Ингибитор бромодомена в качестве адъюванта в противоопухолевой иммунотерапии
Владельцы патента RU 2745999:
ДАНА-ФАРБЕР КЭНСЕР ИНСТИТЬЮТ, ИНК. (US)
Х. ЛИ МОФФИТТ КЭНСЕР СЕНТЕР ЭНД РИСЁЧ ИНСТИТЬЮТ, ИНК. (US)
Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к способу ex vivo активации и увеличения количества антигенспецифических T-клеток для адоптивного переноса клеток. Способ ex vivo активации и увеличения количества антигенспецифических T-клеток для адоптивного переноса клеток включает воздействие на популяцию антигенпрезентирующих клеток популяцией Т-лимфоцитов в присутствии ингибитора бромодомена, где указанный ингибитор бромодомена имеет определенную химическую формулу. Вышеописанный способ позволяет эффективно активизировать и увеличивать количество антигенспецифических T-клеток для адоптивного переноса клеток. 2 з.п. ф-лы, 10 ил., 1 табл., 1 пр.
ПЕРЕКРЕСТНАЯ ССЫЛКА НА РОДСТВЕННЫЕ ЗАЯВКИ
Настоящая заявка испрашивает приоритет предварительной заявки на выдачу патента США № 62/088327, поданной 5 декабря 2014 года, и заявки № 62/106885, поданной 23 января 2015 года, содержание которых настоящим включено в данный документ во всей полноте посредством ссылки.
УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ
Иммунотерапия становится все более привлекательной терапевтической стратегией для пациентов со злокачественной опухолью, при этом из результатов многих современных клинических испытаний видны преимущества общей выживаемости (OS) при меланоме и кастрационно-резистентном раке предстательной железы. В последнее время немелкоклеточный рак легких (NSCLC) стал основной целью для иммунотерапевтических стратегий следующего поколения. Иммунотерапия, в частности применение моноклональных антител, которые блокируют ингибиторные молекулы иммунных контрольных точек и, следовательно, усиливают иммунный ответ на опухоли, продемонстрировала клиническую перспективность на поздних стадиях солидных опухолей.
Иммунные контрольные точки относятся к множеству ингибиторных путей, жестко связанных в иммунной системе, которые важны для поддержания аутотолерантности и модуляции длительности и амплитуды физиологических иммунных ответов в периферических тканях для минимизации побочного повреждения тканей. На данный момент уже известно, что опухоли используют определенные пути иммунных контрольных точек в качестве основного механизма иммунной устойчивости, особенно против Т-клеток, которые специфичны к опухолевым антигенам.
Взаимодействие рецептора запрограммированной гибели 1 (PD-1) с его лигандами, PD-L1 и PD-L2, является одной из важных стратегий, которую используют многие опухоли для уклонения от иммунологического надзора. При связывании лигандов PD-L с PD-1 ослабляется передача сигнала от T-клеточного рецептора (TCR), что приводит к ингибированию пролиферации, снижению продукции цитокинов, анергии и/или апоптозу. Таким образом, экспрессия лигандов PD-L опухолевыми клетками выполняет роль защитного механизма, приводящего к супрессии противоопухолевых эффекторных лимфоцитов в микроокружении опухоли.
СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ
В настоящем документе показано, что антигенпрезентирующие клетки, которые обработаны ингибиторами бромодомена, являются более возбудимыми, проявляя более низкую экспрессию иммуносупрессорной молекулы PDL1, и способны восстанавливать чувствительность толерантных Т-клеток. Таким образом, раскрыт способ стимуляции активации T-клеток в ходе противоопухолевой иммунотерапии у субъекта, который предусматривает введение субъекту, проходящему противоопухолевую иммунотерапию, композиции, содержащей ингибитор бромодомена. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления ингибитор бромодомена представляет собой ингибитор бромодомена и экстратерминального домена («BET»). Например, ингибитором BET может быть (S)-трет-бутил-2-(4-(4-хлорфенил)-2,3,9-триметил-6Н-тиено[3,2-f][1,2,4]триазоло[4,3-a][1,4]диазепин-6-ил)ацетат («JQ1»).
Также раскрыт способ лечения злокачественной опухоли у субъекта, предусматривающий совместное введение субъекту ингибитора бромодомена и иммуностимулирующего средства. Например, иммуностимулирующим средством может быть антитело к PD-1, антитело к PD-L1, антитело к CTLA-4 или их комбинация. Способ может дополнительно предусматривать введение субъекту иммуногенного средства.
Также раскрыт способ ex vivo активации и увеличения количества антигенспецифических T-клеток для адоптивного переноса клеток (ACT). Данный способ предусматривает воздействие на популяцию антигенпрезентирующих клеток (АРС) популяцией Т-лимфоцитов в присутствии ингибитора бромодомена. Например, Т-лимфоциты могут быть выбраны из группы, состоящей из аутологичных противоопухолевых эффекторных лимфоцитов (TIL), Т-клеток, трансдуцированных высокоаффинными Т-клеточными рецепторами (TCR), и Т-клеток, трансдуцированных химерными антигенными рецепторами (CAR). Также, например, к APC, которые можно применять, относятся аутологичные дендритные клетки, макрофаги или их комбинация. В некоторых случаях APC являются искусственными антигенпрезентирующими клетками (aAPC).
Подробности одного или более вариантов осуществления настоящего изобретения изложены на сопроводительных чертежах и в приведенном далее описании. Другие признаки, объекты и преимущества настоящего изобретения станут очевидны из описания и чертежей и из формулы изобретения.
ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ
На фигуре 1 показана жизнеспособность клеток PEM (%) в зависимости от концентрации JQ1 (нМ).
На фигуре 2 показана продукция IL-10 (пг/мл) активированными перитонеальными макрофагами (PEM) после обработки посредством JQ1 (100, 200 или 400 нМ) с LPS и без него.
На фигуре 3 показана продукция IL-6 (пг/мл) клетками PEM после обработки посредством JQ1 (400 или 800 нМ) с LPS и без него.
На фигуре 4 показана экспрессия мРНК IL-6 и IL10 (нормализованная кратная экспрессия) у PEM после обработки посредством JQ1, LPS или JQ1 и LPS.
На фигуре 5 показаны результаты проточной цитометрии PEM, обработанных изотипом, ничем, JQ1, LPS или JQ1 и LPS, с применением антител к PD-L1 (слева) или антител к PD-L2 (справа).
На фигуре 6 показана экспрессия мРНК PD-L1 и PD-L2 у PEM, обработанных ничем, JQ1, LPS или JQ1 и LPS.
На фигуре 7 показана экспрессия мРНК PD-L1 у PEM, обработанных ничем, JQ1, LPS или JQ1 и LPS, через 1, 2 и 6 часов после обработки.
На фигуре 8 показана продукция IL-2 (пг/мл) клетками PEM, которые были обработаны JQ1, LPS или JQ1 и LPS в течение 24 часов, а затем культивированы с наивными CD4 Т-клетками с пептидом OVA или без него в течение еще 48 часов.
На фигуре 9 показана продукция INF-γ (пг/мл) клетками PEM, которые были обработаны JQ1, LPS или JQ1 и LPS в течение 24 часов, а затем культивированы с наивными CD4 Т-клетками с пептидом OVA или без него в течение еще 48 часов.
На фигуре 10 показана продукция INF-γ (пг/мл) клетками PEM, которые были обработаны JQ1, LPS или JQ1 и LPS в течение 24 часов, а затем культивированы с толерантными CD4 Т-клетками с пептидом OVA или без него в течение еще 48 часов.
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ
В соответствии с некоторыми вариантами осуществления раскрытые способы включают лечение субъекта in vivo с помощью ингибитора бромодомена с обеспечением ингибирования роста злокачественных опухолей. Ингибитор бромодомена можно применять отдельно для ингибирования роста злокачественных опухолей. В альтернативном варианте, ингибитор бромодомена можно применять в комбинации с другими иммуногенными средствами, стандартными видами противоопухолевой терапии или иммуностимулирующими средствами.
Существует также несколько протоколов лечения, которые предусматривают ex vivo активацию и увеличение количества антигенспецифических Т-клеток и адоптивный перенос этих клеток реципиентам для стимуляции антигенспецифических Т-клеток против опухоли (Greenberg, R. & Riddell, S. (1999) Science 285: 546-51). Такие способы также можно применять для активации Т-клеточных ответов на такие инфекционные агенты, как CMV. Ex vivo активация в присутствии ингибитора бромодомена, как можно ожидать, увеличит частоту и активность адоптивно переносимых Т-клеток.
Термин «субъект» относится к любому индивидууму, который является объектом для назначения или проведения лечения. Субъектом может быть позвоночное, например, млекопитающее. Так, субъектом может быть пациент-человек или пациент ветеринарной клиники. Термин «пациент» относится к субъекту, проходящему лечение у практикующего врача, например, терапевта.
Термин «лечение» относится к оказанию медицинской помощи пациенту с намерением излечить, смягчить, стабилизировать или предупредить заболевание, патологическое состояние или нарушение. Этот термин включает в себя активное лечение, то есть лечение, направленное конкретно на достижение положительной динамики заболевания, патологического состояния или нарушения, а также включает в себя этиологическое лечение, то есть лечение, направленное на устранение причины ассоциированного заболевания, патологического состояния или нарушения. Кроме того, этот термин в себя включает паллиативное лечение, то есть лечение, предназначенное для облегчения симптомов, а не для излечения заболевания, патологического состояния или нарушения; превентивное лечение, то есть лечение, направленное на минимизацию или частичное или полное ингибирование развития ассоциированного заболевания, патологического состояния или нарушения; и поддерживающее лечение, то есть лечение, используемое для дополнения другой специфической терапии, направленной на достижение положительной динамики ассоциированного заболевания, патологического состояния или нарушения.
Термин «ингибировать» относится к уменьшению активности, ответа, состояния, заболевания или другого биологического параметра. Сюда же можно отнести без ограничения полное устранение активности, ответа, состояния или заболевания. Также сюда можно отнести, например, 10% снижение активности, ответа, состояния или заболевания относительно нативного или контрольного уровня. Таким образом, снижение может составлять 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100% или любое значение снижения относительно нативных или контрольных уровней.
Злокачественные опухоли, чей рост можно ингибировать с помощью раскрытых способов, включают злокачественные опухоли, которые обычно чувствительны к иммунотерапии. Неограничивающие примеры злокачественных опухолей для лечения включают меланому (например, метастатическую злокачественную меланому), рак почки (например, светлоклеточный рак), рак предстательной железы (например, гормонорезистентную аденокарциному предстательной железы), рак молочной железы, рак толстой кишки и рак легких (например, немелкоклеточный рак легких). Примеры других злокачественных опухолей, которые можно лечить с помощью раскрываемых способов, включают рак кости, рак поджелудочной железы, рак кожи, рак головы или шеи, кожную или внутриглазную злокачественную меланому, рак матки, рак яичников, рак прямой кишки, рак анальной области, рак желудка, рак яичка, рак матки, карциному фаллопиевых труб, карциному эндометрия, карциному шейки матки, карциному влагалища, карциному вульвы, болезнь Ходжкина, неходжкинскую лимфому, рак пищевода, рак тонкого кишечника, рак эндокринной системы, рак щитовидной железы, рак паращитовидной железы, рак надпочечников, саркому мягкой ткани, рак уретры, рак полового члена, хронические или острые лейкозы, в том числе острый миелолейкоз, хронический миелолейкоз, острый лимфобластный лейкоз, хронический лимфолейкоз, солидные опухоли в детском возрасте, лимфоцитарную лимфому, рак мочевого пузыря, рак почки или уретры, карциному почечной лоханки, неоплазму центральной нервной системы (CNS), первичную лимфому CNS, ангиогенез опухоли, опухоль оси позвоночника, глиому мозгового ствола, аденому гипофиза, саркому Капоши, эпидермоидный рак, плоскоклеточный рак, Т-клеточную лимфому, злокачественные опухоли, вызванные окружающей средой, в том числе вызванные асбестом, и комбинации указанных злокачественных опухолей. Раскрытые способы также можно применять при лечении метастатических злокачественных опухолей, особенно метастатических злокачественных опухолей, которые экспрессируют PD-L1.
В соответствии с некоторыми вариантами осуществления ингибитор бромодомена можно объединить в комбинации с иммуногенным средством, таким как клетки злокачественной опухоли, очищенные опухолевые антигены (в том числе рекомбинантные белки, пептиды и молекулы углеводов) или клетки, трансфицированные генами, кодирующими иммуностимулирующие цитокины. Неограничивающие примеры опухолевых вакцин, которые можно применять, включают пептиды антигенов меланомы, такие как пептиды антигенов gp100, MAGE, Trp-2, MART1 и/или тирозиназы, или опухолевые клетки, трансфицированные для экспрессии цитокина GM-CSF.
Раскрываемый ингибитор бромодомена может быть объединен в комбинации с протоколом вакцинации. Было разработано множество экспериментальных стратегий для вакцинации против опухолей (см. Rosenberg, S., 2000, Development of Cancer Vaccines, ASCO Educational Book Spring: 60-62; Logothetis, C., 2000, ASCO Educational Book Spring: 300-302; Khayat, D. 2000, ASCO Educational Book Spring: 414-428; Foon, K. 2000, ASCO Educational Book Spring: 730-738; см. также Restifo, N. and Sznol, M., Cancer Vaccines, Ch. 61, pp. 3023-3043 in DeVita, V. et al. (eds.), 1997, Cancer: Principles and Practice of Oncology. Fifth Edition). В соответствии с одной из этих стратегий вакцину получают с использованием аутологичных или аллогенных опухолевых клеток. Было показано, что такие клеточные вакцины наиболее эффективны при трансдукции опухолевых клеток для экспрессии GM-CSF. Было показано, что GM-CSF является мощным активатором презентирования антигена при противоопухолевой вакцинации (Dranoff et al. (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 90: 3539-43).
Раскрываемый ингибитор бромодомена можно применять в сочетании с рекомбинантными белками и/или пептидами, экспрессируемыми в опухоли, для индукции иммунного ответа на эти белки. Такие белки в норме рассматриваются иммунной системой как аутоантигены, и поэтому она толерантна к ним. Опухолевый антиген также может включать белковую часть теломеразы, которая необходима для синтеза теломер хромосом и которая экспрессируется более чем в 85% случаев злокачественных опухолей человека и только в ограниченном количестве соматических тканей. Опухолевый антиген также может представлять собой «неоантигены», экспрессируемые клетками злокачественной опухоли в результате соматических мутаций, которые изменяют последовательность белка или создают гибридные белки между двумя несвязанными последовательностями или идиотип от В-клеточных опухолей.
Другие противоопухолевые вакцины могут включать белки из вирусов, связанных с развитием злокачественных опухолей у человека, таких как вирусы папилломы человека (HPV), вирусы гепатита (HBV и HCV) и герпесвирус, ассоциированный с саркомой Капоши (KHSV). Другой формой опухолеспецифического антигена, которую можно применять в сочетании с блокадой PD-1, являются очищенные белки теплового шока (HSP), выделенные из собственно опухолевой ткани. Такие белки теплового шока содержат фрагменты белков из опухолевых клеток, и такие HSP обладают высокой эффективностью при доставке к антигенпрезентирующим клеткам для индукции противоопухолевого иммунитета.
Дендритные клетки (DC) являются высокоактивными антигенпрезентирующими клетками, которые можно применять для инициирования антигенспецифических ответов. DC можно получить ex vivo и нагрузить различными белковыми и пептидными антигенами, а также экстрактами из опухолевых клеток. DC также можно трансдуцировать посредством генетических методов для экспрессии таких опухолевых антигенов. С целью иммунизации, DC также были гибридизированы непосредственно с опухолевыми клетками. В качестве способа вакцинации DC-иммунизацию можно эффективно объединять в комбинации с ингибитором бромодомена для активации более мощных противоопухолевых ответов.
Раскрываемый ингибитор бромодомена также можно объединять в комбинации со стандартными видами противоопухолевой терапии, такими как химиотерапевтические режимы. В этих случаях может быть возможным снижение дозы вводимого химиотерапевтического реагента. Примером такой комбинации является ингибитор бромодомена в комбинации с декарбазином для лечения меланомы. Другим примером такой комбинации является ингибитор бромодомена в комбинации с интерлейкином-2 (IL-2) для лечения меланомы. Другими разновидностями комбинированной терапии, которые могут привести к синергии с ингибиторами бромодомена, среди прочих являются облучение, хирургическое вмешательство и выключение эндокринной функции. С помощью каждого из этих протоколов создают источник опухолевого антигена у реципиента. В комбинации с ингибитором бромодомена также можно объединять ингибиторы ангиогенеза. Ингибирование ангиогенеза приводит к гибели опухолевых клеток, которые могут служить источником опухолевого антигена в путях презентирования антигена у реципиента.
Ингибиторы бромодомена известны из уровня техники. Ингибитор бромодомена представляет собой любую молекулу или соединение, которые могут предупреждать или ингибировать, частично или полностью, связывание по меньшей мере одного бромодомена с ацетил-лизиновыми остатками белков (например, с ацетил-лизиновыми остатками гистонов). Ингибитор бромодомена может представлять собой любую молекулу или соединение, которое ингибирует бромодомен, как описано выше, в том числе нуклеиновые кислоты, такие как ДНК- и РНК-аптамеры, антисмысловые олигонуклеотиды, siRNA и shRNA, малые пептиды, антитела или фрагменты антител и малые молекулы, такие как низкомолекулярные химические соединения. Следует понимать, что ингибитор бромодомена может ингибировать только один бромодомен-содержащий белок, или же он может ингибировать более одного бромодомен-содержащего белка или все бромодомен-содержащие белки.
Примеры ингибиторов бромодомена описаны в JP 2009028043, JP 2009183291, WO 2011054843, WO 2011054848, WO2009/084693A1, WO2009084693, WO 2011054844, WO 2011054846, US 2012028912, Filippakopoulos et al. Bioorg Med Chem. 20(6): 1878-1886, 2012; Chung et al. J Med Chem. 54(11):3827-38, 2011; и Chung et al. J Biomol Screen. 16(10): 1170-85, 2011, которые включены в настоящий документ посредством ссылки.
В соответствии с некоторыми вариантами осуществления ингибитор бромодомена представляет собой ингибитор BET. Ингибитор BET представляет собой любую молекулу или соединение, которое может предупреждать или ингибировать связывание бромодомена по меньшей мере у одного члена семейства BET с ацетил-лизиновыми остатками белков. Ингибитор BET может представлять собой любую молекулу или соединение, которое ингибирует BET, как описано выше, в том числе нуклеиновые кислоты, такие как ДНК- и РНК-аптамеры, антисмысловые олигонуклеотиды, siRNA и shRNA, малые пептиды, антитела или фрагменты антител и малые молекулы, такие как низкомолекулярные химические соединения.
Примеры ингибиторов BET описаны в WO2011/143651, WO2009/084693, WO 2011/143669, WO 2011/143660, WO 2011/054851 и JP 2008156311, которые включены в настоящий документ посредством ссылки. Следует понимать, что ингибитор BET может ингибировать только одного члена семейства BET, или же он может ингибировать более одного члена семейства BET или всех членов семейства BET. Примеры известных из уровня техники ингибиторов BET включают без ограничения RVX-208 (Resverlogix), PFI-1 (Structural Genomics Consortium), OTX015 (Mitsubishi Tanabe Pharma Corporation), BzT- (GlaxoSmithKline).
В соответствии с некоторыми аспектами ингибиторы BET представляют собой соединение с формулой I:
(I),
где
X представляет собой N или CR5;
R5 представляет собой H, алкил, циклоалкил, гетероциклоалкил, арил или гетероарил, каждый из которых является необязательно замещенным;
RB представляет собой H, алкил, гидроксилалкил, аминоалкил, алкоксиалкил, галогеналкил, гидрокси, алкокси или -COO-R3, каждый из которых является необязательно замещенным;
кольцо A представляет собой арил или гетероарил;
каждый RA независимо представляет собой алкил, циклоалкил, гетероциклоалкил, арил или гетероарил, каждый из которых является необязательно замещенным; или любые два RA вместе с атомами, к которым они присоединены, могут образовывать конденсированную арильную или гетероарильную группу;
R представляет собой алкил, циклоалкил, гетероциклоалкил, арил или гетероарил; каждый из которых является необязательно замещенным;
R1 представляет собой -(CH2)n-L, в котором n равно 0-3, а L представляет собой H, -COO-R3, -CO-R3, -CO-N(R3R4), -S(O)2-R3, -S(O)2-N(R3R4), N(R3R4), N(R4)C(O)R3, необязательно замещенный арил или необязательно замещенный гетероарил;
R2 представляет собой H, D (дейтерий), галоген или необязательно замещенный алкил;
каждый R3 независимо выбран из группы, состоящей из:
(i) H, арила, замещенного арила, гетероарила или замещенного гетероарила;
(ii) гетероциклоалкила или замещенного гетероциклоалкила;
(iii) -C1-C8алкила, -C2-C8алкенила или -C2-C8алкинила, причем каждый из них содержит 0, 1, 2 или 3 гетероатома, выбранных из O, S или N; -C3-C12циклоалкила, замещенного -C3-C12циклоалкила, -C3-C12циклоалкенила или замещенного -C3-C12циклоалкенила, каждый из которых может быть необязательно замещенным; и
(iv) NH2, N=CR4R6;
каждый R4 независимо представляет собой H, алкил, алкил, циклоалкил, гетероциклоалкил, арил или гетероарил, каждый из которых является необязательно замещенным;
или R3 и R4 взяты вместе с атомом азота, к которому они присоединены, с образованием 4-10-членного кольца;
R6 представляет собой алкил, алкенил, циклоалкил, циклоалкенил, гетероциклоалкил, арил или гетероарил, каждый из которых является необязательно замещенным; или R4 и R6 взяты вместе с атомом углерода, к которому они присоединены, с образованием 4-10-членного кольца;
m равно 0, 1, 2 или 3;
при условии, что
(a) если кольцо A представляет собой тиенил, X представляет собой N, R представляет собой фенил или замещенный фенил, R2 представляет собой H, RB представляет собой метил, а R1 представляет собой -(CH2)n-L, в котором n равно 1, а L представляет собой -CO-N(R3R4), тогда R3 и R4 не взяты вместе с атомом азота, к которому они присоединены, с образованием морфолинового кольца;
(b) если кольцо A представляет собой тиенил, X представляет собой N, R представляет собой замещенный фенил, R2 представляет собой H, RB представляет собой метил, а R1 представляет собой -(CH2)n-L, в котором n равно 1, а L представляет собой -CO-N(R3R4), и один из R3 и R4 представляет собой H, тогда другой из R3 и R не является метилом, гидроксиэтилом, алкокси, фенилом, замещенным фенилом, пиридилом или замещенным пиридилом; и
(c) если кольцо A представляет собой тиенил, X представляет собой N, R представляет собой замещенный фенил, R2 представляет собой H, RB представляет собой метил, а R1 представляет собой -(CH2)n-L, в котором n равно 1, а L представляет собой -COO-R3, тогда R3 не является метилом или этилом; или его соль, сольват или гидрат.
В соответствии с определенными вариантами осуществления R представляет собой арил или гетероарил, каждый из которых является необязательно замещенным.
В соответствии с определенными вариантами осуществления L представляет собой H, -COO-R3, -CO-N(R3R4), -S(O)2-R3, -S(O)2-N(R3R4), N(R3R4), N(R4)C(O)R3 или необязательно замещенный арил. В соответствии с определенными вариантами осуществления каждый R3 независимо выбран из группы, состоящей из H, -C1-C8 алкила, содержащего 0, 1, 2 или 3 гетероатома, выбранных из O, S или N; или NH2, N=CR4R6.
В соответствии с определенными вариантами осуществления R1 представляет собой -(CH2)n-L, в котором n равно 1, а L представляет собой -CO-N(R3R4), и один из R3 и R4 представляет собой H, а другой из R3 и R4 представляет собой (CH2)P-Y, в котором p равно 1-3 (например, p равно 2), а Y представляет собой азотсодержащее кольцо (которое может быть ароматическим или неароматическим).
В соответствии с определенными вариантами осуществления R2 представляет собой H, D, галоген или метил.
В соответствии с определенными вариантами осуществления RB представляет собой алкил, гидроксиалкил, галогеналкил или алкокси; каждый из которых необязательно замещен.
В соответствии с определенными вариантами осуществления RB представляет собой метил, этил, гидроксиметил, метоксиметил, трифторметил, COOH, COOMe, COOEt или COOCH2OC(O)CH3.
В соответствии с определенными вариантами осуществления кольцо A представляет собой 5- или 6-членный арил или гетероарил. В соответствии с определенными вариантами осуществления кольцо А представляет собой тиофуранил, фенил, нафтил, бифенил, тетрагидронафтил, инданил, пиридил, фуранил, индолил, пиримидинил, пиридизинил, пиразинил, имидазолил, оксазолил, тиенил, тиазолил, триазолил, изоксазолил, хинолинил, пирролил, пиразолил или 5,6,7,8-тетрагидроизохинолинил.
В соответствии с определенными вариантами осуществления кольцо A представляет собой фенил или тиенил.
В соответствии с определенными вариантами осуществления m равно 1 или 2, и по меньшей мере один вариант RA представляет собой метил.
В соответствии с определенными вариантами осуществления каждый RA независимо представляет собой H, необязательно замещенный алкил, или любые два RA вместе с атомами, к которым они присоединены, могут образовывать арил.
В соответствии с некоторыми аспектами ингибиторы BET представляют собой соединение с формулой II:
(II),
где
X представляет собой N или CR5;
R5 представляет собой H, алкил, циклоалкил, гетероциклоалкил, арил или гетероарил, каждый из которых является необязательно замещенным;
RB представляет собой H, алкил, гидроксилалкил, аминоалкил, алкоксиалкил, галогеналкил, гидрокси, алкокси или -COO-R3, каждый из которых является необязательно замещенным;
каждый RA независимо представляет собой алкил, циклоалкил, гетероциклоалкил, арил или гетероарил, каждый из которых является необязательно замещенным; или любые два RA вместе с атомами, к которым они присоединены, могут образовывать конденсированную арильную или гетероарильную группу;
R представляет собой алкил, циклоалкил, гетероциклоалкил, арил или гетероарил; каждый из которых является необязательно замещенным;
R'1 представляет собой H, -COO-R3, -CO-R3, необязательно замещенный арил или необязательно замещенный гетероарил;
каждый R3 независимо выбран из группы, состоящей из:
(i) H, арила, замещенного арила, гетероарила, замещенного гетероарила;
(ii) гетероциклоалкила или замещенного гетероциклоалкила;
(iii) -C1-C8алкила, -C2-C8алкенила или -C2-C8алкинила, причем каждый из них содержит 0, 1, 2 или 3 гетероатома, выбранных из O, S или N; -C3-C12циклоалкила, замещенного -C3-C12циклоалкила, -C3-C12циклоалкенила или замещенного -C3-C12циклоалкенила; каждый из которых может быть необязательно замещенным;
m равно 0, 1, 2 или 3;
при условии, что если R'1 представляет собой -COO-R3, X представляет собой N, R представляет собой замещенный фенил, а RB представляет собой метил, тогда R3 не является метилом или этилом;
или ее солью, сольватом или гидратом.
В соответствии с определенными вариантами осуществления R представляет собой арил или гетероарил, каждый из которых является необязательно замещенным. В соответствии с определенными вариантами осуществления R представляет собой фенил или пиридил, каждый из которых является необязательно замещенным. В соответствии с определенными вариантами осуществления R представляет собой пара-Cl-фенил, орто-Cl-фенил, мета-Cl-фенил, пара-F-фенил, орто-F-фенил, мета-F-фенил или пиридинил.
В соответствии с определенными вариантами осуществления R'1 представляет собой -COO-R3, необязательно замещенный арил или необязательно замещенный гетероарил; а R3 представляет собой -C1-C8алкил, который содержит 0, 1, 2 или 3 гетероатома, выбранных из O, S или N, и который может быть необязательно замещенным. В соответствии с определенными вариантами осуществления R'1 представляет собой -COO-R3, а R3 представляет собой метил, этил, пропил, изопропил, бутил, втор-бутил или трет-бутил; или R'1 представляет собой H или необязательно замещенный фенил.
В соответствии с определенными вариантами осуществления RB представляет собой метил, этил, гидроксиметил, метоксиметил, трифторметил, COOH, COOMe, COOEt, COOCH2OC(O)CH3.
В соответствии с определенными вариантами осуществления RB представляет собой метил, этил, гидроксиметил, метоксиметил, трифторметил, COOH, COOMe, COOEt или COOCH2OC(O)CH3. В соответствии с определенными вариантами осуществления каждый RA независимо представляет собой необязательно замещенный алкил, или любые два RA вместе с атомами, к которым они присоединены, могут образовывать конденсированный арил.
В соответствии с определенными вариантами осуществления каждый RA представляет собой метил.
В соответствии с некоторыми аспектами ингибиторы BET представляют собой соединение с формулой III:
(III),
где
X представляет собой N или CR5;
R5 представляет собой H, алкил, циклоалкил, гетероциклоалкил, арил или гетероарил, каждый из которых является необязательно замещенным;
RB представляет собой H, алкил, гидроксилалкил, аминоалкил, алкоксиалкил, галогеналкил, гидрокси, алкокси или -COO-R3, каждый из которых является необязательно замещенным;
кольцо A представляет собой арил или гетероарил;
каждый RA независимо представляет собой алкил, циклоалкил, гетероциклоалкил, арил или гетероарил, каждый из которых является необязательно замещенным; или любые два RA вместе с атомами, к которым они присоединены, могут образовывать конденсированную арильную или гетероарильную группу;
R представляет собой алкил, циклоалкил, гетероциклоалкил, арил или гетероарил; каждый из которых является необязательно замещенным;
каждый R3 независимо выбран из группы, состоящей из:
(i) H, арила, замещенного арила, гетероарила или замещенного гетероарила;
(ii) гетероциклоалкила или замещенного гетероциклоалкила;
(iii) -C1-C8алкила, -C2-C8алкенила или -C2-C8алкинила, причем каждый из них содержит 0, 1, 2 или 3 гетероатома, выбранных из O, S или N; -C3-C12циклоалкила, замещенного -C3-C12циклоалкила, -C3-C12циклоалкенила или замещенного -C3-C12циклоалкенила; каждый из которых может быть необязательно замещенным; и
(iv) NH2, N=CR4R6;
каждый R4 независимо представляет собой H, алкил, алкил, циклоалкил, гетероциклоалкил, арил или гетероарил, каждый из которых является необязательно замещенным;
или R3 и R4 взяты вместе с атомом азота, к которому они присоединены, с образованием 4-10-членного кольца;
R6 представляет собой алкил, алкенил, циклоалкил, циклоалкенил, гетероциклоалкил, арил или гетероарил, каждый из которых является необязательно замещенным; или R4 и R6 взяты вместе с атомом углерода, к которому они присоединены, с образованием 4-10-членного кольца;
m равно 0, 1, 2 или 3;
при условии, что:
(a) если кольцо A представляет собой тиенил, X представляет собой N, R представляет собой фенил или замещенный фенил, RB представляет собой метил, тогда R3 и R4 не взяты вместе с атомом азота, к которому они присоединены, с образованием морфолинового кольца; и
(b) если кольцо A представляет собой тиенил, X представляет собой N, R представляет собой замещенный фенил, R2 представляет собой H, RB представляет собой метил, и один из R3 и R4 представляет собой H, тогда другой из R3 и R4 не является метилом, гидроксиэтилом, алкокси, фенилом, замещенным фенилом, пиридилом или замещенным пиридилом; и
или ее солью, сольватом или гидратом.
В соответствии с определенными вариантами осуществления R представляет собой арил или гетероарил, каждый из которых является необязательно замещенным. В соответствии с определенными вариантами осуществления R представляет собой фенил или пиридил, каждый из которых является необязательно замещенным.
В соответствии с определенными вариантами осуществления R представляет собой пара-Cl-фенил, орто-Cl-фенил, мета-Cl-фенил, пара-F-фенил, орто-F-фенил, мета-F-фенил или пиридинил. В соответствии с определенными вариантами осуществления R3 представляет собой H, NH2 или N=CR4R6.
В соответствии с определенными вариантами осуществления каждый R4 независимо представляет собой H, алкил, циклоалкил, гетероциклоалкил, арил, гетероарил; каждый из которых является необязательно замещенным.
В соответствии с определенными вариантами осуществления представляет собой алкил, алкенил, циклоалкил, циклоалкенил, гетероциклоалкил, арил или гетероарил, каждый из которых является необязательно замещенным.
В соответствии с некоторыми аспектами ингибиторы BET представляют собой соединение с формулой IV:
(IV),
где
X представляет собой N или CR5;
R5 представляет собой H, алкил, циклоалкил, гетероциклоалкил, арил или гетероарил, каждый из которых является необязательно замещенным;
RB представляет собой H, алкил, гидроксилалкил, аминоалкил, алкоксиалкил, галогеналкил, гидрокси, алкокси или -COO-R3, каждый из которых является необязательно замещенным;
кольцо A представляет собой арил или гетероарил;
каждый RA независимо представляет собой алкил, циклоалкил, гетероциклоалкил, арил или гетероарил, каждый из которых является необязательно замещенным; или любые два RA вместе с атомами, к которым они присоединены, могут образовывать конденсированную арильную или гетероарильную группу;
R1 представляет собой -(CH2)n-L, в котором n равно 0-3, а L представляет собой H, -COO-R3, -CO-R3, -CO-N(R3R4), -S(O)2-R3, -S(O)2-N(R3R4), N(R3R4), N(R4)C(O)R3, необязательно замещенный арил или необязательно замещенный гетероарил;
R2 представляет собой H, D, галоген или необязательно замещенный алкил;
каждый R3 независимо выбран из группы, состоящей из:
(i) H, арила, замещенного арила, гетероарила или замещенного гетероарила;
(ii) гетероциклоалкила или замещенного гетероциклоалкила;
(iii) -C1-C8алкила, -C2-C8алкенила или -C2-C8алкинила, причем каждый из них содержит 0, 1, 2 или 3 гетероатома, выбранных из O, S или N; -C3-C12циклоалкила, замещенного -C3-C12циклоалкила, -C3-C12циклоалкенила или замещенного -C3-C12циклоалкенила; каждый из которых может быть необязательно замещенным; и
(iv) NH2, N=CR4R6;
каждый R4 независимо представляет собой H, алкил, алкил, циклоалкил, гетероциклоалкил, арил или гетероарил, каждый из которых является необязательно замещенным;
или R3 и R4 взяты вместе с атомом азота, к которому они присоединены, с образованием 4-10-членного кольца;
R6 представляет собой алкил, алкенил, циклоалкил, циклоалкенил, гетероциклоалкил, арил или гетероарил, каждый из которых является необязательно замещенным; или R4 и R6 взяты вместе с атомом углерода, к которому они присоединены, с образованием 4-10-членного кольца;
m равно 0, 1, 2 или 3;
при условии, что
(a) если кольцо A представляет собой тиенил, X представляет собой N, R2 представляет собой H, RB представляет собой метил, а R1 представляет собой -(CH2)n-L, в котором n равно 0, а L представляет собой -CO-N(RaR4), тогда R3 и R4 не взяты вместе с атомом азота, к которому они присоединены, с образованием морфолинового кольца;
(b) если кольцо A представляет собой тиенил, X представляет собой N, R2 представляет собой H, RB представляет собой метил, а R1 представляет собой -(CH2)n-L, в котором n равно 0, а L представляет собой -CO-N(R3R4), и один из R3 и R4 представляет собой H, тогда другой из R3 и R4 не является метилом, гидроксиэтилом, алкокси, фенилом, замещенным фенилом, пиридилом или замещенным пиридилом; и
(c) если кольцо A представляет собой тиенил, X представляет собой N, R2 представляет собой H, RB представляет собой метил, а R1 представляет собой -(CH2)n-L, в котором n равно 0, а L представляет собой -COO-R3, тогда R3 не является метилом или этилом; или
его соль, сольват или гидрат.
В соответствии с определенными вариантами осуществления R1 представляет собой -(CH2)n-L, в котором n равно 0-3, а L представляет собой -COO-R3, необязательно замещенный арил или необязательно замещенный гетероарил; и R3 представляет собой -C1-C8алкил, который содержит 0, 1, 2 или 3 гетероатома, выбранных из O, S или N, и который может быть необязательно замещенным. В соответствии с определенными вариантами осуществления n равно 1 или 2, а L представляет собой алкил или -COO-R3, и R3 представляет собой метил, этил, пропил, изопропил, бутил, втор-бутил или трет-бутил; или n равно 1 или 2, а L представляет собой H или необязательно замещенный фенил.
В соответствии с определенными вариантами осуществления R2 представляет собой H или метил.
В соответствии с определенными вариантами осуществления RB представляет собой метил, этил, гидроксиметил, метоксиметил, трифторметил, COOH, COOMe, COOEt, COOCH2OC(O)CH3.
В соответствии с определенными вариантами осуществления кольцо А представляет собой фенил, нафтил, бифенил, тетрагидронафтил, инданил, пиридил, фуранил, индолил, пиримидинил, пиридизинил, пиразинил, имидазолил, оксазолил, тиенил, тиазолил, триазолил, изоксазолил, хинолинил, пирролил, пиразолил или 5,6,7,8-тетрагидроизохинолинил.
В соответствии с определенными вариантами осуществления каждый RA независимо представляет собой необязательно замещенный алкил, или любые два RA вместе с атомами, к которым они присоединены, могут образовывать арил.
Способы согласно настоящему изобретению также относятся к соединениям с формулами V-XXII и к любому описанному в настоящем документе соединению.
В соответствии с другим аспектом соединение является соединением, представленным формулой:
или ее солью, сольватом или гидратом.
В соответствии с определенными вариантами осуществления соединение является (+)-JQl:
или ее солью, сольватом или гидратом.
В соответствии с другим аспектом соединение является соединением, представленным формулой:
или
или ее солью, сольватом или гидратом.
В соответствии с другим аспектом соединение является соединением, представленным формулой:
или
или ее солью, сольватом или гидратом.
В соответствии с другим аспектом соединение является соединением, представленным любой из следующих формул:
или ее солью, сольватом или гидратом.
В соответствии с другим аспектом соединение является соединением, представленным любой из следующих формул:
или
или ее солью, сольватом или гидратом.
В соответствии с другим аспектом соединение является соединением, представленным любой из следующих:
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
;
или ее солью, сольватом или гидратом.
В соответствии с некоторыми вариантами осуществления соединение согласно настоящему изобретению может быть представлено одной из следующих структур:
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
или
;
или ее солью, сольватом или гидратом.
В соответствии с одним вариантом осуществления соединение представлено структурой:
или ее солью, сольватом или гидратом. В соответствии с другим вариантом осуществления соединение представлено структурой:
или ее солью, сольватом или гидратом.
В соответствии с другим вариантом осуществления соединение представлено структурой:
или ее солью, сольватом или гидратом.
В соответствии с определенными вариантами осуществления соединение согласно настоящему изобретению может иметь хиральность, противоположную любому показанному в настоящем документе соединению.
В соответствии с определенными вариантами осуществления соединение является соединением, представленным формулой (V), (VI) или (VII):
(V),
(VI),
(VII),
в которой R, Rl, и R2, и RB имеют то же значение, что и в формуле (I); Y представляет собой O, N, S или CR5, в котором R5 имеет то же значение, что и в формуле (I); n равно 0 или 1; а пунктирное кольцо в формуле (VII) указывает на ароматическое или неароматическое кольцо; или его солью, сольватом или гидратом.
В соответствии с определенными вариантами осуществления любой из формул I- IV и VI (или любой формулы в настоящем документе), R6 представляет собой отличную от карбонильной часть альдегида, показанную в приведенной ниже таблице (т. е. для альдегида с формулой R6CHO, R6 представляет собой отличную от карбонильной часть альдегида). В соответствии с определенными вариантами осуществления R4 и R6 вместе представляют собой показанную ниже отличную от карбонильной часть кетона (т. е. для кетона с формулой R6C(O)R4, R4 и R6 представляют собой отличную от карбонильной часть кетона).
| Таблица A | |||
| Секция 1 | |||
| 01 | 02 | 03 | |
| A |
|
|
|
| B |
|
|
|
| C |
|
|
|
| D |
|
|
|
| E |
|
|
|
| F |
|
|
|
| G |
|
|
|
| H |
|
|
|
| Секция 2 | |||
| 01 | 02 | 03 | |
| A |
|
|
|
| B |
|
|
|
| C |
|
|
|
| D |
|
|
|
| E |
|
|
|
| F |
|
|
|
| G |
|
|
|
| H |
|
|
|
| Секция 3 | |||
| 01 | 02 | 03 | |
| A |
|
|
|
| B |
|
|
|
| C |
|
|
|
| D |
|
|
|
| E |
|
|
|
| F |
|
|
|
| G |
|
|
|
| H |
|
|
|
| Секция 4 | |||
| 01 | 02 | 03 | |
| A |
|
|
|
| B |
|
|
|
| C |
|
|
|
| D |
|
|
|
| E |
|
|
|
| F |
|
|
|
| G |
|
|
|
| H | |||
| Секция 1 | |||
| 04 | 05 | 06 | |
| A |
|
|
|
| B |
|
|
|
| C |
|
|
|
| D |
|
|
|
| E |
|
|
|
| F |
|
|
|
| G |
|
|
|
| H |
|
|
|
| Секция 2 | |||
| 04 | 05 | 06 | |
| A |
|
|
|
| B |
|
|
|
| C |
|
|
|
| D |
|
|
|
| E |
|
|
|
| F |
|
|
|
| G |
|
|
|
| H |
|
|
|
| Секция 3 | |||
| 04 | 05 | 06 | |
| A |
|
|
|
| B |
|
|
|
| C |
|
|
|
| D |
|
|
|
| E |
|
|
|
| F |
|
|
|
| G |
|
|
|
| H |
|
|
|
| Секция 4 | |||
| 04 | 05 | 06 | |
| A |
|
|
|
| B |
|
|
|
| C |
|
|
|
| D |
|
|
|
| E |
|
|
|
| F |
|
|
|
| G |
|
|
|
| H | |||
| Секция 1 | |||
| 07 | 08 | 09 | |
| A |
|
|
|
| B |
|
|
|
| C |
|
|
|
| D |
|
|
|
| E |
|
|
|
| F |
|
|
|
| G |
|
|
|
| H |
|
|
|
| Секция 2 | |||
| 07 | 08 | 09 | |
| A |
|
|
|
| B |
|
|
|
| C |
|
|
|
| D |
|
|
|
| E |
|
|
|
| F |
|
|
|
| G |
|
|
|
| H |
|
|
|
| Секция 3 | |||
| 07 | 08 | 09 | |
| A |
|
|
|
| B |
|
|
|
| C |
|
|
|
| D |
|
|
|
| E |
|
|
|
| F |
|
|
|
| G |
|
|
|
| H |
|
|
|
| Секция 4 | |||
| 07 | 08 | 09 | |
| A |
|
|
|
| B |
|
|
|
| C |
|
|
|
| D |
|
|
|
| E |
|
|
|
| F |
|
|
|
| G |
|
|
|
| H | |||
| Секция 1 | |||
| 10 | 11 | 12 | |
| A |
|
|
|
| B |
|
|
|
| C |
|
|
|
| D |
|
|
|
| E |
|
|
|
| F |
|
|
|
| G |
|
|
|
| H |
|
|
|
| Секция 2 | |||
| 10 | 11 | 12 | |
| A |
|
|
|
| B |
|
|
|
| C |
|
|
|
| D |
|
|
|
| E |
|
|
|
| F |
|
|
|
| G |
|
|
|
| H |
|
|
|
| Секция 3 | |||
| 10 | 11 | 12 | |
| A |
|
|
|
| B |
|
|
|
| C |
|
|
|
| D |
|
|
|
| E |
|
|
|
| F |
|
|
|
| G |
|
|
|
| H |
|
|
|
| Секция 4 | |||
| 10 | 11 | 12 | |
| A |
|
|
|
| B |
|
|
|
| C |
|
|
|
| D |
|
|
|
| E |
|
|
|
| F |
|
|
|
| G |
|
|
|
| H |
В соответствии с одним вариантом осуществления соединение является соединением, которое представлено формулой:
(VIII), или его солью, сольватом или гидратом. В соответствии с определенными вариантами осуществления соединение представляет собой (рацемическую смесь) JQl; в соответствии с определенными вариантами осуществления соединение представляет собой (+)-JQl. В соответствии с определенными вариантами осуществления соединение представляет собой соединение, выбранное из группы, состоящей из:
(3),
(4),
или их соль, сольват или гидрат.
Дополнительные примеры соединений включают соединения согласно любой из следующих формул:
Также 2- и 4-пиридил
или их соль, сольват или гидрат.
В формулах IΧ-ΧΧΙΙ, R и R' могут представлять собой, например, H, арил, замещенный арил, гетероарил, гетероарил, гетероциклоалкил, -C1-C8алкил, -C2-C8алкенил, -C2-C8алкинил, -C3-C12циклоалкил, замещенный -C3-C12циклоалкил, -C3-C12циклоалкенил или замещенный -C3-C12циклоалкенил, каждый из которых может быть необязательно замещенным. В формуле XIV, X может быть заместителем для арильной группы, как описано в настоящем документе.
В соответствии с некоторыми аспектами ингибиторы BET представляют собой соединение со следующей формулой:
где
R1 представляет собой алкил с количеством атомов углерода, равным 1-4,
R2 представляет собой атом водорода; атом галогена; или алкил с количеством атомов углерода, равным 1-4, необязательно замещенный атомом галогена или гидроксильной группой,
R3 представляет собой атом галогена; фенил, необязательно замещенный атомом галогена, алкилом с количеством атомов углерода, равным 1-4, алкокси с количеством атомов углерода, равным 1-4, или циано; -NRS-(CH2)m-R6, где R5 представляет собой атом водорода или алкил с количеством атомов углерода, равным 1-4, m представляет собой целое число, равное 0-4, а R6 представляет собой фенил или пиридил, необязательно замещенный атомом галогена; или -NR7-CO-(CH2)n-R8, где R7 представляет собой атом водорода или алкил с количеством атомов углерода, равным 1-4, n представляет собой целое число, равное 0-2, а R8 представляет собой фенил или пиридил, необязательно замещенный атомом галогена, и
R4 представляет собой -(CH2)a-CO-NH-R9, где a представляет собой целое число, равное 1-4, а R9 представляет собой алкил с количеством атомов углерода, равным 1-4; гидроксиалкил с количеством атомов углерода, равным 1-4; алкокси с количеством атомов углерода, равным 1-4; или фенил или пиридил, необязательно замещенный алкилом с количеством атомов углерода, равным 1-4, алкокси с количеством атомов углерода, равным 1-4, аминогруппой или гидроксильной группой; или -(CH2)b-COOR10, где b представляет собой целое число, равное 1-4, а R10 представляет собой алкил с количеством атомов углерода, равным 1-4,
или его фармацевтически приемлемую соль, или гидрат, или сольват.
В соответствии с некоторыми примерами R1 представляет собой метил.
В соответствии с некоторыми примерами R2 представляет собой атом галогена (например, хлор), метил или гидроксиметил.
В соответствии с некоторыми примерами R3 представляет собой атом галогена, метоксифенил, цианофенил, -NR5′-(CH2)m′-R6′, где R5′ представляет собой атом водорода или метил, m′ равно 0 или 1, а R6′ представляет собой фенил, пиридил или фенил, замещенный атомом фтора; и -NR7′-CO-(CH2)n′-R8′, где R7′ представляет собой атом водорода, n′ равно 2, а R8′ представляет собой фенил, и более предпочтительные примеры включают атом хлора, цианофенил, фениламино и фенетилкарбониламино. Наиболее предпочтительные примеры включают атом хлора и 3-цианофенил.
В соответствии с некоторыми примерами R4 представляет собой -(CH2)8′-CO-NH-R9′, где a′ равно 1, а R9 представляет собой метил, гидроксиэтил, метокси, аминофенил, гидроксифенил, пиридил или метоксипиридил; и -(CH2)b′-COOR10, где b′ равно 1, а R10′ представляет собой метил или этил, такой как гидроксифениламинокарбонилметил и метоксикарбонилметил. Другие примеры включают 4-гидроксифениламинокарбонилметил и метоксикарбонилметил. Кроме того, атом углерода, с которым связан R4, является асимметричным атомом углерода. Его стерическая конфигурация может быть любой из S-конфигурации, R-конфигурации и их смеси, при этом предпочтительной является S-конфигурация.
В соответствии с некоторыми аспектами ингибиторы BET включают (S)-2-[4-(4-хлорфенил)-2,3,9-триметил-6H-тиено[3,2-f][1,2,4]триазоло[4,3-a][1,4]диазепин-6-ил]-N-(4-гидроксифенил)ацетамид и его дигидрат.
В соответствии с некоторыми аспектами ингибиторы BET представляют собой метил-(S)-{4-(3′-цианобифенил-4-ил)-2,3,9-триметил-6H-тиено[3,2-f][1,2,4]триазоло[4,3-a][1,4]диазепин-6-ил}ацетат.
В соответствии с некоторыми аспектами ингибиторы BET представляют собой метил-(S)-{2,3,9-триметил-4-(4-фениламинофенил)-6H-тиено[3,2-f][1,2,4]триазоло[4,3-a][1,4]диазепин-6-ил}ацетат.
В соответствии с некоторыми аспектами ингибиторы BET представляют собой метил-(S)-{2,3,9-триметил-4-[4-(3-фенилпропиониламино)фенил]-6H-тиено[3,2-f][1,2,4]триазоло[4,3-a][1,4]диазепин-6-ил}ацетат.
В соответствии с некоторыми аспектами ингибиторы BET представляют собой (S)-2-[4-(4-хлорфенил)-2,3,9-триметил-6H-тиено[3,2-f][1,2,4]триазоло[4,3-a][1,4]диазепин-6-ил]-N-(4-гидроксифенил)ацетамид или его дигидрат.
В соответствии с некоторыми аспектами ингибиторы BET представляют собой соединение со следующей формулой:
В соответствии с некоторыми аспектами ингибиторы BET представляют собой соединение со следующей формулой:
В соответствии с некоторыми аспектами ингибиторы BET представляют собой соединение со следующей формулой:
В соответствии с некоторыми аспектами ингибиторы BET представляют собой соединение со следующей формулой:
В соответствии с некоторыми аспектами ингибиторы BET представляют собой соединение со следующей формулой:
В соответствии с некоторыми вариантами осуществления ингибитор BET представляет собой низкомолекулярное соединение, которое связывается с карманом связывания первого бромодомена члена семейства BET (например, BRD1, BRD2, BRD3, BRD4, BRD7, BRDT; см. WO 2011143669). В соответствии с некоторыми предпочтительными вариантами осуществления ингибитор BET представляет собой JQ 1 и имеет приведенную ниже формулу:
.
Раскрываемые ингибиторы бромодомена можно применять в комбинации с противоопухолевой иммунотерапией. Существует два различных типа иммунотерапии: пассивная иммунотерапия предусматривает использование компонентов иммунной системы для направления целевой цитотоксической активности на клетки злокачественной опухоли, не обязательно инициируя иммунный ответ у пациента, тогда как активная иммунотерапия активно запускает эндогенный иммунный ответ. Пассивные стратегии включают применение моноклональных антител (mAb), продуцируемых В-клетками в ответ на специфический антиген. Разработка гибридомной технологии в 1970-х годах и выявление опухолеспецифических антигенов дала возможность фармацевтической разработке mAb, которые могут специфически указывать в качестве мишеней опухолевые клетки для их разрушения иммунной системой. До сих пор mAb были наибольшим успехом в истории иммунотерапии; тройку наиболее продаваемых противораковых лекарственных средств в 2012 году составили mAb. В их число входит ритуксимаб (ритуксан, Genentech), который связывается с белком CD20, который характеризуется высоким уровнем экспрессии на поверхности В-клеточных злокачественных новообразований, таких как неходжкинская лимфома (NHL). Ритуксимаб одобрен FDA для лечения NHL и хронического лимфолейкоза (CLL) в комбинации с химиотерапией. Другим важным mAb является трастузумаб (герцептин, Genentech), который произвел революцию в лечении положительного по HER2 (рецептору эпидермального фактора роста 2 человека) рака молочной железы путем целенаправленного воздействия на экспрессию HER2.
Для активного запуска противоопухолевого иммунного ответа были разработаны терапевтические противораковые вакцины. В отличие от профилактических вакцин, которые применяют превентивно для лечения инфекционных заболеваний, терапевтические вакцины предназначены для лечения верифицированной злокачественной опухоли путем стимуляции иммунного ответа против опухолевого специфического антигена. В 2010 году FDA был одобрен сипулейцел-Т (провендж; Dendreon Corporation) для лечения метастатического, кастрационно-резистентного рака предстательной железы на основе результатов испытания IMPACT (иммунотерапевтического лечения аденокарциномы предстательной железы), в котором он улучшал OS за 4,1 месяца и снижал риск смерти на 22% по сравнению с плацебо. Преимущество активных иммунотерапий заключается в том, что они обладают потенциалом для обеспечения продолжительной противоопухолевой активности путем вовлечения как врожденной, так и приобретенной формы иммунного ответа. Несмотря на то, что моноклональные антитела обычно рассматривают как пассивные разновидности иммунотерапии, все больше доказательств того, что они также индуцируют приобретенный иммунный ответ посредством эффекта, «подобного вакцинации».
Два известных пути ингибирования иммунных контрольных точек задействуют передачу сигнала посредством антигена цитотоксического Т-лимфоцита 4 (CTLA-4) и рецепторов запрограммированной гибели 1 (PD-1). Такие белки являются членами семейства CD28-B7 косигнальных молекул, которые играют важную роль на всех стадиях функционирования Т-клеток. Рецептор PD-1 (также известный как CD279) экспрессируется на поверхности активированных T-клеток. Его лиганды, PD-L1 (B7-H1; CD274) и PD-L2 (B7-DC; CD273), экспрессируются на поверхности APC, таких как дендритные клетки или макрофаги. PD-L1 является преобладающим лигандом, в то время как PD-L2 характеризуется значительно более ограниченным паттерном экспрессии. При связывании лигандов с PD-1 ингибирующий сигнал передается в Т-клетку, что снижает продукцию цитокинов и ингибирует пролиферацию Т-клеток. В таблице 1 представлен перечень проходящих на данный момент клинические испытания антител, целенаправленно воздействующих на иммунологические контрольные точки.
| Таблица 1. Клинически оцениваемые антитела, блокирующие контрольные точки | |
| Цель | Антитело |
| CTLA-4 | Ипилимумаб (MDX-010) |
| Тремелимумаб (CP-675,206) |
|
| PD1 | Ниволумаб (BMS-936558 или MDX1106) |
| CT-011 | |
| MK-3475 | |
| PDL1 | MDX-1105 (BMS-936559) |
| MPDL3280A | |
| MSB0010718C | |
| PDL2 | rHIgM12B7 |
| B7-H3 | MGA271 |
| LAG3 | BMS-986016 |
Человеческие моноклональные антитела к рецептору запрограммированной гибели 1 (PD-1) и способы лечения злокачественной опухоли с применением антител к PD-1 отдельно или в комбинации с другими иммунотерапевтическими средствами описаны в патенте США № 8008449, который в отношении таких антител включен посредством ссылки. Антитела к PD-L1 и их применения описаны в патенте США № 8552154, который в отношении таких антител включен посредством ссылки. Противораковое средство, содержащее антитело к PD-1 или антитело к PD-L1, описано в патенте США № 8617546, который в отношении таких антител включен посредством ссылки.
Также раскрыта композиция, например фармацевтическая композиция, содержащая ингибитор бромодомена, составленный вместе с фармацевтически приемлемым носителем. Фармацевтические композиции можно вводить при комбинированной терапии, т. е. в комбинации с другими средствами. Например, комбинированная терапия может включать антитело, которое является ингибитором бромодомена, в комбинации по меньшей мере с еще одним противовоспалительным или иммунодепрессивным средством.
В контексте настоящего документа «фармацевтически приемлемый носитель» включает все возможные растворители, диспергирующие среды, покрытия, антибактериальные и противогрибковые средства, изотонические и задерживающие абсорбцию средства и т. п., которые являются физиологически совместимыми. Предпочтительно, носитель подходит для внутривенного, внутримышечного, подкожного, парентерального, спинального или эпидермального введения (например, посредством инъекции или инфузии). В зависимости от пути введения, активное соединение, т. е. антитело, иммуноконъюгат или биспецифическая молекула, могут быть покрыты материалом для защиты соединения от действия кислот и других естественных условий, которые могут инактивировать соединение.
Раскрываемая фармацевтическая композиция может включать одну или более фармацевтически приемлемых солей. «Фармацевтически приемлемая соль» означает соль, которая сохраняет необходимую биологическую активность исходного соединения и не оказывает никаких нежелательных токсикологических эффектов.
Раскрываемая фармацевтическая композиция может включать фармацевтически приемлемый антиоксидант. Примеры фармацевтически приемлемых антиоксидантов включают: (1) водорастворимые антиоксиданты, такие как аскорбиновая кислота, гидрохлорид цистеина, бисульфат натрия, метабисульфит натрия, сульфит натрия и т. п.; (2) жирорастворимые антиоксиданты, такие как аскорбилпальмитат, бутилированный гидроксианизол (BHA), бутилированный гидрокситолуол (BHT), лецитин, пропилгаллат, альфа-токоферол и т. п.; и (3) комплексоны металлов, такие как лимонная кислота, этилендиаминтетрауксусная кислота (EDTA), сорбит, винная кислота, фосфорная кислота и т. п.
Примеры подходящих водных и неводных носителей, которые можно использовать в фармацевтических композициях, включают воду, этанол, полиолы (такие как глицерин, пропиленгликоль, полиэтиленгликоль и т. п.) и их подходящие смеси, растительные масла, такие как оливковое масло, и инъекционные сложные органические эфиры, такие как этилолеат. Надлежащую текучесть можно поддерживать, например, с помощью материалов для покрытия, таких как лецитин, путем поддержания необходимого размера частиц в случае дисперсий и с помощью поверхностно-активных веществ.
Такие композиции также могут содержать вспомогательные средства, такие как консерванты, смачивающие средства, эмульгаторы и диспергирующие средства. Предупреждение наличия микроорганизмов можно обеспечить как с помощью процедур стерилизации, как описано выше, так и с помощью включения различных антибактериальных и противогрибковых средств, например, парабена, хлорбутанола, фенолсорбиновой кислоты и т. п. Также может быть необходимым включение в композиции изотонических средств, таких как сахара, хлорид натрия и т. п. Кроме того, длительная абсорбция инъекционной фармацевтической формы может быть достигнута путем включения средств, которые замедляют абсорбцию, таких как моностеарат алюминия и желатин.
Фармацевтически приемлемые носители включают стерильные водные растворы или дисперсии и стерильные порошки для приготовления стерильных инъекционных растворов или дисперсии для немедленного введения. Применение таких сред и средств для фармацевтически активных веществ известно из уровня техники. В фармацевтических композициях согласно настоящему изобретению предполагается применение любой обычной среды или средства, за исключением тех случаев, когда они не совместимы с активным соединением. В композиции также могут быть включены дополнительные активные соединения.
Терапевтические композиции обычно должны оставаться стерильными и стабильными в условиях производства и хранения. Композицию можно составить в виде раствора, микроэмульсии, липосомы или другой упорядоченной структуры, подходящей для высокой концентрации лекарственного средства. Носитель может представлять собой растворитель или дисперсионную среду, содержащую, например, воду, этанол, полиол (например, глицерин, пропиленгликоль и жидкий полиэтиленгликоль и т. п.) и их подходящие смеси. Надлежащую текучесть можно поддерживать, например, с помощью покрытия, такого как лецитин, путем поддержания необходимого размера частиц в случае дисперсии и с помощью поверхностно-активных веществ. Во многих случаях в композицию будет предпочтительным включить изотонические средства, например сахара, полиспирты, такие как маннит, сорбит, или хлорид натрия. Длительной абсорбции инъекционных композиций можно достичь включением в композицию средства, которое задерживает абсорбцию, например, моностеаратных солей и желатина.
Стерильные инъекционные растворы можно приготовить путем включения активного соединения в необходимом количестве в подходящий растворитель с одним или комбинацией перечисленных выше ингредиентов, при необходимости, с последующей стерилизационной микрофильтрацией. Как правило, дисперсии готовят путем включения активного соединения в стерильный наполнитель, который содержит основную дисперсионную среду и другие необходимые ингредиенты из вышеперечисленных. В случае стерильных порошков для приготовления стерильных инъекционных растворов, предпочтительными способами приготовления являются вакуумная сушка и сублимационная сушка (лиофилизация), которые дают на выходе порошок активного ингредиента с любым дополнительным необходимым ингредиентом из их предварительно подвергнутого стерилизующей фильтрации раствора.
Количество активного ингредиента, которое можно объединить в комбинации с материалом-носителем для получения однократной лекарственной формы, будет варьировать в зависимости от подвергаемого лечению субъекта и конкретного способа введения. Количество активного ингредиента, которое можно объединить в комбинации с материалом-носителем для получения однократной лекарственной формы, обычно будет таким количеством в композиции, которое производит терапевтический эффект. Как правило, из ста процентов такое количество будет варьировать от приблизительно 0,01 процента до приблизительно девяноста девяти процентов активного ингредиента, предпочтительно от приблизительно 0,1 процента до приблизительно 70 процентов, наиболее предпочтительно от приблизительно 1 процента до приблизительно 30 процентов активного ингредиента в комбинации с фармацевтически приемлемым носителем.
Для получения оптимального необходимого ответа (например, терапевтического ответа) режимы дозирования подвергают корректировке. Например, можно вводить однократную дозу, можно вводить несколько раздельных доз на протяжении периода времени или дозу можно пропорционально уменьшать или увеличивать, как того требует терапевтическая ситуация. Особое преимущество обеспечивает составление парентеральных композиций в дозированную лекарственную форму для облегчения введения и равномерности дозировки. В контексте настоящего документа дозированная лекарственная форма относится к физически дискретным единицам, пригодным в качестве единых дозировок для подлежащих лечению субъектов; причем каждая единица содержит предопределенное количество активного соединения, рассчитанное для получения необходимого терапевтического эффекта, в сочетании с необходимым фармацевтическим носителем. Спецификация для дозированных лекарственных форм согласно настоящему изобретению определяется и непосредственно зависит от (а) характерных особенностей активного соединения и конкретного терапевтического эффекта, который должен быть достигнут, и (б) присущих на данном уровне техники ограничений составления смеси с таким активным соединением для лечения чувствительности у индивидуумов.
В случае введения ингибитора бромодомена дозировка варьирует от приблизительно 0,0001 до 100 мг/кг и чаще от 0,01 до 5 мг/кг массы тела реципиента. Например, дозировки могут составлять 0,3 мг/кг массы тела, 1 мг/кг массы тела, 3 мг/кг массы тела, 5 мг/кг массы тела или 10 мг/кг массы тела или в диапазоне 1-10 мг/кг. Иллюстративный режим лечения предусматривает введение раз в неделю, раз в две недели, раз в три недели, раз в четыре недели, раз в месяц, раз в 3 месяца или раз в три - 6 месяцев. Предпочтительные режимы дозирования для ингибитора бромодомена включают 1 мг/кг массы тела или 3 мг/кг массы тела посредством внутривенного введения, причем ингибитор бромодомена назначают согласно одной из следующих схем приема: (i) раз в четыре недели в течение шести дозировок, затем раз в три месяца; (ii) раз в три недели; (iii) 3 мг/кг массы тела с последующим 1 мг/кг массы тела раз в три недели.
Фактические уровни дозировок активных ингредиентов в фармацевтических композициях можно варьировать, с тем чтобы получить количество активного ингредиента, которое является эффективным для достижения необходимого терапевтического ответа для конкретного пациента, композиции и способа введения, причем без токсического воздействия на пациента. Выбранный уровень дозировки будет зависеть от ряда фармакокинетических факторов, в том числе активного вещества конкретных используемых композиций согласно настоящему изобретению, или его сложного эфира, соли или амида, пути введения, времени введения, скорости выведения конкретного используемого соединения, продолжительности лечения, других лекарственных средств, соединений и/или материалов, применяемых в комбинации с конкретными используемыми композициями, возраста, пола, массы, состояния, общего состояния здоровья и предыдущей истории болезни подвергаемого лечению пациента и подобных факторов, хорошо известных в области медицины.
«Терапевтически эффективная дозировка» предпочтительно приводит в результате к снижению тяжести симптомов заболевания, увеличению частоты и длительности периодов без симптомов заболевания или предупреждению нарушения функций или инвалидизации вследствие заболевания. Например, в случае лечения опухолей, «терапевтически эффективная дозировка» предпочтительно ингибирует клеточный рост или опухолевый рост по меньшей мере приблизительно на 20%, более предпочтительно по меньшей мере приблизительно на 40%, еще более предпочтительно по меньшей мере приблизительно на 60% и еще более предпочтительно по меньшей мере приблизительно на 80% по сравнению с субъектами, которые не подвергаются лечению. Способность соединения ингибировать опухолевый рост можно оценить на животной модельной системе, прогнозирующей эффективность для опухолей у человека. В качестве альтернативы, такое свойство композиции можно оценить путем исследования способности соединения ингибировать, и такое ингибирование in vitro оценивают с помощью анализов, известных специалисту в настоящей области. Терапевтически эффективное количество терапевтического соединения может уменьшать размер опухоли или иным образом облегчать симптомы у субъекта. Рядовой специалист в настоящей области техники сможет определить такие количества на основании таких факторов, как размер субъекта, тяжесть симптомов у субъекта и конкретная выбранная композиция или выбранный путь введения.
Раскрываемую в настоящем документе композицию можно вводить одним или более путями введения с применением одного или более способов, которые известны из уровня техники. Специалисту в настоящей области будет понятно, что путь и/или способ введения будет варьировать в зависимости от необходимых результатов. Предпочтительные пути введения антител согласно настоящему изобретению включают внутривенный, внутримышечный, внутридермальный, внутрибрюшинный, подкожный, спинальный или другие парентеральные пути введения, например, посредством инъекции или инфузии. В контексте настоящего документа фраза «парентеральное введение» означает способы введения, отличные от энтерального введения и местного применения, обычно посредством инъекции, и включает без ограничения внутривенную, внутримышечную, внутриартериальную, интратекальную, внутрикапсульную, внутриглазничную, внутрисердечную, внутридермальную, внутрибрюшинную, транстрахеальную, подкожную, внутрикожную, внутрисуставную, субкапсулярную, субарахноидальную, интраспинальную, эпидуральную и внутригрудинную инъекцию и инфузию. В качестве альтернативы, композицию можно вводить непарентеральным путем, таким как местное применение, эпидермальный или чрезслизистый путь введения, например, интраназально, перорально, вагинально, ректально, сублингвально или местно.
Активные соединения можно приготовить с носителями, которые будут защищать соединение от быстрого высвобождения, к примеру, состав с контролируемым высвобождением, в том числе имплантаты, трансдермальные пластыри и микроинкапсулированные системы доставки. Можно использовать биоразлагаемые биосовместимые полимеры, такие как этиленвинилацетат, полиангидриды, полигликолевая кислота, коллаген, сложные полиортоэфиры и полимолочная кислота. Многие способы получения таких композиций запатентованы или общеизвестны специалистам в данной области техники.
Активация Т-клеток может быть индуцирована либо ex vivo, либо in vivo аутологичными дендритными клетками, или искусственными антигенпрезентирующими клетками (aAPC), или путем конструирования T-клеток посредством трансгенной доставки T-клеточных рецепторов (TCR). Ex vivo-активированные аутологичные Т-клетки могут быть адоптивно перенесены пациентам для специфического уничтожения клеток злокачественной опухоли. Таким образом, также раскрыт способ ex vivo активации и увеличения количества антигенспецифических T-клеток для адоптивного переноса клеток (ACT). Данный способ предусматривает воздействие на популяцию антигенпрезентирующих клеток (АРС) популяцией Т-лимфоцитов в присутствии ингибитора бромодомена в условиях, подходящих для активации и увеличения количества антигенспецифических Т-клеток. Например, Т-лимфоциты могут быть выбраны из группы, состоящей из аутологичных противоопухолевых эффекторных лимфоцитов (TIL), Т-клеток, трансдуцированных высокоаффинными Т-клеточными рецепторами (TCR), и Т-клеток, трансдуцированных химерными антигенными рецепторами (CAR).
В альтернативном варианте, инъекция АРС может привести к in vivo иммунотерапии без необходимости использования культур аутологичных клеток. Таким образом, также раскрыт способ усиления функции APC ex vivo для in vivo иммунотерапии. Данный способ предусматривает приведение в контакт популяции антигенпрезентирующих клеток (APC) с ингибитором бромодомена.
К APC, которые можно применять в раскрываемых способах, относятся аутологичные дендритные клетки, макрофаги или их комбинация.
Был описан ряд вариантов осуществления настоящего изобретения. Тем не менее, будет понятно, что могут быть внесены различные модификации без отступления от сущности и объема настоящего изобретения. Следовательно, под объем приведенной далее формулы изобретения подпадают и другие варианты осуществления.
ПРИМЕРЫ
Пример 1: JQ 1, селективный ингибитор бромодомена, снижал экспрессию толерогенной молекулы PDL1 у антигенпрезентирующих клеток (APC) и восстанавливал чувствительность у анергических CD4+ T-клеток
Бромодомен и экстратерминальный домен (BET) является белковым доменом, который распознает ацетилированные остатки лизина, такие как расположенные на N-концевых хвостах гистонов. Это распознание зачастую является предпосылкой для белок-гистоновой ассоциации, ремоделирования хроматина и транскрипции гена. Роль белков BET в регуляции ответа генов воспалительных цитокинов посредством трансляции гистоновых меток была плохо изучена.
Принимая во внимание, что воспалительный статус АРС важен при определении активации Т-клеток относительно толерантности Т-клеток и что эпигенетические модификации конкретных генов у АРС играют ключевую роль в данном процессе, были определены функциональные последствия ингибирования BET у APC.
Материалы и способы
Для определения наилучшей рабочей концентрации JQ1 у PEM, высеянные PEM (в 96-луночный планшет) обрабатывали повышенной концентрацией JQ1 в течение 24 часов, а затем определяли жизнеспособность клеток. Приемлемым был установлен порог в 100-800 наномолей.
Макрофаги (PEM) обрабатывали различными концентрациями JQ1 в присутствии и в отсутствие LPS (стимулятора для макрофагов). Спустя 24 часа собирали кондиционированную среду и с помощью ELISA определяли продуцирование IL-10 и IL-6. Было отмечено снижение продукции как IL-10, так и IL-6, которое было дозозависимым. Экспрессию мРНК IL-6 и IL-10, при обработке посредством либо LPS, либо JQ1 и комбинацией этих двух, определяли с помощью ПЦР в режиме реального времени.
PEM обрабатывали различными концентрациями JQ1 в присутствии и в отсутствие LPS. Проводили проточную цитометрию на PEM, обработанных различными концентрациями JQ1 в присутствии и в отсутствие LPS, с использованием антител к PD-L1 и антител к PD-L2, а также изотипа в качестве контроля. В результате комбинированной обработки PEM посредством JQ1 и LPS была видна относительно сниженная экспрессия PD-L1 и PD-L2, нежели при обработке только LPS. Экспрессию мРНК PD-L1 и PD-L2, после обработки посредством LPS или JQ1 и комбинацией этих двух, также определяли с помощью ПЦР в режиме реального времени. В результате комбинированной обработки PEM посредством LPS+JQ1 наблюдали сниженную экспрессию мРНК PDL1.
PEM обрабатывали различными концентрациями JQ1 в присутствии и в отсутствие LPS. Спустя 24 часа PEM дважды промывали теплым RPMI. К высеянным макрофагам с пептидом OVA или без него вносили наивные CD4 Т-клетки или толерантные Т-клетки и совместно культивировали их в течение 48 часов. Продукцию IL-2 и IFN-γ определяли с помощью ELISA. В отсутствие пептида OVA отсутствовала и продукция IL-2 или IFN-γ. Имело место увеличение дозозависимой продукции CD4 Т-клеткой как IL-2, так и IFN-гамма. Комбинированная обработка (JQ1 + LPS) PEM приводила к усилению продукции IFN-гамма толерантными Т-клетками.
Таким образом, у наивных CD4 Т-клеток имело место не только увеличение антигенпрезентирующей способности, но, что более важно, после обработки посредством JQ1 имело место восстановление функции толерантных Т-клеток. Таким образом, АРС, обработанные посредством BDR-специфичного ингибитора JQ1, были более возбудимыми и проявляли сниженную экспрессию иммуносупрессорной молекулы PD-L1. Таким образом, ингибиторы BET, такие как JQ1, способны восстанавливать чувствительность у толерантных Т-клеток и являются перспективными в отношении способов применения в терапевтических целях и расширенного спектра клинического применения.
Результаты
Во-первых, были оценены эффекты JQ1, селективного низкомолекулярного ингибитора бромодомена BET, на функцию APC, а также была оценена его способность регулировать ответ с участием антигенспецифических CD4+ T-клеток. In vitro обработка активированных перитонеальных макрофагов (PEM) или дендритных клеток из костного мозга (DC) с увеличением концентраций JQ 1 приводила к снижению экспрессии и продукции белка противовоспалительного цитокина IL-10 и IL-6 в ответ на стимуляцию LPS (фиг. 2-4). В применяемой концентрации JQ 1 не влиял на жизнеспособность обработанных APC (фиг. 1). Во-вторых, анализ экспрессии молекул класса MHC и костимуляторных молекул выявил снижение экспрессии толерогенной молекулы PDL1 у JQ 1-обработанных APC в сравнении с необработанными АРС (фиг. 5-7). В-третьих, была оценена способность JQ 1-обработанных АРС презентировать родственный антиген наивным или толерантным антигенспецифическим CD4+ Т-клеткам. Обработка либо PEM, либо DC посредством JQ 1 повышала их антигенпрезентирующие способности, что приводило к эффективному примированию наивных CD4+ T-клеток, что подтверждалось увеличением у них продуцирования IL-2 (фиг. 8) и IFN-гамма (фиг. 9) в ответ на родственный антиген. Что более важно, JQ 1-обработанные АРС были способны восстанавливать чувствительность толерантных CD4+ Т-клеток, взятых у пациентов с лимфомой (фиг. 10).
В своей совокупности, APC, обработанные специфичным для бромодомена ингибитором JQ 1, являются более возбудимыми, проявляют более низкую экспрессию иммуносупрессорной молекулы PDL1 и, что более важно, способны восстанавливать чувствительность толерантных Т-клеток. Эти результаты раскрывают ранее неизвестный иммунологический эффект ингибиторов BET и расширяют спектр их клинического применения как перспективных адъювантов при противоопухолевой иммунотерапии.
Если не указано иное, все технические и научные термины, используемые в настоящем документе, имеют те же значения, которые обычно понимаются специалистом в той области, к которой относится раскрываемое изобретение. Цитируемые в настоящем документе публикации и материалы, в отношении которых их цитируют, определенно включены посредством ссылки.
Специалисты в данной области узнают или смогут установить, с помощью постановки простейшего эксперимента, многие эквиваленты конкретных вариантов осуществления описанного в настоящем документе изобретения. Такие эквиваленты понимают как охватываемые приведенной далее формулой изобретения.
1. Способ ex vivo активации и увеличения количества антигенспецифических T-клеток для адоптивного переноса клеток (ACT), предусматривающий воздействие на популяцию антигенпрезентирующих клеток (АРС) популяцией Т-лимфоцитов в присутствии ингибитора бромодомена, где указанный ингибитор бромодомена имеет следующую химическую формулу: 
.
2. Способ по п. 1, где T-лимфоциты выбраны из группы, состоящей из аутологичных противоопухолевых эффекторных лимфоцитов (TIL), Т-клеток, трансдуцированных высокоаффинными Т-клеточными рецепторами (TCR), и Т-клеток, трансдуцированных химерными антигенными рецепторами (CAR).
3. Способ по п. 1 или 2, где APC содержат аутологичные дендритные клетки, макрофаги или их комбинацию.
