Способ выделения ферментных инактиваторов

 

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕН ИЯ

К П АТЕ НТУ

Сова Советскиа

Социвлистическиа

Республик

Зависимый от патента №

Заявлено 15.Ч.1967 (№ 1155142/28-13) Приоритет 26 Ч.1966. F 49298 IVa/6а.

Федеративная Республика Германии

Опубликовано 20.Ч1.1969. Бюллетень № 21

Комитет по делам иаобретений и открытий при Совете Министров

СССР

Дата опубликования описания 1З.Х|.1969

Авторы изобретения

Иностранцы

Ойген Верле и Ханс Фритц (Федеративная Республика Германии) Иностранная фирма

«Фарбенфабрикен Байер АГ> (Федеративная Республика Германии) Заявитель

СПОСОБ ВЪ|ДЕЛЕНИЯ ФЕРМЕНТНЪ|Х ИНАКТИВАТОРОВ

Способ выделения ферментных инактиваторов, например калликреина, из комплекса энзима, пр исоединенного к полимерному носителю, не известен.

Для получения высокоочищенного инактиватора предлагается комплекс энзима и полимерного носителя приводить в воде в контакт с раствором калликреин-инактиватора.

После этого полученный комплекс промывают, диссоциируют и изолируют таким образом инактиватор.

Способ выделения ферментных инактиваторов, например калликреина, заключается в том, что энзимы, например трипсин, химотрипсин, калликреин, присоединяют ковалентно к нерастворимому или растворимому носителю (полимерному веществу) . Полученный при этом продукт присоединения приводят в воде в контакт с раствором калликреин-инактиватора, полученный при этом комплекс очищают промыванием, например, водой и буферным раствором диссоциируют и выделяют калликреин-инактиватор.

Причем носители (полимерные вещества) должны содержать функциональные группы, способные реагировать с энзимами по методу химии пептидов,,например смолы, содержащие группы ангидрида хлорангидрида кислоты, изоцианата и азида или смолы, содержащие активированные атомы фтора.

Диссоциация достигается, например, посредством смещения рН или добавлением веществ, ослабляющих действие молекулярного обмена, например, мочевины.

Пример. Для получения калликреин-колонки 400 мг калликреина гомогенизпруют в

200 мл 0,2 М фосфатного буфера с рН 7,5 при

0 С. Затем добавляют 2 мл 1 -ного раствора

10 гексаметплендиамина, размешивают,в течение

3 мин, после чепо добавляют 100.000 КЕ (2упротеин I(E), растворенные в 20 м г 0,2 М фосфатного буфера с рН 7,5. Полученную суспензию размешивают около 8 час при температу15 ре 0 — 4 С. Для выделения калликреина 80000 единиц калликреина смешивают приблизительно с четырехкратным обьемом порошка целлюлозы и заливают в колонку (вышеописанную), охлажденную водой и заполненную

20 Sephadex G-25 слоем в 1 см. Последгиою промывают буфером с рН 7,8, содержащихг 0,1 И триэтаноламина и 0,2 М NaCI, адсорбируют в колонке 75000 единиц. из них 40000 единиц элюируют аммонийацетатным буфером с

25 рН 2,0.

Калликреин-инактиватор можно элюировать от калликреин-колонки 8 М раствором мочевины с добавлением буфера с рН 7,8 0,1 М триэтаноламина при нейтральном рН. После

50 отделения мочевины с помощью колонны

247134

Составитель Т. Полянская

Техред Л. В. Куклина Корректор Г. И. Тарасова

Редактор А. Бер

Заказ 2887/15 Тираж 480 Подписное

ЦНИИПИ Комитета по делам изобретений и открытий при Совете Министров СССР

Москва, Раушская, д. 4/5

Типография, пр. Сапунова, 2 ерЬаг1ех G-25 выход фермента каллекреининактиватора составлял около 100 /о.

Предмет изобретения

Способ выделения ферментных инактиваторов, например калликреина, .из комплекса энзима, присоединенного к полимерному носителю, отличающийся тем, что, с целью получения высокоочищенного инактиватора, комплекс энзима и полимерного носителя приводят в воде в контакт с раствором калликреин5 инакпиватора, после чего полученный комплекс промывают, диссоциируют и изолируют таким образом инактиватор.