Способ получения пептидов или их производных

 

268305

О П И С А Н Й Е

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ПАТЕНТУ

Севе Сееетсиил

Вециелистичесиии

Реслублие

Зависимый от патента №

Заявлено 01 Vll.1966 (№ 1087855/23-4) Кл. 12q, 6/01

МПК С 07d

Приоритет 02ХП.1965, № 469310. США;

24.Х.1965, № 504978 и № 504982. США;

ЗО.III.1966, № 538542 и ¹ 538560. США;

22.IV.1966, ¹ 544358 и ¹ 544380. США;

28.IV.1966, ¹ 545855, № 545857 и ¹ 545862.

CIlIA

Опубликовано 02.IV.1970. Бюллетень № 13 йснитет се делан изабретений и стнрнтий лри Сосете Министров

СССР

УДК 547.964.4.07(088.8) Дата опубликования описания ЗОХП.1970

Авторы изобретения Иностранцы

Ральф Франц Хиршманн, Роберт Джордж Денкева

Фредерик Шоеньювалдт, Джон Байрон Кони, Роберт

Даниил фрэнк Вебер и Гарвей Швам (Соединенные Штаты Америки)

Иностранная фирма

«Мерк энд КО., Инк.э (Соединенные Штать| Америки) Заявитель

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПЕПТИДОВ ИЛИ ИХ ПРОИЗВОДНЫХ

Известе&: способ получения пептидов и йх производных взаимодействи>эм аминокислоты или пептида или их производных в присутствии эквивалентного количества щелочи в водной среде со смешанным ангидридом М-защищенных аминокислоты или пептида и этоксихлоругольной кислоты при температуре ниже

10 С, при рН выше 6 и при перемешивании.

Для получения более длинного пептида полученный выше пептид выделяют и подвергают взаимодействию с требуемой аминокислотой в виде ее смеша нного ангидрида.

Предложенный способ отличается от известного тем, что в качестве карбоксильной компоненты используют N-карбоксиангидриды или N-тиокарбоксиангидриды аминокислот или их производных, процесс ведут при загцитном рН-4 — 11 с последующим декарбоксилированием или детиокарбоксилированием путем подкисления до рН ниже 3 — 5.

Способ позволяет упростить синтез пептидов, так как для получения более длинного пептида ранее полученный пептид не выделяют, а непосредственно в реакционную смесь вносят ангидрид требуемой N-карбокси- или

N-тиокарбоксиаминокислоты. Выход дипептидов достигает 95 — 98%.

Пример 1. Валил-аланил-аланил-пролилфенилаланил-аргинин, (.месь 420 мг (2 ммоль) хларгидрата аргинина в 20 мл 1 М водного раствора боратного буфера (борпокислого калия), содержащего

5 г льда, рН 11, охлаждают до температуры

s около 0"С, затем добавляют 386 мг (2,01 л моль) твердого ангидрида 1Ч-карбоксифенилаланина при энергичном перемешивании. Смесь перемешивают в течение 1 мин, после чего рН доводят до 3 концентрирован10 ной серной кислотой при 0 С, при пропускании азота через смесь в течение 10 мин. Полученный фенилаланиларгинин не выделяют.

Добавлением концентрированного раствора едкого кали при охлаждении до 0 рН смеси

15 доводят до 9,5. Затем вносят 5 г льда и 285 мг (2,02 ммоль) ангидрида N-карбоксипролина и перемешивают в течение 3 мин. Декарбоксилирование проводят так, как описано выше, полученный продукт не выделяют.

20 Предыдущую операцию повторяют при рН

10 с добавлением 235 мг (2,04 ммоль) ангидрида N-карбоксиаланина и перемешивают в течение 1 мин. Аланил-пролил-фенилаланиларгинин, полученный при декарбоксилирова25 нии по вышеописанному способу, не выделяют. Эту же операцию повторяют.при рН 10 при перемешивании в течение 1 мин, исполь зуя 235 мг (2 ммоль) ангидрида N-карбоксиаланина для образования аланил-аланил-про.

268305

56 лил-фенилаланил-аргинина, который не выделяют.

Повторяя операцию при рН 10 с 294 мг (2,02 ммоль) ангидрида N-карбоксивалина, получают валил-аланил-аланил-пролил-фенилаланил-аргинин. рН полученного раствора (46 мл) доводят до 7,5 водным раствором едкого натра и загружают в 30-мл колонку со смолой 1RC 50 в кислой форме (колонка с внутренним диаметром 1,5 см) со скоростью пропускания

2 мл/мин и элюируют 75 мл 0,25 н. серной кислоты, затем 75 мл 1,0 н. серной кислоты. Элюат, включающий аргининсодержащий пептид, собирают в погоны по 25 мл со скоростью

1 мл)мин.

Образцы всех фракций наносят на круговую бумажную хроматограмму в системе втор-бутанол — вода — уксусная кислота (в соотношении 6: 3: 1). При удалении фронта растворителя на б см фракции элюата 3, 4, 5 и 6 показывают сильную нингидринную реакцию (полосу) с Rf 0,39, что указывает на искомый гексапептид (значение Rf продукта и реагентов предварительно определяют тонкослойной хроматографией). Эти фракции объединяют, упаривают под вакуумом, водным раствором едкого натра доводят рН до 7,5 и сушат вымораживанием. Полученное твердое вещество экстрагируют четыре раза порциями метанола по 10 мл, после чего метанол отгоняют под вакуумом. Остаток растворяют в б мл воды, водным раствором серной кислоты рН доводят до 3,0 и высаживают вещество добавлением 25 мл метанола и затем 55 мл этанола.

Суспензию оставляют на ночь на холоду, после чего отфильтровывают. Получают заданный продукт, что устанавливают анализом аминокислот после гидролиза.

Глицил - аланил-лейцил — изолейцил - валилфенил-алании получают вышеописанным методом. Оптимальные условия: концентрацию реагентов, рН, температуру и продолжительность реакции проверяют предварительно пробами с небольшими количествами реагентов, прежде чем проводить ее в крупном масштабе.

Реакции ведут при рН от 4 до 11, как правило с избытком ангидрида, при температуре от — 5 до 5 С, в аппарате с мешалкой (смесителе).

Температуру поддерживают с помощью внутреннего или наружного охлаждения либо того и другого.

Ангидриды следующих кислот используют в виде трифторацетилпроизводных: серии, треонин, Р-оксилейцин, у-оксинорвалин.

Ниже приведены кислоты, ангидриды которых применяют в виде S-бензильных производных: цистеин, р-тиолнорвалинпеницилламин.

N-карбоксиангидрид тирозина используют в форме тетрагидрофуранового производного.

Омега-аминогруппы лизина и орнитина защищают карбобензилоксигруппами, которые выводят из конечного продукта гидрогениза5

55 цией. Прочие защитные группы также удаляют в конце реакции.

Ниже приведен список принятых сокращений:

Глицин — ГЛИ

Ал анин — АЛЬ

Лейцин — ЛЕЙ

Изолейцин — ИЗОЛ

Валин — ВАЛ

Фенилаланин — ФЕН

Тирозин — ТИР

Триптофан — ТРИ

Аргинин — АГН

Лизин — ЛИЗ

Гистидин — ГИС

Серии — CEP

Треонин — TP

Пр олин — ПРО

Цистеин — ЦИС

Цистин — ЦИСТ

Метионин — МЕТ

Аспарагиновая кислота — ACP

Глута минов ая кислота — ГЛУ

Аспар агин — АСН

Глутамин — ГЛН а-Аминоадипинова я — а, АД а-Аминопимелиновая — а, ПИ а-Аминосуберинова я — а, СУ а-Аминосебационовая — а, CE р-Метиласпарагиновая — рМ, АСП р-Метилглутаминовая — рМ, ГЛУ

Р,Р-Диметиласпарагиновая — рМ, рМ, ACIl

Орнитин — ОРН а-Аминоизомасляная — n, ИВУ а-Аминодиэтилуксусная — а, АДА а-Аминодиизопропилуксусная — P, АДИА а-Аминоэтилизопропилуксусная — а, АЕИА

Пеницилла мин — ПЕНМ

Р-Оксинорвалин — рОН, НВАЛ р-Тиолновалин — P, ТВАЛ а-Аминофенилуксусная кислота — а, APA о-Хлор фенил алании — о — ХЛ вЂ” ФЕ

Фурфурилаланин — ФАЛА

Тиенилаланин — ТАЛА а-Нафтилал анин — а, НАЛА

3-Тионафтенилаланин — ТНАЛА

3-Кумаронилаланин — КОУ, АЛА

N-Метилглицин — NM, ГЛИ

N-метилаланин — NM, АЛА

N-Метиллейцин — NM, ЛЕЙ

N-Метилтирозин — NM, ТИР

В соответствии с вышеописанной методикой получают следующие гексапептиды:

ГЛИ-АЛА-ИЗОЛ-ВАЛ-ФЕ-ТИР

ТРИ-АГН-ЛИЗ-ГИС-СЕР-TP

ПРО-ЦИСТ-МЕТ-АСП-ГЛУ-АСН

ГЛН-а, а-АД а, ПЛ-а, СУ-а, СЕ-рМ, АСП рМ, ГЛУ-рМ, АСП-ОРН-а, ИВУ-АДА-а, АДИА а-АЕИА-ВОН, Н ВАЛ-ПЕНИ- Т, ВАЛ-а, АРА-о-ХЛ-ФЕ

ФАЛА-ТАЛЛ-а, НАЛА-ТНАЛА-КОУ, АЛАУМ, ГЛИ

М1х1, АЛА-NM, ЛЕИ-ХМ, ТИР-ГЛИ-АЛАЛЕИ

268308 ди-ЛЕЙ-ВАЛ- (ЦИС-бис АЛА)

СЕР-ГЛУ-ФАЛА-УМ, АЛА-АСН-ГЛН

ТР-NET-OPH-СЕР-а, ПИ-ACI I

П р и м ер 2. Аспаргил-глицил-глицил-лейцин.

Смесь 2 ммоль лейцина в 20 мл водного раствора боратного буфера (бората калия) при рН 10 охлаждают до — 5 С, затем добавляют

2,05 ммоль твердого ",íãèäðèäà N-карбоксиглицина при энергичном перемешивании. Реакция продолжается 40 сек, после чего рН доводят до 5 концентрированной серной кислотой при 0 С, пропуская ток азота через смесь в течение 10 мин.

Операцию повторяют при рН 10 без выделения промежуточного глицил-лейцина, используя 2,02 ммоль ангидрида Х-карбоксиглицина с образованием глицил-глицил-лейцина, который также не выделяют.

Далее рН смеси доводят до 8 5 концентрированным раствором едкого кали, затем вносят 2,1 ммоль ангидрида N-карбоксиаспарагиновой кислоты при 0 С при интенсивном перемешивании. Через 30 сек рН смеси доводят до 4, одновременно пропуская через смесь азот. Образуется заданный тетрапептид, который высаливают сульфатом аммония.

Заменив ангидрид N-карбокси-аспарагиновой кислоты соответствующим ангидридом и повторив предыдущую операцию, получают следующие соединения: глутамил-глицил-глицил-лейцин; глутаминил-глицил-глицил-лейцин; аспарагинил-глицил-глицил-лейцин.

Пример 3. Синтез d-кортикотропина (овечьего) СЕР

ТИР

CEP

МЕТ

ГЛУ

ГИС

ФЕН

API

ВАЛ

ГЛИ

ЛИЗ

АРГ

АРГ

АЛА

СЕР

ГЛН

АЛА

ФЕН D

ПРО

ЛЕЛ

ГЛУ

ФЕН

ПРО

ВАЛ

ЛИЗ

ВАЛ

ТИР

ПРО

АЛА

I т1И

ГЛУ

АСП

20

Получение пептнда А рН декарбокснлирования

Аминокислота

Время, рро

РН сочетания

Избыток, %

Услов ия реакции мин стадии

ТИР

CEP

МЕТ

ГИС

ФЕН

АРГ

10,0

10,2

9,8

9,8

10,6

10,2 защищен в виде бензилпроизводного, выделяют с поТаблица 2

Получение пептнда АВ нз пептнда А рН декарбоксилирования

Аминокислота

Избыток, рН сочетания

PJo

Время, Условия стадии реакции мин

ТРИ

ГЛИ

ЛИЗ

ПРО

ВАЛ

ГЛИ

ЛИЗ

ЛИЗ

АРГ

АРГ

III

III

Ш

Ш

Ш

I II

Ш

III

III

-1П

5

2,5

3

3

10,2

10,1

9,9

10,0

10,2

10,4

10,4

10,4

9,8

10,0

7

1

3

5

7

9

Продукт, в котором гистидин мощью смолы I RC 50.

Структура d-кортикотропина (овечьего) следующая:

АКТГ

ТРИ

ГЛИ

ЛИЗ

A ПРО В

Пептиды приготовляют в соответствии с методами, описанными в предыдущих примерах, в условиях реакции, указанных в табл. 1, 2, 30 3 и 4 (где показано получение различных частей цепочки).

На первой стадии синтеза тетрагидропир-. аниловый эфир ангидрида N-карбокситирозина сочетают с серином в условиях, приведен35 ных в стадии 1 в та бл. 1.

Таблица 1

268305

Таблица 3

Получение пептида АВС из пептида АВ рН декарбоксилиров ания рН сочетания

Избыток, Время. мин

Аминокислота

Условия реакции

Jljo стадии

ПРО

ВАЛ

ЛИЗ

ВАЛ

ТИР

ПРО

АЛА

ГЛИ

ГЛУ

АСП

АСП

7

9,8

9,8

10,2

10,2

10,2

10,4

10,2

10,2

10,4

10,4

10,6

2

4

6

8

Таблица 4

Получение пептида АВСД из пептида АВС рн декарбоксилирования

Время, Избыток, рН сочеАминокислота

Условия мин тания стадии реакции

ГЛУ

АЛА

СЕР

ГЛН

АЛА

ФЕН

ПРО

ЛЕЙ

ГЛУ фЕН

10,2

10,4

10,4

10,2

9,8

10,2

10,6

10,2

10,4

5

8

1

3

5

7

9

Конечный продукт выделяют с помощью смолы 1КС 50.

Карбобензокси- и бензильную группы удаляют путем восстановления натрием в жидком аммиаке.

Конечная аминогруппа у лизина (см. табл.2 и 3) защищена карбобензоксигруппой. Оксигруппа у тирозина (см. табл. 3) защищена в виде тетрагидропиранильного производного.

Оксигруппа у серина (табл. 4) защищена трифторацетильной группой. Обе защитные группы удаляют в процессе реакции сочетания.

Пример 4. Применение карбоксипептидазы-В.

Этот пример иллюстрирует удаление аргинина из пептида с помощью карбоксипептидазы-В.

Приготовляют три смеси: а — 100 мл трас-буфера (0,1 моль хлористого натрия и 0,2 моль триоксиметиламинометан) при рН 765; б — 8,5 мг сульфата лейцил-аланил-глицилпролил-фенилаланил-аргинина в 3,3 мл того же буфера; в — 10 лгл энзиматической смеси, разбавленной 0,015 мл смеси карбоксипептидазы-В, с содержанием 10 мг энзимов в 1 мл, в том же буфере, Далее смешивают 2 мл смеси а, 1 мл смеси б и 1 мл смеси и и инкубируют в течение 1 час при 37 С.

Смесь подвергают тонкослойной хроматографии на силикагеле, отмечают два пятно.

Одно из них — аргинин, другое — пентапептид.

При проведении реакции в препаративных масштабах растворы смешивают в том же соотношении и инкубированную смесь сушат вымораживанием, экстрагируют метанолом, метанольный раствор упаривают досуха, остаток растворяют в воде, а из водного раствора выделяют хроматографически с помощью смолы

I RC 50., Пример 5. Валил-аланил-глицил-пролилфенилаланил-(Сг )аргинпн.

Этот пример иллюстрирует получение меченого пептида.

Приготовляют смесь, содержащую 0,392 мг меченого аргинина (Сг4, 0,5 милликюри) в

5,0 мл 0,01 н. соляной кислоты и 421 мг немеченого аргинина в 20 мл 1 Ч буферного раствора бората калия, при рН 10,5. Отбирают

0,2 мл смеси и к ней добавляют 401 мг (5% -ный молярнййг избыток) N-карбоксиангидрида фенилаланина (сразу) при интенсив268305

9 ном перемешивании при температуре 0 — 2 С в течение 1 мин, поддерживая рН в интервале

10,5 — 10,4 5 н. едким кали. В конце реакции приливают каплю каприлового спирта в качестве пеногасителя, Затем рН доводят до 3,5 концентрированной серной кислотой, пропускают через смесь струю азота в течение

10 мин, поднимают рН до 10,2 с помощью концентрированного (раствора) едкого кали и отбирают 0,1 мл реакционной смеси, содержащей пролиларгинин (Сг4) .

В образовавшуюся смесь вводят 300,5 мг (6,5О/О-ный молярный избыток) N-карбоксиангидрида пролина при интенсивном перемешивании, при 0 — 2 С. Реакция продолжается

1 мин, рН поддерживают в интервале 10,2—

10,1 5 н. раствором едкого кали. Декарбоксилирование ведут -при рН 3,0 вышеописанным способом. Затем повышают рН до 10,2 концентрйрованньгм раствором едкого кали и отбирают: на анализ 0,1 мл пробы, содержащей глицил-пролил-фенилаланил-аргинин (Сг4).

Тетрапептид переводят в N-карбоксипептид аланил-глицил-пролил - фенилаланил - аргинина (Сг4) добавлением 248 мг (8О/о-ный молярный избыток) N-карбоксиангидоида аланина в реакционную смесь при 0 — 2"С и интенсивном перемешивании. Реакцию продолжают

1 мин, поддерживая рН в интервале 10,2 — 10,0

5 н. раствором едкого кали, а N-карбоксипептид декарбоксилируют при рН 3 вышеописанным способом. Далее рН повышают до 10,2 концентрированным водным раствором едкого кали и отбирают на анализ 0,1 мл пробы, содержащей нужное соединение.

Затем в реакционную смесь вносят 340 мг ангидрида N-карбоксивалина при 0 — 2 С и интенсивном перемешивании. Реакцию продолжают 2 мин, поддерживая рН в интервале

10,3 — 10,0 5 и. раствором едкого кали. Далее концентрированной серной кислотой устанавливают рН 6,5 и отбирают на анализ 0,2 мл пробы, содержащей нужный радиоактивный гексапептид.

Каждую из проб хроматографируют на бумаге, применяя систему бутанол — уксусная кислота — вода в соотношении 4: 1: 5. Хроматограммы проявляют на радиоактивность. Результаты показывают, что свыше 85О/о продуктов каждой из реакции весьма загрязнены побочными продуктами.

Реакционную смесь подвергают лиофильной сушке, остаток экстрагируют трижды (по

150 мл) метанолом, экстракты объединяют и упаривают под вакуумом при 40 С досуха.

Остаток растворяют в 2 мл воды, /4 часть раствора разбавляют в соотношении 1: 1. Разбавленный раствор хроматографируют на колонке 200 мл с карбоксильной ионообменной смолой (С-50 фирмы Ром и Хасс, Филадельфия; диаметр 2,2 см, высота 55 ам) в водородной форме. Через колонку пропускают раствор со скоростью 2.5 млlмин, затем промывают водой в количестве 2 л, элюируют 0,01 н. серной кислотой. Элюент проверяют на изотоп С14, 5

55 используя антраценовую колонку, с начальной скоростью 0,2 мл/мин. Затем скорость постепенно в течение 20 час повышают до

0,6 мл/мин и поддерживают ее постоянной до конца. Элюент собирают во фракции по

24 мл, а нужный продукт выделяют из фракций 25 — 72 установлением рН до 9,5 с помощью 50 /О-ного раствора едкого натра и сушат вымораживанием (лиофильная сушка). Остаток экстрагнруют метанолом., экстракт упаривают под вакуумом при 40 С досуха, Остаток растворяют в небольшом количестве воды, рН доводят до 3,5 концентрированной соляной кислотой. Раствор подвергают лиофильной сушке, после чего заданный продукт перекристаллизовывают нз смеси вода — этанол.

Пример 6. Брадикинин.

Табл. 5 иллюстрирует получение нонапептида аргинил-пролил-пролил-глицил-фенилаланил-серил-пролил-фенилаланил-аргинина по предлагаемому способу. Таблица показывает последовательность стадий внесения Х-карбоксиангидридов или N-тиокарбоксиангидридов с целью образования заданного продукта. Реакция начинается между 1 ммоль аргинина и

1 ммоль ангидрида N-карбоксифенилаланина в 10 лил водного буферного раствора борной кислоты при рН 10,5 рН реакционной смеси поддерживают 50 /0-ным водным раствоедкого натра в течение реакции.

Промежуточный пролил-фенилаланил-аргинпн выделяют с конечной декарбоксилизацией при рН 3, лиофильной сушкой смеси и растворением остатка метанолом. Метанольныйг раствор хроматографируют на силикагеле (колонке) и заданный трипептид элюируют

20О/О-ным водным метанолом, содержащим достаточное количество уксусной кислоты, чтобы поддерживать рН около 5. Трипептид превращают в заданный нонапептид последующими реакциями (без выделения промежуточных продуктов) . По первой реакции (стадия 3)

1 ммоль трипептида в 5 млголь воды реагирует с эквивалентным количеством ангидрида

N-тиокарбоксисерина при рН 9 и температуре

4 С в продолжение 30 лгин. Условия второй реакции (стадия 4) указаны в таблице, причем рН регулируют, используя твердую гидроокись бария. Детиокарбоксилирование проводят в конце каждой из реакций концентрированной серной кис.потой. Прежде чем начинать следующую стадию реакции отфильтровываюг выпавший сульфат бария. Конечным продуктом этой серии реакций является раствор сульфата брадикинина, который переводят в свободное основание и выделяют хроматографически на ионообменной сульфоновой смоле IRC-50 с постепенным элюированием водным раствором уксусной кислоты.

Пример 7. Серил-пролил-фенилаланиларгинин.

15,75 г хлоргидрата аргинина растворяют в

2,62 л буферного раствора тетрабората натрия, рН 10. Концентрированной серной кислотой рН снижают до 3 и продувают азот в те268305

Таблица 5

Концентрация аминокислоты в буфере, яяолб/мл

Температура, С

Время, Реа гент

РН

Субстрат стадии мин

ФЕНИКСА

ПРОМСА

Сер-ТСА

АРГ

ФЕН-АРГ

Пептид. полученный иа предыдущей стадии

То же

1/10

1/10

1/5

10,5

10,5

9,0

30

ФЕН- TCA

ГЛИ-ТСА

ПРО-ТСА

ПРО-ТСА

АРГ-ТСА

1/5

1/5

1/5

1/5

1/5

9,5

9,0

9,0

9,0

9,5

Предмет изобретения

Составитель А. Д. Акимова

Редактор Л. К. Ушакова Техред 3. Н. Тараненко Корректор А. П. Васильева и С. NL Сигал

Заказ 2086/19 Тираж 480 Подписное

ЦНИИПИ Комитета по делам изобретений г открытий при Совете Министров СССР

Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Тын гр;.фия, пр. Сапунова, 2 чение 10 мин. Далее рН повышают до 10,2

50%-ным водным раствором едкого патра, после чего раствор охлаждают до 0 С. В смесь загружают 400 г льда и зачем 82,5 ммоль ангидрида N-карбоксифенилаланина в 20 мл ацетона. Смесь интенсивно перемешивают

1 мин при указанной температуре и подкисляют концентрированной серной кислотой до рН

3, продувая азотом в течение 10 мин. Затем подщелачивают 50%-ным водным раствором едкого натра до рН 9,5 и загружают 400 г льда и 112,5 ммоль ангидрида N-карбоксипролина в 150 мл ацетона. Раствор интенсивно перемешивают 1 мин при 0 С и декарбоксилируют по вышеописанному методу. Операцию повторяют при рН 9,3 добавлением 15,0 ммоль трифторацетилангидрида N-кар боксисерина в

150 мл ацетона, затем перемешивают 1 мин, доводят рН до 7 и сушат вымораживанием.

Снликагель с абсорбированным продуктом вносят в силикагелевую колонку, предварительно обработанную изопропанолом, далее проявляют, используя систему метанол: вода:

: аммиак в соотношении 80: 18: 2, и выделяют заданный тетрапептид, не содержащий трифторацетильной группы.

Аналогично получают следующие соединения, используя трифторацетильное и трихлорацетильное производные соответствующих ангидридов N-карбокси или N-тиокарбокси-аминокислот (в каждом случае выделяют продукт, не содержащий защитной оксигруппы.

При И-тиокарбоксисоединениях величина рН сочетания равна 8,8 вместо 9,3):

Треонил-пролил-фенилаланил-аргинин

20 Оксипролил-пролил-фенилаланил-аргинин р-Фенилсерил-пролил-фенилаланил-аргинин р-Оксилейцил-пролил-фенилаланил-аргинин р-Оксинорвалил-пролил - фенилаланил-аргинин

25 ч-Оксинорвалил-пролил - фенилаланил-арги нин

I. Способ получения пептидов или их про30 изводных путем взаимодействия аминокислоты или пептида меньшей длины или их производных с ангидридом в водной среде при перемешивании при температуре ниже 10 С и огпимальном значении рН с последующим вы35 делением конечного продукта известным способом, отличаюигийся тем, что, с целью упрощения управляемого синтеза пептидов, в качестве ангидрида используют N-карбоксиангидриды или N-тиокарбоксиангидриды аминокис40 лот или их производных и процесс ведут при защитном рН 4 — 11 с последующим подкислением реакционной смеси до рН ниже 3 — 5.

2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что процесс ведут в водной среде, содержащей

45 буферный раствор.

3. Способ по пп. 1 и 2, отличающийся тем, что в случае применения N-тиокарбоксиангидрида процесс ведут при температуре ниже

40 С.