Штамм гриба eremothecium ashbyi - продуцент эфирного масла с запахом цветков розы

Изобретение относится к биотехнологии. Штамм Eremothecium ashbyi Guill. sp-916 депонирован во Всероссийской Коллекции Промышленных Микроорганизмов под регистрационным номером ВКПМ F-1320. Штамм может быть использован для применения в технологии получения эфирного масла с запахом цветков розы. 2 табл., 3 пр.

 

Изобретение относится к биотехнологии, прикладной микробиологии и может быть использовано для применения в качестве продуцента эфирного масла. Целью изобретения является получение нового штамма гриба Eremothecium ashbyi Guill., синтезирующего эфирное масло с запахом цветков розы. Новый штамм Eremothecium ashbyi Guill. ВКПМ F-1320 является мутантом, селекционированным из популяции авторского штамма Eremothecium ashbyi ВКМ F-3009.

Изобретение относится к биологически чистой культуре штамма гриба Е. ashbyi ВКПМ F-1320, которая может быть использована в качестве продуцента эфирного масла с запахом цветков розы.

В настоящее время известны технологии получения индивидуальных душистых веществ с использованием микроорганизмов, способных как продуцировать их de novo, так и биоконвертировать из дополнительно введенных в питательную среду компонентов [1, 2]. За рубежом в производственных условиях осуществляются биотехнологии 4-декалактона с персиковым запахом (BASF), ванилина (Evolva), макроциклических компонентов мускуса (Nippon Mining Co., Quest International) [3, 4]. Однако производство смеси душистых соединений, в частности с запахом свежих цветков розы, не реализовано. Проведенные в 90-е годы прошлого века исследования Бугорского П.С., Семеновой Е.Ф. показали возможность получения ароматического продукта с запахом розы на основе штаммов Eremothecium ashbyi Guilliermond 1935 и Е. gossypii Kurtzman 1995 [5-8].

Предлагаемый штамм гриба Eremothecium ashbyi Guill. ВКПМ F-1320 новый, в научной и патентной литературе не описан. Наиболее близким к изобретению по технической сущности и достигаемому положительному эффекту являются штамм гриба Eremothecium ashbyi ВКМ F-3009 - продуцент эфирного масла (А.с. 1454845 СССР) [5]. Однако по сравнению с прототипом при одинаковых условиях культивирования и выделения (экстракция гексаном) предлагаемый штамм отличается высокой продуктивностью эфирного масла (табл. 1, 2), в составе которого из монотерпеновых спиртов доминируют гераниол и цитронеллол, придающие ему запах цветков розы.

Идентификацию штамма ВКПМ F-1320 проводили на основе анализа последовательности 18S rRNA, а также по основным культурально-морфологическим признакам, физиолого-биохимическим свойствам согласно Определителю Kurtzman'a [11].

Для проверки чистоты культур был произведен посев коллекционного образца на агар Сабуро и инкубация его в течение 120 часов.

Морфология. Микроорганизм образует на твердой агаризованной среде плоские матовые (позднее глянцевые) колонии желтого цвета, легко снимающиеся с агара. Форма колоний округлая, диаметр 9-10 мм на картофельно-декстрозном агаре, 7-8 мм на сусло-агаре (через 3 суток роста при 28°C). Микроорганизм имеет дихотомически ветвящийся мицелий, состоящий из многоядерных клеток. Диаметр гиф варьирует в пределах 2,3-17,5 мкм. Спорангии продолговатые многоспоровые, конидии веретеновидные. Размеры аскоспор: длина 20,2-25,7 мкм, диаметр 2,4-2,8 мкм.

Физиолого-биохимические свойства. Аэроб. Оптимальная температура роста 25-28°C. Оптимум pH лежит в диапазоне 6,0…6,5. В качестве источников углерода и энергии использует глюкозу, сахарозу, не усваивает целлюлозу. Штамм синтезирует эфирное масло, которое обладает запахом, схожим с цветками розы, и содержит гераниол (43,1-51,4%), цитронеллол (0,0-1,9), ФЭС (43,7-61,4%). Селекционированный штамм Е. ashbyi отличается более высокой продуктивностью (табл. 1) и компонентным составом синтезируемого ароматического продукта от исходного штамма-прототипа (табл. 2).

Условия хранения штамма

Методы хранения: в пробирках на твердой скошенной агаризованной среде до 1 месяца при температуре 24°C, до 3 месяцев при температуре 5°C, до 5 лет под вазелиновым маслом.

Среды хранения: агар Сабуро (г/л: глюкоза - 40,0; пептон - 10,0; агар-агар - 18,0-20,0); глюкозо-пептонный агар с дрожжевым экстрактом (г/л: глюкоза - 10,0-30,0; пептон - 2,0-10,0; дрожжевой экстракт - 0,5-3,0; агар-агар - 18,0-20,0); мальт-пептонный агар (г/л: мальт-экстракт - 15,0-30,0; пептон - 1,0-4,0; агар-агар - 18,0-20,0); мальт-агар (г/л: солодовое сусло (3,5°Б) - 1,0 л; агар-агар - 18,0-20,0); картофельно-глюкозный агар (г/л: картофель - 200,0; глюкоза - 1,0-10,0; агар-агар - 18,0-20,0); соево-сахарозный агар (г/л: сахароза - 10,0-30,0; соевая мука - 10,0-40,0; агар-агар - 18,0-20,0).

Среды культивирования

Твердые: агар Сабуро (г/л: глюкоза - 40,0; пептон - 10,0; агар-агар - 18,0-20,0); глюкозо-пептонный агар с дрожжевым экстрактом (г/л: глюкоза - 10,0-30,0; пептон - 2,0-10,0; дрожжевой экстракт - 0,5-3,0; гидроортофосфат калия - 0,0-0,5; агар-агар - 18,0-20,0); мальт-пептонный агар (г/л: мальт-экстракт - 15,0-30,0; пептон - 1,0-4,0; агар-агар - 18,0-20,0); мальт-агар (г/л: солодовое сусло (3,5°Б) - 1,0 л; агар-агар - 18,0-20,0); картофельно-глюкозный агар (г/л: картофель - 200,0; глюкоза - 1,0-10,0; агар-агар - 18,0-20,0); соево-сахарозный агар (г/л: сахароза - 10,0-30,0; соевая мука - 10,0-40,0; агар-агар - 18,0-20,0); рисовый агар (г/л: обезвоженные рисовые хлопья - 20,0; глюкоза - 10,0-20,0; агар-агар - 15,0-20,0);

Жидкие: соево-сахарозная (г/л: соевая мука - 10,0-30,0, сахароза - 10,0-35,0); солодовый бульон с дрожжевым экстрактом (г/л: экстракт солода - 5,0-15,0, мальтоза - 5,0-10,0, дрожжевой экстракт - 0,5-2,0, глюкоза - 7,5-15,0, пептон - 3,0-10,0, гидроортофосфат калия - 0,0-0,5); глюкозо-пептонная (г/л: глюкоза - 7,5-15,0, пептон - 2,0-10,0, натрия сукцинат - 1,0-2,5, калия гидроортофосфат - 0,0-1,0, инозит - 0,0-0,5).

Температура и время культивирования: 25-28°С, 7 суток.

Использование штамма иллюстрируется следующим примерами.

Пример 1. Штамм выращивали в течение 5 суток при 28°С в пробирках на скошенной агаризованной среде следующего состава (г/л): глюкоза - 10,0, пептон - 3,0, дрожжевой экстракт - 0,5, гидроортофосфат калия - 0,5, агар-агар - 20,0, вода дистиллированная - до 1 л. Для образования и накопления эфирного масла вносили клеточную суспензию в изотоническом растворе, соответствующую стандарту мутности 2, в количестве 2% в колбы с жидкой питательной средой следующего состава (г/л): экстракт солода - 6,0, мальтоза - 6,0, дрожжевой экстракт - 1,2, глюкоза - 13,5, пептон - 4,0, гидроортофосфат калия - 0,5, вода дистиллированная - до 1 л. Инкубирование осуществляли при 28°С на качалке (150 об/мин) в течение 120 часов. Эфирное масло экстрагировали гексаном. Количество ароматического продукта составило 181,1 мг/л. Состав ароматоообразующих соединений, мас.%: гераниол 43,8, цитронеллол 1,9, β-фенилэтанол 51,4, а также идентифицированы линалоол, фарнезол, нераль и гераниаль.

Пример 2. Штамм выращивали в течение 6 суток при 28°С в пробирках на скошенной агаризованной среде следующего состава (г/л): глюкоза - 10,0, пептон - 3,0, дрожжевой экстракт - 0,5, гидроортофосфат калия - 0,5, агар-агар - 20,0, вода дистиллированная - до 1 л. Для получения посевного материала вносили клеточную суспензию в изотоническом растворе, соответствующую стандарту мутности 1, в количестве 1% в пробирки с жидкой глюкозо-пептонной питательной средой и помещали при 28°С на качалку (180 об/мин). Засев 24-часовым инокулятом (5% по объему) проводили в бульон с экстрактом солода. Инкубирование осуществляли при 28°С на качалке (220 об/мин) в течение 59 часов. Эфирное масло экстрагировали гексаном. Количество ароматического продукта достигло 272,0 мг/л. Состав ароматообразующих соединений, мас.%: гераниол 46,85, цитронеллол 1,36, β-фенилэтанол 54,75.

Пример 3. Штамм выращивали в течение 7 дней при 28°С в пробирках на скошенном картофельно-глюкозном агаре. Культуру использовали для получения инокулята. Засев проводили в жидкую питательную среду следующего состава (г/л): глюкоза - 10,0, пептон - 3,0, дрожжевой экстракт - 0,5, натрия сукцинат - 1,5, калия гидроортофосфат - 0,5, инозит - 0,14, вода дистиллированная - до 1 л. Культивировали при 28°C в течение 48 часов на качалке (220 об/мин). Для образования и накопления эфирного масла инокулят в количестве 5% вносили в биореактор (10 л) с жидкой питательной средой следующего состава (г/л): соевая мука - 20,0, сахароза - 20,0, воды дистиллированной до 1 л. Культивирование осуществляли в течение 48 часов при 28°C, 600 об./мин., аэрации 500 л/ч. Эфирное масло экстрагировали гексаном. Количество ароматического продукта достигло 336,1 мг/л. Состав ароматообразующих соединений, мас.%: гераниол 48,38, цитронеллол 1,31, β-фенилэтанол 50,44.

Список литературы

1. Krings, U. Biotechnological production of flavours and fragrances / U. Krings, R.G. Berger // Appl. Microbiol. Biotechnol. - 1998. - V. 49. - P. 1-8.

2. Biotechnological production of bioflavors and functional sugars / J.L. Bicas, J.C. Silva, A.P. Dionisio, G.M. Pastore // Ciencia e Technologia de Alimentos. - 2010. - V. 30, №1. - P. 7-18.

3. Production of flavours by microorganisms / L. Janssens, H.L. De Pooter, N.M. Schamp, E.J. Vandamme // Process Biochemistry. - 1992. - V. 27. - P. 195-215.

4. Bomgardner, M.M. The sweet smell of microbes / M.M. Bomgardner // Chemical & Engineering News. - 2012. - V. 90, №29. - P. 25-29.

5. A.c. 1454845 СССР Штамм гриба Eremothecium ashbyi - продуцент эфирного масла / Семенова Е.Ф., Родов B.C., Бугорский П.С. (СССР) Заявл. 28.07.87 (заявка №4291537 с датой приоритета изобретения 28.07.1987 г.). Зарегистрировано в Государственном реестре изобретений СССР 01.10.1988 г. Опубл. 30.01.89, БИ №4.

6. А.с. 1794948 СССР Штамм гриба Ashbya gossypii - продуцент эфирного масла / Семенова Е.Ф., Бугорский П.С., Радзимовская С.Б. (СССР). Заявл. 23.08.90 (заявка №4862283 с датой приоритета изобретения 23.08.1990 г.). Зарегистрировано в Государственном реестре изобретений СССР 08.10.1992 г. Опубл. 15.02.93, БИ №6.

7. А.с. 1421765 СССР Способ получения смеси душистых веществ, обладающей запахом розы / Бугорский П.С., Семенова Е.Ф., Родов B.C., Миронов В.А. (СССР) Заявл. 22.05.87 (заявка №4246910 с датой приоритета изобретения 22.05.1987 г.). Зарегистрировано в Государственном реестре изобретений СССР 08.05.1988 г. Опубл. 07.09.88, БИ №33.

8. А.с. 1698276 СССР Способ получения ароматического продукта с запахом розы / Семенова Е.Ф., Бугорский П.С. (СССР). Заявл. 20.07.88 (заявка №4600171 с датой приоритета изобретения 20.07.1988 г.). Зарегистрировано в Государственном реестре изобретений СССР 15.08.1991 г. Опубл. 15.12.91, БИ №46.

9. The yeast, a taxonomic study. Ed. by Kurtzman CP. Fell J.W. Fourth Edition. - Elsevier Science, 1998. - 1055 p.

Штамм гриба Eremothecium ashbyi ВКПМ F-1320 - продуцент эфирного масла с запахом цветков розы.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к биотехнологии. Предложен рекомбинантный штамм мицелиального гриба Penicillium canescens СL14 ВКМ F-4706D, продуцирующий бактериальную термофильную целлюлазу Cel5L из Clostridium thermocellum с молекулярной массой 48 кДа.

Настоящее изобретение относится к биотехнологии и пищевой промышленности. Предложен способ производства консерванта продуктов питания.
Изобретение относится к биотехнологии. Способ получения органического пигмента для окраски полимерных материалов предусматривает выращивание штамма пигментсодержащего гриба Hypomyces odoratus ВКПМ F-242 на питательной среде, содержащей разваренное зерно пшеницы или овса, отруби пшеничные или ржаные, березовые опилки, измельченные кукурузные кочерыжки, макро– и микроэлементы и водопроводную воду при заданном соотношении компонентов, в условиях твердофазного культивирования при температуре 22-24°C в течение 7-10 дней и рН среды 6,0-6,2.

Изобретение относится к биотехнологии. Способ получения диатомовой водоросли Cylindrotheca closterium предусматривает интенсивное накопительное культивирование Cylindrotheca closterium в течение 7-10 суток в плоских фотобиореакторах с толщиной рабочего слоя 5-8 см при круглосуточном освещении 7-13,5 клк и температуре 20-22°С на питательной среде RS на основе стерильной морской воды, содержащей NaNO3, Na2SiO3×9H2O, NaH2PO4×2H2O, Na2EDTA, FeSO4×7H2O, CuSO4×5H2O, ZnSO4×7Н2O, CoCl2×6H2O, MnCl2×4H2O, NaMoO4×2H2O в заданном соотношении компонентов.
Изобретение относится к биотехнологии. Способ культивирования бифидобактерий предусматривает внесение бифидобактерий в питательную среду, содержащую гидролизат гороха с содержанием аминного азота 160-180 мг, отвар листьев и стеблей люцерны, кукурузный экстракт, Д(-)-лактозу, натрий фосфорнокислый однозамещенный, сульфат железа семиводный, цистеин и осветленную творожную сыворотку в заданном соотношении компонентов и проводят наращивание биомассы бифидобактерий в течение 24 часов.

Изобретение относится к области биотехнологии. Предложен способ получения 3,3',3'',3'''-(3,8,13,17-тетраметилпорфирин-2,7,12,18-тетраил) тетрапропионовой кислоты (копропорфирина III) из культуральной жидкости процесса биосинтеза штаммом Arthrobacter.
Изобретение относится к биотехнологии. Планктонный штамм одноклеточной зеленой водоросли Chlorella vulgaris GKO, обладающий тонкой оболочкой, депонирован во Всероссийской Коллекции Промышленных Микроорганизмов под регистрационным номером ВКПМ Al-24.

Изобретение относится к биотехнологии. Предложен способ культивирования микроводоросли Chlorella.
Изобретение относится к биотехнологии. Штамм одноклеточных микроводорослей Mallomonas kalinae SX-1 – продуцент фукоксантина - депонирован в Национальном биоресурсном центре Всероссийской коллекции промышленных микроорганизмов под регистрационным номером ВКПМ Al-23.

Изобретение относится к масложировой промышленности. Способ ферментативного дегуммирования триглицеридов или снижения содержания масла в камеди растительного масла, которая собирается при дегуммировании масла, который содержит следующие этапы: а) приведение триглицеридов или камеди растительного масла, которая собирается при дегуммировании масла, в контакт с композицией, которая содержит по меньшей мере один расщепляющий гликозиды фермент, выбранный из амилаз, амилоглюкозидаз, изоамилаз, глюкоамилаз, глюкозидаз, галактозидаз, глюканаз, пуллуланаз, арабиназ, ламинараназ, пектолиаз, маннаназ, декстраназ, пектиназ, целлюлаз, целлобиаз и ксиланаз, причем по меньшей мере один расщепляющий гликозиды фермент не демонстрирует никакой фосфолипазной и никакой ацилтрансферазной активности и композиция не содержит ни фосфолипазы, ни ацилтрансферазы; и b1) в случае триглицеридов в качестве исходного материала: отделение камедей от триглицеридов; или b2) в случае камеди растительного масла в качестве исходного материала: разделение на водную, содержащую лецитин, фазу и фазу, содержащую масло.

Изобретение относится к биологическим средствам для повышения продуктивности культурных растений и защиты их от болезней. Изобретение представляет собой базовую композицию комплексного биопрепарата для растениеводства, включающую в себя комплекс жирных кислот с преобладанием арахидоновой кислоты, продуцируемых микромицетом Mortierella alpina ВКПМ F-1134 и целевые добавки: биоразлагаемый детергент, а также аскорбиновую кислоту или α-токоферол или β-каротин, а среди жирных кислот присутствуют гептадекановая и эйкозановая кислоты, в ее составе также присутствуют продуцируемые штаммом Mortierella alpina ВКПМ F-1134 миристиновая, пентадекановая, пальмитиновая, стеариновая, олеиновая, линолевая, γ-линоленовая, дигомо- γ-линоленовая, эйкозадиеновая и гондоиновая жирные кислоты, содержание и соотношение которых не нормируется.

Изобретение относится к биотехнологии. Штамм базидиомицета Fomitopsis pinicola МТ-5.21 обладает способностью продуцировать липиды в условиях погруженного культивирования, с высоким содержанием липидной фракции.

Изобретение относится к биотехнологии, а именно к способу производства пригодного для использования в двигателе сложного метилового эфира жирных кислот (СМЭЖК). Собирают тину морских микроводорослей, выбранных из группы, состоящей из Microspora sp., Cladophora sp.

Предложен штамм гриба Mortierella alpina ВКПМ F-1134 для производства комплекса жирных кислот с преобладанием арахидоновой кислоты, проявляющего рострегулирующий эффект по отношению к растениям.

Изобретение относится к биотехнологии и предназначено для получения биоразрушаемых сополимеров 3-гидроксимасляной и 4-гидроксимасляной кислот [П(3ГБ/4ГБ)], обладающих свойствами эластомеров, перспективных для различных сфер применения: в медицине, в фармакологии.

Изобретение относится к биотехнологии. Предложен способ получения жирных кислот фармакологического и пищевого назначения и их производных общей формулы (I): Осуществляют подачу газа, включающего CO2, в реактор, содержащий по меньшей мере один вид фотосинтезирующих микроводорослей, способных к фотосинтезу с продуцированием биомассы, содержащей соединения (I).

Группа изобретений относится к ферментативному способу получения сложных алкилэфиров жирных кислот для применения в областях производства биотоплива, продуктов питания и детергентов и системе для осуществления такого способа.

Настоящее изобретение относится к биохимии и раскрывает способ рафинирования масла. Для осуществления способа сначала смешивают водный раствор кислоты с маслом с получением смеси, имеющей рН 1-4, затем добавляют в указанную смесь основания с получением смеси, имеющей рН 6-8.

Изобретение относится к биотехнологии, прикладной микробиологии и может быть использовано для получения эфирного масла. Штамм Eremothecium ashbyi Guill.

Изобретение относится к биотехнологии, может быть использовано при производстве биологически активных добавок пищевого, кормового и медицинского назначения. Осуществляют двухстадийную обработку мицелиальной биомассы гриба Aspergillus oryzae 12-84 (RCAM 01134) при естественном значении pH под действием внутриклеточных ферментов.

Изобретение относится к биотехнологии. Штамм Eremothecium ashbyi Guill. sp-916 депонирован во Всероссийской Коллекции Промышленных Микроорганизмов под регистрационным номером ВКПМ F-1320. Штамм может быть использован для применения в технологии получения эфирного масла с запахом цветков розы. 2 табл., 3 пр.

Наверх