Иммуномодулятор



Иммуномодулятор
Иммуномодулятор
Иммуномодулятор
Иммуномодулятор

Владельцы патента RU 2691143:

Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Научно-исследовательский институт фундаментальной и клинической иммунологии" (RU)

Изобретение относится к медицине, а именно к синтетическим иммуномодуляторам на основе хлорароматического производного мочевины. Применяют соединение мета-хлорбензгидрилмочевины в качестве иммуномодулятора при хроническом алкоголизме. Использование данного соединения позволяет модулировать функциональную активность иммунной системы и ее клеточных элементов при хроническом алкоголизме. 2 ил., 3 табл., 5 пр.

 

Изобретение относится к синтетическим иммуномодуляторам на основе хлорароматического производного мочевины и может быть использовано в качестве модулятора функциональной активности иммунной системы и ее клеточных элементов.

Функциональная активность иммунной системы, и иммунокомпетентных клеток в частности, играет важную роль в организме на всех этапах онтогенеза (Ярилин А.А. Иммунология. М.: Медицина, 2013, 288 с; Маркова Е.В., Аникеева О.С. Влияние иммунокомпетентных клеток на формирование поведенческого стереотипа в онтогенезе. В мире научных открытий, 2015, №2 (62), С. 154-170). Нарушение функционирования иммунной системы является существенным звеном патогенеза многих заболеваний, оказывая негативное влияние на их течение, утяжеляя клиническую картину, снижая эффективность терапии (Markova E.V., Knyazeva М.А., Kozlov V.A. Immune parameters in mice with aggressive and depressive-like behavior. Applied and Fundamental Studies Proceedings of the 1st International Academic Conference. Edited by Yan Maximov. 2012. C. 21-27; Маркова E.B., Савкин И.В., Климова Т.В. Нейроиммунные механизмы психосоматической патологии. Симбирцев А.С. Цитокины в патогенезе и лечении заболеваний человека. Издательство Фолиант, 2018, 512 с.) В патогенезе эпилепсии и других заболеваний нервной системы, сопровождающихся судорогами, а также алкоголизма, нарушение функциональной активности иммунной системы и иммунокомпетентных клеток, в частности, также играет существенную роль. Поэтому возникла необходимость исследовать влияние известных антиконвульсантов на функцию клеточных элементов иммунной системы в норме и при патологии.

Известно, что производные мочевины обладают широким спектром биологической активности, в том числе противосудорожной и ферментиндуцирующей (Химико-фармацевтический журнал, N 6, 1976, с. 63-66).

Известны оптически активные изомеры α-этилфенилацетилмочевины, применяемые для лечения эпилепсии и подобных состояний, не имеющие по существу никаких седативных, снотворных или возбудительных свойств.

Препараты содержат оптически активные изомеры α-этилфенилацетилмочевины вместе с одним или несколькими лекарственными средствами, имеющими снотворное и/или седативное действие (GB 864536, A61K 31/17, 1961).

Известны соединения N-арил-N'-(3-метил или этил-4-оксотиазолидинилиден) мочевины), которые обладают противосудорожной активностью и полезны при лечении эпилепсии (US 4402964, C07D 277/54, 1983).

Известны соединения N-арил-N'-(2-тиазолидинилиден) мочевины, которые обладают противосудорожной активностью и полезны при лечении эпилепсии (US 4542144, C07D 277/58, 1985).

Известен класс производных глицилмочевины, которые используют для лечения дисфункций ЦНС, таких как эпилепсия и судорожные расстройства (US 5288905, С07С 275/50, 1994).

Известно применение N-(2,6-дизамещенных фенил)-N'-3- и 4-пиридинилмочевины и их фармацевтически приемлемых кислотно-аддитивных солей. Такие соединения, как моногидрохлорид N-(2-хлор-6-метилфенил)-N'-4-пиридинилмочевины или N-(2,3-дихлорфенил)-N-4-пиридинилмочевина, используются для лечения нейродегенеративных расстройств, перинатальной асфиксии, болезни Альцгеймера, болезни Хантингтона, болезни Паркинсона и бокового амиотрофического склероза. Указанное изобретение относится к таким же новым применениям известных противосудорожных соединений, как ралитолин, фенитоин, ламотригин, тетродотоксин, лидокаин и карбамазепин (WO 9418972, A61K 31/165, 1994).

Известны соединения, содержащие ацилмочевину и композиции, содержащие их, и их использование в лечении неврологических заболеваний и расстройств, таких как эпилепсия, нейропатическая боль, биполярное расстройство, эпилептический статус, химически индуцированные судороги и/или приступы судорог, фебрильные состояния судорог, нарушения обмена веществ. Также предусматривается использование этих и других соединений, содержащих ацилмочевину, при лечении неврологических заболеваний и расстройств (US 2010280124, A61K 31/17, 2010).

Все описанные производные мочевины обладают противосудорожным действием.

Собственно бензгидрилмочевина также обладает выраженной противосудорожной активностью, сравнительно низкой острой токсичностью, но при длительном применении вызывает нежелательные побочные эффекты (RU 2024501, С07С 275/50, 1994). Поэтому были исследованы производные бензгидрилмочевины, которые этих недостатков не имеют.

В связи с этим описаны гликозиды бензгидрилмочевины, проявляющие противосудорожную активность (SU 675790, С07С 127/15, 1982).

Представляет интерес вещество мета-хлорбензгидрилмочевина (в другой редакции может обозначаться как - мета-хлордифенилметилмочевина).

Известны вещества относящиеся к оптическим изомерам (+) и (-) - бензгидрилмочевины и (+) и (-) - 1-[(3-хлорфенил) фенилметила] мочевины, фармацевтической композиции на их основе и способа получения указанных оптических изомеров для их использования на основе различной терапевтической активности, где радикалы выбраны из группы, включающей водород, алкил, галоген, нитро, амино, алкиламино и гидроксигруппы и расположены в орто-, пара- или мета-положениях бензольных колец. Эти вещества обладают противосудорожным действием (RU 2537361, С07С 275/18, A61K 31/17, 2013; US 2016244404, С07С 273/18, 2016).

Известно вещество мета-хлордифенилмочевина, которое применяется как антиаритмическое и противосудорожное средство в медицине (RU 1334658, С07С 273/18, 1995).

Известно лекарственное вещество - мета-хлордифенилметилмочевина, которое является оригинальным отечественным антиконвульсантом и рекомендовано Фармкомитетом СССР к медицинскому применению в качестве противоэпилептического средства под названием галодиф (RU 2092478, С07С 275/24, 1997; RU 2569684, С07С 275/24, С07С 273/18, 2015).

Известно применение мета-хлорбензгидрилмочевины в качестве средства, снижающего алкогольную мотивацию. Средство снижает потребление этилового алкоголя и выраженность патологического влечения к этанолу. (RU 2155034, A61K 31/17, 2000).

Известен способ реабилитации больных алкоголизмом при абстинентном синдроме. Для этого при проведении фармакотерапии дополнительно вводят мета-хлордифенилметилмочевину в дозе 100 мг 3 раза в день курсом 21 день. Способ позволяет достичь устойчивого лечебного эффекта, выражающегося в снижении выраженности патологического влечения к алкоголю, при наличии различной степени выраженности аффективных расстройств за счет нормотимолептического, аналгезирующего и вегетостабилизирующего эффектов (RU 2436573 A61K 31/17, 2011)..

Мета-хлорбензгидрилмочевина (мета-хлордифенилметилмочевина) повышает нейромедиацию гамма-аминомасляной кислоты (ГАМК) в мозге, обладая модуляторным действием на нейрональные рецепторы, в частности ГАМКА/БД-рецепторную систему, что может являться механизмом указанных выше свойств соединения (Шушпанова Т.В. и др. Влияние антиконвульсанта мета-хлор-бензгидрилмочевины (м-хБГМ) на бензодиазепиновую рецепторную систему мозга крыс при экспериментальном алкоголизме. Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 2013, Т. 156, №. 12, С. 779-785).

Учитывая наличие функциональных ГАМКА рецепторов на поверхности клеток иммунной системы, в частности. Т-лимфоцитов (Alam S. et al. Human peripheral blood mononuclear cells express GABAA receptor subunits //Molecular immunology, 2006, T. 43, №. 9, C. 1432-1442; Девойно Л.В., Идова Г.В., Альперина Е.Л. Психонейроиммуномодуляция: поведение и иммунитет. Роль "нейромедиаторной установки мозга". 2009; Mendu S.К. et al. Increased GABAA channel subunits expression in CD8+ but not in CD4+ T cells in BB rats developing diabetes compared to their congenic littermates. Molecular immunology, 2011, T. 48, №. 4, C. 399-407), можно предположить, что мета-хлорбензгидрилмочевина, аналогично эффектам на нейрональных клетках, может вызывает модуляцию функциональной активности клеток иммунной системы.

С целью расширения арсенала синтетических средств, обладающих иммуномодулирующими свойствами, предлагается использовать мета-хлорбензгидрилмочевину в качестве иммуномодулятора, в том числе и при хроническом алкоголизме.

Сущность изобретения заключается в том, что при изучении влияния мета-хлорбензгидрилмочевины на пролиферативную активность клеток иммунной системы в норме и при патологии (хронический алкоголизм) in vivo и in vitro и интенсивность гуморального и клеточного звеньев иммунного ответа показан иммуномодулирующий эффект.

В работе использовали половозрелых мышей-самцов (СВА × C57BI/6)F1 здоровых и в состоянии экспериментального хронического алкоголизма.

Экспериментальные животные были получены из одного питомника и рандомизированы по возрасту и массе тела. До и в период проведения эксперимента контрольные и опытные животные содержались в виварии, в одинаковых условиях в стандартных пластиковых клетках 40×20×20 не более 10 особей в клетке с подстилкой из мелкой древесной стружки на стандартном рационе и при нормальном световом режиме. Все исследования проводились в одно и то же время суток (с 10 до 14 часов). Исследования проводились в соответствии с правилам, принятыми Европейской конвенцией по защите позвоночных животных используемых для экспериментальных и иных научных целей (Страсбург, 1986), и правилами лабораторной практики (приказ Министерства здравоохранения Российской Федерации от 19.06.2003, N 267).

Пример 1. Определение влияния мета-хлорбензгидрилмочевины на функциональную активность клеток иммунной системы в норме in vitro.

Изучение влияния мета-хлорбензгидрилмочевины на функциональную активность клеток иммунной системы в норме проводили in vitro добавлением соединения в культуральную среду при тестировании спонтанной и митогениндуцированной пролиферативной активности лимфоидных клеток селезенки, взятых от интактных (здоровых) мышей. Животных забивали путем цервикальной дислокации; в стерильных условиях вскрывали брюшную полость, извлекали селезенки, очищали их от соединительной ткани и помещали во флаконы с охлажденной до 4°С средой RPMI-1640 (5 мл на селезенку). Выделенные селезенки измельчали на мельчайшие кусочки при помощи ножниц. Образовавшуюся в результате измельчения суспензию клеток осторожно ресуспензировали с помощью шприца, для того, чтобы распались оставшиеся скопления клеток, центрифугировали 8 мин при 150 д. После удаления надосадочной жидкости, находящиеся в осадке спленоциты ресуспензировали в среде RPMI-1640. Жизнеспособность клеток определяли при помощи окраски трипановым синим.

Пролиферативный ответ спленоцитов оценивали общепринятым методом реакции бластной трансформации лимфоцитов. Суспензию клеток в полной культуральной среде, содержащей RPMI-1640, 5% инактивированной эмбриональной телячьей сыворотки, 2 мМ L-глютамина, 10 мМ HEPES-буфера (Sigma), 5×10-5М 2-меркаптоэтанола (Sigma) и 80 мкг/мл гентамицина вносили в объеме 50 мкл в 96-луночные круглодонные планшеты (Linbro) в концентрации 105 спленоцитов на лунку. К суспензии добавляли: мета-хлорбензгидрилмочевину (10 мкг/мл); субоптимальные концентрации ЛПС E.coli 055:В5 (Sigma) и конкавалина А (Pharmacia), которые составляли соответственно 20 мкг/мл и 3 мкг/мл и/или культуральную среду до полного объема 150 мкл на лунку. Клетки культивировались в течение 72 часов при 37°С и 5% содержании CO2 в атмосфере. За 16 часов до окончания инкубационного периода вводили Н3-тимидин (1 мкКю на лунку). По окончании инкубационного периода клетки собирали на стеклянно-волокнистые фильтры (Flow Lab) с помощью аппарата «Harvester» (TITERTEK). Фильтры помещали во флаконы для сцинтилляционного счета, и радиоактивность подсчитывали в сцинтилляторе (4 г дифенилоксазола и 0,1 г дифенил-оксазолилбензола на 1 л толуола) в жидкостном сцинтилляционном счетчике «Delta» (США). Пролиферативный ответ спленоцитов оценивали по включению в нуклеопротеидные фракции клеток радиоактивной метки. Оценка данных проводилась как в абсолютных значениях (имп/мин), так и относительных индексах пролиферации: (Имп(Образец)/Имп(спонтанная пролиферация)). Результаты представлены в таблице 1.

Результаты, представленные в таблице 1, демонстрируют модулирующий эффект мета-хлорбензгидрилмочевины на пролиферативную активность спленоцитов интактных мышей, а именно, повышение спонтанной пролиферации, усиление стимулирующего действия Т-клеточного митогена (Конканавалин А) и снижение эффекта В-клеточного митогена (ЛПС).

Пример 2. Определение влияния мета-хлорбензгидрилмочевины на функциональную активность клеток иммунной системы при патологии (хроническом алкоголизме) in vitro.

Изучение влияния мета-хлорбензгидрилмочевины на функциональную активность клеток иммунной системы при патологии (хроническом алкоголизме) проводили in vitro добавлением соединения в культуральную среду при тестировании спонтанной и Т-митогениндуцированной пролиферативной активности лимфоидных клеток селезенки, взятых у мышей в состоянии хронического алкоголизма. Для моделирования хронического алкоголизма у мышей-самцов (СВА×C57BI/6)F1 животные в течение 6 месяцев подвергались принудительной алкоголизации (10% раствор этанола в качестве единственного источника жидкости). Животных забивали путем цервикальной дислокации; в стерильных условиях вскрывали брюшную полость, извлекали селезенки, очищали их от соединительной ткани и помещали во флаконы с охлажденной до 4°С средой RPMI-1640 (5 мл на селезенку). Выделенные селезенки измельчали на мельчайшие кусочки при помощи ножниц. Образовавшуюся в результате измельчения суспензию клеток осторожно ресуспензировали с помощью шприца, для того, чтобы распались оставшиеся скопления клеток, центрифугировали 8 мин при 150 д. После удаления надосадочной жидкости, находящиеся в осадке спленоциты ресуспензировали в среде RPMI-1640. Жизнеспособность клеток определяли при помощи окраски трипановым синим.

Пролиферативный ответ спленоцитов оценивали общепринятым методом реакции бластной трансформации лимфоцитов. Суспензию клеток в полной культуральной среде, содержащей RPMI-1640, 5% инактивированной эмбриональной телячьей сыворотки, 2 мМ L-глютамина, 10 мМ HEPES-буфера (Sigma), 5×10-5М 2-меркаптоэтанола (Sigma) и 80 мкг/мл гентамицина вносили в объеме 50 мкл в 96-луночные круглодонные планшеты (Linbro) в концентрации 105 спленоцитов на лунку. К суспензии добавляли: мета-хлорбензгидрилмочевину (10 мкг/мл); субоптимальную концентрацию конканавалина А (Кон A) (Pharmacia), которая составляла 3 мкг/мл и/или культуральную среду до полного объема 150 мкл на лунку. Клетки культивировались в течение 72 часов при 37°С и 5% содержании CO2 в атмосфере. За 16 часов до окончания инкубационного периода вводили Н3-тимидин (1 мкКю на лунку). По окончании инкубационного периода клетки собирали на стеклянно-волокнистые фильтры (Flow Lab) с помощью аппарата «Harvester» (TITERTEK). Фильтры помещали во флаконы для сцинтилляционного счета, и радиоактивность подсчитывали в сцинтилляторе (4 г дифенилоксазола и 0,1 г дифенил-оксазолилбензола на 1 л толуола) в жидкостном сцинтилляционном счетчике «Delta» (США). Пролиферативный ответ спленоцитов оценивали по включению в нуклеопротеидные фракции клеток радиоактивной метки. Оценка данных проводилась как в абсолютных значениях (имп/мин), так и относительных индексах пролиферации: (Имп(Образец)/Имп(спонтанная пролиферация)). Результаты, представлены в таблице 2.

Как видно из таблицы 2, при хроническом алкоголизме спленоциты отличаются нарушенной функциональной активностью, проявляющейся в сочетании повышенной спонтанной пролиферации клеток на фоне их низкой чувствительности к митогену. Результаты, представленные в таблице 2, демонстрируют способность мета-хлорбензгидрилмочевины снижать спонтанную пролиферативную активность спленоцитов мышей в состоянии хронического алкоголизма и восстанавливать чувствительность спленоцитов к стимулирующему действию Т-клеточного митогена практически до уровня, характерного для здоровых (интактных) животных.

Пример 3. Определение влияния мета-хлорбензгидрилмочевины на функциональную активность спленоцитов при патологии (хроническом алкоголизме) in vitro в присутствии гамма-аминомасляной кислоты (ГАМК).

Изучение влияния мета-хлорбензгидрилмочевины на функциональную активность клеток иммунной системы in vitro в присутствии ГАМК проводили добавлением соединения в культуральную среду при тестировании спонтанной пролиферативной активности клеток селезенки, взятых у мышей в состоянии хронического алкоголизма.

Для моделирования хронического алкоголизма у мышей-самцов (СВА×C57BI/6)F1 животные в течение 6 месяцев подвергались принудительной алкоголизации (10% раствор этанола в качестве единственного источника жидкости). Животных забивали путем цервикальной дислокации; в стерильных условиях вскрывали брюшную полость, извлекали селезенки, очищали их от соединительной ткани и помещали во флаконы с охлажденной до 4°С средой RPMI-1640 (5 мл на селезенку). Выделенные селезенки измельчали на мельчайшие кусочки при помощи ножниц. Образовавшуюся в результате измельчения суспензию клеток осторожно ресуспензировали с помощью шприца, для того, чтобы распались оставшиеся скопления клеток, центрифугировали 8 мин при 150 д. После удаления надосадочной жидкости, находящиеся в осадке спленоциты ресуспензировали в среде RPMI-1640. Жизнеспособность клеток определяли при помощи окраски трипановым синим.

Пролиферативный ответ спленоцитов оценивали общепринятым методом реакции бластной трансформации лимфоцитов. Суспензию клеток в полной культуральной среде, содержащей RPMI-1640, 5% инактивированной эмбриональной телячьей сыворотки, 2 мМ L-глютамина, 10 мМ HEPES-буфера (Sigma), 5×10-5М 2-меркаптоэтанола (Sigma) и 80 мкг/мл гентамицина вносили в объеме 50 мкл в 96-луночные круглодонные планшеты (Linbro) в концентрации 105 спленоцитов на лунку. К суспензии добавляли: ГАМК (10 мкг/мл) изолированно и в присутствии мета-хлорбензгидрилмочевины (10 мкг/мл). Клетки культивировались в течение 72 часов при 37°С и 5% содержании CO2 в атмосфере. За 16 часов до окончания инкубационного периода вводили Н3-тимидин (1 мкКю на лунку). По окончании инкубационного периода клетки собирали на стеклянно-волокнистые фильтры (Flow Lab) с помощью аппарата «Harvester» (TITERTEK). Фильтры помещали во флаконы для сцинтилляционного счета, и радиоактивность подсчитывали в сцинтилляторе (4 г дифенилоксазола и 0,1 г дифенилоксазолилбензола на 1 л толуола) в жидкостном сцинтилляционном счетчике «Delta» (США). Пролиферативный ответ спленоцитов оценивали по включению в нуклеопротеидные фракции клеток радиоактивной метки. Оценка данных проводилась как в абсолютных значениях (имп/мин), так и относительных индексах пролиферации: (Имп(Образец)/Имп(спонтанная пролиферация)). Результаты, представлены в таблице 3.

Результаты, представленные в таблице 3, демонстрируют повышение мета-хлорбензгидрилмочевиной пролиферативной активности спленоцитов в присутствии ГАМК при хроническом алкоголизме. Это свидетельствует в пользу того, что мета-хлорбензгидрилмочевина, аналогично эффектам на нейрональных клетках, вызывает модуляцию функциональной активности клеток иммунной системы через прямое воздействие на ГАМКА/БДР рецептурную систему на поверхности клеток иммунной системы.

Пример 4. Определение влияния мета-хлорбензгидрилмочевины на интенсивность гуморального иммунного ответа при патологии (хронического алкоголизма) in vivo.

Для моделирования патологии в виде хронического алкоголизма у мышей-самцов (СБА×C57BI/6)F1 животные в течение 6 месяцев подвергались принудительной алкоголизации (10% раствор этанола в качестве единственного источника жидкости). Затем животные подвергались курсовому (10 дней), введению мета-хлорбензгидрилмочевины в действующей концентрации 100 мг/кг массы тела в сутки в виде суспензии на 1% крахмальной слизи внутрижелудочно, по окончании которого оценивалась интенсивность гуморального иммунного ответа по количеству антителообразующих клеток селезенки (АОК). Определение количества АОК проводилось модифицированным методом A.J. Cunningham (Cunningham A.J. A method of increased sensitivity for detecting single antibody-forming cells. Nature, 1965, N 207, P. 1106-1107) на 5-е сутки после внутрибрюшинной иммунизации ЭБ по количеству локальных зон гемолиза в полужидкой среде. Для этого селезенку измельчали ножницами в бюксе со средой 199, взвесь кусочков ткани несколько раз пропускали с помощью шприца через стальную иглу. Полученную суспензию клеток фильтровали. Конечный объем суспензии доводили до 5 мл. Работы проводили при температуре +4°С. Равные объемы клеточной суспензии, 10% суспензии ЭБ и раствора комплемента смешивали в бюксе и заливали в стеклянные камеры. Камеры были изготовлены следующим образом: между двумя предметными стеклами прокладывали полоску бумаги, а верхние и нижние края склеивали между собой горячим парафином. Когда парафин остывал, полоску бумаги вынимали и в щель между стеклами шприцем заливали смесь из 0,5 мл клеточной суспензии, 0,5 мл ЭБ (10% суспензии) и 0,5 мл комплемента.

Комплемент готовили непосредственно перед заливкой камеры. Учитывали объем суспензии, залитой в камеры. Заполненные камеры инкубировали в течение 45 минут в термостате при температуре 37°С. После инкубации подсчитывали количество локальных зон гемолиза в камере под бинокулярной лупой (увеличение в 20 раз). Зона гемолиза (бляшка) представляет собой округлый участок, почти полностью свободный от эритроцитов. Учитывая число бляшек в камере, количество ядросодержащих клеток в 1 мл клеточной суспензии, объем заполненной камеры и клеточность селезенки. Подсчет ядросодержащих клеток селезенки производили в камере Горяева. Оценивали относительное (на 106 ядросодержащих клеток селезенки) число АОК.

В качестве контроля использовались здоровые животные соответствующего возраста, которые содержались с экспериментальной группой мышей в аналогичных условиях, но не принимали алкоголь.

После курсового (10 дней) введения мета-хлорбензгидрилмочевины у животных в состоянии хронического алгкоголизма регистрировалось повышение гуморального иммунного ответа, оцененное по относительному числу антителообразующих клеток селезенки. На рисунке 1 представлен гуморальный иммунный ответ мышей (CBA×C57BI/6)F1 в состоянии хронического алкоголизма и после курсового приема мета-хлорбензгидрилмочевины: по оси ординат отображено относительное количество антителообразующих клеток селезенки (на 106 ядросодержащих клеток селезенки).

1-я группа столбиков (светлые столбики) - контрольная группа здоровых животных; 2-я группа столбиков (темные столбики) - животные в состоянии хронического алкоголизма; 3-я группа столбиков (серые столбики) - животные в состоянии хронического алкоголизма после курсового приема мета-хлорбензгидрилмочевины.

n=12-15 в каждой группе животных.

р<0,01 - между мышами в состоянии хронического алкоголизма и контрольной группой здоровых животных;

р<0,01 между мышами в состоянии хронического алкоголизма до и после мета-хлорбензгидрилмочевины.

Таким образом, сниженный при хроническом алкоголизме гуморальный иммунный ответ в результате курсового приема мета-хлорбензгидрилмочевины повышается до уровня, характерного для здоровых животных соответствующего возраста.

Пример 5. Определение влияния мета-хлорбензгидрилмочевины на интенсивность клеточного иммунного ответа при патологии (хронического алкоголизма) in vivo.

Для моделирования патологии в виде хронического алкоголизма у мышей-самцов (СВА×C57BI/6)F1 животные в течение 6 месяцев подвергались принудительной алкоголизации (10% раствор этанола в качестве единственного источника жидкости). Затем животные подвергались курсовому (10 дней), введению мета-хлорбензгидрилмочевины в действующей концентрации 100 мг/кг массы тела в сутки в виде суспензии на 1% крахмальной слизи внутрижелудочно, по окончании которого оценивалась интенсивность клеточного иммунного ответа по выраженности развиваемой реакции гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ) в ответ на введение Т-зависимого антигена (эритроцитов барана). Для этого мышей иммунизировали внутрибрюшинным введением эритроцитов барана (0,5%-0,5 мл.). Разрешающую дозу указанного антигена (50%-0,05 мл.) вводили под апоневроз задней стопы через 96 часов. Формирование реакции ГЗТ оценивали через 24 часа после разрешающей инъекции по степени опухания лапы (изменения ее толщины по сравнению с позитивно-контрольной задней лапой того же животного, в которую была введена среда RPMI-1640). Индекс реакции (ИР) определяли для каждой мыши по формуле ИР=(Ро-Рк)/Рк и выражали в процентах (Yoshikai Y., Miake S., Matsumoto Т., et al. Effect of stimulation and blockade of mononuclear phagocyte system on the delayed footpad reaction to SRBC in mice. Immunol., 1979, V. 38, N.3, p. 577-583).

В качестве контроля использовались здоровые животные соответствующего возраста, которые содержались с экспериментальной группой мышей в аналогичных условиях, но не принимали алкоголь.

После курсового (10 дней) введения мета-хлорбензгидрилмочевины у животных в состоянии хронического алгкоголизма регистрировалось повышение клеточного иммунного ответа, оцененное по выраженности (уровню) развития реакции ГЗТ.

На рисунке 2 представлен уровень развития реакции ГЗТ у мышей (CBA×C57BI/6)F1 в состоянии хронического алкоголизма и после курсового приема мета-хлорбензгидрилмочевины: по оси ординат отображен индекс реакции (%);

1-я группа столбиков (светлые столбики) - контрольная группа здоровых животных; 2-я группа столбиков (темные столбики) - животные в состоянии хронического алкоголизма; 3-я группа столбиков (серые столбики) - животные в состоянии хронического алкоголизма после курсового приема мета-хлорбензгидрилмочевины.

n=15 в каждой группе животных.

р<0,01- между мышами в состоянии хронического алкоголизма и контрольной группой здоровых животных;

р<0,01 между мышами в состоянии хронического алкоголизма до и после мета-хлорбензгидрилмочевины.

Таким образом, сниженный при хроническом алкоголизме клеточный иммунный ответ в результате курсового приема мета-хлорбензгидрилмочевины повышается практически до уровня, характерного для здоровых животных соответствующего возраста.

Оценивая в целом результаты, можно утверждать, что мета-хлорбензгидрилмочевина физиологических дозах, оказывает иммуномодулирующий эффект, определяемый состоянием организма. У интактных (здоровых) особей мета-хлорбензгидрилмочевина повышает спонтанную пролиферативную активность лимфоидных клеток иммунной системы, усиливает действие Т-клеточного митогена и снижает эффект В-клеточного митогена на пролиферацию лимфоцитов. При хроническом алкоголизме мета-хлорбензгидрилмочевина снижает повышенную пролиферативную активность лимфоцитов и повышает их сниженную чувствительность к Т-клеточному митогену, при этом повышается сниженный гуморальный и клеточный иммунный ответ. Указанные показатели изменяются практически до уровня, характерного для здоровых особей, что свидетельствует о восстановлении под действием мета-хлорбензгидрилмочевины функциональной активности иммунной системы и ее клеточных элементов при хроническом алкоголизме.

Применение соединения мета-хлорбензгидрилмочевины в качестве иммуномодулятора при хроническом алкоголизме.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к области биохимии, в частности к иммуномодулирующей композиции для лечения состояния, отличающегося гиперчувствительностью к Ara h 1 и/или Ara h 2.

Изобретение относится к области органической химии, а именно к гетероциклическому соединению общей формулы (I) или к его энантиомеру, диастереоизомеру, его соли присоединения с фармацевтически приемлемой кислотой, где Het представляет собой 5,6,7,8-тетрагидроиндолизин, индолизин, 1,2-диметил-1H-пиррол; Т представляет собой атом водорода, линейную или разветвленную (С1-С6)алкильную группу или алкил(C1-C4)-NR1R2 группу, R1 и R2 представляют собой атом водорода или линейную или разветвленную (С1-С6)алкильную группу, или R1 и R2 вместе с атомом азота, несущим их, образуют гетероциклоалкильную группу, которая представляет собой морфолин или пиперазин, R3 представляет собой линейную или разветвленную (C1-С6)алкильную группу, арильную группу или гетероарильную группу, которая представляет собой пиррольную группу или пирроло[2,3-b]пиридинильную группу, R4 представляет собой арильную или линейную или разветвленную (С1-С6)алкильную группу, R5 представляет собой атом водорода, R7 представляет собой группу R'7, R'7-CO-, R'7-O-СО-, NR'7R''7-CO-, R'7-SO2-, где R'7 и R''7 представляют собой атом водорода, линейную или разветвленную (С1-С6)алкильную группу, которая необязательно замещена 1-2 группами, выбранными из: (i) гетероарильной группы, необязательно замещенной пиразин-2-ильной группой, (ii) арильной группы, арилокси группы, ариламино группы или арилтио группы, где арил и арилокси группы, необязательно замещены одним или двумя атомами галогена, или группой, выбранной из: метильной группы, [2-(морфолин-4-ил)этил]амино группы, [2-(диметиламино)этил]амино группы, [2-(диметиламино)этокси] группы, диметиламинометил группы, морфолинил-СН2 группы, (4-метилпиперазин-1-ил)-СН2 группы, трифторметокси группы; метокси группы; циано группы или (4-метилпиперазин-1-ил) группы; (iii) фенилкарбамоильной группы, (iv) циклоалкила, (v) гетероциклоалкила, (vi) бензилокси группы, (vii) -NH2 или гидрокси; линейную или разветвленную (С2-С6)алкенильную группу, которая замещена арильной группой, где арильная группа необязательно замещена одним или двумя атомами галогена или метокси группой, трифторметильную группу, циклоалкил, гетероциклоалкил; арильную группу; (4-метилпиперазин-1-ил)фенильную группу, или гетероарил, р=р'=0, q=1 или 2 и q'=1, при этом также предполагается, что: "арил" означает фенильную или нафтильную группу, "гетероарил" означает любую моно- или бициклическую группу, состоящую из 5-10 кольцевых членов, содержащую по меньшей мере один ароматический фрагмент, и содержащую от 1 до 4 гетероатомов, выбранных из кислорода, серы и азота, "циклоалкил" означает любую моно- или бициклическую, неароматическую, карбоциклическую группу, содержащую от 3 до 10 кольцевых членов, которая может включать конденсированные или мостиковые кольцевые системы, "гетероциклоалкил" означает любую моно- или бициклическую, неароматическую, карбоциклическую группу, состоящую из 4-10 кольцевых членов, и содержащую от 1 до 2 гетероатомов, выбранных из кислорода, серы, SO, SO2 и азота, причем арильные, гетероарильные, циклоалкильные и гетероциклоалкильные группы, определенные таким образом, и алкильные, алкенильные группы могут быть замещены 1-3 группами, выбранными из: линейной или разветвленной (С1-С6)алкильной группы; линейной или разветвленной (С2-С6)алкинильной группы; линейного или разветвленного (С1-С6)алкокси; гидроксила; оксо; циано; -COOR'; -NR'R''; R'CONR''-; NR'R''CO-; трифторметила; трифторметокси; галогена; арила; гетероарила; при этом предполагается, что R' и R'' независимо друг от друга представляют собой атом водорода или линейную или разветвленную (С1-С6)алкильную группу.

Изобретение относится к пиразолотиазоловому соединению, представленному формулой [I], где R1 представляет собой водород, С1-6алкил или С1-6алкокси; Z представляет собой -OR3 или -NR4R5; где R3 представляет собой С1-6алкил, С1-6алкил, замещенный С3-6циклоалкилом, С3-6циклоалкил, фенил или пиридил; R4 представляет собой водород или С1-6алкил; R5 представляет собой С1-6алкил, С3-6циклоалкил или насыщенную гетероциклическую группу, выбранную из оксана, пиперидина, пирролидина, оксетана, указанный С1-6алкил в R5 необязательно замещен одной или двумя группами, выбранными из группы, состоящей из следующих (1)-(5): (1) гидрокси,(2) С1-6алкокси и дифторС1-6алкокси, (3) С3-6циклоалкил, С3-6циклоалкил, замещенный (дифторС1-6алкокси)С1-6алкилом, и С3-6циклоалкил, замещенный С1-6алкоксиС1-6алкилом, (4) насыщенная гетероциклическая группа, выбранная из тетрагидропирана, необязательно замещенная (дифторС1-6алкокси)С1-6алкилом, и (5) фенил, замещенный фтором, и фенил, замещенный С1-6алкокси, указанный С3-6циклоалкил в R5 необязательно замещен одной или двумя группами, выбранными из группы, состоящей из следующих (1)-(3): гидрокси, (2) С1-6алкокси и дифторС1-6алкокси, и (3) нитрил, и указанные оксан, пиперидин, пирролидин, оксетан в R5 необязательно замещены одной группой, выбранной из группы, состоящей из следующих (1)-(3): (1) С1-6алкил, (2) С1-6алкилкарбонил, и (3) С1-6алкоксикарбонил; R2 представляет собой гидрокси или -NHR8, где R8 представляет собой гетероарил (пиримидин, тиазол), гетероарил (пиридин), необязательно замещенный фтором или С1-6алкилом, 1,2-оксазол, необязательно замещенный С1-6алкилом, или -COL1, -COOL2 или -SO2L3, указанный L1 представляет собой группу, выбранную из группы, состоящей из следующих (1)-(5): (1) С1-6алкил, дифторС1-6алкил и С1-6алкил, замещенный С1-6алкокси, (2) С3-6циклоалкил, (3) фенил, (4) пиридин и тиенил, и (5) С1-6диалкиламино и С3-6циклоалкиламино, указанный L2 представляет собой группу, выбранную из группы, состоящей из следующих (1)-(3): (1) С1-6алкил, моногалогенС1-6алкил, дигалогенС1-6алкил, тригалогенС1-6алкил, и С1-6алкил, замещенный С1-6алкокси, (2) С3-6циклоалкил, и (3) С1-6диалкиламиноС1-6алкил, и указанный L3 представляет собой С1-6алкил или С3-6циклоалкил, или его фармацевтически приемлемой соли или его гидрату.

Настоящее изобретение относится к соединению формулы (IIB-А) и его фармацевтически приемлемой соли, которые могут быть применены в медицине: ,где А обозначает C-R2 или N; D обозначает C-R4 или N; Е обозначает -СН2- или -СН(СН3)-; Y обозначает группу формулы: где знак (*) обозначает положение присоединения к остальной части молекулы; R1g обозначает водород, фтор, хлор, бром, цианогруппу, трифторметил, гидроксиизопропил, метилтиогруппу, метилсульфинил, метилсульфонил, карбоксигруппу, метоксикарбонил, аминокарбонил, метиламинокарбонил, этиламинокарбонил, изопропиламинокарбонил, диметиламинокарбонил, гидроксиэтиламинокарбонил, гидроксиизопропиламинокарбонил, 1-гидрокси-2-метилпроп-2-иламинокарбонил, метоксиэтиламинокарбонил, циклопропиламинокарбонил, оксазолилметиламинокарбонил, гидроксиоксетанил, метоксиоксетанил, пиперазинилкарбонил, гидроксипирролидинилкарбонил, оксопиперазинилкарбонил, метилсульфонилазетидинилкарбонил или трет-бутоксикарбонилпиперазинилкарбонил; R2g и R3g обозначают водород или галоген; R7a и R7b обозначают водород или C1-С6-алкил; R8a и R8b обозначают водород, галоген или C1-С6-алкил; или R8a и R8b вместе с атомом углерода, к которому они оба присоединены, обозначают циклопропил; R9a и R9b независимо обозначают водород или C1-С6-алкил; R2 обозначает водород или галоген; R4 обозначает водород; R5 обозначает C1-С6-алкил, необязательно замещенный галогеном, гидроксигруппой или C1-С6-алкоксигруппой; V обозначает C-R22 или N; R21 обозначает гидрокси(С1-С6)алкил, метилсульфонил, метилсульфоксиминил, этилсульфоксиминил или (метил)(N-метил)сульфоксиминил; или R21 обозначает циклопропил, циклобутил, циклогексил, оксетанил, азетидинил, тетрагидропиранил, пиперидинил, пиперазинил, морфолинил, диазепанил, 6-окса-3-азабицикло[3.1.1]гептанил, 3-азабицикло-[3.2.1]октанил, 3,7-диокса-9-азабицикло[3.3.1]нонанил, 3-окса-6-азаспиро[3.3]гептанил или 6-тиа-2-азаспиро[3.3]гептанил, любая из этих групп необязательно может содержать 1, 2 или 3 заместителя, независимо выбранные из группы, включающей галоген, C1-С6-алкил, трифторметил, гидроксигруппу, оксогруппу, аминогруппу, карбоксигруппу и С2-С6-алкоксикарбонил; R22 обозначает водород, галоген или C1-С6-алкил; и R23 обозначает водород, C1-С6-алкил, трифторметил или C1-С6-алкоксигруппу.

Настоящее изобретение относится к замещенным производным бензимидазола, имидазо[1,2-а]пиридина и пиразоло[1,5-а]пиридина и их аналогам, которые являются активными модуляторами активности TNFα человека, и поэтому полезны для лечения и/или предупреждения различных заболеваний человека, включая аутоиммунные и воспалительные нарушения; неврологические и нейродегенеративные нарушения; боль и ноцицептивные нарушения; сердечно-сосудистые нарушения; метаболические нарушения; офтальмологические нарушения и онкологические нарушения.

Изобретение описывает применение соединения 1 или его фармацевтически приемлемой соли, гидрата или сольвата в качестве антагониста гистаминовых рецепторов третьего типа.

Изобретение относится к области органической химии, а именно к гетероциклическому соединению формулы (IIB) или его фармацевтически приемлемой соли, где q равно 1; А обозначает C-R2; G обозначает остаток пиридазинильного кольца; Е обозначает -О-, -СН2- или -СН(СН3)-; Q обозначает -СН2-; Z обозначает водород; V обозначает N; R2 обозначает водород; R15 обозначает водород, метил или дифторметоксигруппу; R16 обозначает водород; R21 обозначает гидрокси(С1-С6)алкил; и R23 обозначает водород.

Данное изобретение относится к иммунологии. Предложено моноклональное антитело, связывающее полипептид KIR3DL2, а также содержащая его фармацевтическая композиция и способ лечения или профилактики заболеваний, сопровождающихся экспрессией KIR3DL2.

Изобретение относится к области органической химии, а именно к {1-[(2,5-диметилфенил)метил]-4,5,6,7-тетрагидробензимидазол-2-ил}(пиридин-4-ил)метанолу. Также изобретение относится к фармацевтической композиции на его основе, его применению и способу лечения ревматоидного артрита и/или болезни Крона.

Изобретение относится к области органической химии, а именно к гетероциклическому соединению, выбранному из 4-{1-[(2,5-дихлорфенил)метил]-2-метил-6,7-дигидро-4Н-имидазо[4,5-с]пиридин-5-ил}-N,N-диметилпиридин-2-амина и {1-[(2,5-дихлорфенил)метил]-2-(пиридин-3-илоксиметил)-6,7-дигидро-4Н-имидазо-[4,5-с]пиридин-5-ил}(морфолин-4-ил)метанона.

Изобретение относится к аморфной форме соединения формулы (I), имеющей картину XRPD (порошковой рентгеновской дифракции), которая показана на фиг. 1.

Изобретение относится к синтезу 2-[3-(2-хлорэтил)-нитрозоуреидо]-1,3-пропандиола, обладающего противоопухолевой активностью. Способ заключается во взаимодействие 2-хлорэтилизоцианата с 2-амино-1,3-пропандиололом в присутствии смеси ацетонитрил-метанол в соотношении 2:1 с получением промежуточного продукта 2-[3-(2-хлорэтил)уреидо]-1,3-пропандиола, который нитрозируют в присутствии 50%-ного водного раствора муравьиной кислоты по следующей схеме: .

Группа изобретений относится к медицине, а именно к онкологии, и может быть использовано для получения конъюгата для лечения индивидуума с пролиферативным расстройством.

Изобретение относится к области органической химии и раскрывает способ получения фурацилина. Способ включает конденсацию 5-нитрофурфурола с семикарбазидом основанием, полученным конденсацией гидразин-гидрата и мочевины.

Группа изобретений относится к химико-фармацевтической промышленности и представляет собой лиофилизированную композицию, обладающую ингибиторной активностью в отношении PI3 киназы и mTOR, полученную путем сублимационной сушки фармацевтической композиции в виде водного раствора, содержащей 1-(4-{[4-(диметиламино)пиперидин-1-ил]карбонил}фенил)-3-[4-(4,6-диморфолин-4-ил-1,3,5-триазин-2-ил)фенил]мочевину или ее лактат в концентрации раствора менее 6 мг/мл, молочную кислоту в количестве, достаточном для обеспечения прозрачного раствора, и воду; или 1-(4-{[4-(диметиламино)пиперидин-1-ил]карбонил}фенил)-3-[4-(4,6-диморфолин-4-ил-1,3,5-триазин-2-ил)фенил]мочевину или ее фосфат в концентрации раствора менее 4 мг/мл, ортофосфорную кислоту в количестве, достаточном для обеспечения прозрачного раствора, и воду.

Изобретение относится к конкретным соединениям, перечисленным в п.1 формулы изобретения, которые могут найти применение при лечении или профилактике бактериальной колонизации или инфекции у субъекта.

Изобретение относится к области медицины, а именно к офтальмологии, и предназначено для лечения воспалительного заболевания глаз у субъекта, такого как увеит, сухой глаз, кератит, аллергическое заболевание глаз, инфекционный кератит, герпетический кератит, ангиогенез роговицы, лимфоангиогенез, ретинит, хороидит, острая мультифокальная плакоидная пигментная эпителиопатия, болезнь Бехчета, постоперационное заживление роговицы, влажная и сухая возрастная макулярная дегенерация (ВМД).

Изобретение относится к соединению формулы (1) или его фармацевтически приемлемой соли, где А выбран из группы, состоящей из фенила или пиридина, замещенных Qn, или конденсированных кольцевых структур, приведенных ниже; Q независимо выбран из галогена, алкила, гидрокси, амино и замещенного амино; n равняется 0, 1, 2, 3, 4 или 5; R1, R3 и R4 независимо представляют собой С, СН, CH2, О, N, NH или S, и R2 представляет собой С, СН, СН2, N, NH, C-CF3, CH-CF3 или С=O; причем, если n равняется 1, Q не может представлять собой гидрокси; замещенный амино имеет формулу -NHW, где W выбран из -CN, -SO2(X)aY и -CO(X)aY, а равняется 0 или 1, X выбран из -NH- и -О-, и Y выбран из -Н, -СН3, -СН2СН3, -СН2ОН и -СН2СН2ОН, и где связи между R1 и R2, R2 и R3, R3 и R4 независимо представляют собой двойные или одинарные связи.

Группа изобретений относится к химико-фармацевтической промышленности и представляет собой фармацевтическую композицию, обладающую активностью против ВИЧ-инфекции, которая включает лопинавир, ритонавир в эффективном количестве и сорбент, отличающуюся тем, что в качестве сорбента содержит алюмометасиликат в количестве от 21 до 28 % от массы фармацевтической композиции.
Изобретение относится к области ветеринарии, ветеринарной арахноэнтомологии, ветеринарной гельминтологии, фармакологии, в частности к разработке эффективного средства лечения и профилактики паразитарных заболеваний животных.
© Патентный поиск, поиск патентов на изобретения - FindPatent.RU 2012-2024
Политика конфиденциальности 2018-04-06 2019-06-11T08:00:05
Наверх