствия заявляемого изобретения условию "Изобретательский уровень" заявитель провел дополнительный поиск известных решений, чтобы выявить признаки, совпадающие с отличительными от прототипа признаками заявляемого изобретения.

Результаты поиска показали, что заявляемое изобретение не вытекает для специалиста явным образом из известного уровня техники, определенного заявителем, не выявлено влияние предусматриваемых существенными признаками заявляемого изобретения преобразований на достижение технического результата.

Следовательно, заявляемое изобретение "Способ оценки процессов перекисного окисления липидов в организме " соответствует критерию "Изобретательский уровень".

Критерий "Промышленная применимость" подтверждается тем, что предлагаемое изобретение может быть успешно использовано при массовом обследовании населения в диагностических целях для оценки процессов перекисного окисления липидов в организме и эффективно внедрено в систему здравоохранения России и СНГ.

Способ определения первичных продуктов перекисного окисления липидов в слюне, заключающийся в том, что перед забором пробы промывает ротовую полость кипяченой водой, просушивая полость салфеткой, сбор слюны производят в химически чистые пробирки в количестве 0,5-1 мл, для анализа в центрифужные пробирки наливают 2 мл смеси гептан - изопропиловый спирт в соотношении 1:1 по объему, добавляют 0,2 мл исследуемой слюны, встряхивают в течение 3 мин, добавляют 0,2 мл дистиллированной воды, встряхивают в течение 3 мин, затем центрифугируют в течение 10 мин при 3000 об./мин, удаляют верхнюю фазу (гептановую), отбирают 0,5 мл нижней фазы, добавляют 2,5 мл 96%-ного этилового спирта, перемешивают, центрифугируют в течение 15 мин при 3000 об./мин, измеряют оптическую плотность при длине волны 273 нм на спектрофотометре и определяют концентрацию первичных продуктов перекисного окисления липидов, используя молярный коэффициент экстинкции 28000 М^-1 см^-1.