Гемостатическая смесь коротких и длинных волокон на основе целлюлозы

Изобретение имеет отношение к гемостатической композиции в форме волокон и/или агрегатов, способу получения такой композиции, способу достижения гемостаза, набору, способу обработки кровоточащей раны и применению гемостатической композиции в качестве бактерицидного агента, для остановки кровотечения, для герметизации, предотвращения спайкообразования и/или сведения к минимуму или предотвращения анастомозной утечки. Гемостатическая композиция в форме волокон и/или агрегатов содержит длинные и мелкие волокна на основе целлюлозы, причем длинные и мелкие волокна находятся в соотношении в диапазоне 5-25% масс. и 95-75% масс. соответственно общей массы композиции. Распределение по размерам для длинных волокон составляет: D90 от более 177 мкм до менее 350 мкм и D50 от более 95 мкм до менее 167 мкм, распределение по размерам для мелких волокон составляет: D90 менее 177 мкм и D50 менее 95 мкм. Способ получения гемостатической композиции содержит стадии: a) измельчение материала на основе целлюлозы с образованием длинных волокон и мелких волокон и смешивание длинных и мелких волокон в соотношении в диапазоне 5-25% масс. и 95-75% масс. соответственно, с получением таким образом композиции гемостатических волокон; b) необязательно подвергают композицию гемостатических волокон, полученную на стадии a), дополнительным стадиям для получения гемостатической композиции в форме агрегатов, причем стадии включают: i) прессование композиции гемостатических волокон для получения прессованной композиции гемостатических волокон; и необязательно ii) измельчение прессованной композиции. Способ достижения гемостаза включает осуществление контакта гемостатической композиции в форме волокон и/или агрегатов с кровью с формированием таким образом геля. Набор содержит емкость, включающую в себя гемостатическую композицию в форме волокон и/или агрегатов, и необязательно аппликатор, носитель и/или инструкцию по применению. Способ обработки кровоточащей раны, бактериальной инфекции на раневом участке, для герметизации утечки на участке, предотвращения спайкообразования на участке и/или сведения к минимуму или предотвращения анастомозной утечки у нуждающегося в этом субъекта, включает нанесение эффективного количества гемостатической композиции в форме волокон и/или агрегатов на и/или в рану и/или участок у субъекта. Технический результат - получение гемостатической композиции, обладающей повышенной гемостатической эффективностью. 7 н. и 19 з.п. ф-лы, 2 ил., 5 табл., 3 пр.

 

ОБЛАСТЬ ПРИМЕНЕНИЯ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Изобретение относится к гемостатической композиции, содержащей смесь коротких и длинных волокон на основе целлюлозы, ее получению и применению.

ПРЕДПОСЫЛКИ СОЗДАНИЯ ИЗОБРЕТЕНИЯ

В самых разных обстоятельствах животные, включая людей, могут страдать от кровотечения, вызванного ранами или возникающего во время хирургических вмешательств. В некоторых случаях кровотечение является сравнительно слабым, и нормального свертывания крови вместе с оказанием простой первой помощи оказывается вполне достаточно. В иных обстоятельствах может возникать существенное кровотечение. В таких случаях обычно требуется специальное оборудование и материалы, а также персонал с навыками оказания необходимой помощи.

Кровотечение во время хирургических вмешательств может проявляться во многих формах. Оно может быть дискретным или диффузным из обширной площади поверхности. Оно может происходить из больших или малых сосудов, артериальных (высокое давление) или венозных (низкое давление), в высоком или низком объеме. Оно может быть легко доступным или происходить в местах, доступ к которым затруднен.

Традиционные способы достижения гемостаза включают применение хирургических методик, шовных нитей, лигатур или клипс и основанных на энергии коагуляции и каутеризации. Если эти традиционные меры являются неэффективными или неосуществимыми на практике, как правило, используются дополнительные способы и продукты для гемостаза.

Выбор подходящих способов или продуктов для контроля кровотечения зависит от многих факторов, которые включают в себя, без ограничений, тяжесть кровотечения, анатомическое положение источника и близость источника к смежным критическим структурам, происходит ли кровотечение из дискретного источника или из более широкой площади поверхности, видимость и точное установление источника и доступ к источнику.

В качестве вспомогательных средств для гемостаза было разработано много продуктов. Эти продукты включают в себя рассасывающиеся гемостатические средства для местного применения (TAH), такие как окисленная регенерированная целлюлоза, желатин в различных формах с раствором тромбина или без него, коллагеновый порошок, биологически активные местные гемостатические продукты (местные растворы тромбина, фибриновые наполнители и т. п.) и большое разнообразие синтетических местных герметиков.

Рассасывающиеся гемостатические средства для местного применения (TAH) широко используются в хирургической практике. TAH охватывают продукты на основе окисленной целлюлозы (ОЦ), окисленной регенерированной целлюлозы (ОРЦ), желатина, коллагена, хитина, хитозана и т. п. Для улучшения гемостатической функции каркасы на основе указанных выше материалов можно сочетать с биологическими факторами свертывания крови, такими как тромбин и фибриноген.

Одним из чаще всего используемых местных гемостатических агентов является рассасывающееся гемостатическое средство SURGICEL® Original, которое получают из окисленной регенерированной целлюлозы (ОРЦ). ОРЦ была введена в употребление в 1960 г. в качестве безопасного и эффективного гемостатического агента для многих хирургических вмешательств. SURGICEL® Original представляет собой ткань на основе ОРЦ с неплотной вязью, которая быстро прилегает к своему непосредственному окружению и с которой легче работать по сравнению с другими рассасывающимися агентами, потому что она не прилипает к хирургическим инструментам, а ее размер можно легко подрезать. Это позволяет хирургу плотно удерживать целлюлозу на месте до остановки кровотечения. Остановка кровотечения важна и крайне необходима во время хирургических вмешательств для сведения к минимуму кровопотери, уменьшения послеоперационных осложнений и сокращения продолжительности операции в операционной. Благодаря своей способности к биоразложению, бактерицидным и гемостатическим свойствам окисленная целлюлоза, а также окисленная регенерированная целлюлоза уже длительное время используются в качестве гемостатической раневой повязки для местного применения в ряде хирургических вмешательств, включая нейрохирургию, абдоминальную хирургию, сердечно-сосудистую хирургию, торакальную хирургию, хирургию головы и шеи, хирургию органов таза, операции на коже и подкожной ткани. Известен ряд способов для формирования различных типов гемостатических средств на основе материалов окисленной целлюлозы, изготовленных в форме порошка, тканого, нетканого, трикотажного материала и в других формах. Используемые в настоящее время гемостатические раневые повязки включают трикотажные, тканые или нетканые материалы, содержащие окисленную регенерированную целлюлозу (ОРЦ), которая представляет собой окисленную целлюлозу с повышенной гомогенностью целлюлозного волокна.

Рассасывающиеся гемостатические средства SURGICEL® используют как вспомогательные средства при хирургических вмешательствах для дополнительного контроля капиллярных, венозных и небольших артериальных геморрагий, если лигирование или другие традиционные способы контроля не осуществимы на практике или неэффективны. Семейство рассасывающихся гемостатических средств SURGICEL® состоит из четырех основных групп продуктов, при этом все гемостатические раневые повязки производятся компанией Ethicon, Inc., г. Сомервилл, штат Нью-Джерси, Johnson & Johnson: гемостатическое средство SURGICEL® Original представляет собой белую ткань с бледно-желтым оттенком и легким запахом карамели. Это прочный материал, который можно сшивать или резать без истирания.

Рассасывающееся гемостатическое средство SURGICEL® NU-KNIT® аналогично SURGICEL® Original, но имеет более плотную вязь и более высокое сопротивление разрыву, в частности, этот материал рекомендован для применения при травмах и трансплантационных хирургических операциях, так как его можно использовать для обертывания или пришивания для контроля кровотечения.

Форма продукта рассасывающегося гемостатического средства SURGICEL® FIBRILLAR™ имеет слоистую структуру и позволяет хирургу отслаивать и отделять зажимом любое количество материала, требуемого для достижения гемостаза в конкретном месте кровотечения, и, таким образом, может быть удобнее трикотажной формы, для местных кровотечений, которые труднодоступны или имеют неправильную форму. Он особенно рекомендуется для применения в ортопедической/спинальной хирургии и нейрохирургии.

Форма продукта рассасывающегося гемостатического средства SURGICEL® SNoW™ представляет собой структурированное нетканое плотно, которое может быть удобнее других форм для эндоскопического применения за счет структурированного нетканого материала и является в значительной мере адаптивным и рекомендовано как для открытых, так и минимально инвазивных процедур.

Другим примером доступного в продаже рассасывающегося гемостатического средства, содержащего окисленную целлюлозу, является рассасывающаяся целлюлозная хирургическая повязка GELITA-CEL® производства компании Gelita Medical BV, г. Амстердам, Нидерланды. Доступные в продаже гемостатические средства на основе окисленной целлюлозы, как указано выше, доступны в форме трикотажного, нетканого материала или порошка. Кроме того, доступны дополнительные гемостатические продукты, такие как порошки, состоящие из микропористых полисахаридных частиц и на основе частиц растительного крахмала, под названиями PERCLOT® и ARISTA^TM.

Предшествующий уровень техники US8,815,832; US3,364,200; US2008/0027365; US2004/0005350; WO2007/076415; US6,627,749; US6,309,454; US5,696,191; US6,627,749; US6,225,461; WO2001/024841 A1, EP1,323,436; US2006/0233869.

Howsmon, J. A., & Marchessault, R. H. (1959). The ball-milling of cellulose fibers and recrystallization effects. Journal of Applied Polymer Science J. Appl. Polym. Sci., 1(3), 313-322. doi:10.1002/app.1959.070010308.

Cullen, B., Watt, P. W., Lundqvist, C., Silcock, D., Schmidt, R. J., Bogan, D., & Light, N. D. (2002). The role of oxidised regenerated cellulose/collagen in chronic wound repair and its potential mechanism of action. The International Journal of Biochemistry & Cell Biology, 34(12), 1544-1556. doi:10.1016/s1357-2725(02)00054-7.

Rajkhowa, R., Wang, L., & Wang, X. (2008). Ultra-fine silk powder preparation through rotary and ball milling. Powder Technology, 185(1), 87-95. doi:10.1016/j.powtec.2008.01.005.

Yasnitskii, B. G., Dol'berg, E. B., Oridoroga, V. A., Shuteeva, L. N., Sukhinina, T. V., & Bogun, T. A. (1984). Oxycelodex, a new hemostatic preparation. Pharmaceutical Chemistry Journal, 18(4), 279-281. doi:10.1007/bf00760712.

ИЗЛОЖЕНИЕ СУЩНОСТИ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Настоящее изобретение относится к улучшенным гемостатическим композициям, содержащим смесь коротких и длинных волокон, полученных из материала на основе целлюлозы.

В одном аспекте изобретение относится к гемостатической композиции в форме волокон и/или агрегатов, содержащей длинные и мелкие волокна на основе целлюлозы, причем длинные и мелкие волокна находятся в соотношении в диапазоне 5-25% масс. и 95-75% масс. соответственно; причем распределение по размерам для длинных волокон составляет: D90 более 177 мкм и D50 более 95 мкм, и при этом распределение по размерам для мелких волокон составляет: D90 менее 177 мкм и D50 менее 95 мкм. Все значения процентного содержания указаны в % масс. от массы всей композиции.

В некоторых вариантах осуществления изобретения D90 для длинных волокон составляет менее 350 мкм и D50 менее 167 мкм.

В некоторых вариантах осуществления изобретения гемостатическая композиция дополнительно содержит по меньшей мере одно соединение, выбранное из группы, состоящей из:

a) двухвалентного катиона, выбранного из цинка, кальция, магния, марганца и меди;

b) положительно заряженного пептида и/или полисахарида;

c) омега-аминокарбоновой кислоты; и

d) комбинации любых из перечисленных выше компонентов.

В одном варианте осуществления композиция содержит омега-аминокарбоновую кислоту с концентрацией в диапазоне 2,5-5,0% масс. всей композиции; соль протамина с концентрацией в диапазоне 2,5-5,0% масс. всей композиции; соль двухвалентного катиона, причем концентрация катиона в соли составляет 1,3-1,8% масс. всей композиции. Остальная масса приходится на волокна на основе целлюлозы до суммарной массы 100% масс.

В некоторых вариантах осуществления изобретения гемостатическая композиция дополнительно содержит соль протамина, хлорид кальция и ε-аминокапроновую кислоту (ε-ACA). Остальная масса приходится на волокна на основе целлюлозы до суммарной массы 100% масс.

В одном варианте осуществления диапазоны концентраций ε-ACA, сульфата протамина и хлорида кальция составляют 2,5-5,0%, 2,5-5,0%, 5,0-6,5% масс. соответственно. Остальная масса приходится на волокна на основе целлюлозы до суммарной массы 100% масс.

Композиция содержит длинные волокна в концентрации в диапазоне 5-25% масс. Остальная масса приходится на короткие волокна (присутствующие в концентрации в диапазоне 75-95%) и необязательно другие соединения/добавки до суммарной массы 100%.

В некоторых вариантах осуществления изобретения волокна на основе целлюлозы представляют собой волокна окисленной регенерированной целлюлозы.

В некоторых вариантах осуществления изобретения гемостатическая композиция находится в форме агрегатов с размером в диапазоне 75-420 мкм.

В другом аспекте изобретение относится к способу получения гемостатической композиции, согласно которому:

a) измельчают материал на основе целлюлозы, например, волокно, с образованием длинных волокон и мелких волокон, причем распределение по размерам для длинных волокон составляет: D90 более 177 мкм и D50 более 95 мкм, и при этом распределение по размерам для мелких волокон составляет: D90 менее 177 мкм и D50 менее 95 мкм; и смешивают длинные и мелкие волокна в соотношении в диапазоне 5-25% масс. и 95-75% масс. соответственно, получая таким образом композицию гемостатических волокон;

b) необязательно подвергают композицию гемостатических волокон, полученную на стадии a), дополнительным стадиям для получения гемостатической композиции в форме агрегатов.

В некоторых вариантах осуществления изобретения агрегаты образуются на стадиях, включающих:

i) прессование композиции гемостатических волокон для получения прессованной композиции гемостатических волокон; и

ii) измельчение прессованной композиции.

В некоторых аспектах изобретение относится к способу получения гемостатической композиции, согласно которому:

a) измельчают материал на основе целлюлозы с образованием длинных волокон и мелких волокон, причем распределение по размерам для длинных волокон составляет: D90 более 177 мкм и D50 более 95 мкм, и при этом распределение по размерам для мелких волокон составляет: D90 менее 177 мкм и D50 менее 95 мкм; и смешивают длинные и мелкие волокна в соотношении в диапазоне 5-25% масс. и 95-75% масс. соответственно, получая таким образом композицию гемостатических волокон;

b) необязательно подвергают композицию гемостатических волокон, полученную на стадии a), дополнительным стадиям для получения гемостатической композиции в форме агрегатов, причем стадии включают i) прессование композиции гемостатических волокон для получения прессованной композиции гемостатических волокон; и необязательно ii) измельчение прессованной композиции.

В некоторых вариантах осуществления изобретения D90 для длинных волокон составляет менее 350 мкм и D50 менее 167 мкм.

В некоторых вариантах осуществления изобретения измельчение осуществляют путем помола.

В некоторых вариантах осуществления изобретения измельчению на стадии a) предшествует стадия разрезания и/или обрезки материала на основе целлюлозы.

В некоторых вариантах осуществления изобретения измельчение на стадии a) представляет собой двухстадийный процесс, в котором вторая стадия осуществляется в мельнице пневмоклассификатора.

В некоторых вариантах осуществления изобретения измельчение в мельнице пневмоклассификатора проводят один раз (один проход) для получения длинных волокон и три раза (три прохода) для получения мелких волокон.

В некоторых вариантах осуществления изобретения стадии i) прессования предшествует стадия увлажнения композиции гемостатических волокон, необязательно до уровня содержания воды в диапазоне от 11% до 18% масс.

В некоторых вариантах осуществления изобретения стадию увлажнения осуществляют путем включения в композицию гемостатических волокон гигроскопического материала, необязательно хлорида кальция.

В некоторых вариантах осуществления изобретения измельчению на стадии ii) предшествует стадия обезвоживания прессованной композиции.

В некоторых вариантах осуществления изобретения обезвоживание осуществляют до уровня содержания воды менее 5% масс.

В некоторых вариантах осуществления изобретения прессование на стадии i) осуществляют с помощью машины для агрегирования, необязательно с усилием в диапазоне 25-70 кН/см.

В некоторых вариантах осуществления изобретения получение гемостатических агрегатов на стадии b) нацелено на получение агрегатов с размером в диапазоне 75-420 мкм.

В некоторых вариантах осуществления изобретения материал на основе целлюлозы представляет собой материал из окисленной регенерированной целлюлозы, нетканый материал из окисленной регенерированной целлюлозы, тканый материал из окисленной регенерированной целлюлозы, трикотажный материал из окисленной регенерированной целлюлозы, измельченный материал из окисленной регенерированной целлюлозы или их комбинации.

В некоторых вариантах осуществления изобретения способ дополнительно включает добавление к длинным и мелким волокнам по меньшей мере одного соединения, выбранного из группы, состоящей из:

a) двухвалентного катиона, выбранного из цинка, кальция, магния, марганца и меди;

b) положительно заряженного пептида и/или полисахарида;

c) омега-аминокарбоновой кислоты; и

d) комбинации любых из перечисленных выше компонентов.

В некоторых вариантах осуществления изобретения способ дополнительно включает добавление к длинным и мелким волокнам соли протамина, соли кальция и ε-аминокапроновой кислоты.

В другом аспекте изобретение относится к гемостатической композиции в форме волокон и/или агрегатов, которую можно получить в соответствии со способом изобретения.

В другом аспекте изобретение относится к способу формирования геля, согласно которому осуществляют контакт гемостатической композиции в форме волокон и/или агрегатов в соответствии с изобретением с кровью с формированием таким образом геля.

В другом аспекте изобретение относится к гелю, получаемому способом в соответствии с изобретением.

В другом аспекте изобретение относится к набору, содержащему емкость, включающую в себя гемостатическую композицию в форме волокон и/или агрегатов в соответствии с изобретением и необязательно аппликатор, носитель и/или инструкцию по применению.

В некоторых вариантах осуществления емкость представляет собой аппликатор.

В другом аспекте изобретение относится к способу обработки кровоточащей раны, бактериальной инфекции на раневом участке для герметизации утечки на участке, предотвращения спайкообразования на участке и/или сведения к минимуму или предотвращения анастомозной утечки у нуждающегося в этом субъекта, при этом согласно способу наносят эффективное количество гемостатической композиции в соответствии с изобретением в форме волокон и/или агрегатов на и/или в рану и/или участок у субъекта.

Изобретение относится к применению гемостатической композиции в форме волокон и/или агрегатов в соответствии с изобретением в качестве бактерицидного агента для остановки кровотечения, для герметизации, предотвращения спаек и/или сведения к минимуму или предотвращения анастомозных утечек. В некоторых вариантах осуществления композиция применяется для сведения к минимуму или предотвращения утечек при операции аортокоронарного шунтирования (АКШ).

В одном варианте осуществления нанесение осуществляют без приложения к композиции давления в направлении раны и/или участка. Например, нет необходимости в ручной компрессии с помощью марли. В различных продуктах во время нанесения продукта необходима ручная компрессия в течение по меньшей мере минуты. Преимущество применения гемостатической композиции без компрессии заключается в том, что гемостатическую композицию можно наносить в/на труднодоступные области.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ФИГУР

Фиг. 1 представляет собой столбиковую диаграмму, которая показывает силу сопротивления/когезионную прочность, полученные для различных композиций волокна с помощью модифицированного теста по Блуму. Силу сопротивления, полученную для мелких волокон ОРЦ без добавок, использовали в качестве базисной линии для всего эксперимента. Было показано, что добавление длинных волокон ОРЦ (L-ORC) повышает сопротивление сгустков.

Фиг. 2 представляет собой столбиковую диаграмму, которая показывает гемостатическую эффективность различных композиций в форме агрегатов на модели для наложения швов ex vivo. На фигуре показано, что добавление длинных волокон ОРЦ (L-ORC) повышает гемостатическую эффективность.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ

Настоящее изобретение относится к композиции (-ям) в форме волокон и/или агрегатов, обладающей (-ими) удивительными физическими свойствами и оказывающей чрезвычайно благоприятный (-ые) для гемостаза эффект (-ы) на образование геля или сгустков; к их получению и применению. Гемостатическая композиция содержит смесь коротких и длинных волокон, полученных из материала на основе целлюлозы, в форме волокон и/или агрегатов. Например, композиция в форме волокон и/или агрегата индуцирует образование геля или сгустков, обладающих полезными физическими свойствами, такими как повышенная когезионная прочность, и высокой гемостатической способностью.

Термин «волокна на основе целлюлозы» относится к волокнам, содержащим целлюлозную основную цепь. Целлюлозную основную цепь можно модифицировать, например, она может включать изменения в уровнях карбоксилирования или окисления. Не имеющие ограничительного характера примеры материалов на основе целлюлозы включают окисленную целлюлозу или окисленную регенерированную целлюлозу, карбоксиметилцеллюлозу, гидроксиэтилцеллюлозу, гидроксипропилцеллюлозу и метилцеллюлозу.

Материалы на основе целлюлозы могут представлять собой тканые, нетканые, трикотажные и/или другие формы тканей.

Не имеющие ограничительного характера примеры волокон на основе целлюлозы представляют собой волокна ОРЦ, хлопковые волокна, искусственные волокна и вискозные волокна.

Термин «волокна» относится к структурам, имеющим удлиненную нитевидную форму.

Композиция гемостатических волокон может находиться в форме порошка.

В одном варианте осуществления изобретения «мелкие» или «короткие» волокна на основе целлюлозы в композиции имеют распределение по размерам D90 менее 177 мкм и D50 менее 95 мкм.

В одном варианте осуществления изобретения «длинные» волокна на основе целлюлозы в композиции имеют распределение по размерам D90 более 177 мкм и D50 более 95 мкм. В другом варианте осуществления длинные волокна имеют распределение по размерам менее 350 мкм и D50 менее 167 мкм.

Распределение по размерам D50 также известно как медианный диаметр, или среднее значение единиц в распределении по размерам для порошка/агрегатов; это значение диаметра единиц при 50% в кумулятивном распределении. Например, если D50 составляет X мкм, то 50% единиц в образце больше X мкм и 50% - меньше X мкм. Распределение по размерам - это число единиц, которые попадают в каждый из различных диапазонов по размерам, выраженное в процентном отношении от общего числа по размерам всех единиц в интересующем образце. Соответственно, значение D90 относится к 90% единиц, размер которых меньше значения D90.

Термин «порошок» относится к диспергированным сухим твердым частицам.

Термин «агрегаты» относится к прессованному материалу на основе целлюлозы, имеющему целевой диапазон размеров частиц, например, прессованный материал подвергается измельчению, такому как помол или необязательно просеивание.

Не имеющими ограничительного характера примерами измельчения являются разрывание, дробление, помол, растирание и/или просеивание.

В одном варианте осуществления агрегаты представляют собой прессованную композицию волокон, подвергнутую измельчению, например помолу.

Термин «гемостатический» относится к способности снижать интенсивность кровотечения или останавливать кровотечение.

Результаты основаны на следующих данных исследования.

В соответствии с изобретением было обнаружено, что гемостатическая композиция в соответствии с изобретением показывает превосходные свойства по сравнению со сравнительной композицией мелких волокон на основе целлюлозы.

Было установлено, что добавление в мелкие волокна ОРЦ длинных волокон ОРЦ повышает сопротивление и когезионную прочность сгустков.

Эти результаты показывают, что смесь мелких волокон ОРЦ с длинными волокнами ОРЦ увеличивает когезионную прочность сгустка, образованного при контакте с кровью, по меньшей мере в 1,5 раза.

Термин «сопротивление геля или сгустка» относится к результатам модифицированного теста по Блуму (как показано на примере ниже), которые показывают, какое усилие требуется для того, чтобы металлический стержень проходил через гель при углублении на 7 мм при движении со скоростью 5 мм/мин. Это усилие отражает уровень сопротивления геля (чем больше усилие, тем больше сопротивление геля) и в свою очередь указывает на уровень когезионной прочности геля. Чем больше усилие, необходимое для устойчивого продвижения стержня, тем выше сопротивление геля.

В настоящем документе было обнаружено, что применение волокон ОРЦ с различными распределениями по размерам может увеличивать полученную структурную целостность сгустков, образованных после нанесения волокон и/или агрегатов.

Кроме того, было обнаружено, что добавление в короткие волокна ОРЦ длинных волокон ОРЦ может улучшить гемостатические способности композиции почти в два раза по сравнению с композицией из мелких волокон ОРЦ без добавок, содержащей длинные волокна в концентрации менее 25% от общей массы композиции.

Кроме того, добавление в мелкие волокна ОРЦ длинных волокон и всех трех следующих соединений - хлорида кальция, PS и ε-ACA - показало превосходные результаты. Положительный эффект наблюдался при определенном соотношении добавок.

Композиция, содержащая 80% мелких волокон ОРЦ с 10% длинных волокон ОРЦ и включающая 5% CaCl₂, 2,5% PS и 2,5% ε-ACA, показала превосходные гемостатические результаты - двукратное улучшение по сравнению с композицией, состоящей из мелких волокон ОРЦ.

Композиция в форме волокон и/или агрегатов, содержащая волокна окисленной регенерированной целлюлозы (ОРЦ), включая смесь волокон с различным распределением по размерам, показывает превосходные свойства по сравнению с композицией, содержащей волокна ОРЦ, полученной только из мелких волокон.

Без привязки к механизму, смесь волокон на основе целлюлозы, имеющих различное распределение по размерам и необязательно соединение (-ия), вносят свой вклад в структуру полученного на месте сгустка.

В одном аспекте изобретение относится к композиции в форме волокон и/или агрегатов, содержащей длинные и мелкие волокна на основе целлюлозы, причем длинные и мелкие волокна находятся в соотношении в диапазоне 5-25% масс. и 95-75% масс. соответственно, причем распределение по размерам для длинных волокон составляет: D90 более 177 мкм и D50 более 95 мкм, и при этом распределение по размерам для мелких волокон составляет: D90 менее 177 мкм и D50 менее 95 мкм.

В соответствующих случаях все диапазоны, описанные в настоящем документе, включают верхнее и нижнее предельные значения.

В некоторых вариантах осуществления длинные волокна находятся в концентрации в диапазоне от 5% до менее 25%.

Материалы на основе окисленной регенерированной целлюлозы, которые могут применяться в качестве исходного материала для получения гемостатической композиции настоящего изобретения, известны и доступны в продаже. Исходные материалы могут включать в себя рассасывающееся тканое или трикотажное полотно, либо нетканые материалы, содержащие окисленные полисахариды, в частности окисленную целлюлозу и ее нейтрализованные производные. Например, целлюлоза может представлять собой карбоксильно-окисленную или альдегидо-окисленную целлюлозу. Более предпочтительными вариантами могут быть окисленные регенерированные полисахариды, включая, без ограничений, окисленную регенерированную целлюлозу. Окисленная регенерированная целлюлоза предпочтительна из-за более высокой степени однородности в отличие от нерегенерированной целлюлозы. Регенерированная целлюлоза и подробное описание получения окисленной регенерированной целлюлозы представлены в патентах США № 3,364,200, 5,180,398 и 4,626,253, содержание каждого из которых включено в настоящий документ путем ссылки, как если бы оно было представлено в полном объеме.

Примеры предпочтительных материалов на основе целлюлозы, которые можно использовать, включают в себя, без ограничений, рассасывающийся адгезионный барьер INTERCEED®, рассасывающееся гемостатическое средство SURGICEL® Original, рассасывающееся гемостатическое средство SURGICEL® NU-KNIT®, рассасывающееся гемостатическое средство SURGICEL® FIBRILLAR™, рассасывающееся гемостатическое средство SURGICEL® SNoW™.

Гемостатические волокна и/или агрегаты настоящего изобретения могут функционировать как гемостатические средства либо в форме пасты, либо в форме порошка с отличными гемостатическими свойствами, а также хорошей прилегаемостью и текучестью по ткани. Кроме того, гемостатические волокна и/или агрегаты можно физически соединять и/или смешивать с другими агентами и биополимерами для улучшения адгезии к тканям, герметизирующих свойств и/или противоспаечных свойств.

В одном аспекте настоящего изобретения предлагается способ получения гемостатической композиции в форме волокон и/или агрегатов, имеющих преимущественные гемостатические, ранозаживляющие и другие терапевтические свойства.

Один возможный способ настоящего изобретения включает производство гемостатических волокон и/или агрегатов непосредственно из материалов на основе целлюлозы, таких как продукты на основе ОРЦ, например, описанные выше продукты.

В одном варианте осуществления длинные и короткие волокна получают путем измельчения материала на основе целлюлозы; длинные волокна можно получать за счет меньшего количества стадий помола и/или более короткого времени помола по сравнению с количеством стадий и/или временем, которые необходимы для получения мелких волокон.

В альтернативном варианте осуществления нарезанные куски ткани на основе целлюлозы непосредственно преобразуют в мелкие волокна в шаровой мельнице. Различное число циклов и/или различные периоды времени помола в шаровой мельнице приводят к образованию волокон различных размеров. Более крупные волокна, взятые на стадии помола в шаровой мельнице, можно собрать для применения в будущем с целью включения волокон различных размеров в конечную композицию (-и) в форме волокон и/или агрегатов.

Мелкие волокна на основе целлюлозы, полученные после помола, можно смешивать с ранее полученными длинными волокнами на основе целлюлозы и можно необязательно дополнительно смешивать с соединением (-ями) и/или добавками, например, для улучшения прилегания к тканям, герметизирующих свойств, гемостатических свойств и/или антиадгезионных свойств.

Смешивание длинных и мелких волокон можно осуществлять в соотношении в диапазоне 5-25% и 95-75% соответственно, причем D90 для длинных волокон составляет более 177 мкм и D50 более 95 мкм, и при этом D90 для мелких волокон составляет менее 177 мкм и D50 менее 95 мкм.

В полученную композицию гемостатических волокон можно дополнительно добавлять соединение.

В одном варианте осуществления способ получения гемостатической композиции начинается с материала на основе целлюлозы, такого как материал ОРЦ, например, рассасывающееся гемостатическое средство SURGICEL® Original. Перед подачей материала на лезвие, которое нарезает ткань на более мелкие фрагменты, целлюлозную ткань разрезали на секции шириной 2,54-5,08 см (1-2 дюйма). Нарезанные куски ткани ОРЦ впоследствии размалывают до волокон ОРЦ посредством двух последовательных процессов помола (молотового помола и помола с пневмоклассификацией). Волокна с различных стадий помола отбирают для применения в будущем с целью включения в конечную композицию (-ии) волокон различных размеров. Полученную композицию гемостатических волокон можно подвергать дополнительным стадиям для получения гемостатической композиции в форме агрегатов.

В некоторых вариантах осуществления термин «волокна различных размеров» относится к волокнам, имеющим различное распределение по размерам.

В одном варианте осуществления волокна на основе целлюлозы в композиции состоят из смеси волокон на основе целлюлозы с различным распределением по размерам. Смесь волокон на основе целлюлозы можно дополнительно смешивать с соединением (-ями). В одном варианте осуществления смесь можно подвергать процессу прессования и помола с образованием агрегатов. Агрегаты волокон на основе целлюлозы, необязательно с соединением (-ями), могут иметь размеры в диапазоне от 75 мкм до 420 мкм.

В одном варианте осуществления перед формированием агрегатов смесь волокон на основе целлюлозы, содержащую длинные и мелкие волокна, подвергают стадии увлажнения до уровня от около 11% до около 18%, от около 11% до около 16%, наиболее предпочтительно около 12-16% (при измерении с помощью галогенного анализатора влажности Ohaus) для последующей обработки. Эту стадию можно опустить, если к волокнам добавляют достаточное количество гигроскопического материала, такого как хлорид кальция. Достаточное количество гигроскопического соединения представляет собой, например, такое количество, которое обеспечивает увлажнение до уровня от около 11% до около 18% по результатам измерения с помощью анализатора влажности компании Ohaus. Полученные влажные смешанные волокна впоследствии подвергают прессованию.

Термин «гигроскопический материал» относится к веществу, способному притягивать и удерживать молекулы воды из окружающей среды, обычно при нормальной или комнатной температуре. Не имеющие ограничительного характера примеры включают хлорид цинка, хлорид кальция, гидроксид калия и гидроксид натрия.

В одном варианте осуществления образование агрегатов включает стадию процесса обезвоживания или сушки после прессования и до измельчения, а также включает стадию просеивания. Стадия измельчения и просеивания обычно позволяет получить целевые агрегаты с определенным размером. Следующими стадиями могут быть дозирование в аппликаторные устройства и впоследствии упаковка и стерилизация устройства.

В одном варианте осуществления влажность хранения перед дозированием в аппликаторы составляет менее около 2% масс. по завершении сушки для достижения менее 6% масс. содержания влаги в контролируемых условиях окружающей среды (повышение влажности на 0,3-0,6%/час на 500 грамм образца в зависимости от относительной влажности, как правило, при 25-55% относительной влажности). Один возможный способ получения гемостатической (-их) композиции (-ий) включает стадии, на которых: осуществляют разрезание и обрезку материала на основе целлюлозы; осуществляют измельчение, например, путем помола полученного материала; осуществляют стадию (-и) помола в пневмоклассификаторе для получения длинных и мелких волокон; смешивают волокна различных размеров и необязательно добавляют соединение (-ия).

Другой возможный способ получения гемостатической (-их) композиции (-ий) включает стадии, на которых: осуществляют разрезание и обрезку материала на основе целлюлозы; осуществляют измельчение, например, путем помола полученного материала; осуществляют стадию (-и) помола в пневмоклассификаторе для получения длинных и мелких волокон; смешивают волокна различных размеров и необязательно добавляют соединение (-ия); осуществляют увлажнение (стадию можно опустить в случае добавления достаточного количества гигроскопического материала [например, хлорида кальция]); осуществляют прессование; осуществляют обезвоживание или сушку; измельчают прессованный материала; осуществляют просеивание; необязательно осуществляют дозирование в емкости для хранения или в устройства для доставки, выполняют первичную упаковку и вторичную упаковку; и осуществляют необязательную стерилизацию.

Разрезание и обрезку можно осуществлять для разрезания и обрезки ткани на куски соответствующего размера, которые будут составлять приблизительно 2,54 см на 7,62 см или 5,08 см на 7,62 см (1 дюйм на 3 дюйма или 2 дюйма на 3 дюйма), хотя также можно использовать куски меньшего размера. Основными операциями, которые выполняют для разрезания и обрезки, являются разматывание рулона ткани, разрезание ткани на полосы, обрезка полос по размеру и доставка обрезанных кусков на первую стадию помола. Известен ряд обрезных и разрезных машин, которые доступны в продаже, таких как AZCO Model FTW-1000, поставляется компанией AZCO.

На первой стадии помола обработанные куски ткани на основе целлюлозы преобразуют из промежуточного крупного волокна, полученного на стадии разрезания и обрезки, в материал со значением D90 менее 452 мкм и значением D50 менее 218 мкм, при этом обеспечивали минимальное влияние на цветовой индекс и содержание водорастворимых веществ материала. В продаже доступен ряд машин для помола, таких как модели DASO6 и WJ-RS-D6A, производство компании Fitzpatrick, которые представляют собой машины для помола типа молотовой мельницы, оснащенные круглым экраном 497 мкм и набором лезвий, которые разрушают ткань до тех пор, пока она не пройдет через сито, с получением промежуточного крупного целлюлозного волокна. В примере способа обработки скорость мельницы может составлять около 7000 об/мин; температура обработки менее 80 °C; количество лезвий 8 (по 2 лопасти на каждом); тип лезвий 225, лезвия ударного типа; ориентация лезвия задается как «ударная».

Волокно, полученное на стадии помола, можно дополнительно измельчать при обеспечении минимального влияния на цветовой показатель и содержание водорастворимых веществ материала. Доступен ряд машин для второй стадии помола, таких как Air Classifier/F10 Quadro Fine Grind, производство компании Quadro.

Промежуточное крупное волокно, полученное на первой стадии помола, можно подавать с управляемой скоростью во вторую мельницу и пропускать через две камеры помола, разделенные измельчающим экраном. Материал можно протягивать через камеру помола с помощью воздушного нагнетателя. Промежуточное крупное волокно можно обрабатывать с помощью пневмоклассификатора несколько раз для получения желаемого размера. Кроме того, на этих стадиях помола можно отбирать волокна для применения в будущем с целью включения в конечные волокна и/или агрегаты волокон различных размеров. Промежуточные крупные волокна с первой стадии помола можно подавать на вторую мельницу с контролируемой скоростью. Промежуточные крупные волокна можно обрабатывать с помощью оборудования для пневмоклассификации три раза для получения желаемого размера. Кроме того, в некоторых экспериментах волокна, взятые из первого прогона через пневмоклассификатор, можно извлекать с целью включения в конечные агрегаты волокон различных размеров.

В одном варианте осуществления волокна, отобранные из первого и третьего прогонов через пневмоклассификатор, используют для получения улучшенной композиции в форме волокон/агрегатов.

На этой стадии (-ях) можно применять пневмоклассификатор Quadro Air Classifier F10 со скоростью помола 8400 об/мин, скоростью вращения вентилятора 1800 об/мин и 3 проходами. В таком варианте осуществления после одного прохода полученные длинные волокна могут иметь значение D90 менее 350 мкм и значение D50 менее 167 мкм. После 3 проходов полученные мелкие волокна могут иметь значение D90 менее 177 мкм и значение D50 менее 95 мкм.

Вместо двух стадий помола, как описано выше, мелкое волокно можно также получать в одну стадию с помощью помола в шаровой мельнице.

В альтернативном варианте осуществления помола в шаровой мельнице 50 г предварительно обрезанной ткани на основе целлюлозы [например, ткани ОРЦ] (5 × 5 см или 2 × 2 дюйма) измельчают путем помола в шаровой мельнице с использованием 12 Zirconia высокой плотности (диоксид циркония ZrO2, 20 мм в диаметре; Glen Mills Inc., г. Клифтон, штат Нью-Джерси, США), поместив шарики и образцы в дробильный сосуд объемом 500 мл. Сосуд закрепляли на опорах с зажимами и впоследствии уравновешивали на планетарной шаровой мельнице PM100; производство компании Retsch, Inc., г. Ньютаун, штат Пенсильвания, США). Впоследствии помол выполняли двунаправленно при 450 об/мин в течение 20 минут. Используя различные параметры помола, такие как время, можно получить волокна различных размеров, которые можно использовать в будущем для включения в смесь, что может привести к образованию улучшенных агрегатов.

В одном варианте осуществления камера влажности, приемлемая для стадии увлажнения, доступна в продаже как Model CEO-916-4-B-WF4-QS, и производится компанией Thermal Product Solutions. Увлажнение воздуха в камере достигается посредством впрыска паров воды. Можно использовать типичную устойчивую температуру 25 °C, тогда как уровень влажности можно циклировать в диапазоне от 75% до 85% с предпочтительным целевым значением 85% влажности воздуха. Время увлажнения или время пребывания материала в камере влажности может находиться в диапазоне от нескольких часов до нескольких дней в зависимости от количества материала и рециркуляции воздуха. В типичном и предпочтительном цикле материал будет иметь время пребывания 12-13 часов для около 3000 грамм целлюлозного мелкого волокна, расположенного в нескольких лотках, которое подвергали воздействию 85% относительной влажности, и для целевого содержания влаги волокон после увлажнения на уровне 12%.

В одном варианте осуществления перед прессованием мелкие волокна смешивают с длинными волокнами и необязательно с соединениями и/или добавками.

Прессованный материал можно подвергать помолу и просеиванию и собирать агрегаты с размерами в диапазоне 75-420 мкм.

Оборудование для прессования известно и доступно в продаже. Волокна могут подвергаться прессованию с помощью оборудования для агрегирования или любых других методик прессования, известных в данной области. К примерам устройств для прессования относятся Chilsonator IRR220-L1A компании Fitzpatrick с ручным просеиванием Retsch AS200 Screener и Chilsonator CCS220/M3B & RV-M5A компании Fitzpatrick с устройством Screener Sweco Vibro-energy, интегрированным в M5A. Процесс прессования можно выполнять с использованием двух отдельных подсистем, связанных общей электрической системой. Например, первая подсистема (валковый уплотнитель: основной модуль) может представлять собой валковый уплотнитель Chilsonator CCS220 компании Fitzpatrick и мельницу M3B для предварительного размельчения прессованного материала, тогда как вторая подсистема (валковый уплотнитель: модуль вторичного помола) представляет собой мельницу M5A для конечного помола с сортировщиком Sweco или Retch для отделения с получением агрегатов желаемого размера.

Влагу можно удалить после прессования на стадии обезвоживания или сушки. Предпочтительно стадия обезвоживания или сушки не оказывает значительного влияния на любые другие показатели качества продукта, такие как цвет, объемная плотность, содержание водорастворимых веществ и размер. Как правило, волокна можно высушивать в одной партии с использованием стандартной установки с псевдоожиженным воздушным слоем.

Оборудование для обезвоживания известно и доступно в продаже. Пример настольной установки с псевдоожиженным воздушным слоем - установка производства компании Retsch (TG-200) вместимостью 6 л. Альтернативно можно также использовать установки с псевдоожиженным воздушным слоем модели № 0002 производства компании Fluid Air (Aurora, IL).

В некоторых вариантах осуществления изобретения в состав композиций в соответствии с изобретением дополнительно добавляют/включают один или более полисахаридов, имеющих положительные заряды. Не имеющими ограничительного характера примерами полисахаридов, несущих положительные заряды, являются хитозан и катионная гуаровая камедь.

В некоторых вариантах осуществления изобретения в состав композиций в соответствии с изобретением дополнительно добавляют/включают один или более пептидов, имеющих положительные заряды. Не имеющими ограничительного характера примерами таких пептидов являются абецин, апидацины, профенин, индолицидин, мелиттин, магейнины, LL-37, коровий лактоферрицин, человеческий лактоферрицин, цекропин A1, буфорин II, танатин, полифемузин 1, магейнин 2, человеческий β-дефензин-2, дефензин почек кролика. Пенетратин/Antennapedia, TAT, SynB1, SynB3, PTD-4, PTD-5,FHV Coat-(35-49), BMV Gag-(7-25), HTLV-II Rex-(4-16), D-Tat, R9-Tat Transportan, MAP, SBP, FBP, MPG, MPG(ΔNLS), Pep-1, Pep-2.

В дополнительном аспекте изобретения предложен способ формирования геля, согласно которому осуществляют контакт гемостатической композиции в соответствии с изобретением с кровью с формированием таким образом геля.

Термин «кровь» включает фракции крови, такие как плазма.

Термин «гель» относится к вязкому и/или твердообразному материалу, который может обладать свойствами от мягкого и пластичного до твердого и жесткого. Гель может представлять собой гидрогель.

Как правило, гидрогель представляет собой сеть полимерных цепей, которые являются гидрофильными. Гидрогели могут содержать более 90% воды и включать в себя полимерные сети.

Гель может быть сгустком, представляющим собой густую массу коагулированной жидкости, особенно крови.

Термин «осуществляют контакт» используется в самом широком смысле и относится, например, к объединяющему действию любого типа, в результате которого происходит сближение гемостатической композиции с кровью, достаточное для образования сгустка или геля.

В одном варианте осуществления предлагается способ образования геля, имеющего сопротивление, в 1,5 или более раз превышающее сопротивление геля, который образуется при контакте сравнительной композиции с кровью, и/или образования геля, имеющего гемостатическую способность, примерно в два раза или более превышающую гемостатическую способность геля, который образуется при контакте сравнительной композиции с кровью, где сравнительная композиция содержит мелкие волокна на основе целлюлозы и не содержит длинных волокон на основе целлюлозы.

В дополнительном аспекте изобретения предложен гель, получаемый способом изобретения.

В дополнительном аспекте изобретения предложен набор, содержащий емкость, включающую в себя гемостатическую композицию изобретения и необязательно аппликатор или носитель и необязательно инструкцию по применению.

Термин «носитель» относится к физической матрице, содержащей и/или вмещающей гемостатическую композицию. Примеры носителей включают в себя, без ограничений, прокладки для внутреннего и/или наружного применения, такие как прокладки на основе целлюлозы, прокладки на основе коллагена; имплантаты, такие как ортодонтический и ортопедический имплантаты; текучие герметики и/или гемостатические средства, такие как SURGIFOAM®, EVICEL®.

В одном варианте осуществления гемостатическую композицию в форме волокон и/или агрегатов в соответствии с настоящим изобретением получают из волоконных материалов на основе окисленной целлюлозы (ОЦ) или из предварительно измельченных материалов на основе окисленной целлюлозы (ОЦ).

Полученная гемостатическая композиция в форме волокон и/или агрегатов может применяться для местного нанесения в различных хирургических и ранозаживляющих процедурах, таких как антибактериальная обработка, гемостаз, противоспаечные барьеры, герметизация и/или сведение к минимуму или предотвращение утечек, например анастомозных утечек, таких как утечки, возникающие при операции аортокоронарного шунтирования (АКШ).

Композиция может применяться для остановки кровотечения в труднодоступных областях, например, во время лапароскопических операций, на участках анастомоза, таких как анастомоз АКШ и/или артериовенозный анастомоз, при выполнении процедур, в которых приложение давления является неуместным, например, в спинальной хирургии или нейрохирургии.

У пациентов, подвергающихся операции аортокоронарного шунтирования (АКШ), могут возникать анастомозные утечки во время процедуры. Многие из этих утечек устраняются во время операции с помощью дополнительных шовных нитей или различных гемостатических средств. Остановка этих утечек во время операции и профилактика их развития в послеоперационный период позволят хирургам быть более уверенными в том, что у их пациентов не будут возникать послеоперационные анастомозные утечки. Кровотечение после процедур АКШ, требующее переливания крови или повторной операции, связано со значительным увеличением заболеваемости и смертности. В 20% случаев конкретное место кровотечения можно определить во время повторной операции. Типичные источники хирургического кровотечения включают в себя участки канюляции, проксимальный и дистальный участки анастомоза и ветви внутренних грудных артерий и венозные трансплантаты. Согласно данным из литературы, для 2-3% пациентов с АКШ требуется рестернотомия по поводу кровотечения, и у до 20% возникает чрезмерное послеоперационное кровотечение, требующее переливания крови.

Гемостатическая (-ие) композиция (-и) может (могут) иметь одно или более из следующих преимуществ по сравнению с несколькими известными продуктами:

1 - может (могут) останавливать кровотечение, например, по линии сосудистого шва на крупных кровеносных сосудах и, следовательно, может (могут) значительно уменьшать и останавливать кровотечение из линий сосудистых швов в отличие от нескольких известных продуктов, обладающих ограниченной эффективностью в достижении гемостаза на кровеносных сосудах;

2 - может (могут) обеспечивать достижение гемостаза без необходимости приложения давления. В случае нескольких известных продуктов для достижения гемостаза требуется приложение давления (например, ручная компрессия с марлей);

3 - активируется (-ются) в крови. При активировании влагой гемостатические волокна и/или агрегаты обретают структуру (например, в форме сгустка/геля) и могут обеспечивать достижение гемостаза. Несколько известных продуктов обладают предварительно сформированной структурной целостностью;

4 - может (могут) оседать в крови, не уносится (-ятся) легко и может (могут) обеспечивать достижение гемостаза. Несколько известных продуктов имеют ограниченную эффективность во влажной среде;

5 - может (могут) прилипать к месту кровотечения, но все же обратимым образом, т. е. прилипает (-ют) к месту кровотечения и выдерживает (-ют) промывание, однако ее (их) можно соскабливать для удаления и получения доступа при необходимости хирургической коррекции. Несколько известных продуктов имеют либо ограниченную способность прилипать во влажной среде, либо их трудно удалять после нанесения.

Содержание всех цитируемых публикаций полностью включено в настоящий документ путем ссылки.

ПРИМЕРЫ

МАТЕРИАЛ И СПОСОБЫ

Таблица 1A. Волокна окисленной регенерированной целлюлозы (ОРЦ)

Волокна окисленной регенерированной целлюлозы (ОРЦ)	Категория
Длинные волокна ОРЦ Распределение: D90 более 177 мкм и D50 более 95 мкм*	Волокна на основе целлюлозы
Мелкие волокна ОРЦ Распределение: D90 менее 177 мкм и D50 менее 95 мкм*	Волокна на основе целлюлозы

* См. ниже подробное описание получения.

Таблица 1B. Соединения, используемые для добавления в волокна ОРЦ

Соединение	Категория	Производитель	Номер в каталоге
Дигидрат хлорида кальция	Соль двухвалентного катиона	Merck	1.42000.5000
Сульфат протамина (PS)	Соль протамина	Sigma	P3369-100G
6-Аминокапроновая кислота (ε-аминокапроновая кислота=эпсилон-аминокапроновая кислота=ε-ACA)	Омега-аминокарбоновая кислота	Sigma	A204-100G

В таблице 2 приведено процентное содержание (масс. в расчете на общую массу композиции) катионов в CaCl₂, использованных в экспериментах.

Таблица 2. % (масс.) эквивалента концентрации катиона в CaCl₂

Количество указанной соли (масс.)	Количество катионов кальция (масс.)
3,0% CaCl2	0,818%
3,5% CaCl2	0,954%
5,0% CaCl2	1,363%
6,0% CaCl2	1,636%
6,5% CaCl2	1,768%

Получение волокон окисленной регенерированной целлюлозы (ОРЦ)

Процесс изготовления волокон ОРЦ начинали с материала ОРЦ - рассасывающегося гемостатического средства SURGICEL® Original. Перед подачей материала на лезвие, которое нарезает ткань на более мелкие фрагменты, материал ОРЦ разрезали на секции шириной 2,54-5,08 см (1-2 дюйма). Нарезанные куски ткани ОРЦ впоследствии размалывали до мелких волокон ОРЦ посредством двух последовательных процессов помола (молотового помола и помола с пневмоклассификацией). Волокна с различных стадий помола отбирали для будущего применения с целью включения в конечные агрегаты волокон различных размеров.

Более конкретно, процесс изготовления волокон содержал стадии, на которых: разрезали и обрезали ткань SURGICEL® Original; измельчали полученный материал путем помола на молотковой мельнице; осуществляют стадию (-и) помола в пневмоклассификаторе для получения длинных и мелких волокон; и необязательно смешивали волокна различных размеров.

Нарезание и разрезание осуществляли для разрезания и обрезки ткани на фрагменты подходящих размеров, которые составляют приблизительно 2,54 см на 7,62 см (1 дюйм на 3 дюйма). Основными операциями, которые выполняли для разрезания и обрезки, являлись разматывание рулона ткани, разрезание ткани на полосы, обрезка полос по размеру и доставка обрезанных кусков на первую стадию помола.

На первой стадии помола обработанные куски ткани на основе целлюлозы преобразовали из промежуточного крупного волокна, полученного на стадии разрезания и обрезки, в материал, имеющий значение D90 менее 452 мкм и значение D50 менее 218 мкм, при этом обеспечивали минимальное влияние на цветовой индекс и содержание водорастворимых веществ материала. Для помола на данной стадии использовали мельницу молоткового типа модели WJ-RS-D6A производства компании Fitzpatrick. Молотковая мельница была оснащена круглым решетом с отверстиями 497 мкм и набором лезвий, которые разрушают ткань до тех пор, пока она не пройдет через решето, с получением крупных волокон на основе целлюлозы. Параметры помола были следующими: скорость мельницы приблизительно 7000 об/мин; температура обработки менее 80 °C; количество лезвий 8 (по 2 лопасти на каждом); тип лезвий 225, лезвия ударного типа; ориентация лезвия задается как «ударная».

Промежуточные крупные волокна с первой стадии помола подавали на вторую мельницу с контролируемой скоростью. Промежуточное крупное волокно можно было обрабатывать с помощью оборудования для пневмоклассификации три раза для получения желаемого размера. Кроме того, в некоторых экспериментах волокна, взятые из первого прогона через пневмоклассификатор, извлекали с целью включения в конечные агрегаты волокон различных размеров.

На этой стадии (-ях) применяли пневмоклассификатор Quadro Air Classifier F10 со скоростью помола 8400 об/мин, скоростью вращения вентилятора 1800 об/мин и 3 проходами. После одного прохода полученные длинные волокна ОРЦ имели значение D90 более 177 мкм и D50 более 95 мкм. После 3 проходов полученные мелкие волокна ОРЦ имели значение D90 менее 177 мкм и значение D50 менее 95 мкм.

Получение порошкообразной композиции

Все порошки взвешивали с помощью аналитических весов в условиях контролируемой влажности. На протяжении всего процесса получения порошка относительная влажность не превышала 20%. Все порошки состояли из мелких волокон ОРЦ, имеющих значение D90 менее 177 мкм и D50 менее 95 мкм, полученных в соответствии с описанием выше (таблица 1A), с добавлением длинных волокон ОРЦ, имеющих значение D90 менее 350 мкм и D50 менее 167 мкм, в соотношениях, указанных в каждом примере. Во все порошкообразные композиции в примере 2 также добавляли 5% CaCl₂, 2,5% PS и 2,5% ε-ACA. Например, в примере 2 и на Фиг. 2 композиция под названием «10% L-ORC» состояла из 80% мелких волокон ОРЦ, 10% длинных волокон ОРЦ, 5% CaCl₂, 2,5% PS и 2,5% ε-ACA. Все значения процентного содержания указаны в % масс. от массы всей композиции.

Все соединения, описанные в таблице 1B, были представлены в форме порошка.

Каждую порошковую смесь переносили в ступку с пестиком и тщательно перемешивали до получения равномерного/однородного распределения частиц порошка в композиции. Для сведения к минимуму поглощения влаги порошкообразные композиции хранили во флаконах и герметизировали пластичной парафиновой пленкой (PARAFILM®).

Получение агрегатов

Получение агрегатов/гранул, содержащих более высокое отношение массы к объему, проводили в две стадии:

I - объемное прессование (капсулирование); и

II - сушка капсул, помол/растирание и просеивание.

См. подробное описание стадий I и II ниже.

Прессование порошка

Прессование проводили с помощью ручного гидравлического пресса (модель Atlas GS15011 13608 килограмм (15 тонн) компании Specac) и приемлемой пресс-формы для гранул с возможностью извлечения, диаметр пресс-формы для гранул составлял 10 мм (Specac GS03100). Около 300 мг порошкообразной композиции (полученной в соответствии с описанием выше) загружали в пресс-форму для гранул до высоты приблизительно 1,5-2,0 см. На следующей стадии над порошком устанавливали металлический стержень (который представляет собой деталь оборудования ручного гидравлического пресса) и использовали для достижения давления 3629 килограмм (около 1179 килограмм на см²) (4 тонны (около 1,3 тонны на см²)) с помощью ручного гидравлического пресса. В результате этой стадии формировали капсулу (прессованный порошок) диаметром 10 мм и высотой приблизительно 0,3-0,5 см. Капсулу высвобождали из пресс-формы для гранул и дробили на половины с помощью ступки и пестика для увеличения площади поверхности для последующей стадии сушки.

Сушка капсул, помол/растирание и просеивание

Половины капсул сушили в вакуумной печи (вакуумная печь модели 05017-05 компании Cole-Parmer) при 37°C в течение приблизительно 16 часов для удаления любой избыточной влаги (и достижения влажности менее 5% масс.) и разрешения помола капсул. Высушенные половины капсулы растирали/мололи при 20 000 об/мин в течение 30 секунд с помощью мельницы Tube Mill control 9737790 компании IKA® Works, Inc. На следующей стадии порошок энергично просеивали с помощью встряхивателя для сит компании MRC (производитель сит) (модель LS-200, на уровне интенсивности 2) в течение 1 минуты через набор из 2 сит; одно сито с размером пор 420 мкм, а другое - с размером пор 75 мкм. Агрегаты, оставшиеся между двумя ситами, собирали и хранили при комнатной температуре (20-27 °C) в плотно закрытом флаконе, запечатанном пластичной парафиновой пленкой до применения. В конце этой стадии все компоненты, содержащиеся в каждой конечной композиции в форме гранул/агрегатов, были однородно распределены.

Композиции в примере 1 находились в форме порошка, а композиции в примерах 2 и 3 находились в форме агрегатов.

Получение крови

Кровь, используемую в эксперименте 1, собирали из умерщвленных свиней подрядной исследовательской организацией (КИО) Lahav и доставляли в охлажденных емкостях (4 °C). После сбора крови в расчете на литр крови добавляли 5000 МЕ гепарина [гепарин-натрий Fresenius раствор для инъекций 5000 МЕ/1 мл; производитель: BODENE (PTY) LTD, коммерческое обозначение Intramed; Номер в каталоге 9207910LAB].

Для предотвращения свертывания по прибытии добавляли дополнительное количество гепарина (5000 МЕ на 1 литр крови). Гепаринизированную кровь осторожно перемешивали путем переворачивания флакона несколько раз. На следующей стадии для удаления остаточных сгустков гепаринизированную кровь фильтровали через полипропиленовый шприцевой фильтр 20 мкм (SVL25D20HQSA25 компании Entegris) и собирали в полипропиленовую емкость (для предотвращения свертывания крови под воздействием стекла). Отфильтрованную гепаринизированную кровь хранили при температуре 4°C до применения.

Тест по Блуму

Тест по Блуму представляет собой тест, используемый для измерения когезионной прочности геля или желатина. Когезионная прочность представляет собой сцепление между молекулами исследуемого материала/композиции. В целом тест по Блуму относится к определению усилия (в граммах), которое необходимо приложить к свободной поверхности 6,67% желатинового геля (полученного путем растворения 7,5 г желатина в 105 г воды) посредством цилиндрического поршня (диаметром 12,7 мм), чтобы сделать углубление 4 мм. Гель для теста обычно образуют в стеклянной посуде следующих размеров: емкость 150 мл, внутренний диаметр 59 мм и высота 85 мм. Скорость опускания поршня задается на уровне 30 мм/мин (см. тест по Блуму, описанный в US1540979).

В приведенных ниже примерах модифицированный тест по Блуму проводили для испытания когезионной прочности сгустков, образованных при смешивании с кровью различных исследуемых порошкообразных композиций. Этот параметр оценивали как признак потенциальной гемостатической эффективности каждой исследуемой композиции. Как правило, более высокая сила сопротивления (высокое значение в тесте по Блуму) коррелирует с более высокой когезионной прочностью и дает основания предполагать, что композиция обладает высокой гемостатической эффективностью; низкая сила сопротивления коррелирует с низкой когезионной прочностью и дает основания предполагать, что композиция имеет низкую гемостатическую эффективность. Когезионную прочность, обусловленную каждой исследуемой порошкообразной композицией, оценивали путем сравнения с волокнами (мелкими) ОРЦ без добавок. Результаты представлены как кратное увеличение силы сопротивления относительно волокон (мелких) ОРЦ без добавок.

Модифицированный тест по Блуму проводили следующим образом.

1) 300 мг каждой исследуемой порошкообразной композиции взвешивали в пробирке объемом 7 мл (внутренний диаметр: 15 мм, высота: 50 мм).

2) В каждую порошкообразную композицию добавляли 2,5 мл крови (полученной в соответствии с описанием выше в разделе «Получение крови»).

3) Пробирку энергично встряхивали при 3200 об/мин до тех пор, пока сухой порошок не становился визуально неразличимым, и смесь крови и порошкообразной композиции выдерживали в течение 3 минут для образования сгустков.

4) Для измерения когезионной прочности флакон помещали в прибор Lloyd LF plus и вводили во флакон металлический стержень [1,27 см (0,5 дюйма)] с постоянной заданной скоростью опускания: 5 мм/минуту. Сила сопротивления сгустка перемещению металлического стержня в точке углубления в сгусток на 7 мм измеряли в мегапаскалях (МПа). Тест проводили при комнатной температуре.

Доклиническая модель для наложения швов

Для моделирования физиологических состояний использовали модель экстракорпорального кровообращения (CPB) с пульсирующим кровотоком. Модель описана в работе:

Sergeant, P., Kocharian, R., Patel, B., Pfefferkorn, M., & Matonick, J. (2016). Needle-to-suture ratio, as well as suture material, impacts needle-hole bleeding in vascular anastomoses. Interactive CardioVascular and Thoracic Surgery, 22(6), 813-816. doi:10.1093/icvts/ivw042.

Вкратце, в модели экстракорпорального кровообращения с пульсирующим кровотоком использовали ряд насосов и камер для создания, контроля и поддержания кровяного давления во всей системе. Модель состоит из резервуара для фильтрации крови, поступающей в свиную сонную артерию и возвращающейся из нее, компьютерной системы сбора данных, оксигенатора и теплообменника. Для точной регулировки объемного расхода крови и контроля давления доступны приспособления для регулирования сопротивления потоку и разбиения объема корректировки.

Кровопотери из шва, наложенного на свиную сонную артерию, собирали и взвешивали для определения скорости утечки. Скорость утечки рассчитывали и регистрировали как объем крови, собранной в течение определенного периода времени.

Для моделирования физиологических состояний использовали следующие параметры:

давление 120/80 мм рт. ст.;

частота пульса 72/мин;

температура крови 33-35 °C.

10 000 МЕ гепарина добавляли к 1 л донорской свиной крови и титровали сульфатом протамина 10 мг/мл для настройки активированного времени свертывания (ACT) на приблизительно 369 секунд. ACT измеряли с помощью портативного ручного устройства VetScan i-STAT (компания Abbott Point of Care) и целитового картриджа ACT (Abbott Poing of Care, № компонента: 600-9006-10).

Свиную сонную артерию изолировали от окружающей ткани и устанавливали на систему. Для крепления ткани к фитингам использовали зажимы для трубок. Ограничивали поток крови с обеих сторон сонной артерии и накладывали швы на сонную артерию по простой непрерывной схеме с помощью шовного материала 6-0 PROLENE Suture (8806H) и иглы BV-1. В качестве базисной линии измеряли массу кровопотери в течение 2 минут.

На участки швов наносили агрегаты и выдерживали 4 минуты по завершении нанесения. Снимали ограничение и измеряли массу кровопотери в течение 2 минут.

Модель биопсии печени in vivo

Взрослую свиноматку массой около 60 кг не кормили в течение 24 часов перед хирургическим вмешательством. Животное помещали под наркоз с помощью 1150-1400 мг кетамина, 115-140 мг ксилазина, 7,5 мг мидазолама. Наркоз поддерживали с помощью изофлурана и вскрывали брюшную полость для доступа к печени. На протяжении всей процедуры хирургического вмешательства осуществляли непрерывный мониторинг среднего артериального кровяного давления, температуры тела и частоты сердечных сокращений. Эксперимент прекращали, когда среднее артериальное кровяное давление упало ниже 60 мм рт.ст.

На доле печени производили биопсию диаметром 4 мм x глубиной 2 мм и вырезали образец с помощью хирургических ножниц. Кровотечение на участке биопсии оставляли на 30 секунд и визуально оценивали интенсивность кровотечения по шкале от 0 до 5; при этом отсутствие кровотечения соответствовало значению 0, а интенсивное кровотечение соответствовало значению 5. Впоследствии участок биопсии протирали чистой марлей для удаления излишка крови и в полость биопсии засыпали 100 мг исследуемой композиции в форме агрегатов (например, композиция в форме агрегатов с 5,0% CaCl₂, 2,5% PS и 2,5% ε-ACA эквивалентна: 40 мг/см2 CaCl2, 20 мг/см2 PS, 20 мг/см2 ε-ACA).

Общее количество 100 мг конечной композиции наносят на круговой участок биопсии диаметром 0,4 см. Следовательно, 100 мг композиции наносили на площадь поверхности биопсии, которая равна π * (0,2 см)² - около 0,126 см². Это значит, что использовали 793,65 мг/см² (в результате вычисления: 100 мг/0,126 см²) конечной композиции.

CaCl₂ используют в концентрации 5% конечной композиции, поэтому 793,65 * 0,05 равно около 40 мг/см².

PS используют в концентрации 2,5% конечной композиции, поэтому 793,65 * 0,025 равно около 20 мг/см².

ε-ACA используют в концентрации 2,5% конечной композиции, поэтому 793,65 * 0,025 равно около 20 мг/см².

На композицию вручную прикладывали небольшое давление с помощью чистой марли в течение 1 минуты. Кровотечение отслеживали в течение 4 минут, после чего интенсивность кровотечения вновь оценивали по шкале от 0 до 5. Результаты представлены в процентах от коэффициента полного гемостаза, полученного из всех параллельных опытов.

Пример 1. Влияние добавления в мелкие волокна ОРЦ длинных волокон ОРЦ на когезионную прочность образованного сгустка

Целью данного примера было изучение когезионной прочности, обусловленной добавлением в мелкие волокна ОРЦ длинных волокон ОРЦ. Добавление проводили путем добавления к мелким волокнам ОРЦ возрастающих количеств длинных волокон ОРЦ. Влияние оценивали с помощью модифицированного теста по Блуму, проводимого в соответствии с описанием выше. Мелкие волокна ОРЦ смешивали с длинными волокнами ОРЦ (масс.) в следующих соотношениях: 100: 0, 90: 10, 80: 20 и 70: 30 соответственно.

На Фиг. 1 представлена столбиковая диаграмма, показывающая кратное увеличение силы сопротивления/когезионной прочности, полученное для исследуемых композиций по сравнению с мелкими волокнами ОРЦ без добавок.

Результаты модифицированного теста по Блуму показывают, какое усилие требуется для того, чтобы металлический стержень проходил через гель, образованный при контакте исследуемой композиции с кровью, при углублении на 7 мм при движении со скоростью 5 мм/мин. Это усилие отражает уровень сопротивления геля (чем больше усилие, тем больше сопротивление геля) и в свою очередь указывает на уровень когезионной прочности геля. Когезионная прочность представляет собой прочность, с которой молекулы композиции связаны вместе. Чем больше усилие, необходимое для устойчивого движения стержня, тем выше сопротивление геля и тем выше когезионная прочность.

Результаты представлены как кратное увеличение сопротивления сгустка относительно мелких волокон ОРЦ без добавок.

В целом можно видеть, что добавление в мелкие волокна ОРЦ длинных волокон ОРЦ повышало сопротивление и когезионную прочность сгустков.

Результаты показывают, что смесь мелких волокон ОРЦ с длинными волокнами ОРЦ увеличивало когезионную прочность сгустка по меньшей мере в 1,5 раза.

Пример 2. Гемостатическая эффективность добавления в мелкие волокна ОРЦ длинных волокон ОРЦ в модели ex vivo

Результаты, полученные в примере 1, показали, что добавление в мелкие волокна ОРЦ длинных волокон ОРЦ повышает когезионную прочность сгустка, образованного при смешивании волокон с кровью.

Чтобы изучить, способна ли добавка, повысившая когезионную прочность, также улучшить гемостатические свойства, 3 композиции, содержащие следующие количества длинных волокон ОРЦ: 0%, 25% или 10% от общей массы композиции, причем все они включали в себя 5% CaCl₂, 2,5% PS, 2,5% ε-ACA, испытывали в модели для наложения швов ex vivo.

Результаты, представленные на Фиг. 2, демонстрируют почти двукратное увеличение гемостатической эффективности, полученное при добавлении в мелкие волокна ОРЦ 10% длинных волокон ОРЦ. При использовании 25% длинных волокон ОРЦ можно наблюдать положительную тенденцию относительно мелких волокон ОРЦ без добавок.

Без привязки к механизму, представляется, что длинные волокна обеспечивают несущую основу для образованного сгустка, которая улучшает структурную целостность сгустков, таким образом снижая риски утечек крови через сгусток и повышая гемостатическую эффективность.

Пример 3. Влияние добавления в мелкие волокна длинных волокон и соединений на гемостатическую эффективность, определенную в испытаниях in vivo

В следующем примере исследуется гемостатический эффект добавления соединений и волокон в условиях in vivo. Результаты получали из различных доклинических экспериментов, проведенных на свиноматке с использованием модели биопсии печени in vivo в соответствии с описанием выше. Результаты каждого эксперимента представлены в разных таблицах - таблицах 3, 4 и 5. В данном эксперименте испытывали различные композиции в форме агрегатов. Исследуемые композиции в форме агрегатов представляли собой волокна ОРЦ с добавлением или без добавления соединений и длинных волокон ОРЦ, концентрации этих соединений и волокон ОРЦ указаны в таблицах ниже. Агрегаты с добавками включали в себя комбинации волокон ОРЦ, содержащие 10,0% (масс. от массы конечной смеси) длинных волокон ОРЦ (см. распределение по размерам в таблице 1A) и 77,5-85,0% мелких волокон ОРЦ.

В таблице приведены показатели успешности полной остановки кровотечения/полного гемостаза. В каждом эксперименте агрегаты мелких волокон ОРЦ (без каких-либо добавок) выполняли функцию базового контрольного образца для изучения гемостатической эффективности добавления соединений и длинных волокон ОРЦ.

Таблицы 3, 4 и 5. Коэффициент полного гемостаза, полученный после нанесения композиций в форме агрегатов в модели биопсии печени in vivo (число параллельных опытов для каждой исследуемой композиции ≥ 3)

Соотношение компонентов композиции	Коэффициент полного гемостаза
Мелкие волокна ОРЦ	25%
2,5: 95 PS: ОРЦ 2,5: 95 ε-ACA: ОРЦ	0%
5: 92,5 CaCl2: ОРЦ 2,5: 92,5 ε-ACA: ОРЦ	25%
5: 92,5 CaCl2: ОРЦ 2,5: 92,5 PS: ОРЦ	0%
5: 90 CaCl2: ОРЦ 2,5: 90 PS: ОРЦ 2,5: 90 ε-ACA: ОРЦ	75%
Соотношение компонентов композиции	Коэффициент полного гемостаза
Мелкие волокна ОРЦ	0%
3,5: 91,5 CaCl2: ОРЦ 2,5: 91,5 PS: ОРЦ 2,5: 91,5 ε-ACA: ОРЦ	0%
6,5: 88,5 CaCl2: ОРЦ 2,5: 88,5 PS: ОРЦ 2,5: 88,5 ε-ACA: ОРЦ	37,5%

Соотношение компонентов композиции	Коэффициент полного гемостаза
Мелкие волокна ОРЦ	25%
5: 91,5 CaCl2: ОРЦ 1: 91,5 PS: ОРЦ 2,5: 91,5 ε-ACA: ОРЦ	20%
5: 90 CaCl2: ОРЦ 2,5: 90 PS: ОРЦ 2,5: 90 ε-ACA: ОРЦ	50%
5: 87,5 CaCl2: ОРЦ 5: 87,5 PS: ОРЦ 2,5: 87,5 ε-ACA: ОРЦ	40%
5: 91,5 CaCl2: ОРЦ 2,5: 91,5 PS: ОРЦ 1: 91,5 ε-ACA: ОРЦ	20%
5: 87,5 CaCl2: ОРЦ 2,5: 87,5 PS: ОРЦ 5: 87,5 ε-ACA: ОРЦ	60%

В данной модели in vivo и при исследуемых условиях (таблицы 3-5) превосходные результаты наблюдались при добавлении в мелкие волокна ОРЦ длинных волокон и всех трех соединений (хлорид кальция, PS и ε-ACA). Положительный эффект наблюдался при определенном соотношении добавок.

Результаты в примере 2 указывают на то, что имело место улучшение гемостаза за счет добавления 10% длинных волокон и включению 5% CaCl₂, 2,5% PS и 2,5% ε-ACA.

В этом эксперименте также показано, что другие соотношения оказывают негативное влияние и снижают эффективность гемостаза.

После ознакомления с иллюстрацией и описанием различных версий в настоящем описании специалист в данной области может выполнить дополнительные адаптации способов и систем, описанных в настоящем документе, путем подходящих модификаций без отступления от объема настоящего изобретения. В настоящем документе упомянуты некоторые из таких потенциальных модификаций, а другие будут очевидны специалистам в данной области. Например, описанные выше примеры, версии, геометрия, материалы, размеры, коэффициенты, стадии и т. п. являются иллюстративными и не являются необходимыми. Соответственно, объем настоящего изобретения следует рассматривать в свете представленной ниже формулы изобретения, а также следует понимать, что он не ограничен подробной информацией о конструкции и эксплуатации, показанной и представленной в описании и на чертежах.

1. Гемостатическая композиция в форме волокон и/или агрегатов, содержащая длинные и мелкие волокна на основе целлюлозы, причем длинные и мелкие волокна находятся в соотношении в диапазоне 5-25% масс. и 95-75% масс. соответственно общей массы композиции, причем распределение по размерам для длинных волокон составляет: D90 от более 177 мкм до менее 350 мкм и D50 от более 95 мкм до менее 167 мкм, и при этом распределение по размерам для мелких волокон составляет: D90 менее 177 мкм и D50 менее 95 мкм.

2. Гемостатическая композиция по п. 1, дополнительно содержащая по меньшей мере одно соединение, выбранное из группы, состоящей из:

a) двухвалентного катиона, выбранного из цинка, кальция, магния, марганца и меди;

b) положительно заряженного пептида и/или полисахарида;

c) омега-аминокарбоновой кислоты; и

d) комбинации любых из перечисленных выше компонентов.

3. Гемостатическая композиция по п. 1, дополнительно содержащая соль протамина, соль кальция и ε-аминокапроновую кислоту (ε-ACA).

4. Гемостатическая композиция по любому из пп. 1-3, в которой волокна на основе целлюлозы представляют собой волокна окисленной регенерированной целлюлозы (ОРЦ).

5. Гемостатическая композиция по любому из пп. 1-4, находящаяся в форме агрегатов, размер которых находится в диапазоне 75-420 мкм.

6. Способ получения гемостатической композиции, согласно которому:

a) измельчают материал на основе целлюлозы с образованием длинных волокон и мелких волокон, причем распределение по размерам для длинных волокон составляет: D90 от более 177 мкм до менее 350 мкм и D50 от более 95 мкм до менее 167 мкм, и при этом распределение по размерам для мелких волокон составляет: D90 менее 177 мкм и D50 менее 95 мкм; и смешивают длинные и мелкие волокна в соотношении в диапазоне 5-25% масс. и 95-75% масс. соответственно, получая таким образом композицию гемостатических волокон;

b) необязательно подвергают композицию гемостатических волокон, полученную на стадии a), дополнительным стадиям для получения гемостатической композиции в форме агрегатов, причем стадии включают: i) прессование композиции гемостатических волокон для получения прессованной композиции гемостатических волокон; и необязательно ii) измельчение прессованной композиции.

7. Способ по п. 6, согласно которому измельчение осуществляют путем помола.

8. Способ по п. 6 или 7, согласно которому измельчению на стадии a) предшествует стадия разрезания и/или обрезки материала на основе целлюлозы.

9. Способ по любому из пп. 6-8, согласно которому измельчение на стадии a) представляет собой двухстадийный процесс, и при этом вторую стадию осуществляют в мельнице пневмоклассификатора.

10. Способ по п. 9, согласно которому измельчение в мельнице пневмоклассификатора проводят один раз для получения длинных волокон и три раза для получения мелких волокон.

11. Способ по любому из пп. 6-10, согласно которому прессованию на стадии b) i) предшествует стадия увлажнения композиции гемостатических волокон, необязательно до уровня содержания воды в диапазоне от 11% до 18% масс.

12. Способ по п. 11, согласно которому стадию увлажнения выполняют путем включения в композицию гемостатических волокон гигроскопического материала, необязательно хлорида кальция.

13. Способ по любому из пп. 6-12, согласно которому измельчению на стадии b) ii) предшествует стадия обезвоживания прессованной композиции.

14. Способ по п. 13, согласно которому обезвоживание выполняют до уровня содержания воды менее 5% масс.

15. Способ по любому из пп. 6-12, согласно которому прессование на стадии b) i) осуществляют с помощью машины для агрегирования, необязательно с усилием в диапазоне 25-70 кН/см.

16. Способ по любому из пп. 6-15, согласно которому получение гемостатических агрегатов на стадии b) нацелено на получение агрегатов, размер которых находится в диапазоне 75-420 мкм.

17. Способ по любому из пп. 6-16, согласно которому материал на основе целлюлозы выбран из группы, состоящей из материала из окисленной регенерированной целлюлозы, нетканого материала из окисленной регенерированной целлюлозы, тканого материала из окисленной регенерированной целлюлозы, трикотажного материала из окисленной регенерированной целлюлозы, измельченного материала из окисленной регенерированной целлюлозы и их комбинаций.

18. Способ по любому из пп. 6-17, согласно которому дополнительно добавляют к длинным и мелким волокнам по меньшей мере одно соединение, выбранное из группы, состоящей из:

a) двухвалентного катиона, выбранного из цинка, кальция, магния, марганца и меди;

b) положительно заряженного пептида и/или полисахарида;

c) омега-аминокарбоновой кислоты; и

d) комбинации любых из перечисленных выше компонентов.

19. Способ по пп. 6-17, согласно которому дополнительно добавляют к длинным и мелким волокнам соль протамина, соль кальция и ε-аминокапроновую кислоту.

20. Гемостатическая композиция в форме волокон и/или агрегатов, которую можно получить в соответствии со способом по любому из пп. 6-19.

21. Способ достижения гемостаза, согласно которому осуществляют контакт гемостатической композиции в форме волокон и/или агрегатов по любому из пп. 1-5 и 20 с кровью с формированием таким образом геля.

22. Набор, содержащий емкость, включающую в себя гемостатическую композицию в форме волокон и/или агрегатов по любому из пп. 1-5 и 20; и необязательно аппликатор, носитель и/или инструкцию по применению.

23. Способ обработки кровоточащей раны, бактериальной инфекции на раневом участке, для герметизации утечки на участке, предотвращения спайкообразования на участке и/или сведения к минимуму или предотвращения анастомозной утечки у нуждающегося в этом субъекта, при этом согласно способу наносят эффективное количество гемостатической композиции по любому из пп. 1-5 и 20 в форме волокон и/или агрегатов на и/или в рану и/или участок у субъекта.

24. Способ по п. 23, согласно которому нанесение осуществляют без приложения к композиции давления в направлении раны и/или участка.

25. Применение гемостатической композиции в форме волокон и/или агрегатов по любому из пп. 1-5 и 20 в качестве бактерицидного агента, для остановки кровотечения, для герметизации, предотвращения спайкообразования и/или сведения к минимуму или предотвращения анастомозной утечки.

26. Применение по п. 25 для сведения к минимуму или предотвращения утечки при проведении операции аортокоронарного шунтирования (АКШ).