Способ определения направленности течения хронического профессионального бронхита

Изобретение относится к области медицины, в частности к профессиональной патологии и пульмонологии. Предложен способ определения направленности течения профессионального хронического бронхита. У больного хроническим профессиональным бронхитом проводят отбор пробы крови утром натощак. Количество гиалуроновой кислоты (нг/мл) в сыворотке крови определяют методом ИФА при помощи коммерческого набора реагентов «HYALURONIK ACID (НА) TEST KIT» фирмы «Corgenix, Inc» (USA). Рассчитывают содержание гиалуроновой кислоты в сыворотке крови. За норму принимают концентрацию гиалуроновой кислоты в сыворотке 38,6 нг/мл. При превышении этого значения в 2 и более раз диагностируют неблагоприятное течение хронического профессионального бронхита с усилением процессов обструкции и высоким риском развития дистрофических и фиброзно-склеротических процессов мелких бронхов, бронхиолярного и альвеолярного дерева. Изобретение обеспечивает возможность выделения пациентов с неблагоприятным течением профессионального хронического бронхита, обусловленным усилением явлений обструкции среди лиц с хроническим профессиональным бронхитом, не имеющих функциональных признаков бронхиальной обструкции. 2 табл., 2 пр.

 

Область техники, к которой относится изобретение

Предлагаемое изобретение относится к медицине, в частности, к профессиональной патологии и пульмонологии, а именно, - к способу определения направленности течения хронического профессионального бронхита (далее по тексту - «способ») и может использоваться для определения направленности течения хронического профессионального бронхита, вызванного воздействием кремнеземсодержащей пыли.

Суть изобретения заключается в том, что в стандартное обследование больного хроническим профессиональным бронхитом вводится этап определения в сыворотке крови концентрации гиалуроновой кислоты, уровень которой дает возможность повысить достоверность, информативность и безопасность метода диагностирования направленности течения хронического профессионального бронхита, прогнозирования его тяжелого течения, формирования стойких нарушений бронхиальной проходимости.

Изобретение позволяет определить выраженность необратимой перестройки бронхолегочной системы, а также наличие нарушения бронхиальной проходимости и прогноз респираторного расстройства у пациентов с хроническим профессиональным бронхитом от воздействия пыли; ускорить время обследования, что даст возможность своевременного назначения профилактических мероприятий и оптимизирования проводимого лечения на раннем этапе заболевания хроническим профессиональным бронхитом с целью предотвращения развития его неблагоприятного течения.

Уровень техники

Хронический профессиональный бронхит - это особая форма специфического хронического воспаления всех структур дыхательного тракта в ответ на воздействие промышленных аэрозолей разного состава с развитием диффузных двухсторонних дистрофических и склерозирующих процессов, сопровождающихся расстройством моторики бронхов бронхоспастического или дискинетического типа, формированием прогрессирующих дыхательных нарушений с исходом в легочную гипертензию с недостаточностью кровообращения [1]. Возникает у работающих на горнорудных, угольных, металлургических, машиностроительных, металлообрабатывающих и других промышленных предприятиях, контактирующих в своей деятельности с разного рода пылью и промышленными аэрозолями, содержащими пыль с токсическим и нетоксическим действием на организм работающего, и занимает существенное место в общей профессиональной заболеваемости. В машиностроении контакт с кремний содержащей пылью имеют работающие в литейных цехах при приготовлении формовочной земли, при выбивке, обдирке, обдувке форм и очистке литья, а также в механических цехах - при шлифовке и полировке изделий. Длительный контакт с кремний содержащей пылью вызывает хронический простой профессиональный бронхит с преимущественным поражением крупных бронхов, который протекает вначале без нарушений легочной вентиляции. У части работающих может возникнуть воспалительный процесс, положительно реагирующий на лечение. Дальнейшее распространение воспалительного процесса по бронхиальному дереву на более мелкие бронхи может привести к формированию атрофического и склерозирующего эндобронхита с формированием обтурационного синдрома. Следует отметить, что процесс формирования обструктивных процессов при хроническом профессиональном бронхите происходит медленно и не заметно, клинические симптомы неяркие, лабораторные тесты не всегда указывают на развитие воспаления и тем более обструкции. Вентиляционные нарушения часто не фиксируются [1]. При несвоевременном определении направленности течения заболевания проведение профилактических мероприятий и назначение необходимого лечения запаздывает, заболевание может принять тяжелое течение, итогом которого является стойкая обструкция с явлениями легочной недостаточности [2]. Поскольку хронический профессиональный бронхит имеет постепенное начало и хроническое течение с периодами ремиссии и обострений, определение его прогноза в направлении формирования стойких обструктивных изменений, является сложной задачей врача [3].

Известен способ прогнозирования развития хронической обструктивной болезни легких (ХОБЛ) у лиц, не имеющих функциональных признаков бронхиальной обструкции. У обследуемого выявляют клинические симптомы и факторы риска: одышку, пассивное курение, продукцию мокроты, кашель, свистящие хрипы, эпизоды кашля с мокротой, длящиеся больше 3-х недель, пол, наличие храпа. Далее устанавливают их градации и числовые значения, определяют прогностические коэффициенты, на основании чего делается вывод о риске прогрессирования заболевания. («Способ прогнозирования развития хронической обструктивной болезни легких у лиц, не имеющих функциональных признаков бронхиальной обструкции»: заявка №2005134470/14, RU, МПК А61В 10/00 / Краснова Ю.Н., Гримайлова Е.В., Михалевич И.М., Дзизинский А.А.; заявлено 07.11.2005) [4]. Существенным недостатком данного способа является требование комплексного обследования пациента, присутствие субъективной оценки при анализе симптомов заболевания со стороны пациента и врача, большое количество коэффициентов для расчета прогноза заболевания, что затрудняет использование предложенного способа в практике.

Известен способ ранней неинвазивной диагностики процессов ремоделирования бронхов при ХОБЛ у мужчин. Суть способа заключается в определении концентрации трансформирующего фактора роста - β1 (ТФР-β1)) в слюне. Исходя из его значений, делается вывод о наличии ремоделинга бронхов. («Способ ранней неинвазивной диагностики процессов ремоделинга бронхов при хронической обструктивной болезни легких (ХОБЛ) у мужчин»: заявка №2004138916/15, RU, МПК G01N 33/68 (2006.01), G01N 33/53 (2006.01) / Степанищева Л.А., Теплова С.Н., Игнатова Г.Л.; заявлено 30.12.2004) [5]. Недостатками данного способа является то, что способ прогнозирует бронхиальную обструкцию только у пациентов мужского пола с уже установленным диагнозом ХОБЛ и не включает вопросы, касающиеся прогноза хронического профессионального бронхита.

Известен способ оценки риска развития хронической обструктивной болезни легких. Способ базируется на определении и анализе состава жирных кислот мембран эритроцитов крови пациентов с последующим расчетом коэффициента риска по соотношению жирных кислот С_20:4n-6 и С_20:5n-3 («Способ оценки риска развития хронической обструктивной болезни легких»: заявка №2013141678/15, RU, МПК G01N 33/50 (2006.01) / Новгородцева Т.П., Денисенко Ю.К., Кнышова В.В., Антонюк М.В., Гвозденко Т.А.; заявлено 10.09.2013) [6]. Недостатками этого способа являются сложность и длительность в выполнении анализов, необходимость наличия дорогостоящего диагностического оборудования.

Наиболее близким аналогом к предлагаемому изобретению является способ прогнозирования бронхиальной обструкции при хроническом бронхите, описанный в заявке Российской Федерации №2002111601, А 61 В 5/00, опубликованной 20.11.2003 г. (Постникова Л.Б., Кубышева Н.И.) [7], который принимается за прототип. Способ прогнозирования бронхиальной обструкции при хроническом бронхите, заключается в том, что проводят определение концентрации интерлейкина-1-бета (Ил-1β) в крови, слюне, бронхоальвеолярной жидкости и определение коэффициента его распределения между исследуемыми жидкостями. Сочетание высоких концентраций Ил-1β в крови и слюне с неизмененным его содержанием в бронхоальвеолярной жидкости, может служить ранним прогностическим критерием бронхиальной обструкции у больных хроническим бронхитом без изменений функции внешнего дыхания (ФВД). Недостатком данного способа является то, что для диагностики пациенту необходимо сдавать одновременно три анализа, что занимает много времени для оценки прогноза хронического бронхита. Кроме того, процедура взятия бронхоальвеолярной жидкости для анализа является нагрузочной полуинвазивной методикой, особенно для пациентов с исходной дыхательной недостаточностью и сопутствующей сердечно-сосудистой патологией.

Таким образом, возникает необходимость применения такого варианта решения проблемы прогноза хронического профессионального бронхита, при котором имеющиеся недостатки будут максимально нивелированы. Для решения поставленной цели предлагается следующий способ определения направленности течения хронического профессионального бронхита.

Принципиальным отличием предлагаемого изобретения от аналогов является введение в стандартное обследование больного хроническим профессиональным бронхитом этапа определения в сыворотке крови концентрации гиалуроновой кислоты (ГК), уровень которой дает возможность определения направленности течения профессионального хронического бронхита, его неблагоприятного прогноза, обусловленного обструкцией в бронхиальном дереве. Предлагаемый способ повышает достоверность, информативность и безопасность метода диагностирования направленности течения хронического профессионального бронхита, прогнозирования его тяжелого течения, формирования стойких нарушений бронхиальной проходимости. Выполнение предложенного способа позволит ускорить время обследования, что даст возможность своевременного назначения профилактических мероприятий и оптимизирование проводимого лечения на раннем этапе заболевания хроническим профессиональным бронхитом с целью предотвращения развития его неблагоприятного течения.

Раскрытие изобретения

Гиалуроновая кислота принимает активное участие в патогенезе развития ремоделирования мелких бронхов и альвеол за счет изменений соединительно-тканного каркаса вышеуказанных структур. Повышенные уровни ГК и продукты ее деградации обнаружены в ходе исследований на животных моделях ХОБЛ [8]. Было обнаружено, что гиалуроновая кислота накапливается как в бронхиальной стенке, так и в альвеолах [9].

На моделях in vitro продемонстрирована тесная связь между воспалительными цитокинами, такими как фактор некроза опухоли альфа (ТНФ-α), Ил-1β и ГК, которые индуцируют ее продукцию различными типами клеток, включая эндотелий и фибробласты [10].

На экспериментальных моделях с применением антител против фактора роста бета и Ил-1β было выявлено снижение внеклеточных концентраций ГК и торможение процесса ремоделирования бронхов [11].

С учетом того, что при развитии эмфиземы легких концентрация ГК в тканях падает [12], предполагаем, что обнаруженные нами высокие концентрации ГК в крови у пациентов с хроническим профессиональным бронхитом связаны с протекающими процессами эпителиально-мезенхимальной трансформации, т.е. ремоделированием в бронхиальном дереве.

Задачей заявляемого изобретения является разработка способа определения направленности течения профессионального хронического бронхита.

Поставленная задача решается путем определения концентрации ГК в сыворотке крови пациента методом твердофазного иммуноферментного анализа (ИФА). На основе стандартов рассчитывают ее содержание в сыворотке крови. За норму принимается концентрация ГК 30,6±14,0 нг/мл. При превышении этого значения в 2 и более раз диагностируют неблагоприятное течение хронического бронхита профессиональной этиологии и высокий риск развития необратимой обструкции.

Определение концентрации ГК в сыворотке крови является простым и безопасным способом и может применяться на ранних стадиях морфологической перестройки соединительно-тканного каркаса мелких бронхов, бронхиолярного и альвеолярного дерева, что увеличивает информативность данного показателя для ранней диагностики обструктивных процессов в легких и направленности их течения.

Заявляемый способ обладает новизной по сравнению с прототипом, отличается от него тем, что в сыворотке крови выявляют концентрацию гиалуроновой кислоты, по величине которой определяют направленность течения хронического профессионального бронхита. Заявителю не известны способы определения направленности течения хронического профессионального бронхита по ГК, определяемой в сыворотке крови, поэтому он считает, что заявленное решение соответствует критерию «изобретательский уровень».

Заявляемый способ определения направленности течения профессионального хронического бронхита даст возможность оценить его неблагоприятный прогноз, обусловленный обструкцией в бронхиальном дереве по гиалуроновой кислоте, определяемой в сыворотке венозной крови, и может найти широкое применение в медицине, а именно в клинике профессиональных болезней, а также терапии и пульмонологии, поэтому соответствует критерию «промышленная применимость».

Технический результат заявляемого способа заключается в обеспечении возможности выделения пациентов с неблагоприятным течением профессионального хронического бронхита, обусловленным усилением явлений обструкции среди лиц с хроническим профессиональным бронхитом, не имеющих функциональных признаков бронхиальной обструкции. Важным достоинством способа является техническая простота исполнения, материальная и финансовая доступность его применения в практической медицине.

Достижение технического результата обеспечивается тем, что предлагаемый способ осуществляют следующим образом:

1. У обследуемого проводят отбор пробы крови утром натощак путем венепункции локтевой вены в вакуумную пробирку с активатором свертывания.

2. Пробирку с кровью выдерживают при температуре 22-24°С в течение 30 минут, затем центрифугируют в течение 10-15 минут при 1500-2000 об/мин. Сыворотку отделяют от сгустка крови, помещают в чистую пробирку и используют для анализа.

3. Количество ГК (нг/мл) в сыворотке крови определяют методом твердофазного иммуноферментного анализа (ИФА) при помощи коммерческого набора реагентов «HYALURONIK ACID (НА) TEST KIT» фирмы «Corgenix, Inc» (USA).

4. С помощью стандартов рассчитывают содержание ГК в сыворотке крови.

5. За норму принимают концентрацию ГК в сыворотке 30,6±14,0 нг/мл. При превышении этого значения в 2 и более раз диагностируют неблагоприятный прогноз хронического профессионального бронхита с усилением процессов обструкции и высоким риском развития дистрофических и фиброзно-склеротических процессов мелких бронхов, бронхиолярного и альвеолярного дерева.

Осуществление изобретения

Способ осуществляется следующим образом: после врачебного осмотра, в дополнение к стандартному обследованию пациента с хроническим профессиональным бронхитом, вызванным воздействием

кремнеземсодержащей пыли, у больного хроническим профессиональным бронхитом проводят отбор пробы крови утром натощак путем венепункции локтевой вены в вакуумную пробирку с активатором свертывания, пробирку с кровью выдерживают при температуре 22-24°С в течение 30 минут, затем центрифугируют в течение 10-15 минут при 1500-2000 об/мин, сыворотку отделяют от сгустка крови, помещают в чистую пробирку и используют для анализа. Количество гиалуроновой кислоты (нг/мл) в сыворотке крови определяют методом твердофазного иммуноферментного анализа (ИФА) при помощи коммерческого набора реагентов «HYALURONIK ACID (НА) TEST KIT» фирмы «Corgenix, Inc» (USA). С помощью стандартов рассчитывают ее содержание в сыворотке крови. За норму принимают концентрацию гиалуроновой кислоты в сыворотке 30,6±14,0 нг/мл. При превышении этого значения в 2 и более раз диагностируют неблагоприятный прогноз хронического профессионального бронхита с нарастанием процессов стойкой обструкции.

Информативные показатели гиалуроновой кислоты у больных хроническим профессиональным бронхитом с благоприятным и неблагоприятным течением в зависимости от риска развития обструктивных нарушений представлены в таблице 1.

Определение концентрации ГК в сыворотке крови является простым и безопасным способом, может применяться на ранних стадиях заболевания хронического профессионального бронхита, как в стационаре, так и при проведении амбулаторных медицинских осмотров работающих с ранее установленным диагнозом профессионального хронического бронхита. При обследовании требуется выполнить только забор крови, а определение ГК проводится в условиях лаборатории. Это дает возможность проводить обследование большого количества людей в ограниченный промежуток времени.

Отличительными признаками предложенного способа является использование показателей гиалуроновой кислоты. Применения заявленного показателя для определения направленности течения хронического профессионального бронхита в доступной нам литературе не было выявлено.

Основанием для настоящей разработки явились выполненные ранее нами исследования, в результате которых было выявлены значительные изменения в содержании ГК у больных ХОБЛ профессиональной этиологии и профессиональным хроническим бронхитом [13, 14]. Содержание ГК в сыворотке крови у пациентов с ХОБЛ профессиональной этиологии превышало ее нормальный уровень в 3 и более раз и обратно коррелировало с показателями спирометрии (ОФВ₁ МИТ), что дало возможность рассматривать ГК как маркер бронхообструкции. В проведенных исследованиях не было акцентировано внимание на роль ГК для оценки течения хронического профессионального бронхита, что потребовало разработки способа определения направленности его течения.

Под наблюдением находились 48 больных хроническим профессиональным бронхитом. Диагноз хронического профессионального бронхита ставился на основании анамнеза, профессионального маршрута (контакт с кремнеземсодержащей пылью), длительности заболевания от 8 до 10 лет, клинических симптомов, лабораторных и функциональных исследований, данных спирометрии (определения ОФВ₁ и МИТ). Больные находились в клинике ФБУН «ННИИГП» Роспотребнадзора в стадии ремиссии заболевания. Всем больным проводилось двухкратное определение ГК в сыворотке крови. На основании показателей ГК было выделено две группы больных ХПБ: группа 1-е уровнем ГК, не отличающимся от ее уровня у здоровых лиц (n=22) и группа 2-е уровнем ГК, превышающим ее значение у здоровых лиц в 2 и более раз (n=26). Клинический анализ симптомов, функциональных и лабораторных показателей обследуемых выявил различия между группами. Данные показатели представлены в таблице 2.

Превышение содержания ГК во 2-й группе пациентов в 2 и более раза свидетельствовало о неблагоприятном течении хронического профессионального бронхита, что подтверждалось комплексом клинических и функциональных показателей, биохимические показатели в группах, за исключением уровня ГК, были не различимы.

Пример 1.

Пациент М., 19.04.1960 г.р., поступил в клинику ФБУН «ННИИГП» Роспотребнадзора с жалобами на кашель по утрам и в течение дня с небольшим отделением мокроты, одышку при умеренной физической нагрузке. Из анамнеза известно, что диагноз профессионального хронического бронхита был установлен в 2014 году. Пациент постоянную терапию по поводу бронхолегочного заболевания не получал. Сопутствующие заболевания -язвенная болезнь двенадцатиперстной кишки в стадии ремиссии. При объективном осмотре: состояние удовлетворительное, кожные покровы обычной окраски. Перкуторно над легкими звук легочный, с небольшим укорочением, аускультативно ослабление дыхания, хрипов нет, ЧД 18 в 1 мин, ЧСС 70 в 1 мин, АД 120/80 мм рт.ст. По остальным органам и системам патологических особенностей не выявлено.

Показатели спирометрии после бронходилатационного теста: ФЖЕЛ 58%, ОФВ₁ 61%, МИТ 1,06.

Пациенту проведено обследование по предлагаемому способу определения направленности течения профессионального хронического бронхита: определен уровень ГК в сыворотке крови, который составил 231,7 нг/мл.

Через 2 года наблюдения у пациента произошло ухудшение параметров спирометрии: ФЖЕЛ 47%; ОФВ₁ 47%; МИТ 0,69, что свидетельствовало об ухудшении легочной вентиляции и усилении процессов обструкции.

После бронходилатационного теста МИТ снизился ниже 0,7 и составил 0,69. Таим образом, исходно у больного имелся вариант неблагоприятного клинического течения хронического профессионального бронхита с признаками бронхиальной обструкции.

Пример 2.

Пациент П. 16.02.1953 г.р., поступил в клинику ФБУН «ННИИГП» Роспотребнадзора с жалобами на кашель в течение дня с небольшим отделением мокроты, одышку при умеренной физической нагрузке. Из анамнеза известно, что диагноз профессионального хронического бронхита был установлен в 2017 году. Пациент постоянную терапию по поводу бронхолегочного заболевания не получал. Сопутствующие заболевания -гипертоническая болезнь. При объективном осмотре: состояние удовлетворительное, кожные покровы обычной окраски. Перкуторно над легкими звук легочный, аускультативно дыхания везукулярное, хрипов нет, ЧД 18 в 1 мин, ЧСС 72 в 1 мин, АД 130/80 мм рт.ст. По остальным органам и системам патологических особенностей не выявлено.

Показатели спирометрии после бронходилатационного теста: ФЖЕЛ 73,6%, ОФВ₁ 71,9%, МИТ 0,79.

В анализах крови - без особенностей.

Пациенту проведено обследование по предлагаемому способу определения направленности течения профессионального хронического бронхита: определен уровень гиалуроновой кислоты в сыворотке крови, который составил 39,3 нг/мл.

Показатели спирометрии через 2 года: ФЖЕЛ 82%; ОФВ₁ 81%; МИТ 0,80.

В данном случае можно говорить благоприятном клиническом течении хронического профессионального бронхита без признаков бронхиальной обструкции.

Таким образом, оценка концентрации гиалуроновой кислоты в сыворотке крови является важным, не имеющим противопоказаний, достоверным, информативным и ускоренным диагностическим методом, показанным всем больным с профессиональным хроническим бронхитом для определения направленности его течения и оценки выраженности явлений обструкции. Это обеспечивает возможность вовремя определить неблагоприятное течение хронического профессионального бронхита, оптимизировать терапию и своевременно назначить профилактические мероприятия с целью сохранения здоровья работающих и их работоспособности.

Источники информации

1. Профессиональная патология: национальное руководство / под ред. Н.Ф. Измерова. - М: ГЭОТАР-Медиа. - 2011. - 784 с.

2. Профессиональные заболевания органов дыхания: национальное руководство / под ред. Н.Ф. Измерова, А.Г. Чучалина. - М.: ГЭОТАР-Медиа. -2015.-792 с.

3. Lytras Т., Kogevinas М., Kromhout Н, Carsin А.Е. et al. Occupational exposures and incidence of chronic bronchitis and related symptoms over two decades: the European Community Respiratory Health Survey. // Occup Environ Med. - 2019 Apr - 76(4) - P. 222-229. doi: 10.1136/oemed-2018-105274. Epub 2019 Jan 30.

4. Заявка №2005134470/14, RU, МПК A61B 10/00 / Краснова Ю.Н., Гримайлова E.B., Михалевич И.М., Дзизинский А.А.; заявлено 07.11.2005.

5. Заявка №2004138916/15, RU, МПК G01N 33/68 (2006.01), G01N 33/53 (2006.01) / Степанищева Л.А., Теплова С.Н., Игнатова Г.Л.; заявлено 30.12.2004.

6. Заявка №2013141678/15, RU, МПК G01N 33/50 (2006.01) / Новгородцева Т.П., Денисенко Ю.К., Кнышова В.В., Антонюк М.В., Гвозденко Т.А.; заявлено 10.09.2013.

7. Заявка Российской Федерации №2002111601, А 61 В 5/00, опубликована 20.11.2003 г., Постникова Л.Б., Кубышева Н.И.

8. Irene M.J. Eurlings, Mieke A. Dentener, Evi M. Mercken, Rafael de Cabo et al. A comparative study of matrix remodeling in chronic models for COPD; mechanistic insights into the role of TNF-α. // Am J. Physiol Lung Cell Mol Physiol. - 2014 Oct 1 - 307(7) - P. 557-565.

9. Dentener M.A., Vernooy J.H., Hendriks S., Wouters E.F. Enhanced levels of hyaluronan in lungs of patients with COPD: relationship with lung function and local inflammation. // Thorax. - 2005 Feb - 60(2) - P. 114 - 119.

10. Wilkinson T.S., Potter-Perigo S., Tsoi C, Altman L.C., Wight T.N. Pro-and anti-inflammatory factors cooperate to control hyaluronan synthesis in lung fibroblasts. // Am J. Respir Cell Mol Biol. - 2004 Jul - 31(1) - P. 92 - 99.

11. Rubin M. Tuder and Irina Petrache. Pathogenesis of chronic obstructive pulmonary disease. // J. Clin Invest. - 2012 Aug 1 - 122(8) - P. 2749-2755.

12. Garantziotis S., Brezina M., Castelnuovo P., Drago L. The role of hyaluronan in the pathobiology and treatment of respiratory disease. // Am J. Physiol Lung Cell Mol Physiol. - 2016 May 1 - 310 (9) - P.785 - 795.

13. Федотов В.Д., Курникова А.А., Потехина Ю.П. Гиалуроновая кислота как маркер у пациентов с патологией легких. // Морфология. - 2019. - Том 155, №2. - С.293.

14. Коваленко В.Э., Калинина А.А., Федотов В.Д. Возможность применения маркеров соединительной ткани для ранней диагностики ремоделирования дыхательной системы. Сборник тезисов V Всероссийской конференции молодых ученых и студентов с международным участием «VOLGAMEDSCIENCE», Нижний Новгород, 13-14 марта 2019 год.

Способ определения направленности течения профессионального хронического бронхита, заключающийся в том, что у больного хроническим профессиональным бронхитом проводят отбор пробы крови утром натощак путем венепункции локтевой вены в вакуумную пробирку с активатором свертывания, пробирку с кровью выдерживают при температуре 22-24°С в течение 30 минут, затем центрифугируют в течение 10-15 минут при 1500-2000 об/мин, сыворотку отделяют от сгустка крови, помещают в чистую пробирку и используют для анализа; количество гиалуроновой кислоты (нг/мл) в сыворотке крови определяют методом твердофазного иммуноферментного анализа (ИФА) при помощи коммерческого набора реагентов «HYALURONIK ACID (НА) TEST KIT» фирмы «Corgenix, Inc» (USA); с помощью стандартов рассчитывают содержание гиалуроновой кислоты в сыворотке крови; за норму принимают концентрацию гиалуроновой кислоты в сыворотке 38,6 нг/мл; при превышении этого значения в 2 и более раз диагностируют неблагоприятное течение хронического профессионального бронхита с усилением процессов обструкции и высоким риском развития дистрофических и фиброзно-склеротических процессов мелких бронхов, бронхиолярного и альвеолярного дерева; показатель гиалуроновой кислоты 38,6 нг/мл, считающийся нормой, был определен при обследовании здоровых лиц с нормальным показателем объема форсированного выдоха за первую секунду (ОФВ1) - более 80% от должного.