Способ оценки агрегационной способности эритроцитов
Владельцы патента RU 2390778:
Федеральное государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Нижегородская государственная сельскохозяйственная академия" (ФГОУ ВПО НГСХА) (RU)
Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторным методам исследований. Для оценки агрегационной способности эритроциты выделяют из крови, помещают в кювету агрегометра, добавляют индуктор агрегации и регистрируют степень агрегации фотометрическим методом. В качестве индуктора агрегации используют катионный краситель акридиновый оранжевый, который добавляют до конечной концентрации 1-5 мМ. Способ включает использование нового агрегирующего агента.
Изобретение относится к области медицины, а именно к исследованию биологической жидкости, в частности крови, и может быть использовано при лабораторных исследованиях.
Известны способы оценки агрегационной способности эритроцитов с помощью высокомолекулярного декстрана (Rampling et al. - Biorheology. 2004. V.41. P.91-112), полилизина (Danon. Bibl. Anat. 1973. V.11. P.289-295).
Однако механизм их действия на эритроциты остается до настоящего времени не изученным.
Поэтому задача создания методов оценки агрегационной способности с использованием новых агрегантов с известным механизмом действия на эритроциты является актуальной.
По данным ряда авторов катионный краситель акридиновый оранжевый изменяет форму эритроцитов от дискоцитов к стоматоцитам, индуцирует агрегацию внутримембранных частиц (Lelkes et al. Biochim. Biophys. Acta. 1983. V.732. P.48-57; Lelkes et al. J.Cell Sci. l986. P.57-62) и нарушает асимметричное расположение фосфолипидов в эритроцитах (Koshkaryev et al. Amer. J.Physiol. - 2003. - V.285. - P.720-722).
Нами показано, что катионный краситель акридиновый оранжевый в концентрациях 1-5 мМ стимулирует выраженную агрегацию эритроцитов.
Задачей предлагаемого изобретения является использование нового индуктора агрегации эритроцитов с известным механизмом действия на мембраны клеток.
Поставленная задача решается тем, что предлагаемый способ оценки агрегационной способности эритроцитов включает выделение эритроцитов из крови и регистрацию их агрегации, при этом катионный краситель акридиновый оранжевый добавляют до конечной концентрации 1-5 мМ.
Предлагаемый способ осуществляют следующим образом. Эритроциты трижды отмывают от плазмы и белых клеток центрифугированием в 10-кратном объеме физиологического раствора. Отмытые эритроциты ресуспендируют в соотношении 1:200 в забуференном физиологическом растворе (10 мМ трис-HCl, 146 мМ NaCl, рН 7,4), после чего суспензию клеток помещают в кювету для изучения агрегационной способности и добавляют катионный краситель акридиновый оранжевый до конечной концентрации 1-5 мМ.
Регистрацию агрегационной способности осуществляют фотометрическим методом (Шереметьев Ю.А. и др. Биофизика - 2000. Т.45. №1. С.79-82).
Способ включает использование в качестве агрегирующего агента катионный краситель акридиновый оранжевый.
Способ оценки агрегационной способности эритроцитов, включающий выделение эритроцитов из крови и регистрацию их агрегационной способности, отличающийся тем, что в качестве индуктора агрегации используют катионный краситель акридиновый оранжевый, при этом эритроциты помещают в кювету агрегометра, добавляют катионный краситель акридиновый оранжевый до конечной концентрации 1-5 мМ и регистрируют степень агрегации фотометрическим методом.
