Сублингвальная фармацевтическая композиция эдаравона и (+)-2-борнеола
Владельцы патента RU 2720204:
ЯНЬТАЙ ЕНЭФАРМА КО., ЛТД. (CN)
Изобретение раскрывает фармацевтическую композицию сублингвальной таблетки для лечения цереброваскулярных заболеваний. Фармацевтическая композиция характеризуется тем, что содержит эдаравон, (+)–2–борнеол, эксципиент, наполнитель, связующее, разрыхлитель и смазывающее вещество. Эксципиент включает маннит и коповидон. Фармацевтическая композиция обеспечивает улучшение стабильности и скорости высвобождения эдаравона и (+)–2–борнеола, высокую биодоступность и мозговую проницаемость при удобном сублингвальном способе введения. 6 з.п. ф-лы, 20 пр., 3 таб., 3 ил.
ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ
[0001] Настоящее раскрытие относится к области медицинской технологии и касается сублингвальной фармацевтической композиции эдаравона и (+)–2–борнеола и способа ее получения.
УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ
[0002] Эдаравон (химическое название: 3–метил–1–фенил–2–пиразолин–5–он) представляет собой доступное на рынке нейропротективное средство для головного мозга (Yakugaku Zasshi. 2004, 124(3): 99–111). Исследования показали, что эдаравон обладает антиоксидантной активностью, которая может значительно облегчать симптомы неврологического дефицита у животных с церебральной ишемией–реперфузией, уменьшить размер инфаркта, уменьшить степень повреждения головного мозга, уменьшить отек головного мозга и ингибировать перекисное окисление липидов в поврежденной ткани мозга.
Эдаравон
(Молекулярная формула C10H10N2O, молекулярный вес 174,20)
[0003] (+)–2–Борнеол является основным ингредиентом традиционной китайской медицины – природный борнеол. Борнеол выполняет функции "аналепсии и реанимации", "ароматической реанимации" и "направляющего лекарственного средства", часто используемого в качестве "медицинского проводника" для усиления терапевтического эффекта других лекарств. "Augmented Materia Medica" описывает, что борнеол является "слабым сам по себе и эффективен в качестве адъюванта". Эксперименты на животных и эксперименты in vitro показывают, что борнеол способствует проникновению лекарственного средства через гематоэнцефалический барьер.
(+)–2–Борнеол
(Молекулярная формула C10H18O; молекулярный вес 154,25)
[0004] Цереброваскулярное заболевание, особенно ишемическое цереброваскулярное заболевание, представляет собой острое заболевание, которое необходимо быстро устранить, и, таким образом, инъекционное введение является предпочтительным способом оказания первой помощи. Патент на изобретение (CN101848711A) под названием "Фармацевтическая композиция и ее применение в получении лекарственного средства для лечения цереброваскулярных заболеваний" ("Pharmaceutical composition and its use in the preparation of a medicament for the treatment of cerebrovascular diseases") раскрывает применение композиции, содержащей инъекцию эдаравона и (+)–2–борнеола в определенном соотношении, в получении лекарственного средства для лечения цереброваскулярных заболеваний, в частности ишемических цереброваскулярных заболеваний, причем композиция проявляет лучшие фармакологические результаты, чем инъекция эдаравона.
[0005] Однако внутримышечная или внутривенная инъекция может вызывать боль и раздражение в месте инъекции и требует работы медицинского персонала, а также требует инъекционных принадлежностей. Ее применение подлежит определенным медицинским ограничениям и не подходит для пациентов, находящихся за пределами больницы.
[0006] Сублингвальный препарат непосредственно абсорбируется подъязычной слизистой оболочкой. Подъязычная слизистая оболочка имеет большую площадь поверхности и является легкопроницаемой. Подъязычная слизистая оболочка имеет большое количество капилляров под слизистой мембраной, которые собираются во внутренней яремной вене, так что препарат напрямую попадает в кровоток через верхнюю полую вену. Таким образом, лекарственное средство быстро всасывается после введения, что имеет преимущества быстрого начала действия, точного количества, удобного применения и предотвращения пресистемного метаболизма пероральных лекарственных средств. По сравнению с инъекциями сублингвальные таблетки могут значительно улучшить удобство приема лекарственных средств и соблюдение больными режима и схемы лечения.
[0007] Однако сублингвальные фармацевтические композиции, содержащие эдаравон и (+)–2–борнеол, не являются легкодоступными. Авторы настоящего раскрытия обнаружили, что обычные эксципиенты не подходят для получения приемлемых сублингвальных таблеток эдаравона и (+)–2–борнеола или что свойства (стабильность, скорость высвобождения и т.д.) полученных сублингвальных таблеток являются неудовлетворительными.
[0008] Поэтому в предшествующем уровне техники все еще существует острая потребность в сублингвальной фармацевтической композиции, содержащей эдаравон и (+)–2–борнеол с удовлетворительной стабильностью и скоростью высвобождения.
СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ
[0009] Целью настоящего изобретения является предоставление сублингвальной фармацевтической композиции, содержащей эдаравон или его соль и (+)–2–борнеол.
[0010] Летучесть (+)–2–борнеола делает его содержание в твердых препаратах нестабильным. Кроме того, ингредиенты сублингвальной таблетки должны быстро высвобождаться, чтобы достичь определенной концентрации в крови для получения терапевтического эффекта. Авторы изобретения неожиданно обнаружили, что вышеуказанные проблемы могут быть эффективно решены с использованием эксципиента, содержащего комбинацию маннита и коповидона. На основании этого открытия настоящее изобретение предоставляет сублингвальную фармацевтическую композицию, содержащую эдаравон или его соль и (+)–2–борнеол, в которой (+)–2–борнеол имеет стабильное содержание, и фармацевтически активные ингредиенты могут быстро высвобождаться и всасываться под язык.
[0011] Для достижения вышеуказанной цели настоящее раскрытие принимает следующие технические решения.
[0012] Сублингвальная таблетка, содержащая композицию эдаравона и (+)–2–борнеола, отличающаяся тем, что содержит активный ингредиент эдаравон или его соль и фармацевтически приемлемый адъювант, причем указанный фармацевтически приемлемый адъювант содержит эксципиент, где эксципиент представляет собой один или несколько, выбранных из группы, состоящей из маннита, лактозы, декстрана, цистеина, глицина, коповидона и бета–циклодекстрина, предпочтительно эксципиент содержит комбинацию маннита и коповидона.
[0013] В предпочтительной фармацевтической композиции для сублингвальной таблетки по настоящему изобретению маннит и коповидон используются в качестве эксципиента в массовом соотношении от 1:5 до 5:1, предпочтительно от 1:1 до 5:1.
[0014] В некоторых предпочтительных вариантах осуществления настоящего раскрытия эксципиент содержит комбинацию маннита, коповидона и микрокристаллической целлюлозы. Предпочтительно массовое соотношение маннита, коповидона и микрокристаллической целлюлозы составляет (5:10):(1:5):(10:20).
[0015] В еще других предпочтительных вариантах осуществления настоящего раскрытия эксципиент содержит комбинацию маннита, коповидона и лактозы. Предпочтительно массовое соотношение маннита, коповидона и лактозы составляет (1:10):(1:5):(10:30).
[0016] В фармацевтической композиции для сублингвальной таблетки массовое отношение эдаравона в пересчете на свободное основание к (+)–2–борнеолу составляет более 4 или менее 1, предпочтительно массовое отношение эдаравона в пересчете на свободное основание к (+)–2–борнеолу составляет более 4 и менее 10 или более 0,1 и менее 1, и еще более предпочтительно массовое отношение эдаравона в пересчете на свободное основание к (+)–2–борнеолу составляет 5.
[0017] В фармацевтической композиции для сублингвальной таблетки массовое отношение (+)–2–борнеола к эксципиенту составляет от 0,1 до 1, предпочтительно массовое отношение (+)–2–борнеола к эксципиенту составляет от 0,3 до 1, и более предпочтительно массовое отношение (+)–2–борнеола к эксципиенту составляет от 0,3 до 0,5.
[0018] Способ получения фармацевтической композиции для сублингвальной таблетки, включающий стадии растворения (+)–2–борнеола в органическом растворе и растворения эксципиента в водном растворе; объединения двух полученных растворов, перемешивания и затем оставления стоять; выполнения лиофильной сушки и последующего просеивания; добавления эдаравона, наполнителя, связующего, разрыхлителя и смазывающего вещества и перемешивания до однородного состояния; и таблетирования.
[0019] Когда фармацевтическую композицию для сублингвальной таблетки вводят субъекту, в течение приблизительно от 0,1 до 10 часов после введения единицы препарата концентрация эдаравона в крови достигает от 10 до 8000 нг/мл, и концентрация (+)–2–борнеола в крови достигает от 1 до 200 нг/мл, предпочтительно в течение приблизительно от 0,1 до 6 часов после введения единицы препарата концентрация эдаравона в крови достигает от 50 до 5000 нг/мл, и концентрация (+)–2–борнеола в крови достигает от 2 до 150 нг/мл.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ
[0020] Фигура 1 представляет собой профиль растворения примеров 1–5.
[0021] Фигура 2 представляет собой профиль растворения примеров 6–11.
[0022] Фигура 3 представляет собой профиль растворения примеров 8 и 12–14.
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ
[0100] Настоящее раскрытие раскрывает препарат для сублингвального введения эдаравона и (+)–2–борнеола. Специалисты в данной области техники могут ознакомиться с содержанием настоящего раскрытия и, основываясь на принципе фармации, соответствующим образом улучшить параметры процесса или заданного соотношения. Следует отметить, что все такие альтернативы и модификации очевидны для специалистов в данной области техники и считаются включенными в объем настоящего раскрытия. Применение настоящего раскрытия было описано в предпочтительных вариантах осуществления, и для специалиста в данной области техники очевидно, как изменить или соответствующим образом модифицировать и комбинировать способ и применение, описанные в настоящем документе, не выходя за рамки объема настоящего раскрытия, чтобы реализовать и применить методику настоящего раскрытия.
[0101] Эдаравон, упомянутый в примерах, представляет собой 3–метил–1–фенил–2–пиразолин–5–он.
[0102] Настоящее раскрытие дополнительно иллюстрируется следующими примерами, но примеры не предназначены для ограничения настоящего раскрытия.
Пример 1
| Вещество | Количество （г） |
| Эдаравон | 30 |
| (+)–2– Борнеол | 1,5 |
| Лактоза | 39,7 |
| Гипромеллоза | 4 |
| Кроскармеллоза натрия | 4 |
| Стеарат магния | 0,8 |
[0103] Способ получения: (+)–2–Борнеол, эдаравон, лактозу, гипромеллозу, кроскармеллозу натрия, стеарат магния смешивали и затем таблетировали.
Пример 2
| Вещество | Количество （г） |
| Эдаравон | 30 |
| (+)–2–Борнеол | 2 |
| Лактоза | 39,2 |
| Гипромеллоза | 4 |
| Кроскармеллоза натрия | 4 |
| Стеарат магния | 0,8 |
[0104] Способ получения: (+)–2–Борнеол, эдаравон, лактозу, гипромеллозу, кроскармеллозу натрия, стеарат магния смешивали и затем таблетировали.
Пример 3
| Вещество | Количество （г） |
| Эдаравон | 1,5 |
| (+)–2–Борнеол | 30 |
| Лактоза | 39,7 |
| Гипромеллоза | 4 |
| Кроскармеллоза натрия | 4 |
| Стеарат магния | 0,8 |
[0105] Способ получения: (+)–2–Борнеол, эдаравон, лактозу, гипромеллозу, кроскармеллозу натрия, стеарат магния смешивали и затем таблетировали.
Пример 4
| Вещество | Количество （г） |
| Эдаравон | 6 |
| (+)–2–Борнеол | 30 |
| Бета–циклодекстрин | 35,2 |
| Лактоза | 10 |
| Гипромеллоза | 4 |
| Кроскармеллоза натрия | 4 |
| Стеарат магния | 0,8 |
[0106] Способ получения: (+)–2–Борнеол растворяли в этанольном растворе, и бета–циклодекстрин растворяли в водном растворе. Полученные два раствора объединяли и перемешивали, а затем оставляли стоять. Полученный продукт подвергали лиофильной сушке и просеиванию. Эдаравон, лактозу, гипромеллозу, кроскармеллозу натрия и стеарат магния добавляли и перемешивали до гомогенного состояния, и смесь таблетировали.
Пример 5
| Вещество | Количество （г） |
| Эдаравон | 40 |
| (+)–2–Борнеол | 8 |
| Бета–циклодекстрин | 23,2 |
| Лактоза | 10 |
| Гипромеллоза | 4 |
| Кроскармеллоза натрия | 4 |
| Стеарат магния | 0,8 |
[0107] Способ получения: (+)–2–Борнеол растворяли в этанольном растворе, и бета–циклодекстрин растворяли в водном растворе. Полученные два раствора объединяли и перемешивали, а затем оставляли стоять. Полученный продукт подвергали лиофильной сушке и просеиванию. Эдаравон, лактозу, гипромеллозу, кроскармеллозу натрия и стеарат магния добавляли и перемешивали до гомогенного состояния, и смесь таблетировали.
Пример 6
| Вещество | Количество （г） |
| Эдаравон | 30 |
| (+)–2–Борнеол | 6 |
| Маннит | 35,2 |
| Коповидон | 4 |
| Кроскармеллоза натрия | 4 |
| Стеарат магния | 0,8 |
[0108] Способ получения: (+)–2–Борнеол растворяли в этанольном растворе, и маннит в количестве, в 5 раз превышающем массу (+)–2–борнеола, и небольшое количество кополивидона растворяли в водном растворе. Полученные два раствора объединяли и перемешивали, а затем оставляли стоять. Полученный продукт подвергали лиофильной сушке и просеиванию. Эдаравон, оставшийся маннит, кополивидон, кроскармеллозу натрия и стеарат магния добавляли и перемешивали до гомогенного состояния, и смесь таблетировали.
Пример 7
| Вещество | Количество （г） |
| Эдаравон | 50 |
| (+)–2–Борнеол | 5 |
| Маннит | 16,2 |
| Коповидон | 4 |
| Кроскармеллоза натрия | 4 |
| Стеарат магния | 0,8 |
[0109] Способ получения: (+)–2–Борнеол растворяли в этанольном растворе, и маннит в количестве, в 3 раза превышающем массу (+)–2–борнеола, и небольшое количество кополивидона растворяли в водном растворе. Полученные два раствора объединяли и перемешивали, а затем оставляли стоять. Полученный продукт подвергали лиофильной сушке и просеиванию. Эдаравон, оставшийся маннит, кополивидон, кроскармеллозу натрия и стеарат магния добавляли и перемешивали до гомогенного состояния, и смесь таблетировали.
Пример 8
| Вещество | Количество （г） |
| Эдаравон | 30 |
| (+)–2–Борнеол | 6 |
| Маннит | 14 |
| Лактоза | 22,2 |
| Коповидон | 3 |
| Кроскармеллоза натрия | 4 |
| Стеарат магния | 0,8 |
[0110] Способ получения: (+)–2–Борнеол растворяли в этанольном растворе, и маннит и небольшое количество кополивидона растворяли в водном растворе. Полученные два раствора объединяли и перемешивали, а затем оставляли стоять. Полученный продукт подвергали лиофильной сушке и просеиванию. Эдаравон, лактозу, кополивидон, кроскармеллозу натрия и стеарат магния добавляли и перемешивали до гомогенного состояния, и смесь таблетировали.
Пример 9
| Вещество | Количество （г） |
| Эдаравон | 30 |
| (+)–2–Борнеол | 6 |
| Маннит | 6 |
| Лактоза | 29,2 |
| Коповидон | 4 |
| Кроскармеллоза натрия | 4 |
| Стеарат магния | 0,8 |
[0111] Способ получения: (+)–2–Борнеол растворяли в этанольном растворе, и маннит и небольшое количество кополивидона растворяли в водном растворе. Полученные два раствора объединяли и перемешивали, а затем оставляли стоять. Полученный продукт подвергали лиофильной сушке и просеиванию. Эдаравон, лактозу, кополивидон, кроскармеллозу натрия и стеарат магния добавляли и перемешивали до гомогенного состояния, и смесь таблетировали.
Пример 10
| Вещество | Количество （г） |
| Эдаравон | 30 |
| (+)–2–Борнеол | 6 |
| Лактоза | 31,2 |
| Коповидон | 8 |
| Кроскармеллоза натрия | 4 |
| Стеарат магния | 0,8 |
[0112] Способ получения: (+)–2–Борнеол растворяли в этанольном растворе, и лактозу в количестве, в 5 раз превышающем массу (+)–2–борнеола, и небольшое количество кополивидона, растворяли в водном растворе. Полученные два раствора объединяли и перемешивали, а затем оставляли стоять. Полученный продукт подвергали лиофильной сушке и просеиванию. Эдаравон, оставшуюся лактозу, кополивидон, кроскармеллозу натрия и стеарат магния добавляли и перемешивали до гомогенного состояния, и смесь таблетировали.
Пример 11
| Вещество | Количество （г） |
| Эдаравон | 12 |
| (+)–2–Борнеол | 24 |
| Эдаравон | 31,2 |
| (+)–2– Борнеол | 8 |
| Кроскармеллоза натрия | 4 |
| Стеарат магния | 0,8 |
[0113] Способ получения: (+)–2–Борнеол растворяли в этанольном растворе, и лактозу в количестве, в 1,25 раза превышающем массу (+)–2–борнеола, и небольшое количество кополивидона растворяли в водном растворе. Полученные два раствора объединяли и перемешивали, а затем оставляли стоять. Полученный продукт подвергали лиофильной сушке и просеиванию. Эдаравон, оставшуюся лактозу, кополивидон, кроскармеллозу натрия и стеарат магния добавляли и перемешивали до гомогенного состояния, и смесь таблетировали.
Пример 12
| Вещество | Количество （г） |
| Эдаравон | 30 |
| (+)–2–Борнеол | 6 |
| Маннит | 14 |
| Микрокристаллическая целлюлоза | 22,2 |
| Коповидон | 3 |
| Кроскармеллоза натрия | 4 |
| Стеарат магния | 0,8 |
[0114] Способ получения: (+)–2–Борнеол растворяли в этанольном растворе, и маннит и небольшое количество кополивидона растворяли в водном растворе. Полученные два раствора объединяли и перемешивали, а затем оставляли стоять. Полученный продукт подвергали лиофильной сушке и просеиванию. Эдаравон, микрокристаллическую целлюлозу, кополивидон, кроскармеллозу натрия и стеарат магния добавляли и перемешивали до гомогенного состояния, и смесь таблетировали.
Пример 13
| Вещество | Количество （г） |
| Эдаравон | 30 |
| (+)–2–Борнеол | 6 |
| Маннит | 6 |
| Микрокристаллическая целлюлоза | 16,2 |
| Коповидон | 3 |
| Кроскармеллоза натрия | 7 |
| Диоксид кремния | 1,1 |
| Стеарат магния | 0,7 |
[0115] Способ получения: (+)–2–Борнеол растворяли в этанольном растворе, и маннит и кополивидон растворяли в водном растворе. Полученные два раствора объединяли и перемешивали, а затем оставляли стоять. Полученный продукт подвергали лиофильной сушке и просеиванию. Эдаравон, микрокристаллическую целлюлозу, кроскармеллозу натрия, диоксид кремния и стеарат магния добавляли и перемешивали до гомогенного состояния, и смесь таблетировали.
Пример 14
| Вещество | Количество （г） |
| Эдаравон | 30 |
| (+)–2–Борнеол | 6 |
| Маннит | 14 |
| Микрокристаллическая целлюлоза | 11,2 |
| Коповидон | 3 |
| Кроскармеллоза натрия | 4 |
| Диоксид кремния | 1,1 |
| Стеарат магния | 0,7 |
[0116] Способ получения: (+)–2–Борнеол растворяли в этанольном растворе, и маннит и небольшое количество кополивидона растворяли в водном растворе. Полученные два раствора объединяли и перемешивали, а затем оставляли стоять. Полученный продукт подвергали лиофильной сушке и просеиванию. Эдаравон, микрокристаллическую целлюлозу, кополивидон, кроскармеллозу натрия, диоксид кремния и стеарат магния добавляли и перемешивали до гомогенного состояния, и смесь таблетировали.
Пример 15
[0117] Испытание на стабильность и результаты: соответствующее количество образцов из примеров 1–14 упаковывали как конечный продукт. Образцы хранили при 40 и 60°C в течение 10, 30 и 90 дней. Проверяли свойства, содержание и родственные вещества в образцах. Результаты приведены ниже:
| Примеры | Условия хранения | Свойства | Содержание （%） | Родственные соединения （%） | |
| Эдаравон | (+)–2–Борнеол | ||||
| Пример 1 | 0 дней | Таблетка от белого до кремового цвета | 99,8 | 99,5 | 0,35 |
| 40°C， 10 дней | Таблетка от белого до кремового цвета | 99,5 | 69,4 | 0,37 | |
| 60°C， 10 дней | Таблетка от белого до кремового цвета | 99,4 | 48,2 | 0,45 | |
| 40°C， 30 дней | Таблетка от белого до кремового цвета | 99,5 | 57,8 | 0,38 | |
| 60°C， 30 дней | Таблетка от белого до кремового цвета | 99,4 | 38,1 | 0,44 | |
| 40°C， 90 дней | Таблетка от белого до кремового цвета | 99,0 | 15,4 | 0,45 | |
| 60°C， 90 дней | Таблетка от белого до кремового цвета | 98,9 | 10,1 | 0,51 | |
| Пример 2 | 0 день | Таблетка от белого до кремового цвета | 99,7 | 101,2 | 0,45 |
| 40°C， 10 дней | Таблетка от белого до кремового цвета | 99,8 | 71,3 | 0,38 | |
| 60°C， 10 дней | Таблетка от белого до кремового цвета | 99,5 | 60,2 | 0,44 | |
| 40°C， 30 дней | Таблетка от белого до кремового цвета | 99,7 | 54,1 | 0,46 | |
| 60°C， 30 дней | Таблетка от белого до кремового цвета | 99,6 | 43,5 | 0,47 | |
| 40°C， 90 дней | Таблетка от белого до кремового цвета | 99,2 | 16,3 | 0,53 | |
| 60°C， 90 дней | Таблетка от белого до кремового цвета | 99,1 | 12,7 | 0,62 | |
| Пример 3 | 0 день | Таблетка от белого до кремового цвета | 99,7 | 100,2 | 0,49 |
| 40°C， 10 дней | Таблетка от белого до кремового цвета | 99,5 | 71,1 | 0,56 | |
| 60°C， 10 дней | Таблетка от белого до кремового цвета | 99,4 | 62,8 | 0,48 | |
| 40°C， 30 дней | Таблетка от белого до кремового цвета | 99,2 | 59,7 | 0,52 | |
| 60°C， 30 дней | Таблетка от белого до кремового цвета | 99,5 | 34,2 | 0,50 | |
| 40°C， 90 дней | Таблетка от белого до кремового цвета | 99,1 | 21,3 | 0,62 | |
| 60°C， 90 дней | Таблетка от белого до кремового цвета | 99,3 | 18,1 | 0,78 | |
| Пример 4 | 0 день | Таблетка от белого до кремового цвета | 99,7 | 99,8 | 0,48 |
| 40°C， 10 дней | Таблетка от белого до кремового цвета | 99,8 | 99,4 | 0,49 | |
| 60°C， 10 дней | Таблетка от белого до кремового цвета | 99,7 | 99,8 | 0,51 | |
| 40°C， 30 дней | Таблетка от белого до кремового цвета | 99,4 | 99,0 | 0,44 | |
| 60°C， 30 дней | Таблетка от белого до кремового цвета | 99,5 | 98,7 | 0,53 | |
| 40°C， 90 дней | Таблетка от белого до кремового цвета | 99,2 | 98,1 | 0,54 | |
| 60°C， 90 дней | Таблетка от белого до кремового цвета | 99,3 | 98,8 | 0,61 | |
| Пример 5 | 0 день | Таблетка от белого до кремового цвета | 99,7 | 100,8 | 0,47 |
| 40°C， 10 дней | Таблетка от белого до кремового цвета | 99,4 | 101,3 | 0,48 | |
| 60°C， 10 дней | Таблетка от белого до кремового цвета | 99,6 | 101,1 | 0,48 | |
| 40°C， 30 дней | Таблетка от белого до кремового цвета | 99,8 | 100,5 | 0,39 | |
| 60°C， 30 дней | Таблетка от белого до кремового цвета | 99,5 | 100,3 | 0,44 | |
| 40°C， 90 дней | Таблетка от белого до кремового цвета | 99,2 | 99,8 | 0,43 | |
| 60°C， 90 дней | Таблетка от белого до кремового цвета | 99,1 | 99,1 | 0,54 | |
| Пример 6 | 0 день | Таблетка от белого до кремового цвета | 99,8 | 99,8 | 0,55 |
| 40°C， 10 дней | Таблетка от белого до кремового цвета | 99,2 | 99,8 | 0,60 | |
| 60°C， 10 дней | Таблетка от белого до кремового цвета | 99,8 | 99,7 | 0,54 | |
| 40°C， 30 дней | Таблетка от белого до кремового цвета | 99,7 | 99,5 | 0,58 | |
| 60°C， 30 дней | Таблетка от белого до кремового цвета | 99,8 | 99,8 | 0,56 | |
| 40°C， 90 дней | Таблетка от белого до кремового цвета | 99,7 | 91,6 | 0,48 | |
| 60°C， 90 дней | Таблетка от белого до кремового цвета | 99,8 | 83,7 | 0,56 | |
| Пример 7 | 0 день | Таблетка от белого до кремового цвета | 99,7 | 99,5 | 0,47 |
| 40°C， 10 дней | Таблетка от белого до кремового цвета | 99,2 | 99,6 | 0,48 | |
| 60°C， 10 дней | Таблетка от белого до кремового цвета | 99,8 | 99,8 | 0,56 | |
| 40°C， 30 дней | Таблетка от белого до кремового цвета | 99,1 | 99,8 | 0,47 | |
| 60°C， 30 дней | Таблетка от белого до кремового цвета | 99,5 | 99,7 | 0,48 | |
| 40°C， 90 дней | Таблетка от белого до кремового цвета | 99,6 | 90,8 | 0,46 | |
| 60°C， 90 дней | Таблетка от белого до кремового цвета | 99,4 | 87,3 | 0,51 | |
| Пример 8 | 0 день | Таблетка от белого до кремового цвета | 99,8 | 101,2 | 0,41 |
| 40°C， 10 дней | Таблетка от белого до кремового цвета | 99,9 | 101,1 | 0,43 | |
| 60°C， 10 дней | Таблетка от белого до кремового цвета | 99,9 | 100,9 | 0,41 | |
| 40°C， 30 дней | Таблетка от белого до кремового цвета | 99,7 | 100,0 | 0,39 | |
| 60°C， 30 дней | Таблетка от белого до кремового цвета | 99,8 | 101,0 | 0,40 | |
| 40°C， 90 дней | Таблетка от белого до кремового цвета | 99,7 | 99,8 | 0,50 | |
| 60°C， 90 дней | Таблетка от белого до кремового цвета | 99,8 | 99,2 | 0,48 | |
| Пример 9 | 0 день | Таблетка от белого до кремового цвета | 99,7 | 99,7 | 0,46 |
| 40°C， 10 дней | Таблетка от белого до кремового цвета | 99,7 | 99,8 | 0,45 | |
| 60°C， 10 дней | Таблетка от белого до кремового цвета | 99,5 | 99,6 | 0,47 | |
| 40°C， 30 дней | Таблетка от белого до кремового цвета | 99,6 | 99,7 | 0,45 | |
| 60°C， 30 дней | Таблетка от белого до кремового цвета | 99,7 | 99,8 | 0,44 | |
| 40°C， 90 дней | Таблетка от белого до кремового цвета | 99,5 | 98,7 | 0,47 | |
| 60°C， 90 дней | Таблетка от белого до кремового цвета | 99,4 | 98,7 | 0,51 | |
| Пример 10 | 0 день | Таблетка от белого до кремового цвета | 99,8 | 100,1 | 0,37 |
| 40°C， 10 дней | Таблетка от белого до кремового цвета | 99,7 | 100,2 | 0,36 | |
| 60°C， 10 дней | Таблетка от белого до кремового цвета | 99,5 | 99,8 | 0,41 | |
| 40°C， 30 дней | Таблетка от белого до кремового цвета | 99,6 | 99,1 | 0,38 | |
| 60°C， 30 дней | Таблетка от белого до кремового цвета | 99,4 | 99,6 | 0,40 | |
| 40°C， 90 дней | Таблетка от белого до кремового цвета | 99,6 | 94,3 | 0,44 | |
| 60°C， 90 дней | Таблетка от белого до кремового цвета | 99,7 | 89,4 | 0,47 | |
| Пример 11 | 0 день | Таблетка от белого до кремового цвета | 98,5 | 99,8 | 0,45 |
| 40°C， 10 дней | Таблетка от белого до кремового цвета | 98,2 | 99,5 | 0,39 | |
| 60°C， 10 дней | Таблетка от белого до кремового цвета | 98,7 | 99,6 | 0,51 | |
| 40°C， 30 дней | Таблетка от белого до кремового цвета | 98,6 | 99,7 | 0,38 | |
| 60°C， 30 дней | Таблетка от белого до кремового цвета | 98,4 | 99,8 | 0,50 | |
| 40°C， 90 дней | Таблетка от белого до кремового цвета | 98,3 | 95,7 | 0,51 | |
| 60°C， 90 дней | Таблетка от белого до кремового цвета | 98,1 | 90,7 | 0,49 | |
| Пример 12 | 0 день | Таблетка от белого до кремового цвета | 99,3 | 99,3 | 0,46 |
| 40°C， 10 дней | Таблетка от белого до кремового цвета | 99,4 | 99,5 | 0,45 | |
| 60°C， 10 дней | Таблетка от белого до кремового цвета | 99,5 | 99,7 | 0,43 | |
| 40°C， 30 дней | Таблетка от белого до кремового цвета | 99,2 | 99,6 | 0,41 | |
| 60°C， 30 дней | Таблетка от белого до кремового цвета | 99,1 | 99,3 | 0,48 | |
| 40°C， 90 дней | Таблетка от белого до кремового цвета | 99,4 | 99,4 | 0,41 | |
| 60°C， 90 дней | Таблетка от белого до кремового цвета | 99,2 | 99,7 | 0,49 | |
| Пример 13 | 0 день | Таблетка от белого до кремового цвета | 99,5 | 99,5 | 0,35 |
| 40°C， 10 дней | Таблетка от белого до кремового цвета | 99,6 | 99,4 | 0,39 | |
| 60°C， 10 дней | Таблетка от белого до кремового цвета | 99,7 | 99,7 | 0,41 | |
| 40°C， 30 дней | Таблетка от белого до кремового цвета | 99,5 | 99,6 | 0,40 | |
| 60°C， 30 дней | Таблетка от белого до кремового цвета | 99,4 | 99,4 | 0,42 | |
| 40°C， 90 дней | Таблетка от белого до кремового цвета | 99,3 | 99,8 | 0,44 | |
| 60°C， 90 дней | Таблетка от белого до кремового цвета | 99,5 | 99,4 | 0,44 | |
| Пример 14 | 0 день | Таблетка от белого до кремового цвета | 99,8 | 99,2 | 0,41 |
| 40°C， 10 дней | Таблетка от белого до кремового цвета | 99,4 | 99,4 | 0,46 | |
| 60°C， 10 дней | Таблетка от белого до кремового цвета | 99,8 | 99,5 | 0,47 | |
| 40°C， 30 дней | Таблетка от белого до кремового цвета | 99,2 | 99,6 | 0,45 | |
| 60°C， 30 дней | Таблетка от белого до кремового цвета | 99,6 | 99,3 | 0,46 | |
| 40°C， 90 дней | Таблетка от белого до кремового цвета | 99,4 | 99,4 | 0,43 | |
| 60°C， 90 дней | Таблетка от белого до кремового цвета | 99,5 | 99,7 | 0,47 |
[0118] Приведенные выше данные результатов качественных испытаний примеров демонстрируют, что каждый из примеров с 4 по 14, хранившийся при высокой температуре в течение 30 дней, демонстрировал хорошую стабильность. Среди них примеры 8, 12, 13 и 14, хранившиеся при высокой температуре в течение 90 дней, показали хорошую стабильность.
Пример 16
Испытание на скорость растворения
[0119] В соответствии с методом испытания на растворение и высвобождение в "Китайской фармакопее" версии 2015 года (четвертая часть 0931, второй метод) в качестве среды для растворения использовали 900 мл воды (где для примеров 3 и 4 использовали 250 мл воды в качестве среды для растворения), при скорости вращения 50 об/мин, испытание проводили в соответствии с правилами. Образцы собирали в разные моменты времени, фильтровали через фильтр 0,8 мкм, и последующие фильтраты использовали в качестве тестового раствора. Соответствующее количество родственного соединения эдаравон брали и растворяли в растворе 20 ммоль/л ацетата аммония/ацетонитрила (80:20), а затем разбавляли приблизительно до 0,02 мг/мл для использования. Ультрафиолетовое поглощение тестируемого раствора измеряли при 254 нм, и рассчитывали скорость растворения образца. Результаты показаны на фигурах 1, 2 и 3.
Пример 17
Распределение эдаравона в плазме и ткани головного мозга крыс SD после сублингвального введения
1. Материалы и методы.
1.1 Экспериментальные животные
[0120] Крысы Sprague–Dawley (SD), свободные от патогенной флоры, самцы, весом 180–200 г.
Источник: Компания "Beijing Weitong Lihua Experimental Animal Technology Co., Ltd."
Номер сертификата: 11400700138404
Номер лицензии: SCXK (Пекин) 2012–0001
Обеспеченность пищей и водоснабжение: крысы голодали в течение 12 ч до испытания, и корм давали через 4 ч после введения. Воду не запрещали на протяжении всего эксперимента. Аномалии животных наблюдали и регистрировали во время введения препарата и взятия образца.
1.2 Испытуемые лекарственные средства
[0121] Инъекция соединения эдаравон: 12,5 мг/5 мл по спецификации (эдаравон и (+)–2–борнеол составляли 10 мг/5 мл и 2,5 мг/5 мл, соответственно).
[0122] Сублингвальные таблетки, полученные в соответствии с соотношением состава примера 8, каждая из которых содержит 5 мг эдаравона и 1 мг борнеола.
1.3 Методы
[0123] Группа 1: внутривенное введение инъекции соединения эдаравон (N=4)
[0124] Дозировка: 16 мг/кг эдаравона, 4 мг/кг (+)–2–борнеола; объем введения: 8 мл/кг. Образцы плазмы и ткани головного мозга собирали через 2 мин, 15 мин, 30 мин, 1 ч, 2,5 ч и 5 ч. В каждый момент времени цельную кровь и ткани головного мозга собирали одновременно.
[0125] Группа 2: одну сублингвальную таблетку давали под язык (N=6).
[0126] Крысам SD внутрибрюшинно вводили хлоральгидрат для получения крыс SD под мягкой анестезией. Ротовую полость крысы увлажняли 50 мкл воды, и одну таблетку вводили под язык крысы, 1 таблетка/крыса. Ротовую полость фиксировали в течение 30 мин, чтобы предотвратить выпадение таблетки или скольжение таблетки в желудочно–кишечный тракт. Принимая время введения таблетки под язык в качестве момента времени 0 мин, цельную кровь и ткани головного мозга собирали через 5 мин, 15 мин, 30 мин, 1 ч, 2,5 ч и 5 ч.
2. Экспериментальные результаты
[0127] Ниже приведены средние значения каждого фармакокинетического параметра эдаравона в плазме от крыс SD после внутривенного введения инъекции соединения эдаравон и от крыс SD, которым вводили сублингвальную таблетку.
| Внутривенное введение |
Сублингвальное введение |
|
| Tмакс. (ч) | 0,033 | 2,5 |
| Cмакс. (нг/мл) | 58550 | 4793 |
| AUC0–5ч (ч×нг/мл) | 18179 | 15638 |
| MRTlast (ч) | 0,59 | 2,06 |
| F (%) | / | 62,6 |
AUC0–5ч (ч×нг/мл) – площадь под кривой зависимости концентрации от времени от момента времени 0 до 5 часов
MRTlast (ч) – среднее время удержания препарата в организме от времени введения дозы до времени последней измеримой концентрации
[0128] Ниже приведены средние значения каждого фармакокинетического параметра эдаравона в гомогенате мозга от крыс SD после внутривенного введения инъекции соединения эдаравон и от крыс SD, которым вводили сублингвальную таблетку.
| Внутривенное Введение |
Сублингвальное введение |
|
| Tмакс. (ч) | 0,033 | 0,25 |
| Cмакс. (нг/мл) | 1405 | 55,3 |
| AUC0–5ч (ч×нг/мл) | 270 | 106 |
| MRTlast (ч) | 0,20 | 1,18 |
| F (%) | / | 28,5 |
[0129] Ниже приведены средние значения каждого фармакокинетического параметра борнеола в плазме от крыс SD после внутривенного введения инъекции соединения эдаравон и от крыс SD, которым вводили сублингвальную таблетку.
| Внутривенное Введение |
Сублингвальное введение |
|
| Tмакс. (ч) | 0,033 | 1,00 |
| Cмакс. (нг/мл) | 1611 | 105 |
| AUC0–5ч (ч×нг/мл) | 622 | 353 |
| MRTlast (ч) | 0,64 | 1,86 |
| F (%) | / | 51,6 |
[0130] Ниже приведены средние значения каждого фармакокинетического параметра борнеола в гомогенате мозга от крыс SD после внутривенного введения инъекции соединения эдаравон и от крыс SD, которым вводили сублингвальную таблетку.
| Внутривенное Введение |
Сублингвальное введение |
|
| Tмакс. (ч) | 0,033 | 0,5 |
| Cмакс. (нг/мл) | 5726 | 260 |
| AUC0–5ч (ч×нг/мл) | 1686 | 529 |
| MRTlast (ч) | 0,34 | 1,31 |
| F (%) | / | 28,5 |
[0131] Результаты распределения ингредиентов в сублингвальной таблетке в плазме и ткани мозга крыс SD продемонстрировали, что биодоступность эдаравона и (+)–2–борнеола в сублингвальном препарате была следующей: эдаравона приблизительно 62,6%, (+)–2–борнеола приблизительно 51,6%; биодоступность в головном мозге была следующей: эдаравона приблизительно 28,5%, (+)–2–борнеола приблизительно 28,5%, что указывает на высокую биодоступность эдаравона и борнеола при сублингвальном введении, удовлетворяющую требованиям к сублингвальному введению.
[0132] Сублингвальные таблетки, содержащие эдаравон и (+)–2–борнеол, обладали преимуществами хороших фармакокинетических свойств, высокой биодоступности, высокой мозговой проницаемости и удобного введения.
Пример 18
[0133] Защитное воздействие сублингвального введения на фокальную церебральную ишемию–реперфузию
1 Материалы и методы
1.1 Экспериментальные животные
[0134] Крысы Sprague–Dawley (SD), самцы, свободные от патогенной флоры, весом 260–280 г.
1.2 Испытуемые лекарственные средства
[0135] Сублингвальные таблетки получали в соответствии с соотношением примера 8 в трех спецификациях: 0,67 мг эдаравона и 0,13 мг борнеола (группа, получавшая дозу 3 мг/кг); 2,01 мг эдаравона и 0,39 мг борнеола (группа, получавшая дозу 9 мг/кг); 6 мг эдаравона и 1,2 мг борнеола (группа, получавшая дозу 27 мг/кг).
[0136] Инъекция соединения эдаравон, по спецификации: 5 мл:12,5 мг, производимая Nanjing Xiansheng Dongyuan Pharmaceutical Co., Ltd.
1.3 Экспериментальные методы
1.3.1 Получение модели фокальной церебральной ишемии–реперфузии
[0137] Модель церебральной ишемии–реперфузии создавали путем окклюзии средней мозговой артерии (MCAO) через шов на внутренней сонной артерии. После анестезии 7%–ным гидратированным трихлорацетальдегидом (6 мл/кг) животных фиксировали на операционном столе в положении лежа, кожу дезинфицировали, шею вскрывали посередине, и правую общую сонную артерию, наружную сонную артерию и внутреннюю сонную артерию разделяли, блуждающий нерв осторожно удаляли, наружную сонную артерию лигировали, и вслед за внутренней сонной артерией лигировали крылонебную артерию. Пережимали конец общей сонной артерии поблизости к сердцу, и делали разрез с дистального конца линии лигатуры наружной сонной артерии, в который вставляли нейлоновый катетер с внешним диаметром 0,285 мм. Нейлоновый катетер входил во внутреннюю сонную артерию через бифуркацию общей сонной артерии, и его медленно вставляли до тех пор, пока не наблюдали небольшое сопротивление (около 20 мм от бифуркации). Все кровоснабжение средней мозговой артерии было заблокировано. После того, как правый мозг страдал от ишемии в течение 2 часов, нейлоновый катетер осторожно извлекали, кровоснабжение восстанавливали для реперфузии, кожу зашивали и дезинфицировали.
1.3.2 Разделение животных на группы и введение
[0138] Экспериментальных животных разделяли на 5 групп: три группы сублингвальных таблеток (доза 3 мг/кг, 9 мг/кг, 27 мг/кг), группа положительного контроля лекарственным соединением эдаравон (3 мг/кг) и модельная группа. После получения модели церебральной ишемии животных случайным образом распределяли в каждую группу. Животным в группе сублингвальных таблеток вводили сублингвальные таблетки с соответствующей спецификацией одновременно с реперфузией, 1 таблетка/крыса, и ротовые полости фиксировали, чтобы предотвратить выпадение таблеток или их скольжение в желудочно–кишечный тракт, до того, пока таблетки полностью не всасывались. Животным в группе с положительным контролем лекарственным средством внутривенно вводили один раз сразу после реперфузии, а животным в модельной группе вводили равный объем физиологического раствора. Симптомы неврологического расстройства оценивали через 24 часа после церебральной ишемии, а затем животных умерщвляли, мозг извлекали и подвергали окрашиванию и визуализации для определения площади церебрального инфаркта.
1.3.3 Оценка неврологического расстройства и измерение размера церебрального инфаркта
[0139] Неврологическое расстройство оценивали с использованием модифицированной 5–балльной шкалы Бедерсона. Симптомы неврологического расстройства у крыс после церебральной ишемии оценивали односторонне слепым методом. В частности, разработчик теста метил животных в группах. Тот, кто оценивал симптомы неврологического расстройства, не знал групповую принадлежность животных. После того, как оценка была закончена, результаты оценки различных меток представляли разработчику теста, и разработчик раскрывал оценку для каждого животного каждой испытуемой группы.
| Приложенная таблица: Оценка неврологического расстройства (баллы по шкале Бедерсона) 0: Когда хвост поднят, а тело подвешено в воздухе, передние конечности животного простираются до пола, и нет другого поведенческого расстройства. 1. Когда хвост поднят и тело подвешено в воздухе, передние конечности животного на противоположной (левой) от прооперированной стороне демонстрируют сгибание запястья, вращательные движения в плечевых суставах, отведение локтя и прижимание к грудной стенке. 2: Животное помещают на гладкий лист, и сопротивление уменьшается, когда толкают в плечо с прооперированной стороны, чтобы переместить в противоположную сторону. 3: Когда животное ходит свободно, оно будет кружиться или поворачиваться к противоположной от прооперированной стороне. 4: Конечности мягкие и не имеют спонтанной активности. |
[0140] Определение степени церебрального инфаркта
[0141] После того, как животное было умерщвлено, мозг удаляли после обезглавливания, обонятельную луковицу, мозжечок и нижний ствол мозга удаляли. Кровь на поверхности мозга смывали физиологическим раствором, а остаточную воду на поверхности удаляли. Мозг размещали при –20°C на 20 мин. Сразу после удаления плоскость, непосредственно связанную с линией зрения, разрезали вертикально вниз, чтобы получить корональный разрез, и в обратном направлении отрезали по одному срезу каждые 2 мм. Срезы мозга инкубировали в 2%–ном растворе красителя ТТХ (37°C в течение 90 мин) для окрашивания. Нормальная мозговая ткань была окрашена в темно–красный цвет, а ишемическая мозговая ткань была бледного цвета. После промывания физиологическим раствором срезы головного мозга быстро располагали в ряд спереди назад, и остаточную воду на поверхности удаляли, а затем фотографировали.
[0142] Изображения обрабатывали с помощью программного обеспечения для анализа изображений, и соответствующий объем левого мозга и объем инфаркта рассчитывали по формуле, и определяли процент объема инфаркта.
Расчет объема инфаркта:
V=t (A1+ A2+ A3+ .........+An)
t представляет собой толщину среза, и A представляет собой площадь инфаркта.
%I=100%×(VC–VL)/VC
%I представляет собой процент объема инфаркта, VC представляет собой объем мозга на контрольной стороне (левое полушарие), и VL представляет собой объем неинфарктной области на стороне инфаркта (правое полушарие).
2 Экспериментальные результаты
2.1 Влияние на неврологическое расстройство
[0143] Степень неврологического расстройства у каждой группы животных показана в таблице 1. По сравнению с модельной группой три дозы (3, 9, 27 мг/кг) сублингвальной таблетки и положительный контроль лекарственным соединением эдаравон (3 мг/кг), оба значительно облегчали неврологическое расстройство.
[0144] Таблица 3. Влияние сублингвального введения эдаравона и (+)–2–борнеола на неврологическое расстройство
| Группы | Количество животных | Оценки неврологического расстройства |
| Модельная группа | 12 | 2,58±0,51 |
| Группа соединения эдаравон | 13 | 1,77±0,93⃰ |
| Сублингвальная таблетка (0,8 мг) | 14 | 2,00±0,68⃰ |
| Сублингвальная таблетка (2,4 мг) | 12 | 1,75±0,75⃰⃰ |
| Сублингвальная таблетка (7,2 мг) | 13 | 1,54±1,05⃰⃰ |
[0145] Х±стандартное отклонение. По сравнению с модельной группой ⃰p ˂0,05, ⃰⃰p ˂0,01.
2.2 Влияние на площадь церебрального инфаркта
[0146] Влияние на площадь церебрального инфаркта показано в таблице 2. По сравнению с модельной группой три дозы (3, 9, 27 мг/кг) сублингвальной таблетки и положительный контроль лекарственным соединением эдаравон, оба значительно уменьшили размер зоны церебрального инфаркта на модели животных с ишемией–реперфузией.
[0147] Таблица 2 Влияние сублингвального введения эдаравона и (+)–2–борнеола на площадь церебрального инфаркта
| Группы | Количество животных | Площадь церебрального инфаркта (%) |
| Модельная группа | 12 | 35,1±11,5 |
| Группа соединения эдаравон | 13 | 22,9±13,0⃰ |
| Сублингвальная таблетка (0,8 мг) | 14 | 24,0±10,0⃰ |
| Сублингвальная таблетка (2,4 мг) | 12 | 22,0±11,4⃰ |
| Сублингвальная таблетка (7,2 мг) | 13 | 20,7±13,1⃰⃰ |
[0148] Х±стандартное отклонение. По сравнению с модельной группой ⃰p ˂0,05, ⃰⃰p ˂0,01.
Пример 19
Исследование распределения эдаравона в плазме и ткани мозга крыс SD после сублингвального введения:
3. Материалы и методы.
1.4 Экспериментальные животные
[0149] Крысы Sprague–Dawley (SD), свободные от патогенной флоры, самцы, весом 180–200 г.
Источник: Компания "Beijing Weitong Lihua Experimental Animal Technology Co., Ltd."
Номер сертификата: 11400700138404.
Номер лицензии: SCXK (Пекин) 2012–0001.
Обеспеченность пищей и водоснабжение: крысы голодали в течение 12 ч до испытания, и корм давали через 4 ч после введения. Воду не запрещали на протяжении всего эксперимента. Аномалии животных наблюдали и регистрировали во время введения препарата и взятия образца.
1.5 Испытуемые лекарственные средства
[0150] Инъекция соединения эдаравон: 12,5 мг/5 мл по спецификации (эдаравон и (+)–2–борнеол составляли 10 мг/5 мл и 2,5 мг/5 мл, соответственно).
[0151] Сублингвальные таблетки, полученные в соответствии с соотношением состава примера 13, каждая из которых содержит 5 мг эдаравона и 1 мг борнеола.
1.6 Методы
[0152] Группа 1: внутривенное введение инъекции соединения эдаравон (N=4)
[0153] Дозировка: 16 мг/кг эдаравона, 4 мг/кг (+)–2–борнеола; объем введения: 8 мл/кг. Образцы плазмы и ткани головного мозга собирали через 2 мин, 15 мин, 30 мин, 1 ч, 2,5 ч и 5 ч. В каждый момент времени цельную кровь и ткани головного мозга собирали одновременно.
[0154] Группа 2: одну сублингвальную таблетку давали под язык (N=6).
[0155] Крысам SD внутрибрюшинно вводили хлоральгидрат для получения крыс SD под мягкой анестезией. Ротовую полость крысы увлажняли 50 мкл воды, и одну таблетку вводили под язык крысы, 1 таблетка/крыса. Ротовую полость фиксировали в течение 30 мин, чтобы предотвратить выпадение таблетки или скольжение таблетки в желудочно–кишечный тракт. Принимая время введения таблетки под язык в качестве момента времени 0 мин, цельную кровь и ткани головного мозга собирали через 5 мин, 15 мин, 30 мин, 1 ч, 2,5 ч и 5 ч.
4. Экспериментальные результаты
[0156] Ниже приведены средние значения каждого фармакокинетического параметра эдаравона в плазме от крыс SD после внутривенного введения инъекции соединения эдаравон и от крыс SD, которым вводили сублингвальную таблетку.
| Внутривенное введение |
Сублингвальное введение |
|
| Tмакс. (ч) | 0,032 | 0,5 |
| Cмакс. (нг/мл) | 56370 | 5875 |
| AUC0–5ч (ч×нг/мл) | 16038 | 17427 |
| MRTlast (ч) | 0,59 | 2,63 |
| F (%) | / | 79,9 |
[0157] Ниже приведены средние значения каждого фармакокинетического параметра эдаравона в гомогенате мозга от крыс SD после внутривенного введения инъекции соединения эдаравон и от крыс SD, которым вводили сублингвальную таблетку.
| Внутривенное введение |
Сублингвальное введение |
|
| Tмакс. (ч) | 0,032 | 0,25 |
| Cмакс. (нг/мл) | 1398 | 59,2 |
| AUC0–5ч (ч×нг/мл) | 255 | 110 |
| MRTlast (ч) | 0,20 | 1,16 |
| F (%) | / | 30,1 |
[0158] Ниже приведены средние значения каждого фармакокинетического параметра борнеола в плазме от крыс SD после внутривенного введения инъекции соединения эдаравон и от крыс SD, которым вводили сублингвальную таблетку.
| Внутривенное введение |
Сублингвальное введение |
|
| Tмакс. (ч) | 0,032 | 1,00 |
| Cмакс. (нг/мл) | 1571 | 114 |
| AUC0–5ч (ч×нг/мл) | 593 | 392 |
| MRTlast (ч) | 0,63 | 1,93 |
| F (%) | / | 60,1 |
[0159] Ниже приведены средние значения каждого фармакокинетического параметра борнеола в гомогенате мозга от крыс SD после внутривенного введения инъекции соединения эдаравон и от крыс SD, которым вводили сублингвальную таблетку.
| Внутривенное введение |
Сублингвальное введение |
|
| Tмакс. (ч) | 0,032 | 0,5 |
| Cмакс. (нг/мл) | 5430 | 273 |
| AUC0–5ч (ч×нг/мл) | 1729 | 541 |
| MRTlast (ч) | 0,34 | 1,30 |
| F (%) | / | 29,6 |
[0160] Результаты распределения ингредиентов в сублингвальной таблетке в плазме и ткани головного мозга крыс SD продемонстрировали, что биодоступность эдаравона и (+)–2–борнеола в сублингвальном препарате была следующей: эдаравона приблизительно 79,9%, (+)–2–борнеола приблизительно 60,1%; биодоступность в головном мозге была следующей: эдаравона приблизительно 30,1%, (+)–2–борнеола приблизительно 29,6%, что указывает на высокую биодоступность эдаравона и борнеола при сублингвальном введении, удовлетворяющую требованиям к сублингвальному введению.
[0161] Сублингвальные таблетки, содержащие эдаравон и (+)–2–борнеол, обладали преимуществами хороших фармакокинетических свойств, высокой биодоступности, высокой мозговой проницаемости и удобного введения.
Пример 20
[0162] Защитное воздействие сублингвального введения на фокальную церебральную ишемию–реперфузию
1 Материалы и методы
1.1 Экспериментальные животные
[0163] Крысы Sprague–Dawley (SD), самцы, свободные от патогенной флоры, весом 260–280 г.
1.2 Испытуемые лекарственные средства
[0164] Сублингвальные таблетки получали в соответствии с соотношением примера 13 в трех спецификациях: 0,67 мг эдаравона и 0,13 мг борнеола (группа, получавшая дозу 3 мг/кг); 2,01 мг эдаравона и 0,39 мг борнеола (группа, получавшая дозу 9 мг/кг); 6 мг эдаравона и 1,2 мг борнеола (группа, получавшая дозу 27 мг/кг).
[0165] Инъекция соединения эдаравон, по спецификации: 5 мл:12,5 мг, производимая Nanjing Xiansheng Dongyuan Pharmaceutical Co., Ltd.
1.3 Экспериментальные методы
1.3.1 Получение модели фокальной церебральной ишемии–реперфузии
[0166] Модель церебральной ишемии–реперфузии создавали путем окклюзии средней мозговой артерии (MCAO) через шов на внутренней сонной артерии. После анестезии 7%–ным гидратированным трихлорацетальдегидом (6 мл/кг) животных фиксировали на операционном столе в положении лежа, кожу дезинфицировали, шею вскрывали посередине, и правую общую сонную артерию, наружную сонную артерию и внутреннюю сонную артерию разделяли, блуждающий нерв осторожно удаляли, наружную сонную артерию лигировали, и вслед за внутренней сонной артерией лигировали крылонебную артерию. Пережимали конец общей сонной артерии поблизости к сердцу, и делали разрез с дистального конца линии лигатуры наружной сонной артерии, в который вставляли нейлоновый катетер с внешним диаметром 0,285 мм. Нейлоновый катетер входил во внутреннюю сонную артерию через бифуркацию общей сонной артерии, и его медленно вставляли до тех пор, пока не наблюдали небольшое сопротивление (около 20 мм от бифуркации). Все кровоснабжение средней мозговой артерии было заблокировано. После того, как правый мозг страдал от ишемии в течение 2 часов, нейлоновый катетер осторожно извлекали, кровоснабжение восстанавливали для реперфузии, кожу зашивали и дезинфицировали.
1.3.2 Разделение животных на группы и введение
[0167] Экспериментальных животных разделяли на 5 групп: три группы сублингвальных таблеток (доза 3 мг/кг, 9 мг/кг, 27 мг/кг), группа положительного контроля лекарственным соединением эдаравон (3 мг/кг) и модельная группа. После получения модели церебральной ишемии животных случайным образом распределяли в каждую группу. Животным в группе сублингвальных таблеток вводили сублингвальные таблетки с соответствующей спецификацией одновременно с реперфузией, 1 таблетка/крыса, и ротовые полости фиксировали, чтобы предотвратить выпадение таблеток или их скольжение в желудочно–кишечный тракт, до того, пока таблетки полностью не всасывались. Животным в группе с положительным контролем лекарственным средством внутривенно вводили один раз сразу после реперфузии, а животным в модельной группе вводили равный объем физиологического раствора. Симптомы неврологического расстройства оценивали через 24 часа после церебральной ишемии, а затем животных умерщвляли, мозг извлекали и подвергали окрашиванию и визуализации для определения площади церебрального инфаркта.
1.3.3 Оценка неврологического расстройства и измерение размера церебрального инфаркта
[0168] Неврологическое расстройство оценивали с использованием модифицированной 5–балльной шкалы Бедерсона. Симптомы неврологического расстройства у крыс после церебральной ишемии оценивали односторонне слепым методом. В частности, разработчик теста метил животных в группах. Тот, кто оценивал симптомы неврологического расстройства, не знал групповую принадлежность животных. После того, как оценка была закончена, результаты оценки различных меток представляли разработчику теста, и разработчик раскрывал оценку для каждого животного каждой испытуемой группы.
| Приложенная таблица: Оценка неврологического расстройства (баллы по шкале Бедерсона) 0: Когда хвост поднят, а тело подвешено в воздухе, передние конечности животного простираются до пола, и нет другого поведенческого расстройства. 1. Когда хвост поднят и тело подвешено в воздухе, передние конечности животного на противоположной (левой) от прооперированной стороне демонстрируют сгибание запястья, вращательные движения в плечевых суставах, отведение локтя и прижимание к грудной стенке. 2: Животное помещают на гладкий лист, и сопротивление уменьшается, когда толкают в плечо с прооперированной стороны, чтобы переместить в противоположную сторону. 3: Когда животное ходит свободно, оно будет кружиться или поворачиваться к противоположной от прооперированной стороне. 4: Конечности мягкие и не имеют спонтанной активности. |
[0169] Определение степени церебрального инфаркта
[0170] После того, как животное было умерщвлено, мозг удаляли после обезглавливания, обонятельную луковицу, мозжечок и нижний ствол мозга удаляли. Кровь на поверхности мозга смывали физиологическим раствором, а остаточную воду на поверхности удаляли. Мозг размещали при –20°C на 20 мин. Сразу после удаления плоскость, непосредственно связанную с линией зрения, разрезали вертикально вниз, чтобы получить корональный разрез, и в обратном направлении отрезали по одному срезу каждые 2 мм. Срезы мозга инкубировали в 2%–ном растворе красителя ТТХ (37°C в течение 90 мин) для окрашивания. Нормальная мозговая ткань была окрашена в темно–красный цвет, а ишемическая мозговая ткань была бледного цвета. После промывания физиологическим раствором срезы головного мозга быстро располагали в ряд спереди назад, и остаточную воду на поверхности удаляли, а затем фотографировали.
[0171] Изображения обрабатывали с помощью программного обеспечения для анализа изображений, и соответствующий объем левого мозга и объем инфаркта рассчитывали по формуле, и определяли процент объема инфаркта.
Расчет объема инфаркта:
V=t (A1+ A2+ A3+ .........+An)
t представляет собой толщину среза, и A представляет собой площадь инфаркта.
%I=100%×(VC–VL)/VC
%I представляет собой процент объема инфаркта, VC представляет собой объем мозга на контрольной стороне (левое полушарие), и VL представляет собой объем неинфарктной области на стороне инфаркта (правое полушарие).
2 Экспериментальные результаты
2.1 Влияние на неврологическое расстройство
[0172] Степень неврологического расстройства у каждой группы животных показана в таблице 1. По сравнению с модельной группой три дозы (3, 9, 27 мг/кг) сублингвальной таблетки и положительный контроль лекарственным соединением эдаравон (3 мг/кг), оба значительно облегчали неврологическое расстройство.
[0173] Таблица 3. Влияние сублингвального введения эдаравона и (+)–2–борнеола на неврологическое расстройство
| Группы | Количество животных | Оценки неврологического расстройства |
| Модельная группа | 11 | 2,64±0,42 |
| Группа соединения эдаравон | 12 | 1,74±0,71⃰ |
| Сублингвальная таблетка (0,8 мг) | 14 | 2,35±0,73⃰ |
| Сублингвальная таблетка (2,4 мг) | 14 | 1,83±0,77⃰⃰ |
| Сублингвальная таблетка (7,2 мг) | 13 | 1,43±0,95⃰⃰ |
[0174] Х±стандартное отклонение. По сравнению с модельной группой ⃰p ˂0,05, ⃰⃰p ˂0,01.
2.2 Влияние на площадь церебрального инфаркта
[0175] Влияние на площадь церебрального инфаркта показано в таблице 2. По сравнению с модельной группой три дозы (3, 9, 27 мг/кг) сублингвальной таблетки и положительный контроль лекарственным соединением эдаравон, оба значительно уменьшили размер зоны церебрального инфаркта на модели животных с ишемией–реперфузией.
[0176] Таблица 2 Влияние сублингвального введения эдаравона и (+)–2–борнеола на площадь церебрального инфаркта
| Группы | Количество животных | Площадь церебрального инфаркта (%) |
| Модельная группа | 11 | 37,2±12,3 |
| Группа соединения эдаравон | 12 | 21,6±12,5⃰ |
| Сублингвальная таблетка (0,8 мг) | 14 | 23,4±9,3⃰ |
| Сублингвальная таблетка (2,4 мг) | 14 | 21,3±8,5⃰ |
| Сублингвальная таблетка (7,2 мг) | 13 | 19,8±10,1⃰⃰ |
[0177] Х±стандартное отклонение. По сравнению с модельной группой ⃰p ˂0,05, ⃰⃰p ˂0,01.
[0178] Экспериментальные данные показали, что сублингвальная таблетка по настоящему раскрытию может достигать лекарственного эффекта, сравнимого с эффектом инъекции.
1. Фармацевтическая композиция сублингвальной таблетки для лечения цереброваскулярных заболеваний, содержащая эдаравон, (+)–2–борнеол и фармацевтически приемлемый адъювант, где фармацевтически приемлемый адъювант включает маннит и коповидон.
2. Фармацевтическая композиция по п.1, содержащая маннит и коповидон в массовом соотношении от 1:5 до 5:1 в качестве эксципиентов.
3. Фармацевтическая композиция по п.2, содержащая маннит и коповидон в массовом соотношении от 1:1 до 5:1 в качестве эксципиентов.
4. Фармацевтическая композиция по любому из пп.1–3, в которой массовое отношение эдаравона в пересчете на свободное основание к (+)–2–борнеолу составляет более 4 и менее 10 или более 0,1 и менее 1.
5. Фармацевтическая композиция по любому из пп.1–4, в которой массовое отношение эдаравона в пересчете на свободное основание к (+)–2–борнеолу составляет 5:1.
6. Фармацевтическая композиция по любому из пп.1–5, в которой массовое отношение (+)–2–борнеола к эксципиенту составляет от 0,1:1 до 1:1.
7. Фармацевтическая композиция по любому из пп.1–5, в которой массовое отношение (+)–2–борнеола к эксципиенту составляет от 0,3:1 до 1:1.
