Соединения метаболита антагониста рецептора ангиотензина ii и ингибитора nep, и способы их получения
Изобретение относится к надмолекулярным комплексам (соединениям) двойного действия, которые обладают эффектом блокирования рецептора ангиотензина II (AT1), ингибитора неприлизина (NEPi) и представляют собой соединения (EXP3174·AHU377)·1,5Ca·2H2O и (EXP3174·AHU377)·1,5Ca·2,5H2O. 3 н. и 7 з.п. ф-лы, 7 табл., 9 пр., 8 ил.
Область техники
Данное изобретение относится к области фармацевтической химии, в частности, включает соединения метаболита антагониста рецептора ангиотензина II и ингибитора NEP, а также способы их получения.
Уровень техники
Аллисартанизопроксил (CAS: 947331-05-7), химическое название:
2-бутил-4-хлор-1-[2'-(1Н-тетразол-5-ил)-1,1'-бифенилметил]-имидазол-5-карбоновой кислоты 1-[(изопропокси)карбонилокси]метиловый эфир, торговое название: Xinlitan, представляет собой новый тип антагониста рецептора ангиотензина II (AT1). Его структурная формула впервые опубликована в китайском патенте CN 200610023991.0, где описано также его применение при получении антигипертензивных лекарственных препаратов. По сравнению с другими антигипертензивными препаратами того же типа (такими как лозартан), аллисартанизопроксил демонстрирует низкую токсичность, хорошую антигипертензивную эффективность и другие преимущества. Аллисартанизопроксил играет роль при лечении в результате гидролиза и метаболизма до ЕХР3174. Однако ЕХР3174 демонстрирует низкую биодоступность и слабый терапевтический эффект при использовании в качестве монотерапии, поскольку высокая полярность его молекулярной структуры затрудняет его прохождение через клеточную мембрану посредством диффузии или иными способами пассивной абсорбции, подобными диффузии, и такая пассивная абсорбция может быть улучшена только оптимизацией структуры. Однако многие способы, такие как оптимизация структуры, оптимизация введения препарата, описанные в данной области техники, не могут обеспечивать эффективное улучшение биодоступности ЕХР3174.
Неприлизин (NEP) представляет собой тип нейтральной эндопептидазы, которая разрушает различные эндогенные вазоактивные пептиды, такие как натрийуретический пептид, брадикинин, и также может снижать уровень адреномедуллина, тогда как ингибитор неприлизина может улучшать уровень указанных веществ, таким образом, противодействуя сужению сосудов, задерживанию натрия и чрезмерной активации нейроэндокринной системы.
Гипертензия является наиболее распространенным сердечно-сосудистым заболеванием, клинический синдром которого характеризуется повышением системного артериального давления. Ее подразделяют на первичную и вторичную гипертензию, среди которых на долю пациентов с первичной гипертензией приходится более 95% от всех пациентов с гипертензией. С развитием социальной экономики и улучшением стандарта жизни людей непрерывно растет заболеваемость гипертензией. Гипертензия, если ее не контролировать и не лечить эффективно, может вызывать коронаросклероз, таким образом, развиваясь в коронарную болезнь сердца или стенокардию, и также может вызывать гипертоническую болезнь сердца, сердечную недостаточность и другие тяжелые осложнения. Кроме того, продолжительная гипертензия может вызывать повреждение почек, головного мозга, сердечно-сосудистой системы и других органов.
Поскольку причины и патогенез гипертензии являются разнообразными, то ненадлежащий контроль кровяного давления влияет на структуру и функцию многих органов тела, пациенты с гипертензией также страдают от других болезней или повреждений органов, таких как сердечно-сосудистые и церебрососудистые заболевания, гиперлипемия. Для лечения можно использовать комбинацию с антигипертензивными лекарствами с различным механизмом действия для более эффективного контролирования кровяного давления и, что более важно, такое лечение может оказывать синергетическое действие, что способствует снижению применяемого количества лекарств и дополнительному уменьшению побочных реакций.
Сердечная недостаточность (для краткости, HF, от англ. «Heartfailure») в настоящее время является одним из наиболее распространенных сердечно-сосудистых заболеваний, которая представляет собой группу комплексных клинических синдромов нарушения вентрикулярного наполнения или выброса, вызванных патологической структурой или функцией сердца, и проявляется, главным образом, в виде одышки и слабости (ограниченной переносимости физических нагрузок), а также в виде задержки жидкости (застой в легких и периферический отек). Сердечная недостаточность является тяжелой болезнью и конечной стадией различных сердечных заболеваний с высокой заболеваемостью (China Guideline for Diagnosis and Treatment of Heart Failure, 2014). Более чем за десять последних лет сделаны лишь небольшие достижения в области лекарств против сердечной недостаточности. До настоящего времени ингибитор ангиотензин-превращающего фермента (ACEI, от англ. «angiotensin-convertingenzymeinhibitor») все еще является главным выбором, который достоверно может снижать процент смертности пациентов, а также является признанным лекарством для лечения сердечной недостаточности в медицине, по наиболее полно собранным данным. Для указанной серии лекарств наиболее распространенным побочным эффектом является частый сухой кашель с частотой возникновения 1-30% при лечении с ACEI, который зачастую возникает на ранней стадии (от нескольких дней до нескольких недель) медицинского лечения, и может демонстрировать кумулятивный эффект; такое лечение также может приводить к ангионевротическому отеку. ЕХР3174 имеет потенциал при лечении гипертензии, однако, будучи ограниченным вследствие чрезвычайно низкой биодоступности, приводящей к более слабому воздействию лекарства, дополнительное исследование в отношении данного показания также невозможно осуществить.
С 2005 года, на фоне преобладания факторов риска сердечно-сосудистого заболевания, количество пациентов с сердечно-сосудистым заболеванием в Китае постоянно растет. По статистике, количество пациентов с сердечно-сосудистыми заболеваниями в Китае составляет около 290 миллионов, в том числе 270 миллионов пациентов с гипертензией и около 4500 тысяч пациентов с сердечной недостаточностью (Chinese Cardiovascular Disease Report, 2013).
Комплекс натриевой соли (LCZ696) валсартан-сакубитрил и способ его получения описаны в патенте WO 2007056546. В частности, LCZ696 представляет собой надмолекулярный комплекс (соединение) тринатриевой соли, содержащий 2,5 молекулы кристаллизационной воды, и образуется в результате связывания валсартана и AHU377 нековалентными связями; указанное соединение демонстрирует двойное действие - блокирование рецепторов ангиотензина и ингибирование нейтральной эндопептидазы, и клинически демонстрирует эффект понижения кровяного давления. Описанные клинические экспериментальные данные свидетельствуют о том, что по сравнению с группой лечения эналаприлом, LCZ696 снижает частоту госпитализации пациентов с сердечной недостаточностью на 21%, а также снижает симптомы сердечной недостаточности и физического ограничения, превосходит эналаприл в отношении уменьшения частоты летального исхода и частоты госпитализации пациентов с сердечной недостаточностью (N Engl J Med, 2014, 371(1): 993-1004). Однако вследствие широкого воздействия компонентов (AT1, NEPi, катион и т.д.), образующих указанное соединение, или других неизвестных факторов, LCZ696 легко поглощает влагу и является менее стабильным во влажных и тепловых условиях, кроме того, он также легко демонстрирует электростатический эффект, что ухудшает сыпучесть продукта; свойства, упомянутые выше, обусловливают относительно жесткие ограничения в отношении технологических условий при получении клинического препарата LCZ696.
Таким образом, поиск соединения, демонстрирующего хороший терапевтический эффект и небольшой побочный эффект, которое можно применять при лечении группы сердечно-сосудистых заболеваний, включая гипертензию, сердечную недостаточность и т.д., и других осложнений, и которое демонстрирует физико-химические свойства, подходящие для производства, является технической проблемой, которая не решена с помощью существующих технологий. В данном изобретении предложена серия надмолекулярных комплексов (соединений), которые состоят из химических соединений, демонстрирующих эффект блокирования рецептора ангиотензина II (AT1), и ингибитора неприлизина (NEPi), демонстрируют двойное действие в отношении блокирования рецептора ангиотензина II и эффекта ингибирования нейтральнойэндопептидазы, а также имеют более выгодные физико-химические свойства в процессе получения.
Сущность изобретения
Первая задача данного изобретения заключается в преодолении недостатков существующих технологий и обеспечении серии надмолекулярных комплексов (соединений), обладающих двойным действием; указанные надмолекулярные комплексы (соединения) состоят из следующих компонентов:
1) Химическое соединение, обладающее эффектом блокирования рецептора ангиотензина II (AT1);
2) Ингибитор неприлизина (NEPi);
3) Фармацевтически приемлемый катион.
В одном варианте реализации данного изобретения соединение, обладающее эффектом блокирования рецептора ангиотензина II (AT1), представляет собой метаболит аллисартанаизопроксила (ЕХР3174), его химическая формула представляет собой C22H21ClN6O2, а структура показана ниже:
В одном варианте реализации ингибитор неприлизина (NEPi) представляет собой AHU377 (сакубитрил, CAS: 149709-62-6), его химическая формула представляет собой C24H29NO5, а структура показана ниже:
AHU377, упомянутый выше, представляет собой тип специфических ингибиторов неприлизина, и впервые описан в патенте США US 5217996.
В одном варианте реализации фармацевтически приемлемый катион, упомянутый выше, представляет собой катион кальция (Са2+). Известные технологии предусматривают, что соединения, блокирующие рецептор ангиотензина II (AT1), могут связываться с любым катионом с образованием надмолекулярного комплекса, однако авторами настоящего изобретения, после проведения экспериментов, обнаружено, что надмолекулярные комплексы с другими катионами, такими как ион натрия (Na+), ион калия (K+), не могут быть получены, вопреки ожиданиям.
Надмолекулярный комплекс (соединение) образуется посредством связывания вышеупомянутого соединения, обладающего эффектом блокирования рецептора ангиотензина II (AT1), ингибитора неприлизина и фармацевтически приемлемого катиона нековалентными связями, среди которых вышеупомянутые нековалентные связи известны специалистам в данной области техники и включают, но не ограничиваются ими, водородную связь, координационную связь, ионную связь; метаболит аллисартанаизопроксила (ЕХР3174) содержит две кислотные группы, а именно карбоновую кислоту и тетразол, и AHU377 содержит один тип кислотной группы, а именно карбоновую кислоту.
Вышеупомянутый надмолекулярный комплекс (соединение) может дополнительно содержать растворители. Упомянутые растворители упакованы и/или удерживаются в кристаллической решетке как часть молекулы, участвуя в межмолекулярной структуре, например, посредством надмолекулярного взаимодействия. Вышеупомянутые растворители являются традиционными растворителями в данной области техники, такими как вода, метанол, этанол, 2-пропиловый спирт, ацетон, этилацетат, метил-трет-бутиловый эфир, ацетонитрил, метилбензол, дихлорметан, среди которых предпочтительным является вода. Упомянутый надмолекулярный комплекс (соединение) также можно рассматривать как сольват соли кальция.
В одном варианте реализации формульная единица упомянутого надмолекулярного комплекса (соединения) является такой, как показано ниже:
(аЕХР3174⋅bAHU377)⋅хСа⋅nA
Где молярное отношение метаболита аллисартанаизопроксила (ЕХР3174) к AHU377 (а к b) составляет 1:0,25-4, в различных вариантах реализации значения отношения а к b могут составлять 1:0,25, 1:0,5, 1:1, 1:1,5, 1:2, 1:2,5, 1:3, 1:3,5, 1:4 и т.д.; относительно молярного отношения метаболита аллисартанаизопроксила (ЕХР3174), молярное отношение х для Са2+ может составлять 0,5-3, например, 0,5, 1, 1,5, 2, 2,5, 3; А в упомянутом надмолекулярном комплексе (соединении) относится к воде, метанолу, этанолу, 2-пропиловому спирту, ацетону, этилацетату, метил-трет-бутиловому эфиру, ацетонитрилу, метилбензолу, дихлорметану или другим растворителям, и относительно молярного отношения метаболита аллисартанаизопроксила (ЕХР3174), молярное отношение n для растворителя составляет 0-3, например 0, 0,5, 1, 1,5, 2, 2,5, 3.
Кроме того, в одном варианте реализации упомянутого надмолекулярного комплекса (соединения) молярное отношение метаболита аллисартанаизопроксила (ЕХР3174) к AHU377 (а к b) составляет 1:1, и растворитель представляет собой воду; метаболит аллисартанаизопроксила (ЕХР3174) содержит два типа кислотных групп, а именно карбоновую кислоту и тетразол, AHU377 содержит один тип кислотной группы, а именно карбоновую кислоту; метаболит аллисартанаизопроксила (ЕХР3174) и AHU377, которые связаны с ионом кальция ионной связью и/или координационной связью, а также другими нековалентными связями, также можно рассматривать как сольват кальциевой соли. В одном варианте реализации формульная единица упомянутого надмолекулярного комплекса представлена ниже:
(ЕХР3174⋅AHU377)⋅xCa⋅nH2O Где молярное отношение х для Са2+составляет 0,5-2, например, 0,5, 1, 1,5, 2; молярное отношение n для растворителя составляет 0-3, например, 0, 0,5, 1, 1,5, 2, 2,5, 3. В одном варианте реализации упомянутый надмолекулярный комплекс (соединение) состоит из молярного отношения 1 метаболита аллисартанаизопроксила (ЕХР3174), молярного отношения 1 AHU377 и молярного отношения 1,5-2 Са2+, связанных нековалентными связями, и содержит молярное отношение 1-3 молекул воды, причем значение молярного отношения Са2+ может составлять 1,5 или 2, значение молярного отношения воды может составлять 1, 1,5, 2, 2,5 или 3, и предпочтительно молярное отношение молекул воды 2-3, причем молярное отношение Са2+ может составлять 1,5 или 2, а молярное отношение воды может составлять 2, 2,5 или 3, и в предпочтительных вариантах реализации формульная единица упомянутого надмолекулярного комплекса (соединения) является такой, как показано ниже:
(EXP3174⋅AHU377)⋅1,5Ca⋅nH2O (n представляет собой произвольное значение от 1 до 3, и предпочтительно произвольное значение от 2 до 3)
Например, она может представлять собой
(ЕХР3174⋅AHU377)⋅1,5Са⋅1H2O;
(EXP3174⋅AHU377)⋅1,5Ca⋅1,5H2O;
(ЕХР3174⋅AHU377)⋅1,5Са⋅2H2O;
(EXP3174⋅AHU377)⋅1,5Ca⋅2,5H2O;
(EXP3174⋅AHU377)⋅1,5Ca⋅3H2O;
Или формульная единица упомянутого надмолекулярного комплекса (соединения) является такой, как показано ниже:
(EXP3174⋅AHU377)⋅2Ca⋅nH2O (n представляет собой произвольное значение от 1 до 3, и предпочтительно произвольное значение от 2 до 3)
Например, она может представлять собой
(ЕХР3174⋅AHU377)⋅2Са⋅1H2O;
(ЕХР3174⋅AHU377)⋅2Са⋅1,5H2O;
(ЕХР3174⋅AHU377)⋅2Са⋅2H2O;
(ЕХР3174⋅AHU377)⋅2Са⋅2,5H2O;
(ЕХР3174⋅AHU377)⋅2Са⋅3H2O; Специалистам в данной области техники понятно, что метаболит аллисартанаизопроксила (ЕХР3174), AHU377, Са2+ и молекулы растворителя заполняют структурные ячейки надмолекулярного комплекса (соединения) в форме нескольких формульных единиц. Надмолекулярный комплекс (соединение) отличается от физической смеси, получаемой простым смешиванием двух активных ингредиентов. Полученный надмолекулярный комплекс (соединение) существенно отличается от кальциевых солей ЕХР3174 и AHU377 по спектру РПД и свойствам растворимости в различных растворителях (таких как вода, этанол, этанол-вода), а также другими физическими свойствами и химическими свойствами, такими как гигроскопичность, температура плавления и инфракрасный спектр. Для одного полученного надмолекулярного комплекса (соединения) по данному изобретению, спектр рентгеновской порошковой дифракции (РПД) демонстрирует пики дифракции с относительно высокой интенсивностью поглощения при 4,35°, 5,15°, 5,90°, 12,80° и 15,85° с допустимым диапазоном погрешности ±0,2° для пиков с высокой интенсивностью поглощения, они редко зависят от свойств продукта, испытательного оборудования, условий испытания и других факторов, следовательно, воспроизводимость является весьма высокой; специалистам в данной области техники понятно также, что для конкретных соединений, которые зависят от свойств продукта, испытательного оборудования, условий испытания и других факторов, воспроизводимость пиков с относительно слабой интенсивностью поглощения может быть невысокой, и автором данного изобретения в повторных испытаниях обнаружено, что образцы надмолекулярного комплекса (соединения) из одной партии / различных партий также демонстрируют свойства воспроизводимости, упомянутые выше. Кроме того, спектр рентгеновской порошковой дифракции (РПД) указанного надмолекулярного комплекса (соединения) демонстрирует пики дифракции с более высокой воспроизводимостью при 9,00°, 10,15° и 15,02° с допустимым диапазоном погрешности ±0,2°; более конкретно, спектр рентгеновской порошковой дифракции надмолекулярного комплекса (соединения) в одном испытании имеет следующие пики:
Спектр РПД данного надмолекулярного комплекса (соединения) представлен на Фиг. 1. Молярное отношение ЕХР3174 к AHU377 в данном надмолекулярном комплексе (соединении) можно прямо / косвенно получить аналитическим методом определения состава, например, массу/содержание ЕХР3174 и AHU377 (свободной кислоты) в надмолекулярном комплексе (соединении) можно определить высокоэффективной жидкостной хроматографией (ВЭЖХ), и в результате дополнительного превращения можно получить молярное отношение 1:1.
Дифференциальная сканирующая калориметрия (ДСК) данного надмолекулярного комплекса (соединения) демонстрирует два эндотермических пика дегидратации при 94,4±10°С и 164,1±10°С, поскольку данный надмолекулярный комплекс (соединение) содержит кристаллизационную воду; специалистам в данной области техники понятно, что в различных условиях испытания, таких как скорость нагревания, и при различных характеристиках образца, таких как размер зерна образца, некоторые пики (такие как эндотермический пик дегидратации) на спектре ДСК могут демонстрировать значительную флуктуацию, например, положения эндотермических пиков дегидратации на спектрах, записанных с различной скоростью нагревания, имеют относительно большие различия, и на спектре присутствует другой эндотермический пик при 244,6±5°С. Более конкретно, ДСК надмолекулярного комплекса (соединения) из данного примера представлен на Фиг. 2.
Спектр Рамана данного надмолекулярного комплекса (соединения) демонстрирует пики дифракции при длине волны (см-1) 3061 (ср.), 2935 (ср., широкий), 1613 (слн.), 1521 (ср.), 1482 (сл.), 1286 (ср.), 995 (сл.), 816 (сл., широкий) и 408 (сл.), и интенсивности полос поглощения обозначены следующим образом: (сл.) = слабый, (ср.) = средний (слн.) = сильный.
Инфракрасный спектр (см-1) данного надмолекулярного комплекса (соединения) демонстрирует пики дифракции при главных полосах 3383 (слн., широкий), 1709 (ср.), 1634 (ср.), 1577 (слн.), 1549 (слн.), 1459 (слн.), 1407 (слн.), 1262 (ср.), 1173 (сл.), 762 (ср.), 698 (сл.) и т.д. Интенсивности полос поглощения обозначены следующим образом: (сл.) = слабый, (ср.) = средний (слн.) = сильный.
Для испытания содержания воды в данном надмолекулярном комплексе (соединении) можно использовать методы, общеизвестные в данной области техники, такие как метод Карла Фишера и/или термогравиметрия. В частности, спектр термогравиметрического анализа (ТГ) данного надмолекулярного комплекса (соединения) демонстрирует, что содержание воды в надмолекулярном комплексе (соединении) составляет 5,0%, а содержание воды, определенное методом Карла Фишера, составляет 4,9%. Атомно-абсорбционный спектр данного надмолекулярного комплекса (соединения) демонстрирует, что содержание кальция в надмолекулярном комплексе (соединении) составляет 6,46%.
Измеренные значения элементного анализа данного надмолекулярного комплекса (соединения) составляют: С: 57,81%, Н: 5,48%, и N: 10,36%.
На основании приведенной выше информации, формульная единица данного надмолекулярного комплекса (соединения) представляет собой
(EXP3174⋅AHU377)3-⋅1,5Ca2+⋅2,5H2O.
Для другого полученного надмолекулярного комплекса (соединения), упомянутого в данном изобретении, спектр РПД аналогичен спектру вышеупомянутого надмолекулярного комплекса (соединения). В частности, его спектр РПД демонстрирует пики дифракции с относительно высокой интенсивностью поглощения при 4,40°, 5,19° и 5,96° с допустимым диапазоном погрешности ±0,2°; кроме того, его спектр РПД также демонстрирует пики дифракции с относительно высокой воспроизводимостью при 15,82° и 26,34° с допустимым диапазоном погрешности ±0,2°; более конкретно, спектр РПД надмолекулярного комплекса (соединения) имеет в данном испытании следующие пики:
Спектр РПД данного надмолекулярного комплекса (соединения) представлен на Фиг. 5. Молярное отношение ЕХР3174 к AHU377 в надмолекулярном комплексе (соединении) можно прямо / косвенно получить аналитическим методом определения состава, например, массу/содержание ЕХР3174 и AHU377 (свободной кислоты) в надмолекулярном комплексе (соединении) можно определить с помощью ВЭЖХ, и в результате дополнительного превращения можно получить молярное отношение 1:1.
ДСК данного надмолекулярного комплекса (соединения) демонстрирует наличие двух эндотермических пиков дегидратации при 95,4±10°С и 166,4±10°С, поскольку надмолекулярный комплекс (соединение) содержит кристаллизационную воду; специалистам в данной области техники понятно, что в различных условиях испытания, таких как скорость нагревания, и при различных характеристиках образца, таких как размер зерна образца, некоторые пики (такие как эндотермический пик дегидратации) на спектре ДСК могут демонстрировать значительную флуктуацию, например, положения эндотермических пиков дегидратации на спектрах, записанных с различной скоростью нагревания, имеют относительно большие различия, и на спектре присутствует другой эндотермический пик при 242,4±5°С. Более конкретно, после нескольких повторов было обнаружено, что существует объективное различие ДСК между надмолекулярными комплексами (соединениями), полученными в различных примерах, и ДСК надмолекулярного комплекса (соединения) из данного примера представлен на Фиг. 6. Для испытания содержания воды в надмолекулярном комплексе (соединении) можно использовать методы, общеизвестные в данной области техники, такие как метод Карла Фишера и/или термогравиметрия. В частности, после нескольких повторов было обнаружено, что существует объективное различие ТГ между данным надмолекулярным комплексом (соединением) и предыдущим надмолекулярным комплексом, более конкретно, полученный спектр демонстрирует, что содержание воды в данном надмолекулярном комплексе (соединении) составляет 3,97%, а содержание воды, измеренное методом Карла Фишера, составляет 3,83%.
Атомно-абсорбционный спектр данного надмолекулярного комплекса (соединения) демонстрирует, что содержание кальция в надмолекулярном комплексе (соединении) составляет 6,50%.
Измеренные значения элементного анализа данного надмолекулярного комплекса (соединения) составляют: С: 58,51%, Н: 5,41%, и N: 10,25%.
На основании приведенной выше информации, формульная единица данного надмолекулярного комплекса (соединения) представляет собой
(ЕХР3174⋅AHU377)3-⋅1,5Са2+⋅2H2O.
Другая задача данного изобретения заключается в обеспечении способа получения серии надмолекулярных комплексов (соединений), упомянутых в данном изобретении, и указанный способ включает следующие стадии:
1) Соединение, обладающее эффектом блокирования рецептора ангиотензина II (AR1), и ингибитор неприлизина (NEPi) растворяют в подходящем растворителе;
2) Фармацевтически приемлемую ионную соль кальция и/или гидроксид иона кальция растворяют или суспендируют в подходящем растворителе;
3) Смесь, полученную на стадии 2), медленно добавляют к раствору, полученному на стадии 1), или ионную соль кальция и/или гидроксид иона кальция (непосредственно в твердой форме), соответственно, по порядку добавляют с растворителем в реакционную систему и перемешивают смесь до полной кристаллизации;
4) В осадок выпадает твердое вещество, которое сушат с получением упомянутого надмолекулярного комплекса (соединения).
Указанную реакцию можно проводить при температурах реакции, известных специалистам в данной области техники, таких как температуры реакции, включающие низкую температуру, комнатную температуру или нагревание, при котором температура предпочтительно составляет от комнатной температуры до 45°С, а упомянутая комнатная температура означает 20±10°С.
В частности, на получение упомянутой серии надмолекулярных комплексов (соединений) может влиять добавленное количество, реакционные растворители и другие факторы, поэтому не так просто обеспечить стабильный способ получения, в котором соединение, обладающее эффектом блокирования рецептора ангиотензина II (AT1), и ингибитор неприлизина (NEPi) являются свободными веществами, которые можно получать, напрямую используя свободные вещества или высвобождая их из соответствующей соли; выбор реакционных растворителей влияет на получение упомянутой серии надмолекулярных комплексов (соединений), что проявляется в невозможности, вопреки ожиданиям, получения надмолекулярного комплекса (соединения) с применением некоторых испытанных систем растворителей, в частности, упомянутой системы растворителей для получения указанного соединения, которая содержит ацетон и/или изопропанол; а также добавленное количество упомянутого соединения, обладающего эффектом блокирования рецептора ангиотензина II (AT1), и ингибитора неприлизина, которое является по существу таким, как молярное отношение указанных двух молекул в указанной структуре надмолекулярного комплекса (соединения).
Ионные соли кальция, упомянутые на стадии 2), представляют собой обычные ионные соли кальция, известные в данной области техники, такие как CaCl2, CaSO4, гидроксид иона кальция означает Са(ОН)2, который является предпочтительным; количество Са2+ в упомянутых ионных солях кальция, в основном, соответствует отношению Са2+ в структуре надмолекулярного комплекса (соединения).
В частности, конкретный способ получения надмолекулярного комплекса (соединения) включает следующие стадии:
1) Высвобождают соль AHU377 с получением раствора, содержащего свободную кислоту AHU377, и удаляют растворитель;
2) Свободную кислоту AHU377, полученную на стадии 1), и ЕХР3174 растворяют в органическом растворителе;
3) Фармацевтически приемлемую ионную соль кальция и/или гидроксид иона кальция растворяют или суспендируют в подходящем растворителе;
4) Смесь, полученную на стадии 3), медленно добавляют к раствору, полученному на стадии 2), или ионную соль кальция и/или гидроксид иона кальция (непосредственно в твердой форме), соответственно, по порядку добавляют с растворителем в реакционную систему;
5) Полученную смесь перемешивают до полной кристаллизации, фильтруют с получением твердого осадка и сушат с получением упомянутого надмолекулярного комплекса (соединения).
Соли AHU377, упомянутые на стадии 1), представляют собой обычные соли металла/неметалла, такие как кальциевая соль, магниевая соль, цинковая соль, соль железа(III), натриевая соль, аминная соль, диэтиламинная соль, триэтиламинная соль, среди которых предпочтительным является Са(ОН)2; для упомянутого растворителя предпочтительным является изопропилацетат.
В частности, при получении надмолекулярного комплекса (соединения), содержащего 1,5 моль ионов кальция, то есть (EXP3174⋅AHU377)⋅1,5Са⋅nH2O, отношение 0,7-1,2:1 является предпочтительным для молярного отношения ЕХР3174 к AHU377, упомянутого на стадии 2).
Для ионной соли кальция и/или гидроксида иона кальция, упомянутого на стадии 3), предпочтительным является гидроксид иона кальция, то есть Са(ОН)2, в частности, при получении надмолекулярного комплекса (соединения), содержащего 1,5 моль положительных ионов кальция, молярное отношение количества ионов кальция в упомянутой ионной соли кальция к AHU377 составляет 1,3-2:1; в качестве подходящего упомянутого растворителя предпочтительными являются ацетон и/или изопропанол; кроме того, подходящее количество воды, которую необходимо добавить в систему, предпочтительно составляет 1-8:1 г/мл, выраженное как мас./об. отношение AHU377 к воде; добавление другого количества воды может приводить к получению надмолекулярных комплексов (соединений), содержащих другое количество кристаллизационной воды; в частности, добавление меньшего количества воды в пределах диапазона подходящего количества способствует получению указанного надмолекулярного комплекса (соединения) с меньшим количеством кристаллизационной воды, а добавление большего количества воды в пределах диапазона подходящего количества способствует получению указанного надмолекулярного комплекса (соединения) с большим количеством кристаллизационной воды; более конкретно, как описано в Примере 2, если мас./об. отношение AHU377 к воде составляет 2,36:1 г/мл, то формульная единица надмолекулярного комплекса (соединения), полученного в результате реакции, представляет собой (EXP3174⋅AHU377)⋅1,5Ca⋅2,5H2O, и, как описано в Примере 3, если мас./об. отношение AHU377 к воде составляет 3,93:1 г/мл, то формульная единица надмолекулярного комплекса (соединения), полученного в результате реакции, представляет собой (EXP3174⋅AHU377)⋅1,5Са⋅2H2O. Температура, упомянутая на стадии 4), может представлять собой температуру реакции, известную специалистам в данной области, при этом предпочтительной является температура от комнатной температуры до 45°С, а комнатная температура означает 20±10°С.
Надмолекулярный комплекс (соединение), упомянутый в первой задаче данного изобретения, можно получить с применением вышеуказанного способа, и формульная единица надмолекулярного комплекса (соединения), полученного предпочтительно с применением конкретных вариантов вышеупомянутого способа, выбрана из любых следующих формульных единиц:
(ЕХР3174⋅AHU377)⋅1,5Са⋅1H2O;
(ЕХР3174⋅AHU377)⋅1,5Са⋅1,5H2O;
(EXP3174⋅AHU377)⋅1,5Ca⋅2H2O;
(ЕХР3174⋅AHU377)⋅1,5Са⋅2,5H2O;
(ЕХР3174⋅AHU377)⋅1,5Са⋅3H2O;
(ЕХР3174⋅AHU377)⋅2Ca⋅1H2O;
(ЕХР3174⋅AHU377)⋅2Са⋅1,5H2O;
(ЕХР3174⋅AHU377)⋅2Са⋅2H2O;
(ЕХР3174⋅AHU377)⋅2Са⋅2,5H2O;
(ЕХР3174⋅AHU377)⋅2Са⋅3H2O.
Третья задача данного изобретения заключается в обеспечении определенного надмолекулярного комплекса (соединения) по данному изобретению при получении лекарственного средства для лечения группы сердечно-сосудистых заболеваний, включая гипертензию, сердечную недостаточность и другие осложнения.
В частности, упомянутые заболевания/осложнения включают, но не ограничиваются ими, гипертензию, острую и хроническую сердечную недостаточность, застойную сердечную недостаточность, аритмию, фибрилляцию предсердий, инфаркт миокарда, артериосклероз, коронарную болезнь сердца, нестабильную или стабильную стенокардию, легочную гипертензию, реноваскулярную гипертензию и т.д., а также другие повреждения почек, головного мозга, сердца и других органов, вызванные длительной гипертензией. Упомянутое лекарство состоит из надмолекулярного комплекса (соединения) по данному изобретению и фармацевтического носителя, в котором массовый процент упомянутого надмолекулярного комплекса (соединения) по данному изобретению составляет 0,1-99,9% по массе лекарства.
В сравнении с одним ингредиентом, аналогами, описанными в существующих технологиях, смесью, получаемой физическим смешиванием, а также подобными продуктами, надмолекулярные комплексы (соединения) по данному изобретению демонстрируют преимущества в отношении растворимости, стабильности и т.д., что впоследствии соответствует более высокому клиническому терапевтическому эффекту и воздействию лекарства, а также более высокой применимости при использовании при производстве и лечении.
Упомянутые носители лекарств включают, но не ограничиваются ими, смесь, полученную смешиванием одного или более из наполнителя, разрыхлителя, связующего агента, смазывающего вещества, поверхностно-активного вещества и т.д. в произвольном соотношении.
Упомянутое лекарство включает, но не ограничивается этим, капсулы, порошки, гранулы, таблетки, препараты для инъекций и т.д.
Специалисты в данной области техники могут подтвердить преимущества надмолекулярных комплексов (соединений) по данному изобретению в отношении растворимости, гигроскопичности, стабильности и других аспектов с помощью испытаний растворимости и других релевантных экспериментов, или с помощью соответствующей экспериментальной модели для подтверждения эффективности надмолекулярных комплексов (соединений), упомянутых в данном изобретении, при использовании в лекарствах для лечения упомянутой группы сердечно-сосудистых заболеваний, таких как гипертензия и сердечная недостаточность, а также других осложнений. В частности, поскольку надмолекулярные комплексы (соединения), полученные в Примерах 2 и 3 данного изобретения, соответственно, свойства растворимости которых существенно улучшены по сравнению, например, с ЕХР3174, они имеют более высокую растворимость в воде, этаноле, смеси этанола и воды и в других традиционных растворителях; кроме того, надмолекулярный комплекс (соединение), полученный по данному изобретению, демонстрирует преимущественную гигроскопичность, по сравнению со смесью, полученной физическим смешиванием в том же соотношении, и аналогами, описанными в известных технологиях.
Для тщательной оценки кратковременной, экстренной, а также долговременной, хронической активности полученных соединений использовали животную модель. В частности, активность против сердечной недостаточности (кратковременную, экстренную) надмолекулярных комплексов (соединений), полученных в Примере 2 и в Примере 3, испытывали в животной модели (на крысах), использовали перевязку левой передней нисходящей коронарной артерии для получения животной модели сердечной недостаточности, терапевтическое лекарство вводили экспериментальным животным через зондовое питание один раз в сутки в течение 7 последовательных дней, и после успешного получения модели крысам осуществляли непрерывное введение в течение трех дней. В эксперименте установлено, что полученные соединения демонстрируют преимущество в отношении снижения кровяного давления, которое существенно превосходит однократное введение, и полученный результат соответствует ожиданиям.
Активность против сердечной недостаточности (долговременную, хроническую) надмолекулярных комплексов (соединений), полученных в Примере 2 и в Примере 3, дополнительно испытывали в животной модели (на крысах), использовали перевязку левой передней нисходящей коронарной артерии для получения животной модели сердечной недостаточности, терапевтическое лекарство вводили животным через неделю послеоперационного восстановления через зондовое питание, один раз в сутки в течение 4 последовательных недель, в указанном эксперименте установлено, что полученные соединения демонстрируют преимущество в отношении лечения сердечной недостаточности, которое существенно превосходит однократное введение, и которое существенно превосходит эффект физической смеси.
Специалистам в данной области техники понятно, что терапевтический эффект кратковременного введения (кратковременное, экстренное введение в животной модели сердечной недостаточности) на экспериментальных животных можно наблюдать как эффект понижения кровяного давления, тогда как долговременное введение (долгосрочное, хроническое введение в животной модели сердечной недостаточности) наблюдают как эффект на лечение сердечной недостаточности.
Результаты всесторонних экспериментов демонстрируют, что по сравнению с индексами нелеченых крыс в группе модели сердечной недостаточности, крысы в группе лечения с указанным соединением демонстрировали существенное улучшение; все индексы животных в группе лечения с указанным соединением также были близки к индексам здоровых животных в контрольной группе; по сравнению с группой лечения с одним лекарством в той же дозе, группа лечения с указанным соединением может демонстрировать существенную и предпочтительную задержку развития сердечной недостаточности у крыс, и демонстрирует существенно более высокую активность против сердечной недостаточности, по сравнению с введением одного лекарства. Результаты экспериментов также свидетельствуют о том, что указанная серия надмолекулярных комплексов (соединений) по данному изобретению также демонстрирует преимущество в отношении физико-химических свойств, по сравнению с аналогичным надмолекулярным комплексом (соединением), описанным ранее; в частности, гигроскопичность указанной серии надмолекулярных комплексов (соединений) по данному изобретению лучше, чем гигроскопичность LCZ696, то есть LCZ696 является более гигроскопичным, чем надмолекулярные комплексы (соединения) по данному изобретению при равных условиях; кроме того, сыпучесть серии надмолекулярных комплексов (соединений) по данному изобретению лучше, чем сыпучесть LCZ696, то есть при одинаковых условиях испытания свойств порошок LCZ696 демонстрирует низкую сыпучесть, а сыпучесть серии надмолекулярных комплексов (соединений) по данному изобретению является относительно более благоприятной для производственного процесса, и электростатический эффект надмолекулярных комплексов (соединений) по данному изобретению существенно улучшен по сравнению с LCZ696.
По сравнению с существующей технологией, данное изобретение имеет следующие преимущества и благоприятные эффекты:
1. В данном изобретении предложена серия надмолекулярных комплексов (соединений) двойного действия, состоящих из метаболита аллисартанаизопроксила (ЕХР3174) и ингибитора неприлизина (AHU377), и они демонстрируют преимущества в отношении терапевтического эффекта, гигроскопичности, сыпучести и других аспектов, по сравнению с продуктами, описанными в известном уровне техники;
2. Предложены способы получения надмолекулярных комплексов (соединений), упомянутых в данном изобретении;
3. Предложено применение надмолекулярных комплексов (соединений) по данному изобретению для получения лекарств для лечения группы сердечно-сосудистых заболеваний, таких как гипертензия, сердечная недостаточность, и других осложнений.
Описание графических материалов
На Фиг. 1 представлен спектр РПД соединения, полученного в Примере 2.
На Фиг. 2 представлен спектр ДСК соединения, полученного в Примере 2.
На Фиг. 3 представлено сравнение спектра РПД ЕХР3174, кальциевой соли AHU377 и соединения, полученного в Примере 2.
На Фиг. 4 представлен ТГ спектр соединения, полученного в Примере 2.
На Фиг. 5 представлен спектр РПД соединения, полученного в Примере 3.
На Фиг. 6 представлен спектр ДСК соединения, полученного в Примере 3.
На Фиг. 7 представлен ТГ спектр соединения, полученного в Примере 3.
На Фиг. 8 представлены кривые абсорбции влаги соединений, полученных в Примере 2 и в Примере 3, в условиях ОВ=75% и ОВ=85%.
Подробное описание Примеров
Данное изобретение дополнительно подробно описано в сочетании с Примерами и Фигурами, представленными ниже, но не ограничивается ими.
В следующих Примерах:
рентгеновскую порошковую дифракцию проводили на рентгеновском дифрактометре Empyrean с экспериментальными условиями: Cu мишень Kα-излучения, напряжение: 40 KB, ток: 40 мА, эмиссионная щель: 1/32°, антирассеивающая щель: 1/16°, антирассеивающая щель: 7,5 мм, диапазон 20: 3°-60°, длина шага: 0,02°, и продолжительность каждого шага: 40 с.
ДСК проводили на дифференциальном сканирующем калориметре DSC204F1 производства компании NETZSCH, Германия, при следующих экспериментальных условиях: атмосфера: N2, 20 мл/мин.; сканер: нагревание от комнатной температуры до 250°С со скоростью 10°С/мин., и записывали кривую нагревания.
Содержание воды определяли на термогравиметрическом анализаторе TG209 производства компании NETZSCH, Германия, при следующих экспериментальных условиях: атмосфера: N2, 20 мл/мин.; сканер: от комнатной температуры до 700°С, скорость нагревания: 10°С/мин.
ЕХР3174, использованный в примерах, самостоятельно получали на мощностях названной компании с чистотой 98,3%.
Кальциевую соль AHU377, использованную в примерах, самостоятельно получали на мощностях названной компании с чистотой 99,4%.
Пример 1
Получение свободной кислоты AHU377:
2,1 г кальциевой соли AHU377 и 40 мл изопропилацетата добавляли в одногорлую колбу объемом 250 мл, затем добавляли 4,5 мл 2 моль/л хлористоводородной кислоты при комнатной температуре и перемешивали для растворения. Жидкость отделяли, собирали органический слой и дважды промывали, используя 20 мл воды; растворитель удаляли под вакуумом при 35°С с получением свободной кислоты AHU377.
Пример 2
Получение соединения:
При комнатной температуре 2,36 г свободной кислоты AHU377, полученной в соответствии со способом, описанным в Примере 1,2 г ЕХР3174 и 40 мл ацетона добавляли в трехгорлую колбу объемом 250 мл и растворяли смесь до прозрачности; при комнатной температуре добавляли 1,3 эквивалента твердого гидроксида кальция относительно AHU377 и 1 мл воды, перемешивали в течение 10 часов при комнатной температуре, добавляли 40 мл ацетона, и затем оставляли взаимодействовать в течение 8 часов, фильтровали через воронку Бюхнера под защитой азота, твердое вещество промывали ацетоном с получением белого твердого вещества, 3,5 г твердого вещества с чистотой 99%, по данным анализа ВЭЖХ получали после сушки под вакуумом при 35°С, и расчетное молярное отношение ЕХР3174 к AHU377 составляло 1:1.
РПД полученного продукта представлена на Фиг.1, а спектр ДСК представлен на Фиг. 2.
Сравнивая с РПД спектрами ЕХР3174 и кальциевой соли AHU377, было обнаружено, что (как показано на Фиг. 3) полученный продукт был существенно иным, и было установлено, что полученный продукт образован в виде соединения, по результатам тщательного анализа спектра РПД и испытания ВЭЖХ.
В частности, РПД спектр демонстрировал пики дифракции с относительно высокой интенсивностью поглощения при 4,35°, 5,15°, 5,90°, 12,80° и 15,85° с допустимым диапазоном погрешности ±0,2°. Кроме того, РПД спектр надмолекулярного комплекса (соединения) также демонстрировал пики дифракции с относительно высокой воспроизводимостью при 9,00°, 10,15° и 15,02° с допустимым диапазоном погрешности ±0,2°; более конкретно, РПД спектр, представленный на Фиг. 1, демонстрировал следующие пики:
Рамановский спектр полученного продукта демонстрировал пики при длине волны (см-1 3061 (ср.), 2935 (ср., широкий), 1613 (слн.), 1521 (ср.), 1482 (сл.), 1286 (ср.), 995 (сл.), 816 (сл., широкий) и 408 (сл.).
Инфракрасный спектр (см-1) полученного продукта демонстрировал пики дифракции при главных полосах 3383 (слн., широкий), 1709 (ср.), 1634 (ср.), 1577 (слн.), 1549 (слн.), 1459 (слн.), 1407 (слн.), 1262 (ср.), 1173 (сл.), 762 (ср.), 698 (сл.) и т.д. Интенсивности полос поглощения обозначены следующим образом: (сл.) = слабый, (ср.) = средний (слн.) = сильный.
Элементный анализ: измеренные значения: С: 57,81%; Н: 5,48%; N: 10,36%; теоретические значения (рассчитанные для (ЕХР3174⋅AHU377)3-⋅1,5Са2+⋅2,5H2O): С: 58,08%; Н: 5,47%; N: 10,31%.
ТГ спектр полученного продукта представлен на Фиг. 4, а содержание воды, определенное по ТГ, составляло 5,0%.
Содержание воды, определенное методом Карла Фишера, составляло 4,9%.
Содержание кальция, определенное атомно-абсорбционным методом, составляло 6,46%.
Формульная единица описанного соединения представляла собой (EXP3174⋅AHU377)3-⋅1,5Ca2+⋅2,5H2O, по результатам всестороннего анализа.
Пример 3
При комнатной температуре 2,36 г свободной кислоты AHU377, полученной в соответствии со способом, описанным в Примере 1,2 г ЕХР3174 и 40 мл ацетона добавляли в трехгорлую колбу объемом 250 мл и растворяли смесь до прозрачности; при комнатной температуре добавляли 1,6 эквивалента твердого гидроксида кальция относительно AHU377 и 0,6 мл воды, перемешивали в течение 6 часов при 35°С, добавляли 40 мл ацетона, затем оставляли взаимодействовать в течение 8 часов, фильтровали через воронку Бюхнера под защитой азота, твердое вещество промывали ацетоном с получением белого твердого вещества, 3,1 г твердого вещества получали после сушки под вакуумом при 50°С в течение 8 часов, и расчетное молярное отношение ЕХР3174 к AHU377 в полученном продукте составляло 1:1. ДСК спектр полученного продукта представлен на Фиг.6.
Элементный анализ: измеренные значения: С: 58,51%; Н: 5,41%; N: 10,25%; теоретические значения (рассчитанные для (EXP3174⋅AHU377)3-⋅1,5Ca2+⋅2H2O): С: 58,68%; Н: 5,46%; N: 10,41%.
ТГ спектр полученного продукта представлен на Фиг. 7, а содержание воды, определенное по ТГ, составляло 3,97%.
Содержание воды, определенное методом Карла Фишера, составляло 3,83%.
Содержание кальция, определенное атомно-абсорбционным методом, составляло 6,50%.
Формульная единица описанного соединения представляла собой (ЕХР3174⋅AHU377)3-⋅1.5Са2+⋅2H2O, по результатам всестороннего анализа.
РПД спектр полученного продукта согласовался со спектром продукта, полученного в Примере 2 (как показано на Фиг. 5), в частности, РПД спектр данного надмолекулярного соединения (комплекса) демонстрировал пики дифракции с относительно высокой интенсивностью поглощения при 4,40°, 5,19° и 5,96° с допустимым диапазоном погрешности ±0,2°. Кроме того, РПД спектр данного надмолекулярного соединения (комплекса) также демонстрировал пики дифракции с относительно высокой воспроизводимостью при 15,82° и, 26,34° с допустимым диапазоном погрешности ±0,2°; более конкретно, РПД спектр, представленный на Фиг. 5, демонстрировал следующие пики:
Пример 4
Получение соединения:
При комнатной температуре 2,40 г свободной кислоты AHU377, полученной в соответствии со способом, описанным в Примере 1, 2 г ЕХР3174, 40 мл ацетона и 10 мл изопропанола добавляли в трехгорлую колбу объемом 250 мл и растворяли смесь до прозрачности; при комнатной температуре добавляли 1,5 эквивалента твердого гидроксида кальция относительно AHU377 и 1 мл воды, перемешивали в течение 6 часов при 40°С, добавляли 40 мл ацетона, затем оставляли взаимодействовать в течение 8 часов, фильтровали через воронку Бюхнера под защитой азота, твердое вещество промывали ацетоном с получением белого твердого вещества, 3,3 г твердого вещества с чистотой по ВЭЖХ 99% получали после сушки под вакуумом при 35°С в течение 16 часов, и расчетное молярное отношение ЕХР3174 к AHU377 в полученном продукте составляло 1:1.
Спектр РПД, спектр ДСК, спектр Рамана и инфракрасный спектр полученного продукта согласовались со спектрами продукта, полученного в Примере 2.
Формульная единица описанного соединения представляла собой (EXP3174⋅AHU377)3-⋅1,5Ca2+⋅2,5H2O, которую определяли сочетанием элементного анализа, анализа содержания воды и содержания кальция.
Пример 5
При комнатной температуре 2,4 г свободной кислоты AHU377, полученной в соответствии со способом, описанным в Примере 1, 2,1 г ЕХР3174 и 50 мл изопропанола добавляли в трехгорлую колбу объемом 250 мл и растворяли смесь до прозрачности; при комнатной температуре добавляли 1,4 эквивалента твердого гидроксида кальция относительно AHU377 и 0,6 мл воды, перемешивали в течение ночи при комнатной температуре, добавляли около 40 мл изопропанола, затем оставляли взаимодействовать в течение 8 часов, фильтровали через воронку Бюхнера под защитой азота, твердое вещество промывали ацетоном с получением белого твердого вещества, 2,8 г твердого вещества получали после сушки под вакуумом при 50°С в течение 10 часов, и расчетное молярное отношение ЕХР3174 к AHU377 в полученном продукте составляло 1:1.
Спектр РПД и спектр ДСК, полученного продукта согласовались со спектрами продукта, полученного в Примере 3.
Формульная единица описанного соединения представляла собой (EXP3174⋅AHU377)3-⋅1,5Са2+⋅2H2O, которую определяли сочетанием элементного анализа, анализа содержания воды и содержания кальция.
Сравнительный пример 1
Пытались получить соединения в виде натриевых солей ЕХР3174-AHU377 в соответствии с добавленным количеством и стадиями получения, описанными в каждом примере патента WO 2007056546, и результаты представлены ниже:
Автор данного изобретения не добился получения надмолекулярного комплекса (соединения) с участием иона натрия после попыток с применением многих способов; кроме того, автор данного изобретения не добился также получения надмолекулярного комплекса (соединения) с участием иона калия после попыток с применением многих способов.
Пример 6
Активность против сердечной недостаточности (кратковременная, экстренная) соединений, полученных в Примерах 2 и 3, дополнительно испытывали в животной модели (крысы). Готовили животную модель с сердечной недостаточностью, используя перевязку левой передней нисходящей коронарной артерии, экспериментальным животным вводили терапевтическое лекарство через зондовое питание, один раз в сутки в течение 7 последовательных дней, и после успешного получения модели осуществляли непрерывное введение в течение трех дней.
Ниже представлены подробности:
1. Лабораторные животные
Самцы SD крыс возрастом 6 недель;
2. Методика эксперимента
Подготовка к испытанию: Всех животных разделяли на 5 групп по схеме рандомизированных блоков, по 6 крыс в каждой группе и акклиматизировали животных в течение 3 дней перед экспериментальным лечением.
Ход эксперимента: Терапевтическое лекарство вводили экспериментальным животным через зондовое питание, один раз в сутки в течение 7 последовательных дней. Операцию проводили на 8 день, животных анестезировали, трахею соединяли с респиратором, подключали электрокардиограф (ЭКГ) для записи в реальном времени, полость грудной клетки раскрывали между 3 и 4 ребрами, перевязывали левую переднюю нисходящую коронарную артерию, повышение ST-сегмента на ЭКГ свидетельствовало об успешной перевязке, полость грудной клетки закрывали и зашивали кожу.
После операции терапевтическое лекарство непрерывно вводили животным через зондовое питание, один раз в сутки в течение 3 последовательных дней. Животных анестезировали на 11 день, измеряли ЭКГ, а затем измеряли артериальное давление и давление в левом желудочке, посредством интубации в сонную артерию.
3. Запись данных
Кровяное давление: среднее артериальное давление (тАР) и среднее давление в левом желудочке (mLVP), ниже представлены данные в каждой группе:
На основании приведенных выше результатов наблюдали, что животные после моделирования с применением перевязки коронарной артерии демонстрировали компенсирующее повышение кровяного давления вследствие нарушения частичной функции миокарда. Специалистам в данной области техники понятно, что в данном экспериментальном протоколе активности против сердечной недостаточности (кратковременной, экстренной) в животной модели (крысы) кратковременное введение существенно влияло на кровяное давление экспериментальных животных, терапевтический эффект на сердечную недостаточность, в первую очередь, проявлялся как влияние на понижение кровяного давления, следовательно, экспериментальные результаты согласовались с ожидаемым результатом;на основании полученных данных, авторы изобретения наблюдали, что эффект улучшения при использовании одного лекарственного средства ЕХР3174 и кальциевой соли AHU377 на mAP и mLVP не был значительным, по сравнению с группой животных без лечения, тогда как влияние на понижение кровяного давления в группах, которых лечили соединениями из Примеров 2 и 3, был существенным и дозозависимым, при сравнении различных доз; в следующем дополнительном испытании было обнаружено, что масса экпериментальных животных в соответствующей группе также существенно увеличивалась, по сравнению с массой животных в группе без лечения.
Пример 7
Активность против сердечной недостаточности (долговременная, хроническая) соединений, полученных в Примерах 2 и 3, дополнительно испытывали в животной модели (крысы). Готовили животную модель с сердечной недостаточностью, используя перевязку левой передней нисходящей коронарной артерии, терапевтическое лекарство вводили животным через зондовое питание через одну неделю послеоперационного восстановления, один раз в сутки в течение 4 последовательных недель, и определяли влияние на первичные показатели сердечной недостаточности экспериментальных животных, такие как частота сердцебиений, площадь миокардиального фиброза, фракция выброса, толщина сердечной стенки, и результаты представлены ниже:
* Крысам не вводили лекарства после торакотомии.
** Крысам не вводили лекарства после торакотомии и перевязки.
*** Физическая смесь, полученная смешиванием ЕХР3174 и кальциевой соли AHU377 в массовом соотношении 1:1.
Вышеупомянутые экспериментальные результаты свидетельствуют о том, что группы с введением низкой дозы (22 мг/кг) и высокой дозы (67 мг/кг) соединения демонстрировали эффективность против хронической сердечной недостаточности.
В частности, при сравнении показателей крыс без лечения в модельной группе сердечной недостаточности, животные в группах с низкой дозой (22 мг/кг) и высокой дозой (67 мг/кг) соединения демонстрировали существенное улучшение, близкое к улучшению у животных в группах с имитацией операции.
При сравнении с показателями в группе с введением одного лекарства в той же дозе, как группы с низкой дозой (22 мг/кг) так и с высокой дозой (67 мг/кг) демонстрировали существенную и предпочтительную задержку процесса сердечной недостаточности у крыс, и демонстрировали существенно более высокую активность против сердечной недостаточности, чем при использовании одного лекарственного средства. Наиболее важно, что при сравнении с показателями физической смеси, было неожиданно обнаружено, что и группа с низкой дозой (22 мг/кг), и группа с высокой дозой (67 мг/кг) соединения демонстрировала более высокий терапевтический эффект, чем в других экспериментальных группах, и, что еще более неожиданно, группа с низкой дозой демонстрировала более высокий терапевтический эффект, чем физическая смесь; по сравнению с экспериментальной группой с LCZ696 (68 мг/кг), было обнаружено, что совокупные характеристики в группе с той же дозой (67 мг/кг) были немного лучше, в то время как даже группа с низкой дозой (22 мг/кг) также демонстрировала активность, подобную экспериментальной группе с LCZ696, и даже демонстрировала небольшое преимущество по некоторым показателям, таким как миокардиальный фиброз, что свидетельствует о том, что надмолекулярные комплексы (соединения) по данному изобретению являются перспективными для достижения задачи снижения клинической дозы.
Пример 8
Гигроскопичность
LCZ696 (чистота: 99,4%) получали способом, описанным в Примере 1 патента WO 2007056546, соответственно, гигроскопичность (плоский образец) испытывали вместе с образцами, полученными в вышеупомянутом Примере 2 и Примере 3, в условиях ОВ 75% и ОВ 85%, и результаты представлены ниже в таблице (кривая поглощения влаги представлена на Фиг.8):
* Образец превращался в раствор (расплывался), и определить содержание воды было невозможно.
** Увеличение содержания воды.
На основании приведенной выше таблицы, наблюдали, что надмолекулярные комплексы (соединения), упомянутые в данном изобретении, демонстрировали преимущество лучшей, чем ожидалось, гигроскопичности (низкая) в условиях ОВ 75% и ОВ 85%, в частности, даже при воздействии на надмолекулярные комплексы (соединения), полученные в Примере 2 и Примере 3, условий хранения при ОВ 75% в течение 5 дней увеличение массы составляло <2,00%, а при воздействии условий хранения при ОВ 85% увеличение массы составляло <2,50%, как можно видеть по кривым поглощения влаги обоих комплексов, увеличение массы образцов было умеренным в ходе данного эксперимента, что свидетельствует о том, что указанные образцы имели улучшенную гигроскопичность (более низкую); кроме того, чистота экспериментальных образцов также демонстрировала отсутствие существенных изменений в испытании количественного содержания, которое в данном эксперименте проводили одновременно.
Однако экспериментальные образцы LCZ696 не смогли сохранить твердое состояние до конца эксперимента, в частности, экспериментальные образцы полностью расплывались по окончании эксперимента (в растворимой форме), что свидетельствует о том, что их гигроскопичность (низкая) была гораздо хуже, чем гигроскопичность надмолекулярных комплексов (соединений) по данному изобретению.
Сыпучесть
LCZ696 получали способом, описанным в Примере 1 патента WO 2007056546, образцы, полученные в вышеупомянутом Примере 2 и Примере 3, измельчали до диапазона распределения частиц по размеру, подобного аналогичному показателю LCZ696, и результаты представлены ниже в таблице:
На основании приведенных выше данных, наблюдали, что надмолекулярные комплексы (соединения), упомянутые в данном изобретении, демонстрировали умеренную сыпучесть и отсутствие заметного электростатического явления, и свойства порошка были лучше, чем для LCZ696; однако для LCZ696 наблюдали остановку изменения угла естественного откоса в данном испытании, вызывая трудности при отмеривании, и после проблематичного отмеривания угол его естественного откоса составлял 57,35°, данный порошок демонстрировал электростатическое явление при меньшей насыпной плотности, и свойства данного порошка были хуже, чем для надмолекулярных комплексов (соединений), полученных в Примере 2 и Примере 3.
Пример 9
Ускоренное испытание стабильности
Надмолекулярные комплексы (соединения), полученные в Примере 2 и Примере 3, хранили в условиях 40°С, 75% ОВ в течение 6 месяцев для испытания стабильности при хранении в ускоренных условиях (с упаковкой), и результаты представлены ниже в таблице:
На основании приведенных выше данных, надмолекулярные комплексы (соединения) по данному изобретению демонстрировали более высокую стабильность, которая соответствует требованиям клинического фармацевтического препарата.
В заключение было показано, что серия надмолекулярных комплексов (соединений) по данному изобретению обладает более высоким действием против острой сердечной недостаточности и хронической сердечной недостаточности при меньшем количестве вводимых доз, что способствует снижению дозы лекарства; они демонстрировали более высокие преимущества с точки зрения свойства гигроскопичности (более низкая), по сравнению с предшествующими продуктами, известными из существующих технологий, также демонстрировали преимущества с точки зрения свойств порошка (сыпучесть, насыпная плотность и т.д.) и демонстрировали физико-химические свойства, более удобные для производства; можно сделать вывод, что указанная серия надмолекулярных комплексов (соединений) по данному изобретению имеет более широкие возможности при клиническом лечении.
Вышеупомянутые примеры представляют собой сравнительно хорошие варианты реализации данного изобретения, но варианты его реализации не ограничены вышеприведенными Примерами, и любое изменение, модификация, замена, комбинация и упрощение, сделанное без отступления от объема и принципа данного изобретения, также входит в объем правовой защиты данного изобретения.
1. Соединение метаболита антагониста рецептора ангиотензина II и ингибитора NEP, выбранное из:
(EXP3174⋅AHU377)⋅1,5Ca⋅2H2O и (EXP3174⋅AHU377)⋅1,5Ca⋅2,5H2O,
где структура EXP3174 такая, как представлена ниже:
, и
структура AHU377 такая, как представлена ниже:
.
2. Соединение метаболита антагониста рецептора ангиотензина II и ингибитора NEP по п. 1, отличающееся тем, что РПД спектр указанных соединений демонстрирует пики дифракции при 4,35°, 5,15°, 5,90°, 12,80° и 15,85° с допустимым диапазоном погрешности ± 0,2° или РПД спектр указанных соединений демонстрирует пики дифракции при 4,40°, 5,19° и 5,96° с допустимым диапазоном погрешности ±0,2°.
3. Соединение метаболита антагониста рецептора ангиотензина II и ингибитора NEP по п. 2, отличающееся тем, что РПД спектр указанных соединений также демонстрирует пики дифракции при 9,00°, 10,15° и 15,02° с допустимым диапазоном погрешности ± 0,2° или РПД спектр указанных соединений также демонстрирует пики дифракции при 15,82° и 26,34° с допустимым диапазоном погрешности ± 0,2°.
4. Соединение метаболита антагониста рецептора ангиотензина II и ингибитора NEP по п. 2 или 3, отличающееся тем, что РПД спектр указанных соединений демонстрирует следующие пики дифракции:
| Номер | 2θ (°, ±0,2) | Относительная интенсивность (%) |
| 1 | 4,35 | 70,97 |
| 2 | 5,15 | 100,00 |
| 3 | 5,90 | 32,67 |
| 4 | 9,00 | 2,80 |
| 5 | 10,15 | 3,40 |
| 6 | 12,80 | 5,21 |
| 7 | 15,02 | 5,59 |
| 8 | 15,85 | 8,27 |
| 9 | 16,81 | 2,57 |
| 10 | 20,27 | 2,39 |
| 11 | 22,09 | 2,48 |
| 12 | 23,79 | 1,34 |
| 13 | 26,22 | 1,87 |
или РПД спектр указанных соединений демонстрирует следующие пики дифракции:
| Номер | 2θ (°, ±0,2) | Относительная интенсивность (%) |
| 1 | 4,40 | 77,30 |
| 2 | 5,19 | 100,00 |
| 3 | 5,96 | 19,78 |
| 4 | 15,82 | 5,11 |
| 5 | 26,34 | 3,44 |
.
5. Соединение метаболита антагониста рецептора ангиотензина II и ингибитора NEP по п. 2 или 3, отличающееся тем, что РПД спектр указанных соединений представлен на Фиг. 1 или Фиг. 5.
6. Соединение метаболита антагониста рецептора ангиотензина II и ингибитора NEP по п. 1, отличающееся тем, что спектр ДСК указанных соединений демонстрирует два эндотермических пика дегидратации при 94,4±10°C и 164,1±10°C и эндотермический пик на спектре при 244,6±5 °C; или спектр ДСК указанных соединений демонстрирует два эндотермических пика дегидратации при 95,4±10°C и 166,4±10°C и эндотермический пик на спектре при 242,4±5°C.
7. Соединение метаболита антагониста рецептора ангиотензина II и ингибитора NEP по п. 6, отличающееся тем, что спектр ДСК указанных соединений представлен на Фиг. 2 или Фиг. 6.
8. Способ получения соединения метаболита антагониста рецептора ангиотензина II и ингибитора NEP по любому из пп. 1-7, включающий следующие стадии получения:
1) высвобождают соль AHU377 с получением раствора, содержащего свободную кислоту AHU377, и удаляют растворитель;
2) свободную кислоту AHU377, полученную на стадии 1), и EXP3174 растворяют в органическом растворителе;
3) фармацевтически приемлемую ионную соль кальция и/или гидроксид иона кальция растворяют или суспендируют в подходящем растворителе;
4) смесь, полученную на стадии 3), медленно добавляют к раствору, полученному на стадии 2), или ионную соль кальция и/или гидроксид иона кальция (непосредственно в твердой форме), соответственно, по порядку добавляют с растворителем в реакционную систему;
5) полученную смесь перемешивают до полной кристаллизации, фильтруют с получением твердого осадка и сушат с получением указанного соединения;
при этом соль AHU377, упомянутая на стадии 1), выбрана из кальциевой соли, магниевой соли, цинковой соли, соли железа (III), натриевой соли, аминной соли, соли диэтиламина, триэтиламина и растворитель, упомянутый на стадии 1), представляет собой изопропилацетат; молярное отношение EXP3174 к AHU377, упомянутое на стадии 2), составляет 0,7-1,2 : 1; на стадии 3) молярное отношение количества ионов кальция в ионной соли кальция к AHU377 составляет 1,3-2 : 1; упомянутый подходящий растворитель(-и) представляет(-ют) собой ацетон и/или изопропанол; кроме того, к растворителю необходимо добавить подходящее количество воды, если мас./об. отношение AHU377 к воде составляет 2,36:1 г/мл, соединение, полученное в результате реакции, представляет собой (EXP3174⋅AHU377)⋅1,5Ca⋅2,5H2O; если мас./об. отношение AHU377 к воде составляет 3,93:1 г/мл, соединение, полученное в результате реакции, представляет собой (EXP3174⋅AHU377)⋅1,5Ca⋅2H2O; температура реакции, упомянутой на стадии 4), составляет от комнатной температуры до 45°С.
9. Применение соединения метаболита антагониста рецептора ангиотензина II и ингибитора NEP по любому из пп. 1-7 при получении лекарства для лечения сердечной недостаточности или гипертензии.
10. Применение соединения метаболита антагониста рецептора ангиотензина II и ингибитора NEP по п. 9 при получении лекарства для лечения сердечной недостаточности или гипертензии, причем массовый процент соединения в лекарстве составляет 0,1-99,9%.
