Композиции, содержащие экстракт эхинацеи и производные соединения линолевой кислоты
Изобретение относится к фармацевтической и косметической композициям, содержащим экстракт эхинацеи и производные соединения линолевой кислоты, в частности к эмульсиям, содержащим экстракт эхинацеи и производные соединения линолевой кислоты в качестве комбинации активных веществ, а также к применению таких композиций в качестве лекарственного средства, медицинского препарата и/или косметического средства. Описана композиция для лечения зуда и/или состояний воспаления кожи, и/или сухой кожи, и/или раздраженной кожи, содержащая: a) 0,025-2 масс.% экстракта эхинацеи в расчете на общую массу композиции и b) 0,01-10 масс.% производных соединений линолевой кислоты в расчете на общую массу композиции, отличающаяся тем, что экстракт эхинацеи получают из Echinacea purpurea radix и производные соединения линолевой кислоты находятся в виде, выбранном из группы, состоящей из сафлорового масла, рапсового масла и масла из проростков семян пшеницы, где экстракт эхинацеи представляет собой экстракт, полученный с применением CO2. Технический результат - создание композиции, обладающей противозудным действием, улучшение стабильности композиции для обеспечения коммерческого применения композиции, предотвращение нежелательных эффектов экстракта эхинацеи без оказания отрицательного влияния на косметическое применение, предотвращение отрицательного влияния экстракта эхинацеи на пигментообразование в коже. 4 н. и 8 з.п. ф-лы, 24 ил., 3 табл., 8 пр.
Настоящее изобретение относится к фармацевтической и косметической композициям, содержащим экстракт эхинацеи и производные соединения линолевой кислоты, в частности к эмульсиям, содержащим экстракт эхинацеи и производные соединения линолевой кислоты в качестве комбинации активных веществ, а также к применению таких композиций в качестве лекарственного средства, медицинского препарата и/или косметического средства.
Предшествующий уровень техники
Препараты пурпурной рудбекии (Echinacea purpurea и Echinacea angustifolia) широко применяются при лечении с простуды и инфекций верхних органов дыхания. При этом в общем случае принято, что действие эхинацеи становится возможным благодаря взаимодействию с иммунной системой. Удалось показать, что некоторый компонент в экстракте эхинацеи, противовоспалительное действие которого уже описано другими рабочими группами, влияет на эндогенную каннабиноидную систему. В случае этого компонента речь идет о веществах из класса алкиламидов (Raduner S et al., J Biol Chem 2006, 281, 14192-14206). Эти алкиламиды проявляют иммуномодулирующую активность (Gertsch J, Planta Med 2008, 74, 638-650).
Капсаицин представляет собой агонист ваниллоидного рецептора-1 транзитивных потенциал-зависимых катионных каналов (TRPV1), который после топического применения оказывает противоболевое и противозудное действие. Формы для топического введения капсаицина применяют, в частности, для лечения индуцированного гемодиализом (Breneman DL, et al. J Am Acad Dermatol 1992, 26, 91-94), аквагенного (Lotti T, et al. J Am Acad Dermatol 1994, 30, 232-235) и брахиорадиального зуда (Goodless DR, Eaglestein WH, J Am Acad Dermatol 1993, 29, 783-784). Другими объектами применения являются парестетическая ноталгия (Leibsohn E, Cutis 1992, 49, 335-336) и узелковый пруриго (Ständer S, Luger T, Metze D, J Am Acad Dermatol 2001, 44, 471-478).
Компоненты из Echinacea purpurea описаны в качестве ингибиторов тирозиназы (Jiang L, et al., J Med Plants Res 2012, 6, 5317-5321). Активность тирозиназы связана с продуцированием меланина меланоцитами (Kim, YJ, Uyama H, Cell Mol Life Sci 2005 62, 1707-23). Таким образом, ингибирование тирозиназы может вести к уменьшенному биосинтезу меланина, что в свою очередь может вести к пониженной пигментации, например, кожи. Это обстоятельство может вести к косметическим дефектам при использовании форм применения, которые содержат ингибитор тирозиназы, такой, как, например, экстракт эхинацеи, так как могут возникать различия в пигментации обработанной и необработанной кожи.
Улучшение состояния кожи после обработки композицией с экстрактом эхинацеи описано в "Yotsawimonwat S, et al., Int J Cosm Sci 2010, 32, 340-346". Для этого применяли спиртовые экстракты из надземных частей растений Echinacea purpurea. При этом удалось показать, что композиция как в виде крема, так и в виде геля, содержащая спиртовой экстракт эхинацеи, улучшает гидратацию кожи у участников испытаний без повреждения барьерной функции. Однако стойкость композиции при хранении была сильно ограниченной. При 4°C она составляла 2 или 4 месяца в случае крема и геля соответственно. Прибавлением антиоксиданта удалось повысить сохраняемость до 7 месяцев.
Наряду с известными иммуностимулирующими и противовоспалительными эффектами экстрактов из Echinacea purpurea имеются спорные данные клинических исследований относительно побочных действий препаратов, содержащих эхинацею (Manayi A, Varizian M, Saeidnia S, Pharmacogn Rev 2015, 9, 63-72). Так, в частности, были зафиксированы зуд, эритемы и крапивница в качестве тяжелых побочных действий при лечении эхинацеей.
Постановка задачи
Существовала задача, состоявшая в разработке комбинации активных веществ, которая по сравнению с экстрактом эхинацеи обладает только улучшенными свойствами. В частности, должна быть разработана композиция, обладающая противозудным действием. Кроме того, задача состояла в том, чтобы улучшить стабильность композиции для обеспечения коммерческого применения композиции. Другая задача настоящего изобретения состояла в том, чтобы предотвратить нежелательные эффекты экстракта эхинацеи без оказания отрицательного влияния на косметическое применение. В частности, должно предотвращаться образование эритем после обработки экстрактом эхинацеи. Особенный интерес состоял также в том, чтобы предотвращать отрицательное влияние экстракта эхинацеи на пигментообразование в коже.
Эти задачи решаются благодаря предложенной заявке согласно пунктам формулы изобретения. В частности, неожиданным образом оказалось, что композиция по настоящему изобретению оказывает отличное противозудное действие, например, в случае пациентов с атопическим дерматитом и одновременно обладает большим сроком годности, составляющим по меньшей мере два года при комнатной температуре. Благодаря этому возможна очень хорошая коммерческая реализация. Кроме того, согласно настоящему изобретению было показано, что восстановление природного кожного барьера у участников испытаний и пациентов с уже нарушенным кожным барьером происходит очень эффективно. Неожиданно оказалось также, что обработка композицией по настоящему изобретению ведет к значительному повышению содержания липидов в коже. В этой связи, заслуживает упоминания, в частности, повышение содержания длинноцепочечных церамидов EOS, которые являются особенно важными для стабильности двойных липидных слоев рогового слоя эпидермиса, так как в данном случае ω-гидроксижирная кислота этерифицируется в церамидной основе линолевой кислотой. Благодаря переэтерификации сложных эфиров именно и образуется C36-боковая цепь, которая внедряется в следующий двойной липидный слой. Поэтому говорят также о "функции скрепляющего гвоздя" этих церамидов.
Противозудное действие подтверждается, в частности, неожиданно заметной активацией ваниллоидного рецептора-1 транзитивных потенциал-зависимых катионных каналов (TRPV1) при применении комбинации активных веществ по настоящему изобретению. Кроме того, неожиданно для специалистов в данной области техники комбинация активных веществ эхинацеи и линолевой кислоты/производных соединений линолевой кислоты предотвращает нежелательное действие эхинацеи на пигментообразование кожи. Нарушение пигментообразования (уменьшенная пигментация), наблюдаемое при применении эхинацеи на коже, не происходит в случае комбинации по настоящему изобретению активных веществ эхинацеи с линолевой кислотой и/или производными соединениями линолевой кислоты. Это подтверждается неожиданно неизменной активностью тирозиназы при применении комбинации активных веществ по настоящему изобретению.
Таким образом, настоящее изобретение относится к композиции, содержащей a) экстракт эхинацеи и b) линолевую кислоту и/или производные соединения линолевой кислоты. Предпочтительный экстракт эхинацеи представляет собой липофильный экстракт. Более предпочтительный экстракт эхинацеи представляет собой экстракт, полученный с применением сверхкритического CO2. Кроме того, по настоящему изобретению предпочтительным является содержание алкиламидов в экстракте в интервале от 1 до 50%, предпочтительно в интервале от 10 до 40% и особенно предпочтительно в интервале от 15 до 30% (в расчете на массу). В предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения экстракт эхинацеи получают из корней (Radix) эхинацеи и предпочтительно из Echinacea purpurea radix.
По настоящему изобретению производные соединения линолевой кислоты представляют собой эфиры линолевой кислоты и предпочтительно триэфиры глицерина. В предпочтительном варианте осуществления производные соединения линолевой кислоты находятся в виде растительного масла и/или экстракта из растительного масла и предпочтительно в виде масла бодяка.
По настоящему изобретению композиция содержит компоненты a) и b) в массовом соотношении от 1:1000 до 1:1 и предпочтительно от 1:50 до 1:10. Кроме того, композиция по настоящему изобретению предпочтительно содержит 0,001-5 масс.% экстракта эхинацеи, предпочтительно 0,025-2 масс.% экстракта эхинацеи и более предпочтительно 0,05-1 масс.% экстракта эхинацеи в расчете на общую массу композиции и 0,001-10 масс.% линолевой кислоты и/или такое количество производных соединений линолевой кислоты, которое соответствует 0,001-10 масс.% линолевой кислоты и предпочтительно 0,01-5 масс.% линолевой кислоты, и/или такое количество производных соединений линолевой кислоты, которое соответствует 0,01-5 масс.% линолевой кислоты, соответственно в расчете на общую массу композиции.
Композиция по настоящему изобретению предпочтительно содержит также одно или несколько косметических и/или фармацевтических вспомогательных веществ. Особенно предпочтительная композиция представляет собой эмульсию.
По настоящему изобретению композицию применяют в качестве лекарственного средства, в качестве медицинского препарата или в качестве косметического средства. При этом она предпочтительно служит для лечения зуда, сухой кожи и/или раздраженной кожи (например, кожи, покрасневшей после солнечного ожога, ссадин или иным образом раздраженной кожи и т.п.), а также состояний воспаления кожи, таких как, в частности, атопический дерматит (нейродермит, атопическая экзема). В предпочтительном варианте осуществления кожа представляет собой кожу головы.
Далее отдельные компоненты композиции по настоящему изобретению поясняются более подробно.
Применяемый по настоящему изобретению экстракт эхинацеи в качестве компонента a) композиции может представлять собой стандартный экстракт предшествующего уровня техники (например, соответственно описанному в WO 2001/066076 A). Приемлемые источники представляют собой Echinacea purpurea, Echinacea angustifolia и Echinacea pallida, причем экстракт может быть получен как из надземной части растения, так и из корней (Radix). По настоящему изобретению предпочтительной является Echinacea purpurea, при этом экстракт из корней Echinacea purpurea является особенно предпочтительным. Экстракция по настоящему изобретению может осуществляться органическими растворителями, такими как спирты (например, метанол, этанол), водными растворами спиртов (например, метанола, этанола), алканами (например, пентаном, гексаном, гептаном), хлоруглеводородами (например, хлороформом, метиленхлоридом), кетонами (например, метилэтилкетоном, ацетоном), или как экстракция со сверхкритическим диоксидом углерода (CO2). При этом липофильные экстракты являются предпочтительными. Экстракция со сверхкритическим диоксидом углерода является по настоящему изобретению особенно предпочтительной, так как может применяться природная самородная углекислота и экстракт можно получать щадящим образом особенно чистым. Кроме того, CO2 как растворитель может быть легко и без остатка удален и рециклирован в закрытый контур системы.
Содержание алкиламидов в экстракте предпочтительно находится в интервале от 1 до 50%, предпочтительно в интервале от 10 до 40% и особенно предпочтительно в интервале от 15 до 30% (в расчете на массу). При этом определение содержания алкиламидов может осуществляться известными способами анализа. В качестве примера можно назвать масс-спектрометрическое определение содержания алкиламидов. Кроме того, определение содержания алкиламидов может осуществляться хроматографически, например способом ВЭЖХ, со сравнительными веществами.
В качестве второго активного компонента b) композиция по настоящему изобретению содержит линолевую кислоту и/или одно или несколько производных соединений линолевой кислоты. В случае линолевой кислоты речь идет о (cis,cis)-октадека-9,12-диеновой кислоте, то есть о ненасыщенной жирной кислоте с 18 атомами углерода и двумя двойными связями (18:2). Таким образом, она относится к омега-6-жирным кислотам. По настоящему изобретению можно применять как свободную линолевую кислоту, так и производное соединение линолевой кислоты. Под производными соединениями имеются в виду сложные эфиры (в частности, моно-, ди- и триглицериды линолевой кислоты и гликольпроизводные моно- и диэфиры линолевой кислоты) в виде индивидуальных соединений или также в виде природных масел и жиров и соли линолевой кислоты. При этом предпочтительные алкиловые эфиры линолевой кислоты представляют собой метиловый, этиловый, пропиловый и изопропиловый сложные эфиры. Линолевая кислота естественным образом входит во многие триглицериды в связанном в сложный эфир виде (триэфиры глицерина). Таким образом, по настоящему изобретению приемлемыми в качестве источников линолевой кислоты являются разные природные масла и жиры, которые содержат эфиры линолевой кислоты в значительных количествах. В качестве предпочтительных в данном случае можно назвать такие растительные масла, как масло солероса, масло ослинника, масло из виноградных косточек, масло бодяка (сафлоровое масло), масло из семян мака, масло из семян опунции, конопляное масло, соевое масло, масло из семян хлопчатника, масло из проростков семян пшеницы, масло из проростков зерен кукурузы, подсолнечное масло, масло из грецкого ореха, кунжутное масло, масло аргании, фисташковое масло, арахисовое масло, рапсовое масло, рисовое масло и оливковое масло. Линолевая кислота и производные соединения линолевой кислоты перед применением могут быть экстрагированы из этих масел известным способом. Альтернативно природные масла и жиры могут применяться непосредственно в исходном виде в качестве линолевой кислоты как компонент b) в композиции по настоящему изобретению. При этом масло бодяка является особенно предпочтительным.
Количественные соотношения компонентов a) и b) в композиции предпочтительно имеют следующие значения: 0,001-5 масс.% экстракта эхинацеи, предпочтительно 0,025-2 масс.% экстракта эхинацеи и особенно предпочтительно 0,05-1 масс.% экстракта эхинацеи в расчете на общую массу композиции и 0,001-10 масс.% линолевой кислоты и/или такое количество производных соединений линолевой кислоты, которое соответствует 0,001-10 масс.% линолевой кислоты и предпочтительно 0,01-5 масс.% линолевой кислоты и/или такое количество производных соединений линолевой кислоты, которое соответствует 0,01-5 масс.% линолевой кислоты, соответственно в расчете на общую массу композиции. Композиции по настоящему изобретению наряду с экстрактом эхинацеи предпочтительно не содержат другой экстракт, в частности другой растительный экстракт. При этом источник линолевой кислоты (например, природные масла и жиры, такие как масло бодяка) согласно настоящему изобретению не следует понимать как экстракт.
Композиции по настоящему изобретению предпочтительно содержат также одно или несколько косметических или фармацевтических вспомогательных веществ. Композиции по настоящему изобретению предпочтительно находятся в виде эмульсий и при этом особенно предпочтительно в виде композиций для топического применения. При этом предпочтительно приемлемым является крем или молочко. Приемлемые для применения по настоящему изобретению вспомогательные вещества представляют собой обычные для этой технической области вспомогательные вещества, в частности материалы, традиционно применяемые в случае композиций для топического применения. Приемлемые вспомогательные вещества описаны, например, в WO 2001/066076 A и DE 10 2005 029 387 A1. Две особенно предпочтительные композиции в виде крема и молочка представлены в приведенном далее разделе примеров настоящей заявки.
Краткое описание чертежей
На фиг. 1 представлена диаграмма, на которой показано действие экстракта эхинацеи, масла бодяка и смеси экстракта эхинацеи и масла бодяка по сравнению с контрольными соединениями в виде капсаицина и капсазепина на активацию TRPV1.
На фиг. 2 представлена диаграмма, на которой показана кривая дозозависимого действия смеси экстракта эхинацеи и масла бодяка по сравнению с контрольными соединениями в виде капсаицина и капсазепина на активацию TRPV1.
На фиг. 3 представлена диаграмма, на которой показано действие экстракта эхинацеи на активность тирозиназы в клетках меланомы B16. В качестве положительной пробы для ингибирования активности тирозиназы применяли койевую кислоту.
На фиг. 4 представлена диаграмма, на которой показано действие масла бодяка на активность тирозиназы в клетках меланомы B16.
На фиг. 5 представлена диаграмма, на которой показано действие смеси экстракта эхинацеи и масла бодяка на активность тирозиназы в клетках меланомы B16.
На фиг. 6 представлена диаграмма, на которой показано действие крема по настоящему изобретению с экстрактом эхинацеи и производными соединениями линолевой кислоты по сравнению с кремом-плацебо на трансэпидермальную потерю воды (A: крем-плацебо; B: крем с эхинацеей и производными соединениями линолевой кислоты).
На фиг. 7 представлена диаграмма, на которой показано уменьшение ощущения сухости кожи после обработки кремом по настоящему изобретению с экстрактом эхинацеи и производными соединениями линолевой кислоты.
На фиг. 8 представлена диаграмма, на которой показано уменьшение зуда после обработки кремом по настоящему изобретению с экстрактом эхинацеи и производными соединениями линолевой кислоты.
На фиг. 9 представлена диаграмма, на которой показаны предшествующее и последующее сравнения липидных ламелл (LBV-TEM) после обработки кремом по настоящему изобретению с экстрактом эхинацеи и производными соединениями линолевой кислоты (диаграмма с количественной оценкой представлена вверху: A: крем с эхинацеей и производными соединениями линолевой кислоты в 1-й день; B: крем с эхинацеей и производными соединениями линолевой кислоты в 15-й день; репрезентативный фотоснимок, полученный с применением трансмиссионного электронного микроскопа (TEM) в 1-й день, представлен в середине; фотоснимок под TEM в 15-й день представлен внизу).
На фиг. 10 представлена диаграмма, на которой показаны предшествующее и последующее сравнения содержания холестерина после обработки кремом по настоящему изобретению с экстрактом эхинацеи и производными соединениями линолевой кислоты (A: крем с эхинацеей и производными соединениями линолевой кислоты в 1-й день; B: крем с эхинацеей и производными соединениями линолевой кислоты в 15-й день).
На фиг. 11 представлена диаграмма, на которой показаны предшествующее и последующее сравнения содержания свободных жирных кислот (FFA) после обработки кремом по настоящему изобретению с экстрактом эхинацеи и производными соединениями линолевой кислоты (A: крем с эхинацеей и производными соединениями линолевой кислоты в 1-й день; B: крем с эхинацеей и производными соединениями линолевой кислоты в 15-й день).
На фиг. 12 представлена диаграмма, на которой показаны предшествующее и последующее сравнения содержания церамидов EOS после обработки кремом по настоящему изобретению с экстрактом эхинацеи и производными соединениями линолевой кислоты (A: крем с эхинацеей и производными соединениями линолевой кислоты в 1-й день; B: крем с эхинацеей и производными соединениями линолевой кислоты в 15-й день).
На фиг. 13 представлена диаграмма, на которой показаны предшествующее и последующее сравнения содержания церамидов NP после обработки кремом по настоящему изобретению с экстрактом эхинацеи и производными соединениями линолевой кислоты (A: крем с эхинацеей и производными соединениями линолевой кислоты в 1-й день; B: крем с эхинацеей и производными соединениями линолевой кислоты в 15-й день).
На фиг. 14 представлена диаграмма, на которой показаны предшествующее и последующее сравнения содержания церамидов NH после обработки кремом по настоящему изобретению с экстрактом эхинацеи и производными соединениями линолевой кислоты (A: крем с эхинацеей и производными соединениями линолевой кислоты в 1-й день; B: крем с эхинацеей и производными соединениями линолевой кислоты в 15-й день).
На фиг. 15 представлена диаграмма, на которой показаны предшествующее и последующее сравнения содержания липидов после обработки кремом по настоящему изобретению с экстрактом эхинацеи и производными соединениями линолевой кислоты (A: крем с эхинацеей и производными соединениями линолевой кислоты в 1-й день; B: крем с эхинацеей и производными соединениями линолевой кислоты в 15-й день).
На фиг. 16 представлена диаграмма, на которой показаны предшествующее и последующее сравнения липидных ламелл (LBV-TEM) после обработки молочком по настоящему изобретению с экстрактом эхинацеи и производными соединениями линолевой кислоты (диаграмма с количественной оценкой представлена вверху: A: молочко с эхинацеей и производными соединениями линолевой кислоты в 1-й день; B: молочко с эхинацеей и производными соединениями линолевой кислоты в 15-й день; репрезентативный фотоснимок, полученный с применением трансмиссионного электронного микроскопа (TEM) в 1-й день представлен в середине; фотоснимок под TEM в 15-й день представлен внизу).
На фиг. 17 представлена диаграмма, на которой показаны предшествующее и последующее сравнения содержания холестерина после обработки молочком по настоящему изобретению с экстрактом эхинацеи и производными соединениями линолевой кислоты (A: молочко с эхинацеей и производными соединениями линолевой кислоты в 1-й день; B: молочко с эхинацеей и производными соединениями линолевой кислоты в 15-й день).
На фиг. 18 представлена диаграмма, на которой показаны предшествующее и последующее сравнения содержания свободных жирных кислот (FFA) после обработки молочком по настоящему изобретению с экстрактом эхинацеи и производными соединениями линолевой кислоты (A: молочко с эхинацеей и производными соединениями линолевой кислоты в 1-й день; B: молочко с эхинацеей и производными соединениями линолевой кислоты в 15-й день).
На фиг. 19 представлена диаграмма, на которой показаны предшествующее и последующее сравнения содержания церамидов EOS после обработки молочком по настоящему изобретению с экстрактом эхинацеи и производными соединениями линолевой кислоты (A: молочко с эхинацеей и производными соединениями линолевой кислоты в 1-й день; B: молочко с эхинацеей и производными соединениями линолевой кислоты в 15-й день).
На фиг. 20 представлена диаграмма, на которой показаны предшествующее и последующее сравнения содержания церамидов NP после обработки молочком по настоящему изобретению с экстрактом эхинацеи и производными соединениями линолевой кислоты (A: молочко с эхинацеей и производными соединениями линолевой кислоты в 1-й день; B: молочко с эхинацеей и производными соединениями линолевой кислоты в 15-й день).
На фиг. 21 представлена диаграмма, на которой показаны предшествующее и последующее сравнения содержания церамидов NH после обработки молочком по настоящему изобретению с экстрактом эхинацеи и производными соединениями линолевой кислоты (A: молочко с эхинацеей и производными соединениями линолевой кислоты в 1-й день; B: молочко с эхинацеей и производными соединениями линолевой кислоты в 15-й день).
На фиг. 22 представлена диаграмма, на которой показаны предшествующее и последующее сравнения содержания липидов после обработки молочком по настоящему изобретению с экстрактом эхинацеи и производными соединениями линолевой кислоты (A: молочко с эхинацеей и производными соединениями линолевой кислоты в 1-й день; B: молочко с эхинацеей и производными соединениями линолевой кислоты в 15-й день).
На фиг. 23 представлена диаграмма, на которой показаны предшествующее и последующее сравнения влажности кожи после обработки кремом по настоящему изобретению с экстрактом эхинацеи и производными соединениями линолевой кислоты (A: крем с эхинацеей и производными соединениями линолевой кислоты в 1-й день; B: крем с эхинацеей и производными соединениями линолевой кислоты в 15-й день).
На фиг. 24 представлена диаграмма, на которой показаны предшествующее и последующее сравнения влажности кожи после обработки молочком по настоящему изобретению с экстрактом эхинацеи и производными соединениями линолевой кислоты (A: молочко с эхинацеей и производными соединениями линолевой кислоты в 1-й день; B: молочко с эхинацеей и производными соединениями линолевой кислоты в 15-й день).
Примеры
Пример 1
Определение агонистической активности по отношению к TRPV1
A) Методика эксперимента
2·104 клеток 293T-VR1 (или родительских клеток 293T в качестве контроля) культивировали в 96-луночных микропланшетах (Costar, Cambridge, MA) в 200 мкл модифицированной по способу Дульбекко среды Игла (DMEM), которая дополнительно содержала 10% фетальный телячьей сыворотки и 1% антибиотиков (пенициллин/стрептомицин). Клетки с испытуемыми веществами или контрольными соединениями (с капсаицином как агонистом TRPV1 (1 мкM) и с капсазепином как антагонистом TRPV1 (10 мкM) или с капсаицином (1 мкM) и капсазепином (10 мкM)) инкубировали в течение 6 ч. Затем определяли выживаемость клеток.
Цитотоксическое действие испытуемых веществ определяли способом с MTT (с 3-[4,5-диметилтиазол-2-ил]-2,5-дифенилтетразолийбромидом). С этой целью в каждую лунку прибавляли по 50 мкл раствора MTT в DMEM (5 мг/мл). Затем осуществляли инкубацию в течение 4 ч при 37°C в темноте. Реакцию останавливали, надосадочную жидкость удаляли и прибавляли по 100 мкл ДМСО на лунку. Далее осуществляли инкубацию в течение 10 мин при осторожном встряхивании. Затем определяли абсорбцию при 550 нм фотометром "TECAN GENios Pro Plate Reader" (Tecan Group Ltd., Schweiz). Результаты представляли в виде процентной доли от контрольной пробы (раствор наполнителя, 100%). Определение осуществляли трижды.
B) Действие испытуемых веществ на активацию TRPV1
На фиг. 1 показано действие на активацию TRPV1 экстракта эхинацеи, масла бодяка и смеси экстракта эхинацеи и масла бодяка по сравнению с контрольными соединениями в виде капсаицина и капсазепина.
Обработкой положительной пробы капсаицином, действующим как агонист TRPV1, выживаемость клеток была уменьшена на 54,9%. Капсазепин, действующий как антагонист TRPV1, при применении индивидуально не оказал действия (106,1%-я выживаемость клеток). Действие капсаицина удалось блокировать капсазепином (101,3%-я выживаемость клеток), что доказывает содействие TRPV1 цитотоксическому действию. В случае клеток, обработанных экстрактом эхинацеи (5 мкг/мл или 50 мкг/мл), цитотоксическое действие обнаружено не было (102,3%-я и 106,0%-я выживаемость клеток соответственно). В случае клеток, обработанных маслом бодяка (5 мкг/мл и 50 мкг/мл соответственно), было обнаружено только слабое, незначительное цитотоксические действие (90,5 или 96,5%). Удивительным образом оказалось, что в случае смеси экстракта эхинацеи и масла бодяка (5 мкг/мл или 50 мкг/мл соответственно) наблюдается заметное, значительное цитотоксическое действие. При 85,0%-ной выживаемости клеток эффект действия даже в случае более низкой концентрации был больше, чем в случае масла бодяка при применении индивидуально. В случае более высокой концентрации выживаемость клеток была даже определена равной только 79,3%.
Неожиданным образом эти результаты показали, что имеется синергический эффект смеси из экстракта эхинацеи и масла бодяка в отношении активации TRPV1, который проявляется уже при существенно низких концентрациях и четко превосходит действие индивидуально применяемых веществ.
На фиг. 2 показана кривая дозозависимого действия смеси экстракта эхинацеи и масла бодяка по сравнению с контрольными соединениями в виде капсаицина и капсазепина на активацию с TRPV1.
В этом эксперименте агонистическая активность положительной пробы с капсаицином оказалась несколько меньшей (70,6%-я выживаемость клеток). Как и в предыдущем эксперименте, действие капсаицина также удалось ингибировать капсазепином, действующим как антагонист TRPV1 (104,4%-я выживаемость клеток). Смесь экстракта эхинацеи и масла бодяка показала дозозависимое агонистическое действие. В случае наиболее высокой концентрации (50 мкг/мл) был достигнут эффект действия (51,2%-я выживаемость клеток), превосходящий действие капсаицина.
Пример 2
Ингибирование активности тирозиназы в клетках меланомы B16
A) Методика эксперимента
Для определения активности тирозиназы клетки меланомы мыши B16 (4A5, ATCC) культивировали в модифицированной по способу Дульбекко среде Игла (DMEM), которая дополнительно содержала 10% фетальный телячьей сыворотки и 1% антибиотиков (пенициллин/стрептомицин). Клетки в течение трех дней обрабатывали с разными концентрациями испытуемых веществ. Затем клетки при 4°C в течение 30 мин подвергали лизису лизирующим буферным раствором (20 мМ фосфата натрия, pH=6,8, 1% тритона X-100, 1 мМ PMSF, 1 мМ ЭДТА), содержавшим смесь ингибиторов протеазы. Лизаты центрифугировали при 15 000 g в течение 10 мин. Надосадочную жидкость использовали в качестве источника тирозиназы. Реакционная смесь для определения активности тирозиназы содержала 20 мМ фосфатный буферный раствор с pH=6,8 и 1,25 мкM L-допа (Sigma-Aldrich). После инкубации в течение 30 мин при 37°C было констатировано образование допахрома. Затем определяли абсорбцию при длине волны 475 нм микропланшетным фотометром (TriStar LB 941, Berthold Technologies, GmbH & Co. KG). В качестве положительной пробы для ингибирования активности тирозиназы применяли койевую кислоту.
B) Ингибирование активности тирозиназы испытуемыми веществами
На фиг. 3 показано ингибирование активности тирозиназы экстрактом эхинацеи по сравнению с койевой кислотой.
Для положительной пробы с койевой кислотой степень ингибирования активности тирозиназы была определена равной 30,2%. Экстракт эхинацеи при испытуемой концентрации 5 мкг/мл не показал ингибирования активности тирозиназы. В случае более высокой испытуемой концентрации 50 мкг/мл степень ингибирования была определена равной 41,8%. Таким образом, действие было более сильным, чем в случае положительной пробы.
На фиг. 4 показано ингибирование активности тирозиназы маслом бодяка по сравнению с койевой кислотой.
Койевая кислота в качестве положительной пробы показала степень ингибирования активности тирозиназы, достигшую 35,3%. В случае масла бодяка при обеих испытуемых концентрациях ингибирование активности тирозиназы обнаружить не удалось.
На фиг. 5 показано ингибирование активности тирозиназы экстрактом эхинацеи и смесью экстракта эхинацеи и масла бодяка по сравнению с койевой кислотой. Как и в обоих предыдущих экспериментах, для положительной пробы с койевой кислотой также было обнаружено ингибирование активности тирозиназы. Степень ингибирования составила 34,3%. В случае экстракта эхинацеи при обеих концентрациях (5 мкг/мл и 50 мкг/мл) степень ингибирования активности тирозиназы была найдена равной 24,3 и 52,8% соответственно. Эти данные подтвердили результаты первого эксперимента. Неожиданным образом в случае смесей экстракта эхинацеи и масла бодяка ингибирование активности тирозиназы не было выявлено. Степень ингибирования составила 89,4-107,5% от контрольной пробы.
Эти результаты показывают, что благодаря прибавлению масла бодяка к экстракту эхинацеи при постоянной испытуемой концентрации экстракта эхинацеи ингибирование активности тирозиназы может быть нейтрализовано.
Пример 3
Восстановление кожного барьера после обработки додецилсульфатом натрия (SDS)
Целью исследования было определение влияния композиции по настоящему изобретению на восстановление нарушенной барьерной функции после двадцатичетырехчасовой обработки додецилсульфатом натрия (кожная аллергическая проба).
A) Планирование исследования
В случае данного исследования речь шла о рандомизированном двойном слепом исследовании с интраиндивидуальным сравнением среди участников испытаний со здоровой кожей (n=23).
B) Проведение исследования
В 1-й день исследования 0,5%-й раствор SDS применяли окклюзионно с использованием пластыря ("FinnChambers®", сверхширокий, на ленте "Scanpore®") в течение 24 часов на ладонной стороне предплечья. После удаления пластыря во 2-й день определяли повреждение барьерной функции. Со 2-го до 11-го дня испытуемые участки дважды в день обрабатывали испытуемыми препаратами. Инструментальные измерения осуществляли в 3-й, 5-й и 8-й дни.
В качестве испытуемых препаратов применяли крем по настоящему изобретению с экстрактом эхинацеи (0,5 масс.%) и производными соединениями линолевой кислоты (соответственно описанному далее образцу крема) и крем-плацебо. Нанесение испытуемых препаратов осуществляли дважды в день на поверхность размером 5 на 6 см. При этом наносили 2 мг/см2 испытуемых веществ.
Участники испытаний были мужского или женского пола. Возраст участников испытаний был от 18 до 55 лет.
Определение трансэпидермальной потери воды
Трансэпидермальная потеря воды (TEWL) представляет собой неинвазивный способ определения целостности барьерной функции рогового слоя эпидермиса и рассматривается в качестве чувствительного параметра раздражения кожи, индуцированного поверхностно-активным веществом. TEWL определяли анализатором "DermaLab" (Cortex, Dänemark) (трехкратное определение). Измерительный зонд при каждом измерении размещали на 40 с на участке кожи, предназначенном для измерения. В течение первых 20 с происходило уравновешивание системы. Значения, полученные в течение вторых 20 с, усредняли и расценивали в качестве измеренного значения. Значения TEWL указывали в г/(м2ч). Обычная область для нормальной нераздраженной кожи находится в интервале от 3 до 9 г/(м2ч). В легкой степени раздраженная кожа с нарушенным кожным барьером в зависимости от исходных оценок участников испытаний обычно характеризуется значениями в интервале от 10 до 18 г/(м2ч). Сильно раздраженная кожа с четко нарушенным кожным барьером характеризуется значениями > 25 г/(м2ч). Таким образом, увеличение значений TEWL представляет собой указание на нарушение функции кожного барьера.
C) Действие испытуемых препаратов на кожный барьер
На фиг. 6 показано действие на трансэпидермальную потерю воды крема по настоящему изобретению с экстрактом эхинацеи и производными соединениями линолевой кислоты по сравнению с кремом-плацебо.
Нанесение обоих испытуемых препаратов вело к заметному уменьшению трансэпидермальной потери воды, которая во 2-й день составляла > 20 г/(м2ч). Неожиданным образом результаты показали, что действие крема по настоящему изобретению с экстрактом эхинацеи и производными соединениями линолевой кислоты в отношении уменьшения трансэпидермальной потери воды в 8-й день значительно больше, чем действие крема-плацебо.
Пример 4
Исследование пациентов с атопическим дерматитом (3 месяца)
A) Планирование исследования
В случае данного исследования речь шла о рандомизированном двойном слепом контролируемом сравнительным препаратом исследовании с интраиндивидуальным сравнением.
B) Проведение исследования
В качестве испытуемых препаратов применяли крем по настоящему изобретению с экстрактом эхинацеи (0,5 масс.%) и производными соединениями линолевой кислоты (соответственно описанному далее образцу крема), а в качестве сравнительного препарата применяли традиционный крем (водно-масляный крем, содержавший около 55% жира и около 2,5% растительного экстракта, содержавшего бетулин). Препараты применяли дважды в день. Поверхность нанесения в случае каждого препарата составляла 1600 см2 (40 на 40 см, то есть около 9% поверхности тела взрослого человека) на контралатеральных местах кожи. В качестве мест нанесения были выбраны сгибы локтей и вся рука или альтернативно подколенные впадины и половина ноги выше и ниже колена или половина стороны верхней части туловища. Препараты применяли в течение около 3 месяцев (85 дней). Нанесенное количество препарата за время применения составило 1,5 г. В 1-й день (начало), 29-й день (через 1 месяц), 57-й день (через 2 месяца) и 85-й день(через 3 месяца) врач-исследователь осуществлял оценку зуда, а пациенты давали субъективную оценку ощущения сухости.
C) Уменьшение ощущения сухости кожи и зуда после обработки кремом по настоящему изобретению с экстрактом эхинацеи и производными соединениями линолевой кислоты (n=46-48)
На фиг. 7 показано изменение во времени уменьшения ощущения сухости кожи после обработки кремом по настоящему изобретению с экстрактом эхинацеи и производными соединениями линолевой кислоты.
Ощущение сухости кожи после обработки кремом по настоящему изобретению с экстрактом эхинацеи и производными соединениями линолевой кислоты уменьшалось на 29-й день на 40% по сравнению с началом обработки. В 57-й и 85-й дни уменьшение составило 40 и 50% соответственно. Уменьшение ощущения сухости кожи в 85-й день было более значительным, чем в случае сравнительного препарата (-35%).
На фиг. 8 показано изменение во времени уменьшения зуда после обработки кремом по настоящему изобретению с экстрактом эхинацеи и производными соединениями линолевой кислоты.
Зуд после обработки кремом по настоящему изобретению с экстрактом эхинацеи и производными соединениями линолевой кислоты уменьшался на 29-й день на 47,6% по сравнению с началом обработки. В 57-й и 85-й дни уменьшение зуда составило 52,4%. Уменьшение зуда в 57-й и 85-й дни было значительно больше, чем в случае сравнительного препарата (-33,3%).
Пример 5
14-дневное исследование пациентов с атопическим дерматитом
A) Планирование исследования
Исследование осуществляли как двойное слепое исследование с интраиндивидуальным сравнением.
B) Проведение исследования
Исследование было осуществлено с участниками испытаний с атопическим диатезом (возраст от 18 до 70 лет, 22 женщины и 3 мужчин, локальная оценка SCORAD в интервале от 1 до 15). В качестве испытуемых препаратов применяли крем по настоящему изобретению с экстрактом эхинацеи (0,5 масс.%) и производными соединениями линолевой кислоты и молочко по настоящему изобретению с экстрактом эхинацеи (0,1 масс.%) и производными соединениями линолевой кислоты (соответственно описанным далее образцу крема и образцу молочка). Препараты применяли в течение 14 дней дважды в день.
Влажность кожи определяли в 1-й и 15-й дни способом корнеометрии.
Прямое исследование эпидермального кожного барьера без инвазивного взятия проб осуществляли способом анализа "Lipbarvis®" (Lipid Barrier Visualisation (визуализация липидного барьера), LBV) компании "Microscopy Services Dähnhardt" (Flintbek, Deutschland). Для этого отбирали пробы кожи в трех-пяти местах расположения клеток с применением особенно щадящей системы "клей/подложка".
Предшествующие и последующие сравнения липидных ламелл (LBV-TEM)
Пробы препарировали и исследовали с применением трансмиссионного электронного микроскопа. С применением специальной компьютерной программы находили длины липидных ламелл и выявляли их связь с межклеточным пространством. Число липидных ламелл позволяет делать очень точные выводы об эффективности нанесенного активного вещества.
Определение липидов кожи (LBV-LIP)
Анализом способом HPTLC (High Performance Thin Layer Chromatography (высокоэффективная тонкослойная хроматография)) проб кожи на общие и отдельные липиды количественно определяли важные липиды кожи, такие как холестерин, жирные кислоты, церамиды EOS, NP и NH.
C) Увеличение числа липидных ламелл после обработки кремом по настоящему изобретению с экстрактом эхинацеи и производными соединениями линолевой кислоты или молочком по настоящему изобретению с экстрактом эхинацеи и производными соединениями линолевой кислоты, повышение синтеза характерных для кожи липидов и повышение влажности кожи (n=20)
На фигурах 9 (крем) и 16 (молочко) показаны предшествующие и последующие сравнения липидных ламелл (LBV-TEM) после обработки препаратом, содержавшим экстракт эхинацеи и производные соединения линолевой кислоты.
В обоих случаях по настоящему изобретению было найдено значительное увеличение числа липидных ламелл.
На фигурах 10 (крем) и 17 (молочко) показаны предшествующие и последующие сравнения содержания холестерина после обработки препаратом, содержавшим экстракт эхинацеи и производные соединения линолевой кислоты.
В случае обоих препаратов было найдено увеличение содержания холестерина. В случае крема по настоящему изобретению с экстрактом эхинацеи и производными соединениями линолевой кислоты различие было особенно значительным.
На фигурах 11 (крем) и 18 (молочко) показаны предшествующие и последующие сравнения содержания свободных жирных кислот (FFA) после обработки препаратом, содержавшим экстракт эхинацеи и производные соединения линолевой кислоты.
В случае обоих препаратов по настоящему изобретению было найдено увеличение содержания свободных жирных кислот.
На фигурах 12 (крем) и 19 (молочко) показаны предшествующие и последующие сравнения содержания церамидов EOS после обработки препаратом, содержавшим экстракт эхинацеи и производные соединения линолевой кислоты.
В случае обоих препаратов по настоящему изобретению было найдено увеличение содержания церамидов EOS. В случае крема по настоящему изобретению с экстрактом эхинацеи и производными соединениями линолевой кислоты различие было особенно значительным.
На фигурах 13 (крем) и 20 (молочко) показаны предшествующие и последующие сравнения содержания церамидов NP после обработки препаратом, содержавшим экстракт эхинацеи и производные соединения линолевой кислоты.
В случае обоих препаратов по настоящему изобретению было найдено увеличение содержания церамидов NP. В случае молочка по настоящему изобретению с экстрактом эхинацеи и производными соединениями линолевой кислоты различие было особенно значительным.
На фигурах 14 (крем) и 21 (молочко) показаны предшествующие и последующие сравнения содержания церамидов NH после обработки препаратом, содержавшим экстракт эхинацеи и производные соединения линолевой кислоты.
В случае обоих препаратов по настоящему изобретению было найдено увеличение содержания церамидов NH. В случае молочка по настоящему изобретению с экстрактом эхинацеи и производными соединениями линолевой кислоты различие было особенно значительным.
На фигурах 15 (крем) и 22 (молочко) показаны предшествующие и последующие сравнения общего содержания липидов после обработки препаратом, содержавшим экстракт эхинацеи и производные соединения линолевой кислоты.
В случае обоих препаратов по настоящему изобретению было найдено увеличение общего содержания липидов. Различие было значительным в случае обеих групп.
На фигурах 23 (крем) и 24 (молочко) показаны предшествующие и последующие сравнения влажности кожи после обработки препаратом, содержавшим экстракт эхинацеи и производные соединения линолевой кислоты.
После обработки кремом по настоящему изобретению с экстрактом эхинацеи и производными соединениями линолевой кислоты или молочком по настоящему изобретению с экстрактом эхинацеи и производными соединениями линолевой кислоты влажность кожи повысилась значительно.
Пример 6
Клиническое исследование потенциала раздражения и сенсибилизации
A) Планирование исследования
В случае данного исследования речь шла о рандомизированном двойном слепом одноцентровом исследовании, контролируемом сравнительным препаратом
B) Проведение исследования
Исследование было осуществлено со 105 добровольными участниками испытаний (возраст от 18 до 75 лет, женщины и мужчины, фототип кожи I-IV, отсутствие острых кожных заболеваний на экспонируемых поверхностях). В качестве испытуемых препаратов применяли крем по настоящему изобретению с экстрактом эхинацеи (0,5 масс.%) и производными соединениями линолевой кислоты и молочко по настоящему изобретению с экстрактом эхинацеи (0,1 масс.%) и производными соединениями линолевой кислоты (соответственно описанным далее образцу крема и образцу молочка), а также крем-плацебо по настоящему изобретению с экстрактом эхинацеи и производными соединениями линолевой кислоты.
Стадия раздражения/индукции
Препараты наносили окклюзионно посредством пластыря "FinnChamber® Large" (18 мм) на ленте "Fixomull® Stretch" постоянно на одни и те же места в течение 14 дней. Было осуществлено шесть процедур нанесения через 48 часов или через 72 часа (по 150 мкл за одну процедуру нанесения). Испытуемые участки находились в нижней части спины. Оценку эритем осуществляли визуально по шкале через 0-6 и 10-30 минут после удаления пластыря (3-й, 5-й, 8-й, 10-й, 12-й и 15-й дни).
Стадия провоцирования (через неделю отдыха после стадии индукции)
Препараты наносили окклюзионно посредством пластыря "FinnChamber® Large" (18 мм) на ленте "Fixomull® Stretch". Была осуществлена одна процедура нанесения через 48 часов (150 мкл за одну процедуру нанесения). Испытуемые участки находились в верхней части руки. Оценку эритем осуществляли визуально по шкале через 0-6 минут, 10-30 минут и через 48 часов после удаления пластыря.
Статистические методы
Потенциал раздражения
Кумулятивную оценку раздражения в случае каждого субъекта рассчитывали как сумму баллов в течение стадии раздражения. Вместо отсутствующих значений переносили значения последнего наблюдения. Если оценка составляла 2 или большее значение, то фиксировали значение оценки, равное 2. Для кумулятивной оценки раздражения представлена описательная статистика (среднее значение, стандартное отклонение, минимальное, максимальное и медианное значения).
Потенциал сенсибилизации
Применяли следующие градации потенциала сенсибилизации:
низкий: ни один из субъектов не реагирует с оценкой 2 или выше или имеется до двух субъектов с оценкой 1 в оба момента оценивания во время стадии сенсибилизации;
умеренный: до двух субъектов реагируют с оценкой 2 или выше или имеется до четырех субъектов с оценкой 1 в оба момента оценивания во время стадии сенсибилизации;
высокий: больше двух субъектов реагируют с оценкой 2 или выше или имеется больше четырех субъектов с оценкой 1 в оба момента оценивания во время стадии сенсибилизации.
C) Потенциал раздражения и сенсибилизации
В случае всех испытуемых препаратов потенциалы раздражения были охарактеризованы от низкого до умеренного. При этом не было статистически значимых различий между группами.
48-часовое окклюзионное воздействие испытуемых препаратов во время стадии провоцирования в 24-й и 26-й дни не вызвало образования эритем с оценкой 1 или выше. Согласно протоколу все препараты были охарактеризованы как препараты с низким потенциалом сенсибилизации.
С учетом многократного окклюзионного воздействия через 48 часов без перерывов между нанесениями отсутствие раздражения или низкий уровень раздражения после первого нанесения и низкий уровень дополнительных клинических симптомов раздражения переносимость кожей всех препаратов характеризируется с оценкой от очень хорошей до хорошей.
В случае нечетко фиксируемого аллергенного потенциала потенциал сенсибилизации был квалифицирован как низкий.
Пример 7
Клиническое исследование раздражения, вызываемого SDS
A) Планирование исследования
В случае данного исследования речь шла о слепом исследовании.
B) Проведение исследования
Исследование было осуществлено с 44 женщинами-участницами испытаний. Все участницы испытаний были подвергнуты 24-часовой окклюзионной обработке с применением SDS (додецилсульфата натрия). Девять участниц испытаний были исключены после оценки исходного уровня вследствие незначительного или неоднородного раздражения, вызванного SDS. Три другие участницы испытаний были исключены вследствие тяжелого раздражения, вызванного SDS, перед оценкой исходного уровня. 31 из участниц испытаний, которые полностью завершили исследование, были в возрасте от 24,9 до 65,6 лет. В качестве испытуемых препаратов применяли кремы по настоящему изобретению с экстрактом эхинацеи (1 или 2 масс.%) и производными соединениями линолевой кислоты. Сравнивали необработанную кожу и кожу с раздражением, вызванным SDS (без раздражения/без обработки, раздражение, вызванное SDS/без обработки). Первичной целью была оценка косметических свойств обоих кремов по настоящему изобретению с экстрактом эхинацеи и производными соединениями линолевой кислоты. Вторичной целью было определение влияния кремов по настоящему изобретению с экстрактом эхинацеи и производными соединениями линолевой кислоты на уменьшение эритемы.
Кожный барьер участниц испытаний повреждали путем 24-часового окклюзионного воздействия 2%-го раствора SDS на пластыре "FinnChamber®" (18 мм) на испытуемые участки на предплечье. Трансэпидермальную потерю воды (TEWL, DermaLab®) и гидратацию кожи (Corneometer® MDD4) определяли через 4 часа, 48 часов, 3 дня и 6 дней после раздражения воздействием SDS. Дополнительно визуально определяли эритему (экспертная оценка). Оба крема по настоящему изобретению с экстрактом эхинацеи и производными соединениями линолевой кислоты рандомизированно наносили на два испытуемых участка. Другой испытуемый участок на предплечье оставался необработанным. В качестве контрольного поля использовали испытуемый участок на плече (без раздражения/без обработки). Нанесение обоих кремов по настоящему изобретению с экстрактом эхинацеи и производными соединениями линолевой кислоты (~2 мкл/см2) осуществляли дважды в день.
Измерения и визуальные оценки осуществляли в следующие моменты:
- перед обработкой препаратом, через 4 ч после удаления пластыря (t0);
- после 4-го нанесения препарата, через 48 ч после удаления пластыря (t1);
- после 6-го нанесения препарата, через 3 дня после удаления пластыря (t2);
- после 12-го нанесения препарата, через 5 дней после удаления пластыря (t3).
C) Трансэпидермальная потеря воды (TEWL)
Обработка кремом по настоящему изобретению с экстрактом эхинацеи (1 масс.%) и производными соединениями линолевой кислоты привела по сравнению с необработанным участком к легкому, незначительному уменьшению TEWL в моменты t0 и t1. В моменты t2 и t3 большие различия между обоими группами зафиксированы не были. После обработки кремом по настоящему изобретению с экстрактом эхинацеи (2 масс.%) и производными соединениями линолевой кислоты значения TEWL в общем случае были больше, чем в случае необработанной кожи. Повышенное значение TEWL приравнивается более низкой барьерной функции. Результаты представлены в таблице 1.
Таблица 1. Трансэпидермальная потеря воды (TEWL), первичные данные, г/(м2ч)
| Момент измерения | Раздражение, вызванное SDS/без обработки | 1%-й крем | 2%-й крем |
| t0 | 41,3 | 39,9 | 41,5 |
| t1 | 30,7 | 28,6 | 32,0 |
| t2 | 18,6 | 19,1 | 22,2 |
| t3 | 10,9 | 11,5 | 13,1 |
D) Гидратация кожи (Corneometer®)
Испытуемые участки, обработанные кремами по настоящему изобретению с экстрактом эхинацеи и производными соединениями линолевой кислоты, показали по сравнению с необработанными участками кожи с раздражением, вызванным SDS, в моменты t2 и t3 статистически значимо повышенные значения гидратации кожи. В момент t1 значения гидратации кожи были также более высокими. Результаты представлены в таблице 2.
Таблица 2. Гидратация кожи, первичные данные [AU]
| Момент измерения | Раздражение, вызванное SDS/без обработки | 1%-й крем | 2%-й крем |
| t0 | 35,6 | 35,1 | 33,0 |
| t1 | 19,3 | 20,9 | 20,6 |
| t2 | 11,9 | 15,9 | 14,9 |
| t3 | 9,6 | 16,1 | 12,8 |
E) Визуальное определение эритемы
Как и следовало ожидать, на необработанных испытуемых участках без раздражения эритема не была обнаружена. При этом оценки эритемы на всех раздраженных участках были значительно более высокими. Между участками, обработанными кремом по настоящему изобретению с экстрактом эхинацеи и производными соединениями линолевой кислоты, и необработанными участками с раздражением, вызванным SDS, большого различия обнаружено не было. При этом было обнаружено, что оценка участков, обработанных кремом по настоящему изобретению с экстрактом эхинацеи (1 масс.%) и производными соединениями линолевой кислоты, в момент t3 была более низкой, чем оценка необработанных участков с раздражением, вызванным SDS. В отличие от этого, в случае участков, обработанных кремом по настоящему изобретению с экстрактом эхинацеи (2 масс.%) и производными соединениями линолевой кислоты, более низкая оценка была зафиксирована только в момент t0. Во все другие моменты измерений оценка эритемы была больше оценки в случае необработанных участков с раздражением, вызванным SDS (незначительно). Результаты представлены в таблице 3.
Таблица 3. Визуальная оценка эритемы, первичные данные
| Момент измерения | Без раздражения/без обработки | Раздражение, вызванное SDS/без обработки | 1%-й крем | 2%-й крем |
| t0 | 0,00 | 1,69 | 1,69 | 1,61 |
| t1 | 0,00 | 1,44 | 1,47 | 1,50 |
| t2 | 0,00 | 1,19 | 1,21 | 1,29 |
| t3 | 0,00 | 0,94 | 0,87 | 0,97 |
В порядке обобщения, было констатировано, что кремы по настоящему изобретению с экстрактом эхинацеи (1 или 2 масс.%) и производными соединениями линолевой кислоты оказывают положительное влияние на влажность кожи. Это преимущество перевешивает наблюдаемое несколько повышенное раздражение при применении с более высокими концентрациями экстракта эхинацеи.
Пример 8
Стабильность композиций
Крем с экстрактом эхинацеи (0,5 масс.%) и производными соединениями линолевой кислоты и молочко с экстрактом эхинацеи (0,1 масс.%) и производными соединениями линолевой кислоты (соответственно описанным далее образцу крема и образцу молочка) были подвергнуты испытанию на долговременную стабильность. Для этого пробы хранили при разных условиях (25°C/60% относительной влажности, 30°C/65% относительной влажности и 40°C/75% относительной влажности). Результаты исследований в итоге показали, что сохраняемость обеих композиций составляет по меньшей мере два года при комнатной температуре.
Неожиданным образом в ранее описанных примерах 3-5 удалось показать, что крем по настоящему изобретению и молочко по настоящему изобретению с экстрактом эхинацеи и производными соединениями линолевой кислоты оказывают положительное влияние на барьерную функцию кожи.
Обработка вела к значительному повышению содержания характерных для кожи липидов, которые являются существенными для восстановления или поддержания барьерной функции. В частности, также повышается содержание церамидов EOS, которые являются особенно важными для стабильности двойных липидных слоев рогового слоя эпидермиса вследствие так называемой "функции скрепляющего гвоздя".
В исследованиях макроскопически удалось доказать уменьшение трансэпидермальной потери воды (TEWL), а также повышение влажности кожи. После обработки препаратами по настоящему изобретению также уменьшался зуд.
Ранее описанные примеры подтверждают, что неожиданным образом не только, как описано в "Yotsawimonwat S, et al., Int J Cosm Sci 2010, 32, 340-346", может быть улучшена гидратация кожи у участников испытаний без повреждения барьерной функции, но и композиции по настоящему изобретению способствуют также восстановлению уже нарушенной барьерной функции. В частности, при этом следует отметить, что композиции по настоящему изобретению не только за счет дополнительного присутствия линолевой кислоты/производных соединений линолевой кислоты отличаются от известных композиций, содержащих эхинацею. Применяемые экстракты из Echinacea purpurea также отличаются. Yotsawimonwat и соавт. применяли спиртовой экстракт из надземных частей эхинацеи, содержащих большое количество фенольных компонентов с антиоксидантным действием. Доля алкиламидов в таких экстрактах очень незначительна. Композиции по настоящему изобретению предпочтительно содержат экстракт из корней эхинацеи. Эти экстракты, предпочтительно полученные с применением сверхкритического CO2, содержат большое количество липофильных алкиламидов и не содержат фенолы.
Также неожиданным образом оказалось, что композиции по настоящему изобретению могут храниться в течение более двух лет. Это наблюдается также и в случае хранении при комнатной температуре. В противоположность этому, композиции, описанные Yotsawimonwat и соавт., после прибавления антиоксиданта могут сохраняться при 4°C в течение не более 7 месяцев.
Для специалистов в данной области техники неожиданным было также то, что композиция по настоящему изобретению оказывает противозудное действие.
Примеры композиций/препаратов по настоящему изобретению
Крем с 2% CO2-экстракта из Echinacea purpurea radix
| Арлацел 1690 | |
| Гексилдециллаурат | |
| Пчелиный воск | |
| Воск апельсиновой корки | |
| Децилолеат | |
| Оксинекс LM | |
| Стеарат цинка | |
| Масло бодяка | |
| Изопропилмиристат | |
| CO2-экстракт из Echinacea purpurea radix | |
| Бензиловый спирт | |
| Гептагидрат сульфата магния | |
| Глицерин | |
| Очищенная вода |
Крем с 1% CO2-экстракта из Echinacea purpurea radix
| Арлацел 1690 | |
| Гексилдециллаурат | |
| Пчелиный воск | |
| Воск апельсиновой корки | |
| Децилолеат | |
| Оксинекс LM | |
| Стеарат цинка | |
| Масло бодяка | |
| Изопропилмиристат | |
| CO2-экстракт из Echinacea purpurea radix | |
| Бензиловый спирт | |
| Гептагидрат сульфата магния | |
| Глицерин | |
| Очищенная вода |
Крем с 0,5% CO2-экстракта из Echinacea purpurea radix
| Арлацел 1690 | |
| Гексилдециллаурат | |
| Пчелиный воск | |
| Воск апельсиновой корки | |
| Децилолеат | |
| Оксинекс LM | |
| Стеарат цинка | |
| Масло бодяка | |
| Изопропилмиристат | |
| CO2-экстракт из Echinacea purpurea radix | |
| Бензиловый спирт | |
| Гептагидрат сульфата магния | |
| Глицерин | |
| Очищенная вода |
Молочко с 0,1% CO2-экстракта из Echinacea purpurea radix
| Стеарат цинка | |
| Воск апельсиновой корки | |
| Арлацел 1690 | |
| Гексилдециллаурат | |
| Масло бодяка | |
| Децилолеат | |
| Изопропилмиристат | |
| Бензиловый спирт | |
| Оксинекс LM | |
| CO2-экстракт из Echinacea purpurea radix | |
| Гептагидрат сульфата магния | |
| Глицерин | |
| Очищенная вода |
Молочко с 0,02% CO2-экстракта из Echinacea purpurea radix
| Стеарат цинка | |
| Воск апельсиновой корки | |
| Арлацел 1690 | |
| Гексилдециллаурат | |
| Масло бодяка | |
| Децилолеат | |
| Изопропилмиристат | |
| Бензиловый спирт | |
| Оксинекс LM | |
| CO2-экстракт из Echinacea purpurea radix | |
| Гептагидрат сульфата магния | |
| Глицерин | |
| Очищенная вода |
1. Композиция для лечения зуда и/или состояний воспаления кожи, и/или сухой кожи, и/или раздраженной кожи, содержащая:
a) 0,025-2 масс.% экстракта эхинацеи в расчете на общую массу композиции и
b) 0,01-10 масс.% производных соединений линолевой кислоты в расчете на общую массу композиции,
отличающаяся тем, что экстракт эхинацеи получают из Echinacea purpurea radix и производные соединения линолевой кислоты находятся в виде, выбранном из группы, состоящей из сафлорового масла, рапсового масла и масла из проростков семян пшеницы, где экстракт эхинацеи представляет собой экстракт, полученный с применением CO2.
2. Композиция по п. 1, отличающаяся тем, что экстракт эхинацеи представляет собой липофильный экстракт.
3. Композиция по п. 1 и/или 2, отличающаяся тем, что экстракт эхинацеи представляет собой экстракт, полученный с применением сверхкритического CO2.
4. Композиция по любому из пп. 1-3, отличающаяся тем, что экстракт эхинацеи содержит алкиламиды в интервале от 1 до 50%, предпочтительно в интервале от 10 до 40% и особенно предпочтительно в интервале от 15 до 30%.
5. Композиция по любому из пп. 1-4, отличающаяся тем, что композиция содержит компоненты a) и b) в массовом соотношении от 1:1000 до 1:1 и предпочтительно от 1:50 до 1:10.
6. Композиция по любому из пп. 1-5, отличающаяся тем, что она содержит 0,05-1 масс.% экстракта эхинацеи в расчете на общую массу композиции и 0,01-5 масс.% производных соединений линолевой кислоты, которое соответствует 0,01-5 масс.% линолевой кислоты, соответственно в расчете на общую массу композиции.
7. Композиция по любому из пп. 1-6, содержащая также одно или несколько косметических и/или фармацевтических вспомогательных веществ, предпочтительно в виде эмульсии.
8. Композиция по п. 1, причем состояние воспаления кожи представляет собой атопический дерматит.
9. Применение композиции по любому из пп. 1-7 в качестве лекарственного средства для лечения зуда и/или состояний воспаления кожи, и/или сухой кожи, и/или раздраженной кожи.
10. Применение композиции по любому из пп. 1-7 в качестве медицинского препарата для лечения зуда и/или состояний воспаления кожи, и/или сухой кожи, и/или раздраженной кожи.
11. Применение композиции по любому из пп. 1-7 в качестве косметического средства для лечения зуда и/или сухой кожи, и/или раздраженной кожи.
12. Применение по любому из пп. 9-11, причем состояние воспаления кожи представляет собой атопический дерматит.
