Комбинированная терапия с применением липосомального иринотекана и ингибитора parp для лечения рака

Группа изобретений относится к области медицины, а именно к онкологии, и предназначена для лечения пациента с солидной опухолью. Способ лечения пациента с солидной опухолью включает i) систематическое введение пациенту липосомального иринотекана один раз каждые две недели и ii) введение ингибитора поли(АДФ-рибоза)полимеразы (PARP) ежесуточно в течение от 3 до 10 суток между последовательными введениями липосомального иринотекана. Ингибитор PARP вводят, начиная, по меньшей мере, через 2, 3, 4 или 5 дней после введения липосомального иринотекана и заканчивая, по меньшей мере, за 1, 2, 3, 4 или 5 дней до следующего введения липосомального иринотекана. В другом варианте способ лечения пациента с солидной опухолью включает введение пациенту антинеопластической терапии в 28-дневном цикле лечения. Антинеопластическая терапия состоит из: i)введения липосомального иринотекана на 1 и 15 сутки цикла лечения и ii) введения ингибитора поли(АДФ-рибоза)полимеразы (PARP) в течение одних или более суток, начиная по меньшей мере через 3 суток после введения липосомального иринотекана и заканчивая по меньшей мере за 1 сутки до введения дополнительного липосомального иринотекана. Еще в одном варианте способ лечения пациента с раком и имеющего опухоль включает i) парентеральное введение пациенту эффективного количества липосомального иринотекана и ii) введение пациенту эффективного количества ингибитора поли(АДФ-рибоза) полимеразы (PARP), где ингибитор PARP вводят пациенту после эффективного интервала для выведения иринотекана из плазмы. При этом эффективный интервал для выведения иринотекана из плазмы составляет: a) от около 48 до около 120 часов и/или b) 2, 3, 4 или 5 дней. Использование группы изобретений позволяет повысить эффективность лечения рака у пациента. 3 н. и 25 з.п. ф-лы, 21 ил., 16 табл., 10 пр.

 

Перекрестная ссылка на родственные заявки

[0001] Данная заявка заявляет приоритет предварительных заявок на патент США №: 62/207709, поданной 20 августа 2016 г.; 62/207760, поданной 20 августа 2015 г.; 62/269756, поданной 18 декабря 2015 г.; 62/269511, поданной 18 декабря 2015 г.; 62/323422, поданной 15 апреля 2016 г., и 62/308924, поданной 16 марта 2016 г., полное содержание которых включено в данный документ посредством ссылки.

Область техники

[0002] Данное изобретение относится к лечению рака ингибитором поли(АДФ-рибоза)-полимеразы (PARP) и ингибитором топоизомеразы, например: комбинацией липосомального состава иринотекана (MM-398) и ингибитора PARP, такого как велипариб, для лечения рака.

Уровень техники

[0003] Ингибиторы топоизомеразы I (Top1) подтвердили свою ценность в качестве противораковых агентов, при этом было получено разрешение регулирующих органов для применения топотекана при раке шейки матки, раке яичника и мелкоклеточном раке легкого и иринотекана при колоректальном раке. Топоизомеразы типа 1 представляют собой ферменты, которые разрезают одну нить ДНК для обеспечения релаксации во время репликации и репарации ДНК. Ингибиторы создают стабильный комплекс ДНК и Тор 1, который индуцирует повреждение ДНК. Целью доклинических стратегий для улучшения активности ингибиторов Тор 1 является повышение уровня повреждения ДНК для стимуляции клеточной гибели.

[0004] Нанолипосомальный иринотекан (nal-IRI) представляет собой высокостабилизированный липосомальный состав иринотекана, который обеспечивает длительное воздействие иринотекана и его активного метаболита SN-38 в опухоли на большую долю клеток во время более чувствительной S-фазы клеточного цикла. Nal-IRI продемонстрировал перспективную доклиническую и клиническую активность в ряде типов рака и недавно был одобрен в Соединенных Штатах в комбинации с 5-FU/LV (5-фторурацил/лейковорин) для применения пациентами с метастатической аденокарциномой поджелудочной железы после прогрессирования заболевания после терапии на основе гемцитабина.

[0005] Ингибиторы поли(АДФ-рибоза)-полимеразы (PARP) представляют новый класс химиотерапевтических агентов, с недавнего времени находящихся в разработке для лечения различных типов рака. PARP представляют семейство ферментов, вовлеченных в репарацию ДНК. Ингибирование пути репарации приводит к клеточной гибели.

[0006] В in vitro анализе было показано, что комбинация ингибиторов PARP и Тор 1 является синергической. Однако клиническая разработка комбинаций ингибитора PARP и ингибитора Тор 1 была ограничена вследствие повышенной токсичности и связанного с ней снижения дозы, что, таким образом, ограничивает потенциальное клиническое применение комбинации. Например, в исследовании с повышением дозы велипариба и топотекана наблюдали значительную миелосупрессию, при этом максимальная переносимая доза была превышена при первом запланированном уровне дозы. На данный момент большинство ингибиторов PARP разрабатывают только в качестве монотерапии.

[0007] В результате существует потребность в способах безопасного и эффективного комбинирования ингибитора PARP с ингибитором Тор 1 для лечения рака. Настоящее изобретение удовлетворяет эту потребность и обеспечивает дополнительные преимущества.

Краткое описание сущности изобретения

[0008] В настоящем изобретении предложены способы введения комбинации ингибитора Тор 1 и ингибитора PARP в опухоль, характеризующееся сниженной периферической токсичностью. В одном аспекте предложен способ лечения рака, например, злокачественной опухоли, включающий применение схемы лечения, включающей один или более случаев совместного введения ингибитора Тор 1 и ингибитора PARP, причем каждый случай совместного введения включает: (a) введение нуждающемуся в этом пациенту эффективного количества липосомального состава иринотекана; и (b) после завершения введения ингибитора Тор 1 введение пациенту эффективного количества ингибитора PARP, при этом ингибитор PARP вводят пациенту через интервал времени, который позволяет снизить периферическую токсичность по сравнению с одновременным введением ингибитора Тор 1 и ингибитора PARP.

[0009] В настоящем изобретении предложены способы лечения рака путем введения ингибитора топоизомеразы и ингибитора PARP со сниженной периферической токсичностью. Это можно осуществить путем введения ингибитора топоизомеразы в форме (например, липосомального иринотекана), которая продлевает накопление ингибитора топоизомеразы в опухоли по сравнению с участками за пределами опухоли, и последующего введения пациенту ингибитора(ов) PARP через некоторый интервал времени между введением ингибитора топоизомеразы и ингибитора PARP. Интервал можно подобрать так, чтобы обеспечить достаточное время для выведения ингибитора топоизомеразы (например, иринотекана и/или его метаболита SN-38) из плазмы или ткани за пределами опухоли в большей степени, чем внутри опухоли. Предпочтительно этот интервал представляет собой эффективный интервал для выведения ингибитора топоизомеразы-1 из плазмы. В контексте данного документа термин «эффективный интервал для выведения ингибитора топоизомеразы-1 из плазмы» (например, интервал для выведения иринотекана из плазмы) означает интервал между завершением введения состава ингибитора топоизомеразы-1 (например, липосомального иринотекана) и началом введения одного или более ингибиторов PARP, причем интервал времени выбирают так, чтобы он обеспечивал достаточную степень выведения ингибитора топоизомеразы-1 (например, иринотекана или его активного метаболита SN-38) из плазмы крови (или периферической ткани), но позволял эффективному количеству ингибитора топоизомеразы-1 (например, иринотекана и/или SN38) оставаться в одной или более опухолях в организме пациента во время последующего введения ингибитора PARP в количестве, эффективном для обеспечения желаемого действия на опухоль (например, повышения комбинированной токсичности, локализованной в пределах опухоли). Предпочтительно ингибитор PARP вводят после окончания интервала для выведения иринотекана из плазмы, составляющего 3-5 суток (например, 3, 4 или 5 суток) после завершения введения липосомального иринотекана на 1 и 15 сутки во время каждого из одного или более 28-суточных циклов лечения.

[0010] Раскрытые в данном документе способы лечения рака включают лечение солидных опухолей. В определенных примерах рак, лечение которого проводят, может быть выбран из группы, состоящей из рака шейки матки, рака яичника, трижды негативного рака молочной железы, немелкоклеточного рака легкого, мелкоклеточного рака легкого, гастроинтестинальных стромальных опухолей, рака желудка, рака поджелудочной железы, колоректального рака и нейроэндокринного рака. Предпочтительно рак является раком шейки матки.

[0011] Ингибитор топоизомеразы может быть предоставлен в виде липосомального состава. Предпочтительно ингибитор топоизомеразы является липосомальным иринотеканом. Липосомальный иринотекан может обеспечивать терминальный период полувыведения иринотекана, составляющий 26,8 часов, и максимальную плазменную концентрацию иринотекана, составляющую 38,0 микрограмм/мл. В некоторых примерах липосомальный иринотекан может включать сахарозный октасульфат иринотекана, инкапсулированный в фосфолипидных везикулах, имеющих размер около 110 нм. Например, липосомальный иринотекан может представлять собой продукт ОНИВАЙД® (липосомальная инъекция иринотекана) (Merrimack Pharmaceuticals, Inc., Cambridge, MA), ранее обозначаемая «MM-398». Ингибитор PARP может включать одно или более соединений, выбранных из группы, состоящей из нирапариба, олапариба, велипариба и рукапариба, предпочтительно велипариб и олапариб.

[0012] Ингибитор топоизомеразы-1 предпочтительно представляет собой липосомальный иринотекан (например, MM-398), который можно вводить в дозе 80 мг/м² (соли) иринотекана один раз каждые 2 недели в комбинации с ингибитором PARP (например, велипарибом, олапарибом, нирапарибом или рукапарибом), вводимым ежесуточно во время каждого двухнедельного цикла, начиная с 3-5 суток после введения липосомального иринотекана, с отсутствием введения ингибитора PARP в дни введения липосомального иринотекана (например, с отсутствием введения ингибитора PARP на 1, 2 или 3 сутки перед следующим введением липосомального иринотекана). Предпочтительно ингибитор PARP не вводят в пределах 3 суток (т. е. ни в течение 3 суток после, ни в течение 3 суток до) относительно введения липосомального иринотекана.

[0013] Конкретные способы лечения рака, предложенные в данном документе, включают применение антинеопластической терапии, состоящей из введения липосомального иринотекана каждые 2 недели (например, на 1 и 15 сутки 28-суточного цикла лечения) и введения ингибитора PARP один или более раз в сутки (например, дважды в сутки) в течение одних или более суток (например, 7-9 суток), начиная по меньшей мере через 3 суток (например, на 3, 4 или 5 сутки) после каждого введения липосомального иринотекана, с отсутствием введения других антинеопластических агентов во время антинеопластической терапии. Например, один вариант антинеопластической терапии представляет собой 28-суточный цикл лечения, состоящий из введения 70 мг/м² липосомального иринотекана ОНИВАЙД/MM-398 (свободное основание) на 1 и 15 сутки и введение терапевтически эффективного количества ингибитора PARP (например, 50-400 мг дважды в день в случае велипариба) на каждые из 5-12 суток и 19-25 суток цикла лечения, при этом на протяжении цикла лечения не вводят никакой другой антинеопластический агент. Другой вариант антинеопластической терапии представляет собой 28-суточный цикл лечения, состоящий из введения 70 мг/м² липосомального иринотекана ОНИВАЙД/MM-398 (в виде свободного основания) на 1 и 15 сутки и введение терапевтически эффективного количества ингибитора PARP (например, 50-400 мг дважды в день в случае велипариба) на каждые из 3-12 суток и 17-25 суток цикла лечения, при этом на протяжении цикла лечения не вводят никакой другой антинеопластический агент.

[0014] В некоторых вариантах реализации изобретения липосомальный иринотекан и ингибитор PARP можно комбинировать в варианте антинеопластической терапии для лечения солидной опухоли, включающем 28-суточный цикл лечения с применением антинеопластической терапии, состоящий из: введения липосомального иринотекана на 1 и 15 сутки цикла лечения и введения ингибитора PARP в течение одних или более суток, начиная по меньшей мере через 3 суток после липосомального иринотекана и заканчивая по меньшей мере за 1 сутки до введения дополнительного липосомального иринотекана. В некоторых вариантах реализации изобретения ингибитор PARP не вводят в течение по меньшей мере 3 суток после введения липосомального иринотекана. Например, ингибитор PARP можно вводить в течение одних или более из 5-12 суток цикла лечения с применением антинеопластической терапии и вводить в течение одних или более из 19-25 суток цикла лечения с применением антинеопластической терапии. В некоторых вариантах реализации изобретения ингибитор PARP вводят в течение одних или более из 3-12 суток цикла лечения с применением антинеопластической терапии и вводят в течение одних или более из 17-25 суток цикла лечения с применением антинеопластической терапии. В некоторых вариантах реализации изобретения ингибитор PARP не вводят в течение 3 суток до или после введения липосомального иринотекана. Кроме того, в данном документе предложены терапевтически эффективные дозы соединений ингибитора топоизомеразы и ингибитора PARP. В некоторых вариантах реализации изобретения каждое введение липосомального иринотекана осуществляют в дозе, составляющей 80 мг/м² (соли) ОНИВАЙДа/MM-398. В некоторых вариантах реализации изобретения каждое введение ингибитора PARP осуществляют в дозе, составляющей от около 20 мг/сутки до около 800 мг/сутки. Каждое введение ингибитора PARP можно осуществлять один или два раза в сутки в дозе, составляющей от около 20 мг/сутки до около 400 мг/сутки.

[0015] Не желая ограничиваться какой-либо теорией действия, считается, что такой интервал обеспечивает время для достаточного выведения ингибитора Тор 1 (например, любого из или обоих, иринотекана и SN-38) из плазмы крови для того, чтобы избежать периферической токсичности вследствие синергического токсического действия комбинации ингибитора Тор 1 и ингибитора PARP, позволяя при этом эффективному количеству ингибитора Тор 1 оставаться в одной или более опухолях в организме пациента для последующего введения ингибитора PARP для получения необходимого синергического терапевтического действия.

[0016] Эта схема лечения обеспечивает один или более показателей, которые могут включать повышенную эффективность комбинации по сравнению с лечением одним агентом; снижение побочных действий, дозирование лекарственных препаратов в более высокой дозе по сравнению с введением комбинации ингибитора PARP и нелипосомального ингибитора Тор 1.

[0017] Дополнительные аспекты включают обеспечение существующего стандартного лечения пациентов, которое может включать или не включать лечение соответствующими одиночными агентами. В некоторых случаях стандартное лечение может включать введение соединения ингибитора PARP.

[0018] Таким образом, в одном аспекте в настоящем изобретении предложен способ лечения пациента с раком и имеющего опухоль, при этом способ включает:

i. парентеральное (например, внутривенное) введение пациенту эффективного количества липосомального состава иринотекана; и

ii. введение пациенту эффективного количества ингибитора PARP, причем ингибитор PARP вводят через эффективный интервал для выведения иринотекана из плазмы.

[0019] Как раскрыто в данном документе, можно откладывать введение ингибитора PARP после введения липосомального иринотекана в течение некоторого периода времени после введения липосомального иринотекана для обеспечения лечения раковых опухолей.

Краткое описание графических материалов

[0020] Фиг. 1A представляет собой график, на котором показаны результаты in vitro определения жизнеспособности клеток рака шейки матки человека ME-180, обработанных ингибитором топоизомеразы 1 SN-38 и различными ингибиторами PARP.

[0021] Фиг. 1В представляет собой график, на котором показаны результаты in vitro определения жизнеспособности клеток рака шейки матки человека MS-751, обработанных ингибитором топоизомеразы 1 SN-38 и различными ингибиторами PARP.

[0022] Фиг. 1С представляет собой график, на котором показаны результаты in vitro определения жизнеспособности клеток рака шейки матки человека C-33A, обработанных ингибитором топоизомеразы 1 SN-38 и различными ингибиторами PARP.

[0023] Фиг. 1D представляет собой график, на котором показаны результаты in vitro определения жизнеспособности клеток рака шейки матки человека SW756, обработанных ингибитором топоизомеразы 1 SN-38 и различными ингибиторами PARP.

[0024] Фиг. 1Е представляет собой график, на котором показаны результаты in vitro определения жизнеспособности клеток рака шейки матки человека SiHa, обработанных ингибитором топоизомеразы 1 SN-38 и различными ингибиторами PARP.

[0025] Фиг. 2A представляет собой график, на котором показаны результаты in vitro определения в динамике % числа клеток мелкоклеточного рака легкого DMS-114, обработанных ингибитором топоизомеразы SN-38 и ингибитором PARP рукапарибом.

[0026] Фиг. 2В представляет собой график, на котором показаны результаты in vitro определения в динамике % числа клеток мелкоклеточного рака легкого NCI-H1048, обработанных ингибитором топоизомеразы SN-38 и ингибитором PARP рукапарибом.

[0027] Фиг. 2С представляет собой график, на котором показаны результаты in vitro определения в динамике % числа клеток рака поджелудочной железы CFPAC-1, обработанных ингибитором топоизомеразы SN-38 и ингибитором PARP рукапарибом.

[0028] Фиг. 2D представляет собой график, на котором показаны результаты in vitro определения в динамике % числа клеток рака поджелудочной железы BxPC-3, обработанных ингибитором топоизомеразы SN-38 и ингибитором PARP рукапарибом.

[0029] Фиг. 2Е представляет собой график, на котором показаны результаты in vitro определения в динамике % числа клеток трижды негативного рака молочной железы (ТНРМЖ) MDA-MB-231, обработанных ингибитором топоизомеразы SN-38 и ингибитором PARP рукапарибом.

[0030] Фиг. 3A представляет собой график, на котором показаны результаты in vitro определения выживаемости клеток трижды негативного рака молочной железы (ТНРМЖ) BT-20, обработанных ингибитором топоизомеразы SN-38 и ингибитором PARP талазопарибом.

[0031] Фиг. 3B представляет собой график, на котором показаны результаты in vitro определения выживаемости клеток трижды негативного рака молочной железы (ТНРМЖ) HCC38, обработанных ингибитором топоизомеразы SN-38 и ингибитором PARP талазопарибом.

[0032] Фиг. 4А и 4В представляют собой графики, изображающие продленное накопление SN-38, наблюдаемое в опухоли после введения MM-398 по сравнению с другими органами. (A) Мышей, несущих ксенотрансплантатную опухоль колоректального рака (КРР) HT-29, внутривенно (ВВ) инъецировали MM-398 в дозе 20 мг/кг и после одной инъекции получали образцы ткани в разные моменты времени (1, 4, 8, 24, 48, 72, 168 часов). Для изменения уровней SN-38 в этих образцах применяли анализ ВЭЖХ. (B) Время присутствия SN-38 при превышении порога 120 нмоль/л вычисляли по фармакокинетическим профилям SN-38 в опухоли и нормальной ткани после 20 мг/кг MM-398.

[0033] Фиг. 5A-5D представляют собой графики, отображающие ФК (фармакокинетические)-параметры MM-398 в исследовании ксенотрансплантата колоректального рака (КРР) мышей HT-29. Уровни CPT-11 (A) или уровни SN-38 (B) в плазме после ВВ инъекций различных доз MM-398 или свободного иринотекана. Уровни CPT-11 (C) или уровни SN-38 (D) в опухоли рассчитывали для различных моментов времени после дозирования эквивалентными дозами свободного иринотекана (красный цвет) или MM-398 (синий цвет). Для изменения уровней CPT-11 и его метаболита SN-38 в этих образцах применяли анализ ВЭЖХ.

[0034] Фиг. 6A-6D представляют собой графики, отображающие эффективность MM-398 в различных моделях рака. Раковые клетки подкожно имплантировали мышам; когда опухоли хорошо развивались и достигали среднего объема 200 мм³, начинали ВВ обработку свободным иринотеканом, MM-398 или контролем. Дозы свободного и нанолипосомального иринотекана, применяемые в каждом исследовании, указаны выше, а моменты времени применения этих доз указаны стрелками. (A) Модель рака молочной железы BT474, обработанная контролем (o), только не содержащим лекарственный препарат и липосомы базовым раствором; свободным CPT-11 (●); или нанолипосомальным CPT-11 (■). (B) Модель рака яичника OVCAR8, обработанная контролем (черный цвет) или MM-398 (синий цвет). (C) Модель КРР HT-29, обработанная контролем (черный цвет), свободным иринотеканом (красный цвет) или MM-398 (синий цвет). (D) Модель с ксенотрансплантатом ортотопической опухоли поджелудочной железы, обработанная контролем (ФСБ, черный цвет), свободным иринотеканом (красный цвет) или MM-398 (синий цвет).

[0035] Фиг. 7А и 7В представляют собой графики, отображающие ФК-анализ для клинического исследования фазы II. Пациенты с раком желудка получали MM-398 в дозе 120 мг/м² (темно-серая линия) или свободный иринотекан в дозе 300 мг/м² (более светлая серая линия) каждые 3 недели. Измерения для CPT-11 (A) и его активного метаболита SN-38 (B) проводили во время цикла 1. На Фиг. 7C-7E приведены клинические данные для локальной активации и накопления SN-38 в опухолевой ткани. (C) Механистическая модель ФК опухоли для nal-IRI прогнозировала более высокие уровни SN-38 в опухоли по сравнению с плазмой. Диапазон фактических данных, полученных в исследовании фазы I пациентов (n=12) с солидными опухолями на поздней стадии указан черными (опухоль) или серыми (плазма) вертикальными столбцами. (D) Уровни CPT-11 и уровни (E) SN-38, измеренные в образцах опухоли (черный цвет) и плазмы (серый цвет) пациентов, полученных через 72 ч после инфузии MM-398.

[0036] На Фиг. 8 изображено исследование переносимости комбинации MM-398+велипариб у мышей. Всех мышей постоянно дозировали один раз в неделю на 1 сутки с последующим дозированием велипарибом в течение 3 последовательных суток на 2-4 (А) сутки, 3-5 (В) сутки или 4-6 (С) сутки. Мышей ежедневно взвешивали, а % прироста массы тела указан по оси Y. Потеря массы указывает на непереносимость комбинации. Более подробно, Фиг. 8A представляет собой график, на котором показаны результаты исследования мышиной переносимости с измерением % изменения массы тела после введения липосомального иринотекана (15 мг/кг, 28 мг/кг или 50 мг/кг MM398 (соль) один раз в неделю) с последующим введением 50 мг/кг велипариба ежесуточно на 2, 3 и 4 сутки после введения MM-398.

[0037] Фиг. 8В представляет собой график, на котором показаны результаты исследования мышиной переносимости с измерением % изменения массы тела после введения разных доз липосомального иринотекана (15 мг/кг, 28 мг/кг или 50 мг/кг MM398 (соль) один раз в неделю) с последующим введением 50 мг/кг велипариба ежесуточно на 3, 4 и 5 сутки после введения MM-398.

[0038] Фиг. 8С представляет собой график, на котором показаны результаты исследования мышиной переносимости с измерением % изменения массы тела после введения разных доз липосомального иринотекана (15 мг/кг, 28 мг/кг или 50 мг/кг MM398 (соль) один раз в неделю) с последующим введением 50 мг/кг велипариба ежесуточно на 4, 5 и 6 сутки после введения MM-398.

[0039] На Фиг. 9 изображено графическое представление дизайна исследования мышиной переносимости со сравнением ММ-398 и олапариба в качестве монотерапии или в комбинации с применением фиксированной дозы ММ-398 и варьирующихся доз олапариба с различными схемами дозирования для разных групп.

[0040] На Фиг. 10A-D приведен ряд графиков, изображающих результаты исследования мышиной переносимости с измерением % изменения массы тела после введения липосомального иринотекана (10 мг/кг), только олапариба и комбинаций MM-398 с разными схемами дозирования олапариба.

[0041] На Фиг. 11 показано, что комбинация MM-398+велипариб является синергической. Две разные модели с ксенотрансплантатами рака шейки матки использовали для исследования эффективности MM-398, дозируемого раз в неделю на 1 сутки (синие стрелки), велипариба, перорально дозируемого при 50 мг/кг раз в сутки в течение 3 последовательных суток на 4-6 сутки каждой недели, или комбинации, дозируемой в таком же режиме, как и в случае обработки одиночными агентами. (A) Модель с ксенотрансплантатом рака шейки матки MS751 с применением MM-398, дозируемого при 5 мг/кг, и (B) модель с ксенотрансплантатом рака шейки матки C33A с применением MM-398, дозируемого при 2 мг/кг.

[0042] На Фиг. 12А изображены результаты по in vivo переносимости MM-398 в комбинации с велипарибом со скорректированным нижним пределом, планками представлена СПС (стандартная погрешность средней величины). В частности, на ней изображена in vivo переносимость дозы 50 мг/кг MM-398 в комбинации с 50 мг/кг велипариба, применяемого на 1, 2 3 или 2, 3, 4, или 3, 4, 5 сутки после введения MM-398.

[0043] На Фиг. 12В изображены результаты по in vivo переносимости MM-398 в комбинации с велипарибом. В частности, на ней изображена in vivo переносимость дозы 28 мг/кг MM-398 в комбинации с 50 мг/кг велипариба, применяемого на 1, 2 3 или 2, 3, 4, или 3, 4, 5 сутки после введения MM-398.

[0044] На Фиг. 13А изображена противоопухолевая эффективность MM-398 в комбинации с велипарибом в модели с ксенотрансплантатом MS751 при дозировании велипариба через 72 ч после введения MM-398 (nal-IRI). В частности, на графике показаны данные для ксенотрансплантатного исследования мышей с применением клеток рака шейки матки MS751 в мышиной модели с обработкой липосомальным иринотеканом (5 мг/кг MM398) и/или ингибитором PARP велипарибом (50 мг/кг) на 3-5 сутки после введения MM398.

[0045] На Фиг. 13В изображено действие MM-398 в комбинации с велипарибом в модели с ксенотрансплантатом MS751 на выживаемость животных. В частности, на графике показаны данные по выживаемости для ксенотрансплантатного исследования мышей с применением клеток рака шейки матки MS751 в мышиной модели с обработкой липосомальным иринотеканом (5 мг/кг MM398) и/или ингибитором PARP велипарибом (50 мг/кг) на 3-5 сутки после введения MM398.

[0046] На Фиг. 13С изображено действие MM-398 в комбинации с велипарибом в модели с ксенотрансплантатом MS751 на массу тела при дозировании велипариба через 72 ч после введения MM-398 (nal-IRI). В частности, на графике показано действие MM-398 в комбинации с велипарибом в мышиной модели с ксенотрансплантатом MS751 с обработкой липосомальным иринотеканом (5 мг/кг MM398) и/или ингибитором PARP велипарибом (50 мг/кг) на 3-5 сутки после введения MM398.

[0047] На Фиг. 14 изображена противоопухолевая эффективность MM-398 в комбинации с велипарибом в модели с ксенотрансплантатом C33A при дозировании велипариба через 72 ч после введения MM-398 (nal-IRI). Ксенотрансплантатное исследование мышей с применением клеток рака шейки матки C33 проводили на мышиной модели с обработкой липосомальным иринотеканом (2 мг/кг MM398) и/или ингибитором PARP велипарибом (50 мг/кг) на 3-5 сутки после введения MM398.

[0048] На Фиг. 15 изображено действие MM-398 в комбинации с велипарибом в модели с ксенотрансплантатом C33A на выживаемость животных. В ксенотрансплантатном исследовании мышей с применением клеток рака шейки матки C33 проводили обработку мышиной модели липосомальным иринотеканом (5 мг/кг MM398) и/или ингибитором PARP велипарибом (50 мг/кг) на 3-5 сутки после введения MM398.

[0049] На Фиг. 16 изображено действие MM-398 в комбинации с велипарибом в модели с ксенотрансплантатом C33A на массу тела при дозировании велипариба через 72 ч после введения MM-398 (nal-IRI). (5 мг/кг MM398) и/или ингибитором PARP велипарибом (50 мг/кг) на 3-5 сутки после введения MM398.

[0050] На Фиг. 17A и 17B изображена in vitro активность (A) и содержание SN-38 в опухоли (В) в моделях рака шейки матки. (A) Линии клеток рака шейки матки обрабатывали велипарибом и SN-38 одновременно или согласно схеме, когда велипариб добавляли через 24 ч после SN-38, а жизнеспособность клеток определяли, используя анализ CTG. In vitro активность (IC50) определяют для нескольких линий клеток рака шейки матки. (B) Бестимусных мышей, несущих опухоли шейки матки, инъецировали одной дозой nal-IRI при 10 мг/кг, а содержание CPT-11 и SN-38 в опухоли определяли с помощью ЖХ-МС.

[0051] На Фиг. 18 приведено графическое представление дизайна исследования фазы I с применением комбинаций MM-398 (nal-IRI) и велипариба. Первичной конечной точкой является определение MTD/RP2D, а вторичной конечной точкой является определение НЯ (нежелательное явление)-профиля, ФК-параметров и анализ биомаркеров, который включает проведение МРТ до обработки для определения доставки и эффективности наночастиц в опухоли.

[0052] На Фиг. 19 показано, что МРТ ФМК (ферумокситол) может служить инструментом прогнозирования ответа опухоли на MM-398. (A) MM-398 и ФМК имеют сходные свойства, включая 1) расширенную ФК, 2) способность к отложению в опухолевых тканях благодаря эффекту ППУ (т. е. пропотеванию сосудов) и 3) поглощение макрофагами. Следовательно, визуализация ФМК на МРТ может прогнозировать отложение MM-398. На Фиг. 19А приведена схема, показывающая применение ферумокситола (ФМК) в качестве прогностического биомаркера для лечения рака липосомальным иринотеканом (например, MM-398); (В) концентрацию ФМК в очагах поражения индивидуальных пациентов рассчитывали, используя стандартную кривую, полученную из МР-изображений через 24 ч после инъекции ФМК. (C) график, изображающий сигналы ФМК в очагах поражения через 24 ч, сгруппированные по медианному значению, наблюдаемому в поддающихся оценке МРТ ФМК очагах поражения, и сравниваемые с наилучшим изменением размеров очагов поражения на основании КТ-сканов (данные получены от 9 пациентов; всего 31 очаг поражения).

[0053] На Фиг. 20A представлен график, изображающий уровни SN-38 (нмоль/л) в опухолях, определенные в опухолях после введения свободного (нелипосомального) иринотекана (CPT-11) при 50мг/кг или 100 мг/кг по сравнению с введением MM-398 (5 мг/кг, 10 мг/кг или 20 мг/кг).

[0054] На Фиг. 20В представлен график, изображающий уровни ингибирования роста опухоли как функцию от времени, требуемого для получения опухолевого ответа, при определенной концентрации SN-38.

[0055] На Фиг. 21 приведены линейные графики, которые изображают жизнеспособность клеток после обработки SN-38 или олапарибом в виде отдельных агентов или в комбинации. Клетки C-33A (карцинома шейки матки, ATCC®HTB-31™; A) или OVCAR-8 (карцинома яичника из панели NCI-60; B) SK-OV-3(карцинома яичника, ATCC® HTB-77™; C) или OVCAR-3 (аденокарцинома яичника, ATCC® HTB-161™, D) высевали при 1000 клеток/лунка в 348-луночный планшет и обрабатывали SN-38 и олапарибом, каждым по отдельности или в комбинации, в течение 24 ч, промывали, а затем инкубировали еще в течение 72 ч со свежей средой, после чего оценивали жизнеспособность клеток. Обработка клеток комбинацией SN-38 и олапариба снижала IC50 по сравнению с обработкой отдельными агентами во всех исследуемых линиях клеток.

Подробное описание сущности изобретения

[0056] В настоящем изобретении предложен способ лечения пациента с раком и имеющего опухоль, включающий применение схемы лечения, которую можно повторять через недельные или большие интервалы (например, раз в 2 недели, раз в 3 недели или раз в 4 недели), при этом каждый случай лечения включает:

i. внутривенное введение пациенту эффективного количества липосомального состава иринотекана ингибитора Тор 1, такого как иринотекан, топотекан, луртотекан, индотекан и индимитекан; и

ii. введение пациенту эффективного количества ингибитора PARP, причем ингибитор PARP вводят через некоторый интервал времени после завершения введения ингибитора Тор 1, например, эффективный интервал для выведения иринотекана из плазмы.

[0057] В дополнительном варианте реализации изобретения данный способ включает:

i. внутривенное введение пациенту эффективного количества липосомального состава иринотекана, имеющего терминальный период полувыведения, составляющий около 26,8 часов, и максимальную плазменную концентрацию иринотекана, составляющую около 38,0 микрограмм/мл; и

ii. введение пациенту эффективного количества ингибитора PARP, причем ингибитор PARP вводят через интервал, составляющий 24 часа или до трех дней после завершения введения иринотекана.

[0058] В некоторых вариантах реализации вышеуказанных двух способов эффективный интервал для выведения из плазмы составляет от около 24 до около 240 часов, например, эффективный интервал для выведения из плазмы составляет от около 48 до около 168 часов, например, от около 48 до около 90 часов. В некоторых вариантах реализации вышеуказанных двух способов, вышеуказанного варианта реализации или варианта, раскрытого в другом месте данного документа, эффективный интервал для выведения из плазмы составляет 2, 3, 4 или 5 суток. В некоторых вариантах реализации вышеуказанных двух способов, вышеуказанного варианта реализации или варианта, раскрытого в другом месте данного документа, эффективное количество MM-398 составляет от около 60 мг/м² до около 120 мг/м². В некоторых вариантах реализации вышеуказанных двух способов, вышеуказанного варианта реализации или варианта, раскрытого в другом месте данного документа, эффективное количество MM-398 составляет около 80 мг/м². В некоторых вариантах реализации вышеуказанных двух способов, вышеуказанного варианта реализации или варианта, раскрытого в другом месте данного документа, ингибитор PARP вводят в дозе, составляющей от около 20 мг/сутки до около 800 мг/сутки. В некоторых вариантах реализации вышеуказанных двух способов, вышеуказанного варианта реализации или варианта, раскрытого в другом месте данного документа, ингибитор PARP вводят в дозе, составляющей от около 10 процентов до 100 процентов максимальной переносимой дозы. В некоторых вариантах реализации вышеуказанных двух способов, вышеуказанного варианта реализации или варианта, раскрытого в другом месте данного документа, ингибитор PARP вводят один или два раза в сутки в дозе, составляющей от около 20 мг до около 400 мг. В некоторых вариантах реализации ингибитор PARP выбран из группы, состоящей из талазопариба, нирапариба, олапариба, велипариба, инипариба, рукапариба, CEP 9722, талазопариба и BGB-290, например, представляет собой велипариб. В некоторых вариантах реализации вышеуказанных двух способов, вышеуказанного варианта реализации или варианта, раскрытого в другом месте данного документа, рак представляет собой рак шейки матки, рак яичника, трижды негативный рак молочной железы, немелкоклеточный рак легкого, мелкоклеточный рак легкого, гастроинтестинальные стромальные опухоли, рак желудка, рак поджелудочной железы, колоректальный рак или нейроэндокринный рак.

[0059] В изобретении также предложено применение липосомального иринотекана в комбинации с ингибитором поли(АДФ-рибоза)-полимеразы (PARP) в антинеопластической терапии для лечения солидной опухоли, причем липосомальный иринотекан систематически вводят один раз каждые две недели, а ингибитор PARP вводят ежесуточно в течение от 3 до 10 суток между последовательными введениями липосомального иринотекана, с отсутствием введения ингибитора PARP в пределах 3 суток относительно введения липосомального иринотекана. Ингибитор PARP можно вводить на каждые из 3-10 последовательных суток между сутками, когда вводят липосомальный иринотекан.

[0060] В изобретении также предложено применение липосомального иринотекана в комбинации с ингибитором поли(АДФ-рибоза)-полимеразы (PARP) в антинеопластической терапии для лечения солидной опухоли, при этом применение включает 28-суточный цикл лечения с применением антинеопластической терапии, состоящий из: введения липосомального иринотекана на 1 и 15 сутки цикла лечения и введения ингибитора PARP в течение одних или более суток, начиная по меньшей мере через 3 суток после введения липосомального иринотекана и заканчивая по меньшей мере за 1 сутки до введения дополнительного липосомального иринотекана. В некоторых вариантах реализации изобретения ингибитор PARP не вводят в течение по меньшей мере 3 суток после введения липосомального иринотекана, например, когда ингибитор PARP не вводят в течение по меньшей мере 3 суток перед следующим введением липосомального иринотекана.

[0061] В некоторых вариантах реализации любых из приведенных в данном документе применений или способов ингибитор PARP вводят в течение одних или более из 5-12 суток цикла лечения с применением антинеопластической терапии. В некоторых вариантах реализации любых из вышеприведенных применений или способов ингибитор PARP вводят в течение одних или более из 19-25 суток цикла лечения с применением антинеопластической терапии. В некоторых вариантах реализации любых из вышеприведенных применений или способов ингибитор PARP вводят в течение одних или более из 3-12 суток цикла лечения с применением антинеопластической терапии. В некоторых вариантах реализации любых из вышеприведенных применений или способов ингибитор PARP вводят в течение одних или более из 17-25 суток цикла лечения с применением антинеопластической терапии.

[0062] Как уже было отмечено, в некоторых вариантах реализации, например, способов или применений, описанных в этом разделе, липосомальный иринотекан имеет терминальный период полувыведения, составляющий 26,8 часов, и максимальную плазменную концентрацию иринотекана, составляющую 38,0 микрограмм/мл. В некоторых вариантах реализации любых из вышеприведенных применений или способов ингибитор PARP не вводят в течение 3 суток до или после введения липосомального иринотекана.

[0063] В некоторых вариантах реализации любых из приведенных в данном документе применений или способов липосомальный иринотекан вводят в дозе, составляющей 80 мг/м² (соль) или 70 мг/м² (свободное основание). В некоторых вариантах реализации любых из приведенных в данном документе применений или способов каждое введение ингибитора PARP осуществляют в дозе, составляющей от около 20 мг/сутки до около 800 мг/сутки. В некоторых вариантах реализации любых из приведенных в данном документе применений или способов каждое введение ингибитора PARP осуществляют один или два раза в сутки в дозе, составляющей от около 20 мг/сутки до около 400 мг/сутки.

[0064] В некоторых вариантах реализации любых из приведенных в данном документе применений или способов липосомальный иринотекан вводят в дозе, составляющей 80 мг/м² (соль) или 70 мг/м² (свободное основание), а ингибитор PARP вводят в дозе, составляющей от около 20 мг/сутки до около 800 мг/сутки.

[0065] В некоторых вариантах реализации любых из приведенных в данном документе применений или способов липосомальный иринотекан вводят в дозе, составляющей 80 мг/м² (соль) или 70 мг/м² (свободное основание), а ингибитор PARP вводят один или два раза в сутки в дозе, составляющей от около 20 мг/сутки до около 400 мг/сутки.

[0066] В некоторых вариантах реализации любых из приведенных в данном документе применений или способов ингибитор PARP выбран из группы, состоящей из нирапариба, олапариба, велипариба, рукапариба и талазопариба. В некоторых вариантах реализации любых из приведенных в данном документе применений или способов рак представляет собой рак шейки матки, рак яичника, трижды негативный рак молочной железы, немелкоклеточный рак легкого, мелкоклеточный рак легкого, гастроинтестинальные стромальные опухоли, рак желудка, рак поджелудочной железы, колоректальный рак или нейроэндокринный рак.

[0067] В некоторых вариантах реализации любых из приведенных в данном документе применений или способов рак представляет собой рак шейки матки, а ингибитор PARP представляет собой велипариб. В некоторых вариантах реализации любых из приведенных в данном документе применений или способов рак представляет собой рак шейки матки, а ингибитор PARP представляет собой олапариб.

[0068] В некоторых вариантах реализации любых из приведенных в данном документе применений или способов рак представляет собой рак шейки матки, а ингибитор PARP представляет собой велипариб, липосомальный иринотекан вводят в дозе, составляющей 80 мг/м² (соль) или 70 мг/м² (свободное основание), а ингибитор PARP вводят в дозе, составляющей от около 20 мг/сутки до около 800 мг/сутки. В некоторых вариантах реализации любых из приведенных в данном документе применений или способов рак представляет собой рак шейки матки, а ингибитор PARP представляет собой олапариб, липосомальный иринотекан вводят в дозе, составляющей 80 мг/м² (соль) или 70 мг/м² (свободное основание), а ингибитор PARP вводят в дозе, составляющей от около 20 мг/сутки до около 800 мг/сутки. В некоторых вариантах реализации любых из приведенных в данном документе применений или способов рак представляет собой рак шейки матки, а ингибитор PARP представляет собой велипариб, липосомальный иринотекан вводят в дозе, составляющей 80 мг/м² (соль) или 70 мг/м² (свободное основание), а ингибитор PARP вводят один или два раза в сутки в дозе, составляющей от около 20 мг/сутки до около 400 мг/сутки. В некоторых вариантах реализации любых из приведенных в данном документе применений или способов рак представляет собой рак шейки матки, а ингибитор PARP представляет собой олапариб, липосомальный иринотекан вводят в дозе, составляющей 80 мг/м² (соль) или 70 мг/м² (свободное основание), а ингибитор PARP вводят один или два раза в сутки в дозе, составляющей от около 20 мг/сутки до около 400 мг/сутки.

[0069] В некоторых вариантах реализации любых из приведенных в данном документе применений или способов рак представляет собой рак шейки матки, а ингибитор PARP представляет собой велипариб, липосомальный иринотекан вводят в дозе, составляющей 80 мг/м² (соль) или 70 мг/м² (свободное основание), а ингибитор PARP вводят в дозе, составляющей от около 20 мг/сутки до около 800 мг/сутки, при этом липосомальный иринотекан систематически вводят один раз каждые две недели, а ингибитор PARP вводят ежесуточно в течение от 3 до 10 суток между последовательными введениями липосомального иринотекана, с отсутствием введения ингибитора PARP в пределах 3 суток относительно введения липосомального иринотекана. В некоторых вариантах реализации любых из приведенных в данном документе применений или способов рак представляет собой рак шейки матки, а ингибитор PARP представляет собой олапариб, липосомальный иринотекан вводят в дозе, составляющей 80 мг/м² (соль) или 70 мг/м² (свободное основание), а ингибитор PARP вводят в дозе, составляющей от около 20 мг/сутки до около 800 мг/сутки, при этом липосомальный иринотекан систематически вводят один раз каждые две недели, а ингибитор PARP вводят ежесуточно в течение от 3 до 10 суток между последовательными введениями липосомального иринотекана, с отсутствием введения ингибитора PARP в пределах 3 суток относительно введения липосомального иринотекана. В некоторых вариантах реализации любых из приведенных в данном документе применений или способов рак представляет собой рак шейки матки, а ингибитор PARP представляет собой велипариб, липосомальный иринотекан вводят в дозе, составляющей 80 мг/м² (соль) или 70 мг/м² (свободное основание), а ингибитор PARP вводят один или два раза в сутки в дозе, составляющей от около 20 мг/сутки до около 400 мг/сутки, при этом липосомальный иринотекан систематически вводят один раз каждые две недели, а ингибитор PARP вводят ежесуточно в течение от 3 до 10 суток между последовательными введениями липосомального иринотекана, с отсутствием введения ингибитора PARP в пределах 3 суток относительно введения липосомального иринотекана. В некоторых вариантах реализации любых из приведенных в данном документе применений или способов рак представляет собой рак шейки матки, а ингибитор PARP представляет собой олапариб, липосомальный иринотекан вводят в дозе, составляющей 80 мг/м² (соль) или 70 мг/м² (свободное основание), а ингибитор PARP вводят один или два раза в сутки в дозе, составляющей от около 20 мг/сутки до около 400 мг/сутки, при этом липосомальный иринотекан систематически вводят один раз каждые две недели, а ингибитор PARP вводят ежесуточно в течение от 3 до 10 суток между последовательными введениями липосомального иринотекана, с отсутствием введения ингибитора PARP в пределах 3 суток относительно введения липосомального иринотекана.

[0070] В одном варианте реализации изобретения рак представляет собой рак молочной железы, например, метастатический рак молочной железы, содержащий мутацию в одном из генов, ассоциированных с раком молочной железы, BRCA1 или BRCA2. В другом варианте реализации изобретения рак представляет собой рак яичника, содержащий мутацию в BRCA1 или BRCA2. Мутации в генах-супрессорах опухолевого роста BRCA1 и BRCA2 связаны с повышенным риском рака молочной железы (приблизительно в 5 раз большим риском по сравнению с человеком без мутации BRCA) и/или повышенным риском рака яичника (приблизительно в 10-30 раз большим риском по сравнению с человеком без мутации BRCA). Статистика для связанного с BRCA рака яичника, как правило, включает не только рак самих яичников, но также перитонеальный рак и рак фаллопиевых труб; у женщин с мутацией BRCA частота рака фаллопиевых труб в более чем 100 раз превышает нормальный показатель. Мутации BRCA также связаны с повышенным риском рака простаты у мужчин. Раковые клетки, в которых отсутствует нормальный BRCA1 или BRCA2 (или другие ответственные за репарацию ДНК ферменты, такие как ATM), зависят вместо этого от регулируемой PARP репарации ДНК и, следовательно, являются гиперчувствительными к ингибированию PARP.

[0071] В некоторых вариантах реализации любых из приведенных в данном документе применений или способов применение способа дополнительно включает применение ферумокситола в качестве визуализирующего агента для проведения отбора пациентов для получения липосомального иринотекана и ингибитора PARP, например, когда способ дополнительно включает введение ферумокситола, а затем получение МРТ-изображения пациента через 24 часа после введения ферумокситола.

[0072] Иринотекан является ингибитором Тор 1. Химическое название иринотекана - (S)-4,11-диэтил-3,4,12,14-тетрагидро-4-гидрокси-3,14-диоксо-1H-пирано[3',4':6,7]-индолизино[1,2-б]хинолин-9-ил-[1,4'бипиперидин]-1'-карбоксилат. Иринотекан также известен под названием CPT-11 и под коммерческим названием Камптозар. Иринотекан действует как пролекарственный препарат и преобразуется ферментами эстеразами в более активный метаболит SN-38.

[0073] В настоящем изобретении также предложены способы введения комбинации ингибитора топоизомеразы-1 (Тор 1) (например, иринотекана и/или его метаболита SN-38) и ингибитора PARP в опухоль со сниженной периферической токсичностью. Ингибитор Тор 1 можно вводить в липосомальном составе, что приводит к продлению накопления ингибитора Тор 1 в солидной опухоли по сравнению с периферической плазмой и/или здоровыми органами. После этого можно вводить ингибитор PARP через период времени, позволяющий количеству ингибитора Тор 1 за пределами опухоли снизиться по сравнению с количеством ингибитора Тор 1 в опухоли. Предпочтительно ингибитор Тор 1 вводят в виде липосомального иринотекана, который обеспечивает наличие SN-38 в солидной опухоли.

[0074] Предложены способы лечения рака, а также терапевтические применения соединений ингибитора PARP в комбинации с составами липосомального иринотекана для лечения рака, в частности, рака, включающего солидные опухоли.

Раскрытые в данном документе применения и способы частично основаны на экспериментах по оценке комбинации ингибитора топоизомеразы 1 (например, липосомального иринотекана или SN-38) и ингибитора PARP как в доклинических, так и в клинических исследованиях на людях. Ингибитор топоизомеразы 1 вводили в некоторых in vitro животных моделях, используя состав, обеспечивающий более длительное воздействие ингибитора топоизомеразы 1 (например, иринотекана и/или активного метаболита иринотекана, обозначаемого SN-38) внутри солидных опухолей по сравнению с периферическими тканями или плазмой за пределами опухоли. Комбинации ингибитора топоизомеразы 1 SN38 и/или иринотекана и соединений ингибитора PARP исследовали в различных in vitro экспериментах. Как подробно описано в Примере 2, in vitro исследования некоторого количества комбинаций ингибитора топоизомеразы 1 (SN38) и различных ингибиторов PARP в более чем 20 клеточных линиях рака (включая клеточные линии рака шейки матки, молочной железы, яичника, колоректального рака, рака поджелудочной железы и мелкоклеточного рака легкого) все демонстрировали снижение жизнеспособности клеточных линий рака (Фиг. 1A, 1B, 1C, 1D, 1E, 2A, 2B, 2C, 2D, 2E и 17A). Липосомальный иринотекан (MM398) демонстрировал большее снижение объема опухоли, чем нелипосомальный (свободный) иринотекан (CPT11) в ксенотрансплантатных исследованиях на мышах среди нескольких типов клеточных линий рака (включая клеточные линии рака молочной железы, яичника, колоректального рака и рака поджелудочной железы).

[0075] Как подробно описано в Примере 3, переносимость ингибитора топоизомеразы 1 (липосомального иринотекана), вводимого в комбинации с различными ингибиторами PARP, оценивали путем определения изменения массы тела животного (мыши) в нескольких мышиных моделях посредством сравнения различных схем дозирования. В некоторых экспериментах липосомальный иринотекан и ингибитор PARP вводили вместе на одни и те же сутки (сутки 1). В других экспериментах ингибитор PARP сначала вводили ежесуточно, начиная со 2, 3 или 4 суток после каждого введения липосомального иринотекана. Ингибитор PARP вводили в течение некоторого количества последовательных суток (например, 3 последовательных суток) и не вводили на те же сутки, что и ингибитор топоизомеразы 1. Как подробно описано во многих приведенных в данном документе экспериментах, введение ингибитора PARP по меньшей мере через одни сутки после липосомального иринотекана приводило к улучшению переносимости сравнимых комбинированных доз ингибитора PARP и липосомального иринотекана (MM-398) согласно результатам определения процентного изменения массы тела животного (например, Фиг. 10A-10D, 8A, 8B, 8C, 12A и 12B). Откладывание введения ингибитора PARP на 2, 3 или 4 суток после введения липосомального иринотекана приводило к большей общей переносимости комбинированного введения липосомального иринотекана и ингибитора PARP по сравнению с введением липосомального иринотекана и ингибитора PARP в одни сутки. Например, введение велипариба на 2, 3 и 4 сутки после введения липосомального иринотекана на 1 сутки приводило к постепенному повышению переносимости (определяемой как большее процентное изменение массы тела) комбинации этих двух лекарственных препаратов (наблюдаемому при дозе 15 мг/кг липосомального иринотекана на 1 сутки с последующим дозированием велипариба на 2, 3 и 4 сутки; при дозировке 28 мг/кг липосомального иринотекана на 1 сутки с последующим дозированием велипариба на 3, 4 и 5 сутки на Фиг. 12B или с последующим дозированием велипариба на 2, 3 и 4 сутки на Фиг. 12B; и при дозе 50 мг/кг липосомального иринотекана на 1 сутки с последующим дозированием велипариба на 4, 5 и 6 сутки или с последующим дозированием велипариба на 2, 3 и 4 сутки, или с последующим дозированием велипариба на 3, 4 и 5 сутки на Фиг. 12A). Аналогично, введение олапариба, начиная со 2 или 3 суток после MM398, приводило к сравнимой или улучшенной переносимости по сравнению с введением обоих агентов на 1 сутки. Например, введение мышам дозы 200 мг/кг олапариба на 2, 3, 4 и 5 после введения 10 мг/кг липосомального иринотекана MM398 на 1 сутки приводило к меньшей потере массы тела, чем введение таких же доз MM398 и олапариба на 1, 2, 3 и 4 сутки.

[0076] Комбинации ингибитора топоизомеразы 1 (SN38 и/или иринотекана) и соединений ингибитора PARP исследовали в различных доклинических in vivo экспериментах, чтобы оценить эффективность введения различных ингибиторов PARP, начиная с 3 или 4 суток после введения липосомального ингибитора топоизомеразы 1 MM398. Как подробно описано в Примере 4, введение липосомального иринотекана (MM398) на 1 сутки с последующим введением ингибитора PARP велипариба на 3, 4 и 5 сутки или 4, 5 и 6 сутки приводило к снижению объема опухоли и увеличению процента выживаемости в мышиных ксенотрансплантатных моделях рака шейки матки с применением двух разных линий клеток (MS751 и C33A) (Фиг. 11A, 11B, 13A, 13B, 14 и 15).

[0077] Частично на основании этих экспериментов способы лечения рака человека включают введение ингибитора PARP через одни или более суток (предпочтительно 2, 3, 4, 5 или 6 суток) после введения липосомального ингибитора топоизомеразы, такого как липосомальный иринотекан. Предпочтительно ингибитор PARP и липосомальный иринотекан не вводят в одни сутки. В Примере 6 предложены предпочтительные варианты реализации для применения липосомального иринотекана и одного или более ингибиторов PARP для лечения рака человека, такого как рак шейки матки, тогда как также предложены другие варианты реализации изобретения (например, Таблица 3).

Ингибиторы топоизомеразы, включая конъюгаты липосомального иринотекана и камптотецина

[0078] Ингибитор топоизомеразы можно вводить в любой форме, которая обеспечивает продленное сохранение активности ингибитора топоизомеразы-1 внутри опухоли по сравнению с областью за пределами опухоли после введения ингибитора топоизомеразы. Например, ингибитор топоизомеразы может представлять собой состав, который доставляет SN-38 в опухолевую клетку in vivo, вводимый в количестве и способом, обеспечивающим более высокую концентрацию SN-38 внутри опухоли, чем за пределами опухоли, в течение некоторого периода времени после введения ингибитора топоизомеразы. Подходящие составы ингибиторов топоизомеразы включают конъюгированные молекулы ингибитора топоизомеразы (например, камптотецин, конъюгированный с полимером или антителом), липосомы, содержащие ингибитор топоизомеразы, или другие технологии составов с направленным высвобождением. Состав ингибитора Тор 1 предпочтительно готовят так, чтобы обеспечить продленное накопление в участке опухоли по сравнению с накоплением в здоровой (нераковой) ткани за пределами участка опухоли (например, в плазме и/или здоровых органах, таких как толстая кишка, двенадцатиперстная кишка, почки, печень, легкие и селезенка). Различные липосомальные составы ингибитора Тор 1 описаны в патенте США № 8147867 и публикации заявки на патент США № 2015/0005354, которые включены в данный документ посредством ссылки.

[0079] В одном варианте реализации изобретения ингибитор топоизомеразы представляет собой SN-38, камптотецин или соединение, которое преобразуется в SN-38 в организме, такое как иринотекан. Иринотекан и SN-38 представляют собой примеры ингибиторов Тор 1. Иринотекан преобразуется ферментами эстеразами в более активный метаболит SN-38.

[0080] Ингибитор топоизомеразы может представлять собой камптотецин, конъюгированный с биосовместимым полимером, таким как циклодекстрин или аналог циклодекстрина (например, сульфонированные циклодекстрины). Например, ингибитор топоизомеразы может представлять собой содержащий циклодекстрин полимер, химически связанный с камптотецином, иринотеканом, SN-38 или другим соединением ингибитора топоизомеразы 1. Ингибитор топоизомеразы 1 на основе конъюгированного с циклодекстрином камптотецина можно вводить в фармацевтически приемлемой дозе, включая еженедельное введение 6, 12 или 18 мг/м² или введение раз в две недели 12, 15 или 18 мг/м². Примеры ингибиторов топоизомеразы 1 на основе конъюгированного с циклодекстрином камптотецина (например, конъюгат содержащего циклодекстрин полимера с камптотецином, обозначаемый «CRLX101») и родственные промежуточные соединения для их получения раскрыты, например, в Greenwald et al., Bioorg. Med. Chem., 1998, 6, 551-562, а также в заявке на патент Соединенных Штатов 2010/0247668, заявке на патент Соединенных Штатов 2011/0160159 и заявке на патент Соединенных Штатов 2011/0189092.

[0081] Ингибитор топоизомеразы также может представлять собой липосомальный состав ингибитора топоизомеразы, такого как иринотекан, камптотецин или топотекан. Липосомальный иринотекан (например, MM-398, также называемый «nal-IRI») представляет собой высокостабилизированный липосомальный состав иринотекана, который обеспечивает длительное воздействие иринотекана и его активного метаболита SN-38 в опухоли на большую долю клеток во время более чувствительной S-фазы клеточного цикла. MM-398 представляет собой липосомальный иринотекан, который продемонстрировал перспективную доклиническую и клиническую активность в ряде типов рака и недавно был одобрен в Соединенных Штатах в комбинации с 5-FU/LV для применения пациентами с метастатической аденокарциномой поджелудочной железы после прогрессирования заболевания после терапии на основе гемцитабина. По сравнению со свободным иринотеканом nal-IRI имеет расширенный ФК-профиль с продленным локальным воздействием на опухоль MM-398 и SN-38. Так как SN-38 быстрее выводится из нормальных тканей, чем из опухолевых, предполагается, что отложенное относительно MM-398 дозирование велипариба позволит ожидаемому окну максимальной индуцированной иринотеканом токсичности пройти в отсутствие одновременной токсичности со стороны велипариба. При этом прогнозируется, что уровни SN-38 в опухоли будут поддерживаться после последующего дозирования велипариба, сохраняя, таким образом, способность обоих лекарственных препаратов действовать на опухолевую ткань одновременно и поддерживать синергический эффект.

[0082] Одним подходящим липосомальным составом ингибитора Тор 1 является липосомальный иринотекан, доступный под зарегистрированным названием ОНИВАЙД® (липосомальная инъекция иринотекана) (Merrimack Pharmaceuticals, Inc, Cambridge, MA), ранее обозначаемый «MM-398» до получения одобрения FDA, и продукты на основе липосомального иринотекана, являющиеся биоэквивалентами ОНИВАЙДа.

[0083] В контексте данного документа термин «MM-398» относится к нанолипосомальной композиции иринотекана. Доза MM-398 относится к дозе иринотекана на основании молекулярной массы иринотекана гидрохлорида тригидрата, если четко не указано иное.

[0084] В контексте данного документа, если не указано иное, доза иринотекана в ОНИВАЙД/MM-398 относится к дозе иринотекана на основании молекулярной массы иринотекана гидрохлорида тригидрата (т. е. дозе «(соли)»), если четко не указано иное. Доза также может быть выражена как свободное основание иринотекана (т. е. доза «(основания)»). Преобразование дозы на основании иринотекана гидрохлорида тригидрата в дозу на основании свободного основания иринотекана осуществляют путем умножения дозы на основании иринотекана гидрохлорида тригидрата на отношение молекулярной массы свободного основания иринотекана (586,68 г/моль) и молекулярной массы иринотекана гидрохлорида тригидрата (677,19 г/моль). Это отношение составляет 0,87 и может быть использовано как коэффициент преобразования. Например, доза 80 мг/м² на основании иринотекана гидрохлорида тригидрата эквивалента дозе 69,60 мг/м² на основании свободного основания иринотекана (80×0,87). В клинических условиях ее округляют до 70 мг/м², чтобы свести к минимуму любые потенциальные погрешности дозирования. Аналогично, доза 120 мг/м² иринотекана гидрохлорида тригидрата эквивалента дозе 100 мг/м² свободного основания иринотекана

[0085] MM-398 (липосомальная инъекция иринотекана) включает в себя соль сахарософата (sucrosofate) иринотекана, инкапсулированную в липосомах, для внутривенного использования. Липосома для лекарственного продукта представляет собой небольшую однослойную везикулу с одним липидным бислоем диаметром приблизительно 110 нм, в которой инкапсулирована водная фаза, содержащая иринотекан в желатинированном или осажденном состоянии в виде сахарософатной соли. Липосомные носители состоят из 1,2-дистеароил-сн-глицеро-3-фосфохолина (ДСФХ), 6,81 мг/мл; холестерина, 2,22 мг/мл; и метокси-терминированного полиэтиленгликоля (ММ 2000)-дистеароилфосфатидилэтаноламина (МПЭГ-2000-ДСФЭ), 0,12 мг/мл. Каждый мл также содержит 2-[4-(2-гидроксиэтил)пиперазин-1-ил]этансульфоновую кислоту (ГЭПЭС) в качестве буфера, 4,05 мг/мл; хлорид натрия в качестве реагента для изотоничности, 8,42 мг/мл. Раствор забуферен до рН 7,25.

[0086] Было показано, что ОНИВАЙД/MM-398 улучшает профиль фармакокинетики и безопасности свободного иринотекана благодаря высокой степени удержания молекул иринотекана в липосоме, продлению периода полувыведения иринотекана из плазмы и повышенному времени воздействия иринотекана на опухолевые клетки по сравнению с другими органами. В приведенной ниже Таблице 1 приведены обобщенные данные по медианным (%МКО)^* значениям фармакокинетических параметров для общего иринотекана и SN-38, которые наблюдали у пациентов с солидными опухолями после введения ОНИВАЙД/MM-398 в дозе 80 мг/м² иринотекана (соли), вводимого один раз каждые две недели.

[0087] Обобщенные данные по медианным (%МКО)^* значениям фармакокинетических параметров для общего иринотекана и SN-38, которые наблюдали у пациентов с солидными опухолями.

Доза (мг/ м2)	Общий иринотекан		SN-38
Cмакс [мкг/ мл]	t1/2 [ч]†	ППК0-∞ [ч⋅мкг/ мл]†	Vд [л/ м2]†	CL [л ч/м2]†		Cмакс [нг/ мл]	t1/2 [ч]†	ППК0-∞ [ч⋅нг/ мл]†
80 (n=25)	38,0 (36%)	26,8 (110%)	1030 (169%)	2,2 (55%)	0,077 (143%)		4,7 (89%)	49,3 (103%)	587 (69%)
	* % МКО: % межквартильного отношения † t1/2, ППК0-∞ (AUC0-∞) и Vр были рассчитаны только для подгруппы пациентов с достаточным числом образцов в терминальной фазе: n=23 для общего иринотекана; n=13 для SN-38. Cмакс: Максимальная плазменная концентрация t½: Терминальный период полувыведения ППК0-∞: Площадь под кривой плазменной концентрации, экстраполированной на бесконечность Vр: Объем распределения

[0088] В случае MM-398 в диапазоне дозировок от 60 до 180 мг/м² максимальные концентрации как общего иринотекана, так и SN-38 линейно возрастали с увеличением дозы. ППК для общего иринотекана линейно возрастала с увеличением дозы; ППК для SN-38 возрастала в меньшей пропорции с увеличением дозы. Период полувыведения как общего иринотекана, так и SN-38 не изменялся с увеличением дозы. В обобщенном анализе по 353 пациентам более высокая плазменная C_макс SN-38 была связана в повышенной вероятностью появления нейтропении, а более высокая плазменная C_макс общего иринотекана была связана в повышенной вероятностью появления диареи. Прямое определение липосомального иринотекана показывает, что 95% иринотекана остается инкапсулированным в липосомах во время циркуляции. Объем распределения MM-398 80 мг/м² составляет 2,2 л/м². Объем распределения иринотекана HCl составляет между 110 л/м² (доза=125 мг/м²) и 234 л/м² (доза=340 мг/м²). Плазменное связывание белка MM-398 составляет <0,44% от общего иринотекана в MM-398. Плазменное связывание белка иринотекана HCl составляет от 30% до 68%, и приблизительно 95% SN-38 связано с белками плазмы человека. Плазменный клиренс общего иринотекана MM-398 80 мг/м² составляет 0,077 л/ч/м² с терминальным периодом полувыведения 26,8 ч. После введения иринотекана HCl, 125 мг/м², плазменный клиренс иринотекана составляет 13,3 л/ч/м² с терминальным периодом полувыведения 10,4 ч. Липосомальный иринотекан MM398 может обеспечивать иринотекан и его активный метаболит SN-38 в организме пациента, которые метаболически выводятся человеческим цитохромным изоферментом P450 3A4 (CYP3A4) и уридиндифосфат-глюкуронозилтрансферазой 1A1 (UGT1A1) соответственно. Метаболическое преобразование иринотекана в активный метаболит SN-38 опосредовано ферментами карбоксилэстеразами. In vitro исследования показывают, что иринотекан, SN-38 и другой метаболит, аминопентановая карбоновая кислота (АПК), не ингибируют цитохромные изоферменты P-450. Впоследствии SN-38 конъюгируется, главным образом, ферментом UGT1A1 с образованием метаболита глюкуронида. Активность UGT1A1 снижена у индивидов с генетическими полиморфизмами, которые приводят к снижению активности фермента, такими как полиморфизм UGT1A1*28. Приблизительно 10% населения Северной Америки является гомозиготным по аллелю UGT1A1*28 (что также называется генотипом UGT1A1 7/7). На основании результатов фармакокинетического анализа населения обнаружили, что пациенты, гомозиготные и негомозиготные по аллелю UGT1A1*28 (генотип UGT1A1 7/7), имеют сходную представленность SN-38. Выведение иринотекана HCl с мочой составляет от 11% до 20%; SN-38, <1%; и глюкуронида SN-38, 3%. Кумулятивное выведение иринотекана HCl и его метаболитов (SN-38 и глюкуронида SN-38) с желчью и мочой в течение 48 часов после введения иринотекана HCl у двух пациентов находилось в диапазоне от приблизительно 25% (100 мг/м²) до 50% (300 мг/м²). Исследование баланса масс с крысами Спрег-Доули с применением липосомального инкапсулированного ¹⁴C-иринотекана показало, что после высвобождения иринотекана из липосом он проходит такой же путь выведения, что и неинкапсулированный иринотекан. Выведение с калом было основным путем выведения у самцов и самок крыс и составляло 78,3% и 83,4%, соответственно, от общей вводимой радиоактивной дозы липосомального инкапсулированного ¹⁴C-иринотекана в течение 168 часов.

[0089] Различные липосомальные составы иринотекана описаны в патенте США № 8147867 и публикации заявки на патент США № 2015/0005354, которые включены в данный документ посредством ссылки. Считается, что MM-398 содержит около 80 000 молекул иринотекана в желатинированном или осажденном состоянии в виде соли сахарософата, инкапсулированной в липосоме диаметром около 100 нм. Было показано, что MM-398 улучшает профиль фармакокинетики и безопасности свободного иринотекана благодаря высокой степени удержания молекул иринотекана в липосоме, продлению периода полувыведения иринотекана из плазмы и повышенному времени воздействия иринотекана на опухолевые клетки по сравнению с другими органами.

[0090] В способах согласно данному изобретению эффективное количество липосомального иринотекана предоставлено в виде MM-398 и составляет от около 60 мг/м² до около 120 мг/м². В дополнительном варианте реализации изобретения эффективное количество MM-398 составляет около 80 мг/м² и, необязательно, вводится в комбинации с 400 мг/м² лейковорина в течение 30 минут с последующим внутривенным введением 2400 мг/м² 5-фторурацила в виде инфузии в течение 46 часов. В некоторых вариантах реализации изобретения доза составляет 70, 80, 90, 100, 110 или 120 мг/м² (на основании массы соли иринотекана гидрохлорида тригидрата) и 50, 60, 70, 80, 95 и 100 мг/м² (на основании массы свободного основания иринотекана) и вводится один раз каждые две (2) недели (например, на 1 и 15 сутки 28-суточного цикла антинеопластического лечения). В некоторых вариантах реализации изобретения эффективное количество MM-398 составляет около 90 мг/м² (свободного основания).

[0091] Липосомальный иринотекан MM-398 продлевает воздействие на опухоль ингибитора топоизомеразы 1 SN-38. Было обнаружено, что липосомальный иринотекан MM-398 является более активным, чем иринотекан во многих мышиных ксенотрансплантатных моделях. Длительность воздействия на опухоль ингибитора топоизомеразы 1 SN-38 выше пороговой минимальной концентрации (например, 120 нМ) коррелировала с противоопухолевой активностью липосомального иринотекана. Кроме того, липосомальный иринотекан MM-398 может обеспечивать продленное время нахождения SN-38 в опухоли, превышающее время, обеспечиваемое нелипосомальным иринотеканом. Например, на Фиг. 17В показано содержание SN-38 в опухоли в нескольких мышиных моделях рака шейки матки. Бестимусных мышей, несущих опухоли шейки матки, инъецировали одной дозой MM-398 при 10 мг/кг, а содержание CPT-11 и SN-38 в опухоли определяли с помощью ЖХ-МС. На Фиг. 20A представлен график, изображающий уровни SN-38 (нмоль/л) в опухолях, определенные в опухолях после введения свободного (нелипосомального) иринотекана (CPT-11) при 50 мг/кг или 100 мг/кг по сравнению с введением MM-398 (5 мг/кг, 10 мг/кг или 20 мг/кг). График показывает продленное накопление SN-38 (концентрацию), определяемое в опухоли после введения липосомального иринотекана (MM-398), по сравнению с другими органами, полученное с использованием мышей, несущих ксенотрансплантат опухоли колоректального рака (КРР) НТ-29. На Фиг. 20В представлен график, изображающий уровни ингибирования роста опухоли как функцию от времени, требуемого для получения опухолевого ответа, при определенной концентрации SN-38. Уровни SN-38, составляющие 120 нМ, были определены как концентрация SN-38 в опухоли, необходимая для того, чтобы получить ответ опухоли. In vitro IC50 для действия SN-38 на линию клеток можно использовать как in vivo пороговое значение (согласно наблюдениям GI50 для HT-29 составляла около 60 нM). Согласно наблюдениям липосомальный иринотекан MM-398 продлевал длительность воздействия SN-38 в дозах 10 мг/кг и 20 мг/кг.

[0092] Ингибиторы PARP

[0093] В способах согласно настоящему изобретению ингибитор PARP выбран из группы состоящей из талазопариба, нирапариба, олапариба, велипариба, инипариба, рукапариба, CEP 9722 или BGB-290. В дополнительном варианте реализации изобретения ингибитор PARP представляет собой велипариб.

[0094] PARP представляют семейство ферментов, вовлеченных в репарацию ДНК, которые действуют посредством двух механизмов: каталитическое ингибирование и захват комплексов PARP-ДНК, а ингибирование этого пути репарации может привести к гибели клеток после повреждения ДНК. В предпочтительных вариантах реализации изобретения комбинирование ингибиторов PARP и ингибиторов Тор 1 приводит к повышению эффективности в клинических условиях по сравнению с любым из агентов, применяемым отдельно. Хотя было продемонстрировано, что синергический эффект между ингибиторами PARP и ингибиторами Тор 1 имеет место благодаря каталитическому ингибированию PARP в не включает PARP-захват, эта перспективная доклиническая активность привела к неприемлемой токсичности этих комбинаций в клинических условиях.

[0095] Ингибитор PARP может быть выбран из соединений, которые ингибируют поли(АДФ-рибоза)-полимеразу (PARP), семейство ферментов, вовлеченных в репарацию ДНК. Предпочтительно ингибитор PARP представляет собой соединение, которое действует посредством двух механизмов: каталитическое ингибирование и захват комплексов PARP-ДНК. Ингибитор PARP может представлять собой одно или более клинически доступных соединений ингибиторов PARP (например, помимо прочего, талазопариб, нирапариб, олапариб и велипариб), включая соединения, которые могут действовать посредством обоих механизмов, хотя и в разной степени. Например, нирапариб намного эффективнее в отношении PARP-захвата чем велипариб, хотя они оба проявляют одинаковую каталитическую активность PARP.

[0096] В дополнительном варианте реализации изобретения ингибитор PARP представляет собой велипариб, олапариб, рукапариб или нирапариб. В другом варианте реализации изобретения ингибитор PARP представляет собой велипариб или олапариб. Ингибитор PARP может представлять собой велипариб, вводимый после липосомального иринотекана. Ингибитор PARP может представлять собой олапариб, вводимый после липосомального иринотекана.

[0097] Олапариб показан в качестве монотерапии пациентам с поздней стадией рака яичника, связанного с вредной или с подозреваемой вредной мутацией BRCA в зародышевой линии (по результатам одобренного FDA теста), которые ранее проходили лечение тремя или более линиями химиотерапии. Рекомендуемая доза олапариба при таком показании составляет 400 мг (восемь капсул по 50 мг) с приемом дважды в сутки и общей суточной дозой 800 мг. Пациентам, принимающим олапариб, советуют избегать одновременного применения сильных и умеренных ингибиторов CYP3A и рассмотреть альтернативные агенты с меньшим ингибированием CYP3A. Если нет возможности избежать приема ингибитора, советуют снизить дозу линпарзы до 150 мг (три капсулы по 50 мг) и принимать дважды в сутки в случае сильного ингибитора CYP3A или до 200 мг (четыре капсулы по 50 мг) и принимать дважды в сутки в случае умеренного ингибитора CYP3A.

[0098] Ингибитор PARP может ингибировать PARP 1 и/или PARP 2. Например, ингибитор PARP может представлять собой ингибитор PARP ½ с IC50, составляющей 5 нM/1 нM в бесклеточном анализе, и быть в 300 раз менее эффективным против танкиразы-1 (например, олапариб). Ингибитор PARP может представлять собой ингибитор PARP 1 и PARP 2 с Ки (Ki), составляющей 5,2 нM и 2,9 нM, соответственно, в бесклеточном анализе, и быть неактивным в отношении SIRT2 (например, велипариб). Ингибитор PARP может представлять собой ингибитор PARP 1 с Ки, составляющей 1,4 нM в бесклеточном анализе, и также демонстрировать аффинность связывания в отношении других доменов PARP (например, рукапариб). Ингибитор PARP может быть эффективным против трижды негативного рака молочной железы (ТНРМЖ), как один, так и в комбинации с другими агентами. Ингибитор PARP может представлять собой ингибитор PARP 1 с IC50, составляющей 0,58 нM в бесклеточном анализе, который не ингибирует PARG и чувствителен к мутации PTEN (например, талазопариб). Ингибитор PARP может представлять собой сильный и селективный ингибитор танкиразы с IC50, составляющей 46 нМ и 25 нМ для TNKS 1/2 соответственно (например, G007-LK). Ингибитор PARP может представлять собой сильный ингибитор PARP 1 с Ки, составляющей менее чем около 5 нМ в бесклеточном анализе (например, AG-14361). Ингибитор PARP может представлять собой селективный ингибитор PARP 2 с IC50, составляющей 0,3 микромоль, и может быть в около 27 раз более селективным в отношении PARP 1 (например, UPF-1069). Ингибитор PARP может представлять собой сильный и селективный ингибитор с IC50 в отношении PARP 3, составляющей около 0,89 микромоль, и с приблизительно 7-кратно большей селективностью в отношении PARP 1 (например, ME0328). Ингибитор PARP может представлять собой ингибитор PARP 1 и PARP2 со значениями Ки, составляющими 1 нМ и 1,5 нМ соответственно.

[0099] Предпочтительные примеры ингибиторов PARP приведены ниже в Таблице 2А, наряду с их фармацевтически приемлемыми пролекарственными препаратами, солями (например, тозилатами) и сложными эфирами.

Таблица 2А: Примеры ингибиторов PARP

Олапариб (AZD-2281)
Велипариб (ABT-888)
Нирапариб (MK04827)
Рукапариб (AG 014699)
Талазопариб (BMN-673)
Инипариб (BSI-201)

[00100] Дозу ингибитора PARP и частоту дозирования можно выбирать на основании различных характеристик ингибитора PARP, включая фармакокинетические свойства соединения (например, период полувыведения), предыдущие схемы дозирования и характеристики пациентов. Параметры, которые можно использовать при выборе ингибитора PARP, включают перечисленные ниже в Таблице 2В.

[00101] Кроме того, можно провести отбор пациентов для лечения, включающего применение комбинации ингибитора топоизомеразы и ингибитора PARP. Например, отбор пациентов можно проводить на основании их статуса в отношении BRCA (например, BRCA1, BRCA2), нарушения гомологичной рекомбинации (НГР), BROCA-HR или анализа другой панели генетического риска пациента.

Таблица 2В Характеристики некоторых ингибиторов PARP

Характеристика	Велипариб	Олапариб	Рукапариб	Нирапариб	Талазопариб
Молекулярная масса	244,3	434,5	323,4	320,4	380,4
PARP1 IC50	4,73-5,2	1,94-5	1,4-1,98	2,1-3,8	0,57-1,2
PAR EC50	5,9	3,6	4,7		2,5
Дозирование при монотерапии	200-400 мг дважды в сутки	300 мг, дважды в сутки	240-600, мг дважды в сутки	300 мг, ежесуточно	1 мг, ежесуточно
CDx	BRCA	BRCA, HRD	HRD	BRCA, HR	HRD, HR

[00102] В способах согласно данному изобретению ингибитор PARP вводят в терапевтически эффективной дозе (например, дозе, выбранной для монотерапии ингибитором PARP, например, от около 200 мг/сутки до около 800 мг/сутки велипариба). В дополнительном варианте реализации изобретения ингибитор PARP вводят дважды в сутки в дозе, составляющей от около 100 до около 400 мг. В некоторых вариантах реализации изобретения велипариб, рукапариб или олапариб вводят дважды в сутки в дозе, составляющей от около 100 до около 400 мг. В некоторых вариантах реализации изобретения пациентам дважды в сутки вводят 200 мг дозу велипариба после (например, через 3-5 суток) каждого введения липосомального иринотекана.

[00103] В способах согласно данному изобретению ингибитор PARP вводят через «эффективный интервал для выведения иринотекана из плазмы». «Эффективный интервал для выведения иринотекана из плазмы» представляет собой интервал между введением липосомального иринотекана и ингибитора PARP, который обеспечивает достаточное выведение иринотекана и SN38 из плазмы крови и позволяет эффективному количеству иринотекана и/или SN38 оставаться в одной или более опухолях в организме пациента для последующего введения ингибитора PARP для обеспечения желаемого терапевтического действия. Эффективный интервал для выведения из плазмы в способах согласно данному изобретению составляет от около 24 до около 168 часов, включая от 48 часов до около 168 часов. В дополнительном варианте реализации изобретения эффективный интервал для выведения из плазмы составляет от около 48 до около 96 часов. В дополнительном варианте реализации изобретения эффективный интервал для выведения из плазмы составляет 24 часа или 2, 3, 4 и 5 суток.

[00104] В способах согласно данному изобретению рак представляет собой рак шейки матки, рак яичника, трижды негативный рак молочной железы (ТНРМЖ), немелкоклеточный рак легкого (НМКРЛ), мелкоклеточный рак легкого (МКРЛ), рак желудка, рак поджелудочной железы, колоректальный рак или нейроэндокринную опухоль.

[00105] В одном варианте реализации изобретения способ лечения пациента в соответствии с настоящим изобретением приводит к полному патологическому ответу (ППО), полному ответу (ПО), частичному ответу (ЧО) или стабильному заболеванию (СЗ).

[00106] Способы согласно данному изобретению могут дополнительно включать введение пациенту одного или более дополнительных агентов, включая, но не ограничиваясь этим, противорвотные средства, такие как антагонист 5-НТ3; агенты для лечения диареи, такие как лоперамид; дексаметазон; или другие химиотерапевтические агенты.

[00107] В одном варианте реализации изобретения способы согласно данному изобретению приводят к полному патологическому ответу (ППО), полному ответу (ПО), частичному ответу (ЧО) или стабильному заболеванию (СЗ). В другом варианте реализации изобретения комбинированная терапия MM-398 и ингибитором PARP, например, велипарибом, приводит к терапевтическому синергическому эффекту.

[00108] В определенных вариантах реализации изобретения MM-398 и ингибитор PARP вводят в течение по меньшей мере одного цикла. Цикл включает введение первого агента (например, первого профилактического или терапевтического агента) в течение определенного периода времени с последующим введением второго агента (например, второго профилактического или терапевтического агента) в течение определенного периода времени, необязательно, с последующим введением третьего агента (например, третьего профилактического или терапевтического агента) в течение определенного периода времени и так далее, и повторение такого последовательного введения, т. е. цикл. В одном варианте реализации изобретения комбинацию MM-398 и ингибитора PARP вводят в течение по меньшей мере одного цикла. В одном варианте реализации изобретения цикл представляет собой 2-недельный цикл. В другом варианте реализации изобретения цикл представляет собой 3-недельный цикл. В другом варианте реализации изобретения цикл представляет собой 4-недельный цикл. В одном варианте реализации изобретения MM-398 вводят в начале цикла, а введение ингибитора PARP (например, велипариба) откладывают по меньшей мере на около 12, 24, 48, 72, 96 или 120 часов после введения MM-398. В одном варианте реализации изобретения MM-398 вводят в начале цикла, а введение ингибитора PARP (например, велипариба) откладывают по меньшей мере на около 24, 48, 72, 96 или 120 часов после введения MM-398. В одном варианте реализации изобретения MM-398 вводят в качестве части 28-суточного цикла на 1 и 15 сутки, а ингибитор PARP вводят на 3-12 сутки и 17-25 сутки. В другом варианте реализации изобретения MM-398 вводят в качестве части 28-суточного цикла на 1 и 15 сутки, а ингибитор PARP вводят на 5-12 сутки и 19-25 сутки.

[00109] В некоторых примерах, включая протоколы в Таблице 3, ингибитор PARP не вводят в пределах 3 суток относительно введения липосомального ингибитора топоизомеразы 1, такого как липосомальный иринотекан MM-398 (т. е. ингибитор PARP вводят только по меньшей мере на 2, 3, 4 или 5 сутки после введения липосомального ингибитора топоизомеразы 1 или по меньшей мере за 2, 3, 4 или 5 суток до следующего введения липосомального ингибитора топоизомеразы 1). В Таблице 3 приведены протоколы времени введения дозы для введения терапевтически эффективного количества ингибитора PARP и липосомального иринотекана на конкретные сутки 28-суточного цикла антинеопластического лечения.

Таблица 3: Примеры 28-суточных циклов лечения

Протокол	Ингибитор PARP, применяемый на сутки	Липосомальный иринотекан, применяемый на сутки
1	3-12; 17-25	1, 15
2	4-12; 17-25	1, 15
3	5-12; 17-25	1, 15
4	6-12; 17-25	1, 15
5	3-12; 18-25	1, 15
6	4-12; 18-25	1, 15
7	5-12; 18-25	1, 15
8	6-12; 18-25	1, 15
9	3-12; 19-25	1, 15
10	4-12; 19-25	1, 15
11	5-12; 19-25	1, 15
12	6-12; 19-25	1, 15

[00110] В некоторых примерах ингибитор PARP вводят в течение одних или более суток 28-суточного цикла антинеопластического лечения. Например, ингибитор PARP можно вводить на одни или более из 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 и 12 и 19, 20, 21, 22, 23, 24 и 25 суток 28-суточного цикла антинеопластического лечения, когда липосомальный иринотекан (например, MM-398) вводят один раз каждые две недели или на 1 и 15 сутки 28-суточного цикла антинеопластического лечения.

[00111] Способы лечения и терапевтическое применение ингибиторов PARP и ингибиторов топоизомеразы.

Примеры

[00112] Следующие неограничивающие примеры иллюстрируют способы согласно настоящему изобретению.

Пример 1:

Исследование фазы I комбинации MM-398 и велипариба в солидных опухолях

Предпосылки - Ингибиторы PARP и ингибиторы Тор 1

[00113] Ингибиторы поли(АДФ-рибоза)-полимеразы (PARP) представляют новый класс химиотерапевтических агентов, с недавнего времени находящихся в разработке для лечения различных типов рака. PARP представляют семейство ферментов, вовлеченных в репарацию ДНК, а ингибирование этого пути репарации приводит к гибели клеток. Следовательно, ингибиторы PARP исследовали в типах опухолей с другими известными нарушениями путей репарации ДНК, таких как опухоли молочной железы и яичников с мутациями BRCA1 или BRCA2, которые приводят к искусственной летальности. Ингибиторы PARP действуют посредством двух механизмов: каталитическое ингибирование и захват комплексов PARP-ДНК. Клинически доступные ингибиторы PARP (например, талазопариб, нирапариб, олапариб и велипариб, помимо прочих) действуют посредством обоих механизмов, хотя в разной степени. Например, нирапариб намного эффективнее в отношении PARP-захвата чем велипариб, хотя они оба проявляют одинаковую каталитическую активность PARP. Предполагается, что это приводит к снижению токсичности, наблюдаемому в случае велипариба по сравнению с нирапарибом или олапарибом. При этом снижение токсичности не исключает эффективность, согласно продемонстрированной велипарибом клинической активности в исследовании фазы I для 88 пациентов (60 BRCA+ и 28 BRCA-дт), проходивших монотерапию велипарибом, в котором общая частота ответа (ОЧО; ПО+ЧО) составила 23% с частотой клинической эффективности (ЧКЭ; ПО+ЧО+стабильное заболевание) 58% для пациентов BRCA+, и ОЧО 40% с ЧКЭ 68% при максимально переносимой дозе (МПД) и рекомендуемой дозе 2 фазы (RP2D). Подлежащая оценке ОЧО для пациентов BRCA-дт составила 4% с ЧКЭ 38% [5].

[00114] В случае пациентов BRCA-дт, для которых монотерапевтическое лечение не демонстрировало искусственной летальности, возможность улучшать опухолевый ответ может быть достигнута с помощью комбинированной терапии. Следовательно, считается, что предварительная обработка опухолевых клеток другими противораковыми агентами, которые повреждают ДНК, сделает опухолевые клетки более чувствительными к ингибиторам PARP. Ингибиторы Тор 1 представляют класс химиотерапевтических агентов, целью которых является ингибирование репликации ДНК, и, как известно, они индуцируют разрывы нитей ДНК, которые привлекают для своей репарации PARP. Предполагается, что комбинирование ингибиторов PARP и ингибиторов Тор 1 приведет к повышению эффективности в клинических условиях по сравнению с любым из агентов в отдельности. Тогда как ингибиторы PARP до сих пор находятся на стадии разработки, ингибиторы Тор 1 уже продемонстрировали успешную клиническую активность в различных типах опухолей, как отмечено выше. Недавно было продемонстрировано, что причиной синергического эффекта между ингибиторами PARP и ингибиторами Тор 1 является каталитическое ингибирование PARP, но не PARP-захват. Следовательно, при комбинировании двух классов лекарственных препаратов было спрогнозировано, что применение велипариба, менее эффективного в отношении PARP-захвата, в комбинации с ингибитором Тор 1 позволит получить оптимальный синергический эффект, в то же время сведет к минимуму дозолимитирующую токсичность, и такая комбинация была выбрана для этого исследования (Фиг. 1). При комбинировании двух классов лекарственных препаратов было спрогнозировано, что применение олапариба, более эффективного в отношении PARP-захвата по сравнению с велипарибом, в комбинации с ингибитором Тор 1 позволит получить оптимальный синергический эффект (Фиг. 21). Токсичность, связанную с дозированием олапариба, снижали путем разнесения во времени введения олапариба и ингибитора Тор 1. Кроме того, индуцированное Тор 1 повреждение ДНК также можно устранить через альтернативные пути эндонуклеазной репарации, такие как путь XPF-ERCC1. Следовательно, прогнозируется, что опухоли с нарушением эндонуклеазных путей репарации также будут более чувствительны к индуцированной иринотеканом (CPT-11) гибели клеток. В доклинических условиях цитотоксичность велипариба плюс CPT-11 также была дополнительно повышена в XPF-дефицитных клетках. В клинических условиях ожидается, что иринотекан плюс велипариб приведут к повышению эффективности при нацеливании на опухоли с нарушениями различных путей ответа на повреждение ДНК

Клиническая практика применения велипариба в комбинации с ингибиторами Тор 1

[00115] Комбинации ингибиторов PARP и ингибиторов Тор 1 тестировали в клинических исследованиях фазы I. Однако разработка этих комбинированных химиотерапевтических схем была ограничена наблюдаемой повышенной токсичностью, которая приводила к снижению доз, что может ограничить эффективность. В частности, в исследовании с повышением дозы велипариба и топотекана наблюдали значительную миелосупрессию, при этом максимальная переносимая доза была превышена при первом запланированном уровне дозы. Результатом стало снижение доз топотекана и отсутствие повышения дозы велипариба, при этом конечная дозировка велипариба составляла 10 мг дважды в сутки, что в 40 раз ниже по сравнению с установленной для монотерапии дозой, составляющей 400 мг дважды в сутки. В исследовании фазы I велипариба в комбинации с иринотеканом дозолимитирующая токсичность (ДЛТ) включала фебрильную нейтропению (3 степени), лейкопению и нейтропению (4 степени) и приводила к дозе велипариба в 10 раз меньшей по сравнению с монотерапией велипарибом. В другом исследовании с повышением дозы фазы 1 комбинировали велипариб с вводимым раз в два месяца FOLFIRI в случае пациентов с солидными опухолями на поздней стадии. Важно, что тремя из четырех случаев ДЛТ в этом исследовании были случаи нейтропении, а частота нейтропении 3/4 степени составила 47%. Также в этих исследованиях фазы 1 наблюдали некоторую эффективность в случае отдельных пациентов. Например, 5 ЧО наблюдали среди 32 проходящих лечение пациентов в исследовании велипариба плюс иринотекан, тогда как в исследовании, включавшем всего 96 пациентов, получавших велипариб в комбинации с FOLFIRI, наблюдали 12 ЧО и 1 ПО. В Таблице 1, ниже, приведены обобщенные доступные клинические данные для исследований, в которых комбинировали велипариб с ингибитором Тор 1, иллюстрирующие снижение доз одного или более лекарственных препаратов при комбинированном лечении, а также значительную токсичность. Следовательно, задача состоит в определении того, насколько безопасно комбинировать эти два класса лекарственных препаратов, так как потенциальная эффективность комбинации остается многообещающей.

Обобщенные данные по клиническим исследованиям, в которых комбинировали велипариб с ингибитором Тор 1

Исследование	Ингибитор Тор1	МПД/RP2D	ДЛТ	Наиболее распространенные НЯ Степень3/4 (G3/4)	Наиболее распространенные НЯ	Ссылка
Исследование фазы I с повышением дозы велипариба (В) с вводимым раз в два месяца FOLFIRI для пациентов с солидными опухолями на поздней стадии	Иринотекан (как часть схемы FOLFIRI с 5-FU)	В: 200 мг дважды в сутки, 1-5 и 15-19 сутки каждые 28 суток Иринотекан: 150 (сниженная) или 180 (стандартная) мг/м2 дважды в неделю	нейтропения (n=3; Р1, 160 мг и 270 мг, дважды в сутки, В; P2, 100 мг, дважды в сутки, В); гастрит и рвота (P1, 270 мг, дважды в сутки, В)	>30 пациентов с: нейтропенией (47%), тошнотой (38%) и диареей (34%)	диарея (61%), тошнота (60%), нейтропения (59%), рвота (48%), утомляемость (47%), анемия и алопеция (каждый, 41%)	J Clin Oncol 32, 2014 (suppl 15S; abstr 2574)
Исследование фазы I безопасности, фармакокинетики (ФК) и фармакодинамики (ФД) ингибитора поли(АДФ-рибоза)-полимеразы (PARP) велипариба (ABT-888; В) в комбинации с иринотеканом (CPT-11; Ир) для пациентов (пцт) с солидными опухолями на поздней стадии.	Иринотекан	В: 40 мг, дважды в сутки, 15 суток прием/6 суток пропуск (21-суточный цикл) Иринотекан: 100 мг/м2 на 1 и 8 сутки 21-суточного цикла	утомляемость, диарея, фебрильная нейтропения (3 ст.), лейкопения и нейтропения (4 ст.)	не предоставлены	диарея (59%), тошнота (56%), лейкопения (50%), утомляемость (47%), нейтропения (47%), анемия (34%) и рвота (31%)	J Clin Oncol 29: 2011 (suppl; abstr 3000)
Исследование фазы I ингибитора PARP ABT-888 (велипариб) в комбинации с топотеканом для взрослых пациентов с рефрактерными солидными опухолями и лимфомами	Топотекан	В: 10 мг, дважды в сутки, на 1-5 сутки 21-суточного цикла Топотекан: 0,6 (сниженная) мг/м2/сутки на 1-5 сутки 21-суточного цикла	нейтропения 4 степени и тромбоцитопения (1 пцт), нейтропения 4 степени, длящаяся более 5 суток (2 пцт), фебрильная нейтропения (2 пцт), тромбоцитопения 4 степени (2 пцт)	не предоставлены	не предоставлены	Cancer Res 2011;71:5626-5634.

MM-398, механизм действия

[00116] MM-398 представляет собой нанолипосомальный состав иринотекана (nal-IRI), состоящий приблизительно из 80 000 молекул иринотекана, инкапсулированных в липосоме диаметром ~100 нм. Этот стабильный состав разработан так, чтобы улучшить профиль фармакокинетики и безопасности свободного лекарственного препарата путем продления представленности и защиты молекул иринотекана внутри липосомы. Также известно, что липосомы преимущественно откладываются в опухолевой ткани благодаря эффекту повышенной проницаемости и удержания (ППУ), который является результатом аномальности сосудистой системы опухоли, допускающей просачивание макромолекул, а также нарушения лимфодренажа, которое стимулирует удержание этих молекул в опухолевом микроокружении. Эффект ППУ обеспечивает длительное воздействие MM-398 на опухолевую ткань, что, в свою очередь, обеспечивает воздействие MM-398 на большую долю клеток во время более чувствительной S-фазы клеточного цикла. В исследовании биораспределения на мышах проводили измерение активного метаболита иринотекана SN-38 в различных тканях после дозирования MM-398 и определили, что SN-38 сохранялся в опухолевой ткани дольше, чем в нормальных тканях, включая почки и печень (Фиг. 4). Дополнительные доклинические исследования фармакокинетики (ФК) показали расширенную плазменную ФК, а также расширенную опухолевую ФК после дозирования MM-398 по сравнению с дозированием свободного иринотекана (Фиг. 5). Как иринотекан, так и SN-38 очень быстро (в течение 8 часов) выводятся из плазмы после введения свободного иринотекана. При этом выведение MM-398 значительно замедлено со временем полувыведения приблизительно 48 часов, как показано на Фиг. 5A; так как >90% иринотекана является инкапсулированным по всему объему плазмы, уровни иринотекана отображают концентрацию MM-398. Представленность SN-38 в плазме также является большей, хотя уровни C_макс снижены, после введения MM-398, что позволяет предположить преимущество липосомального состава в продлении времени представленности и полувыведения (Фиг. 5B). В опухолевой ткани CPT-11 и SN-38 выводятся приблизительно в течение 2 суток после дозирования свободного иринотекана, при этом как CPT-11, так и SN-38 сохраняются в опухолевой ткани в течение по меньшей мере 1 недели после эквивалентной дозы MM-398.

[00117] Прогнозируется, что проницаемость опухоли, а также активность карбоксилэстеразы (CES) в опухолевой ткани, которая отвечает за ферментативное преобразование CPT-11 в SN-38, являются критическими факторами для локальной представленности SN-38 в опухоли после дозирования MM-398. In vivo исследования с опухолевыми ксенотрансплантатами продемонстрировали, что эффективность MM-398 связана с высокой активностью CES и/или высокими уровнями CPT-11 в опухоли после дозирования MM-398. Кроме того, MM-398 продемонстрировал превосходящую активность по сравнению с эквивалентным дозированием свободным иринотеканом в нескольких доклинических моделях, включая модели с ксенотрансплантатами опухолей молочной железы, толстой кишки, яичника и поджелудочной железы (Фиг. 6).

Клиническая практика применения MM-398 и МРТ ферумокситола

[00118] В клинических условиях MM-398 также демонстрировал продленную представленность SN-38. Результаты ФК в исследовании фазы II пациентов с раком желудка продемонстрировали расширенную плазменную ФК как CPT-11, так и SN-38 после лечения MM-398 по сравнению с лечением свободным иринотеканом (Фиг. 7A/B). Кроме того, в исследовании фазы I (протокол #MM-398-01-01-02) исследовали уровни CPT-11 и SN-38 в опухоли после лечения MM-398 с помощью полученных после лечения образцов биопсии. С учетом прогнозирования на основе моделей ожидалось, что уровни SN-38 в опухоли будут выше, чем в плазме, что позволит предположить наличие локального преобразования CPT-11 в SN-38 в опухолевом микроокружении при применении MM-398 (Фиг. 7C). Прогнозы были подтверждены путем измерения уровней CPT-11 и SN-38 в образцах биопсии опухолей, полученных от пациентов через 72 часа после дозирования, которые демонстрировали в 5 раз большие уровни SN-38 в опухоли, чем в плазме (Фиг. 7D-E).

[00119] Вместе эти данные позволяют предположить, что продление воздействия SN-38 приведет к продлению повреждения ДНК. SN-38 обратимо связывается с расщепляющим комплексом топоизомеразы 1 («Top1cc»). Следовательно, расщепляющий комплекс, «захваченный» SN-38, находится в равновесии со свободным SN-38. Аффинность связывания является относительно низкой (но компенсируется общей селективностью), так как IC₅₀ находится в наномолярном диапазоне. Вкратце, свободный SN-38 представляет собой объективное отражение Top1cc-связанного SN-38. В основе метаболизма SN-38 лежит глюкуронизация UGT1A1 и выведение из печени посредством ABCC2. UGT1A1 обнаруживается на значительно больших уровнях в нормальной ткани печени, чем в других тканях и опухолях (за исключением гепатоцеллюлярных раков). Следовательно, SN-38 в опухолевой ткани не будет метаболизироваться в какой-либо значительной степени. На Фиг. 7 приведены клинические данные, позволяющие предположить длительно поддерживаемые уровни в циркуляции и, что более удивительно, длительно поддерживаемые уровни в опухоли. Таким образом, было обнаружено, что длительное повреждение ДНК возникает при применении MM-398 (в противоположность быстро выводимому свободному иринотекану, который причинял бы повреждение ДНК, которое затем было бы быстро устранено).

[00120] В исследовании фазы I MM-398 также изучали возможность применения магнито-резонансной (МР) визуализации для прогнозирования содержания опухоль-ассоциированных макрофагов (ОАМ) и отложения MM-398. Оказалось, что ОАМ играют ключевую роль в отложении, удержании и активации MM-398 в опухолевом микроокружении. В этом клиническом исследовании ферумокситол (ФМК) (содержащий микрочастицы препарат суперпарамагнитного оксида железа, покрытый карбоксиметилэфиром сорбита полиглюкозы) применяли в качестве визуализирующего контрастного агента, а МР-изображения получали через 1 ч, 24 ч и 72 ч после инъекции ФМК. ФМК является одобренным видом терапии, показанным для лечения железодефицитной анемии у взрослых пациентов с хронической болезнью почек; при этом все возрастающему количеству раковых пациентов без железодефицита вводят ФМК в качестве визуализирующего агента для визуализации содержания макрофагов и сосудистой системы. Как и MM-398, ФМК также является наночастицей диаметром приблизительно 17-31 нм. Так как проницаемость опухоли согласно прогнозам является важным фактором в эффективности MM-398, ФМК также исследовали в отношении применения в качестве суррогата отложения липосом (Фиг. 19А). Преимущество ФМК состоит в том, что этот агент помогает идентифицировать пациентов с меньшей вероятностью ответа на MM-398 вследствие плохого поглощения лекарственного препарата. В качестве диагностической тест-системы ферумокситол позволяет определять популяцию пациентов, которым применение MM-398 принесет пользу и которые в ином случае не были бы категоризированы.

[00121] В отношении риска, связанного с инфузией ФМК, на вкладыше упаковки Ферагем^® указаны следующие предупреждения и предостережения для ФМК: реакции гиперчувствительности, гипотензия, перенасыщение железом и способность отрицательно влиять на диагностическую возможность МРТ. В трех рандомизированных клинических исследованиях, включавших 605 пациентов, проходивших лечение ФМК, ≥1% пациентов, проходивших лечение ферумокситолом, сообщали о следующих нежелательных явлениях: тошнота, головокружение, гипотензия, периферический отек, головная боль, отек, рвота, боль в животе, боль в груди, кашель, зуд, лихорадка, боль в спине, мышечные спазмы, одышка и сыпь. Все ВВ железосодержащие продукты несут риск потенциально опасных для жизни аллергических реакций. В первых клинических исследованиях Ферагема^®, проводимых в основном на пациентах с хронической болезнью почек, сообщалось о серьезных реакциях гиперчувствительности у 0,2 процента (3/1726) пациентов, получавших Ферагем^®. Другие нежелательные реакции, потенциально связанные с гиперчувствительностью (например, зуд, сыпь, крапивница и свистящее дыхание) наблюдались у 3,7 процента (63/1726) этих пациентов. В других исследованиях, которые не включали пациентов с хронической болезнью почек, сообщалось об умеренных и тяжелых реакциях гиперчувствительности у 2,6 процента (26/1014) пациентов, проходивших лечение Ферагемом^®. После одобрения Ферагема^® 30 июня 2009 г. были случаи серьезной гиперчувствительности, включая смерть. В исследовании MM-398-01-01-02 всего 15 пациентов получали ферумокситол до настоящего времени, а 13/15 пациентов продолжили участие в исследовании с получением MM-398. Для этих 15 пациентов не было отмечено никаких реакций гиперчувствительности или нежелательных явлений, связанных с ферумокситолом. Пациенты с запущенным не поддающимся лечению раком, которых лечили экспериментальными агентами, такими как MM-398, имели конечную стадию рака с очень ограниченными возможностями лечения и очень высоким риском смерти вследствие первопричинного заболевания. Дополнительный риск лечения пациентов ФМК после MM-398 является небольшим по сравнению с общими рисками, связанными с лечением MM-398 пациентов с метастатическим раком. Были приняты меры предосторожности, чтобы гарантировать, что ФМК вводят в соответствии с указанными на этикетке инструкциями, включая тщательное наблюдение пациентов во время и в течение 30 минут после инфузии ферумокситола, когда его вводили в качестве части клинического исследования MM-398. Дополнительные меры предосторожности принимают для того, чтобы не вводить ФМК пациентам с любым из следующих патологических состояний: признаки перенасыщения железом, известная гиперчувствительность к ферумокситолу или любому другому железосодержащему ВВ продукту, подтвержденный анамнез множественной лекарственной аллергии, или тем, кому МРТ противопоказана по каким-либо другим причинам.

[00122] Результаты МРТ из исследования MM-398-01-01-02 продемонстрировали, что количество ФМК, откладываемое в опухолевых очагах поражения, можно было количественно оценить (Фиг. 19В), а впоследствии было показано наличие корреляции между поглощением ферумокситола в опухолевом очаге поражения по данным МРТ и ответом на MM-398 (Фиг. 19C). Сейчас эту корреляцию дополнительно исследуют в расширенном исследовании фазы 1, и также она включена в качестве коррелятивной визуализации в исследование MM-398+велипариб.

[00123] В конечном итоге разработка ФМК в качестве сопроводительного диагностического агента имеет перспективу как в отношении того, чтобы уберечь не демонстрирующих ответ пациентов от ненужной связанной с лечением токсичности, так и в отношении того, чтобы служить дополнительным инструментом для увеличения доли проходящих лечение пациентов, которые могут демонстрировать ответ.

План лечения

[00124] MM-398 будут вводить путем внутривенной (ВВ) инфузии в течение 90 минут в дозе 80 мг/м² каждые две недели. Начальная доза MM-398 80 мг/м² была выбрана как доза, которую успешно использовали в исследовании NAPOLI в случае рака поджелудочной железы в комбинации с 5-FU и лейковорином, следовательно, дозу MM-398 будут поддерживать постоянной без повышения. Велипариб пациент будет перорально принимать в домашних условиях дважды в сутки; при этом будет вестись дневник для записи дозировки и времени суток приема лекарственного препарата. Число дней приема велипариба будут выяснять с помощью схемы повышения дозы, приведенной в таблице ниже. Начальная доза велипариба в 100 мг дважды в сутки представляет половину дозы, вводимой в комбинации с иринотеканом в качестве части FOLFIRI и недавно представленной на ежегодном собрании ASCO (J Clin Oncol 32, 2014 (suppl 15S; abstr 2574)). Безопасность при начальном уровне дозирования гарантируется началом применения велипариба, начиная с 5 суток после дозирования MM-398. Данные, полученные на сегодняшний день, позволяют предположить, что SN-38 к этому времени будет выведен из плазмы, но все еще накоплен в опухолевой ткани (смотрите Фиг. 7C). Уровень дозирования 2, 200 мг велипариба дважды в сутки, соответствует МПД велипариба, применяемой в схеме FOLFIRI; следовательно, если уровень дозирования 2 признают безопасным после оценочного периода, увеличение числа дней дозирования велипарибом станет запланированным этапом повышения дозы до следующего уровня дозирования (уровень дозирования 3). Если дозу и режим применения велипариба при уровне дозирования 3 признают безопасными, то увеличение дозы велипариба продолжат. Если уровень дозирования 3 не признают безопасным, можно будет исследовать альтернативную схему дозирования, в которой число дней дозирования велипарибом будут уменьшать.

[00125] MM-398 вводят путем внутривенной (ВВ) инфузии в течение 90 минут в дозе 80 мг/м² каждые две недели. Пациент совместно принимает велипариб перорально в домашних условиях в соответствии со следующим расписанием:

Уровень дозирования1	Доза велипариба (мг, дважды в сутки)	Дни приема дозы велипариба	Доза MM-398 (мг/м2, раз в две недели)
1	100	2, 3, 4 или 5-12; 16, 17, 18 или 19-25 сутки	80, 1, 15 сутки
2	200	2, 3, 4 или 5-12; 16, 17, 18 или 19-25 сутки	80, 1, 15 сутки
3	200	2, 3, 4 или 5-12; 16 или17-25 сутки	80, 1, 15 сутки
4	300	2, 3, 4 или 5-12; 16, 17, 18 или 19-25 сутки	80, 1, 15 сутки
5	400	2, 3, 4 или 5-12; 16, 17, 18 или 19-25 сутки	80, 1, 15 сутки

¹Дополнительные уровни дозирования и альтернативные схемы дозирования можно исследовать после разрешения спонсора, медицинского наблюдателя и исследователей.

** После достижения МПД и только для первого цикла мы планируем привлечь приблизительно 18 пациентов для получения биопсии опухолей в соответствии со схемой, приведенной в корреляционном разделе ниже.

Пример 2: In Vitro исследования

[00126] In vitro исследования проводили, тестируя комбинации различных ингибиторов PARP и ингибиторов топоизомеразы липосомального иринотекана и SN-38.

[00127] На Фиг. 1A-1D приведены линейные графики, которые отображают жизнеспособность клеток рака шейки матки после обработки SN-38 и/или различными ингибиторами PARP. Если не указано иное, данные на каждой из этих фигур были получены путем оценки жизнеспособности клеток для 5 разных клеток рака шейки матки (ME-180 на Фиг. 1A, MS-751 на Фиг. 1B, C-33A на Фиг. 1C, SW756 на Фиг. 1D и SiHa на Фиг. 1E) при 1000 клеток/лунка в 384-луночном планшете с обработкой SN-38 (ингибитор топоизомеразы 1) и/или 3 разными ингибиторами PARP (велипариб, нирапариб или олапариб) при 0,33 микрограмм/мл в течение 24 часов с последующей промывкой и инкубацией в течение дополнительных 72 часов со свежей средой.

[00128] Комбинацию ингибитора топоизомеразы 1 SN-38 и различных ингибиторов PARP (велипариб, нирапариб и олапариб) исследовали in vitro с различными линиями клеток мелкоклеточного рака легкого (МКРЛ), рака поджелудочной железы и рака молочной железы. При концентрации 2 нМ SN-38 наблюдали аддитивное/синергическое повышение ингибирования раковых клеток в комбинации с олапарибом, велипарибом и рукапарибом (при этом согласно наблюдениям велипариб был немного менее эффективным в комбинации с SN-38, чем олапариб и рукапариб). При всех исследуемых концентрациях был достигнут статический рост популяции раковых клеток. На Фиг. 2A-2E приведены графики, отображающие результаты in vitro экспериментов по оценке комбинаций ингибитора топоизомеразы 1 SN38 с различными ингибиторами PARP, проводимых в формате в соответствии с нижеприведенными таблицами 4-5 (планшеты с 5000 клеток/лунка, 100 микролитров на лунку; лекарственные препараты добавляют с 20x при 10 микролитрах на лекарственный препарат, дополняют до общего объема 100 микролитров DMEM; затем начинают сканирование каждые 4 часа до 68 часов).

Таблица 4

	Мелкоклеточный рак легкого	Рак поджелудочной железы	ТНРМЖ
Лечение	DMS-114	NCI-H1048	CFPAC-1	BxPC-3	MDA-MB-231
SN-38 и олапариб	Планшет 1	Планшет 2	Планшет 3	Планшет 4	Планшет 5
SN-38 и рукапариб	Планшет 1	Планшет 2	Планшет 3	Планшет 4	Планшет 5
SN-38 и велипариб	Планшет 1	Планшет 2	Планшет 3	Планшет 4	Планшет 5

Таблица 5

[00129] Аддитивный/синергический эффект наблюдали между SN-38 при 2 нM в комбинации с исследуемыми ингибиторами PARP олапарибом, велипарибом и рукапарибом с клетками МКРЛ DMS-114. Фиг. 2A представляет собой график, на котором показаны результаты in vitro определения в динамике % числа клеток мелкоклеточного рака легкого DMS-114, обработанных ингибитором топоизомеразы SN-38 и ингибитором PARP рукапарибом.

[00130] Клетки МКРЛ NCI-H1048 росли медленно и были очень чувствительны к комбинациям олапариба и рукапариба с SN-38 при 2 нM. Фиг. 2В представляет собой график, на котором показаны результаты in vitro определения в динамике % числа клеток мелкоклеточного рака легкого NCI-H1048, обработанных ингибитором топоизомеразы SN-38 и ингибитором PARP рукапарибом.

[00131] Аддитивный/синергический эффект наблюдали между SN-38 при 2 нM в комбинации с исследуемыми ингибиторами PARP олапарибом, велипарибом и рукапарибом с клетками рака поджелудочной железы CFPAC-1. Фиг. 2С представляет собой график, на котором показаны результаты in vitro определения в динамике % числа клеток рака поджелудочной железы CFPAC-1, обработанных ингибитором топоизомеразы SN-38 и ингибитором PARP рукапарибом.

[00132] Фиг. 2D представляет собой график, на котором показаны результаты in vitro определения в динамике % числа клеток рака поджелудочной железы BxPC-3, обработанных ингибитором топоизомеразы SN-38 и ингибитором PARP рукапарибом. Фиг. 2Е представляет собой график, на котором показаны результаты in vitro определения в динамике % числа клеток трижды негативного рака молочной железы (ТНРМЖ) MDA-MB-231, обработанных ингибитором топоизомеразы SN-38 и ингибитором PARP рукапарибом.

[00133] На Фиг. 17А изображена in vitro активность SN-38 в моделях рака шейки матки. Линии клеток рака шейки матки обрабатывали велипарибом и SN-38 в одно и то же время или согласно схеме, когда велипариб добавляли через 24 ч после SN-38, а жизнеспособность клеток определяли, используя анализ CTG.

Пример 3: Доклинические исследования переносимости дозы

[00134] Проводили различные доклинические in vivo эксперименты, чтобы оценить, может ли дозирование велипариба, отложенное относительно липосомального иринотекана, снизить системную токсичность, включая доклиническое исследование переносимости дозы. Комбинация велипариба и иринотекана характеризовалась дозолимитирующей токсичностью, которая предотвращала дозирование этой комбинации в высоких (эффективных) дозах каждого лекарственного препарата, тем самым ограничивая ее клиническую применимость. Чтобы решить эту проблему, в доклинических исследованиях оценивали введение липосомального препарата ингибитора топоизомеразы 1 с последующим введением ингибитора PARP по меньшей мере через 1 сутки (предпочтительно 2-3 суток) после введения липосомального ингибитора топоизомеразы 1.

[00135] Преимущество дозирования MM-398 по сравнению со свободным иринотеканом состоит в расширенном ФК-профиле и продленном воздействии на опухоль MM-398. Так как SN-38 быстрее выводится из нормальных тканей, чем из опухоли, отложенное дозирование велипариба (например, начиная дозирование велипариба через несколько суток после введения MM-398) позволит окну максимальной индуцированной иринотеканом токсичности пройти в отсутствие одновременной токсичности со стороны велипариба. При этом уровни SN-38 в опухоли поддерживаются дольше, чем в здоровой ткани и, таким образом, после дозирования ингибитора PARP после введения липосомального ингибитора Тор 1 (например, MM-398) оба лекарственных препарата будут одновременно воздействовать на опухолевую ткань.

[00136] Чтобы продемонстрировать, что отложенное относительно nal-IRI дозирование велипариба может снизить системную токсичность, проводили доклиническое исследование переносимости дозы. Мышей дозировали nal-IRI на постоянной основе один раз в неделю при разных дозах на 1 сутки, тогда как велипариб дозировали раз в сутки при фиксированной дозе в течение 3 последовательных суток каждую неделю (на 2-4 сутки, 3-5 сутки или 4-6 сутки) и отслеживали массу тела как показатель токсичности. Всех мышей дозировали на постоянной основе один раз в неделю на 1 сутки, после чего дозировали велипарибом в течение 3 последовательных суток на 2-4 сутки (8А), 3-5 (8В) сутки или 4-6 сутки (8С). Мышей ежедневно взвешивали, а % прироста массы тела указан по оси Y. Потеря массы указывает на непереносимость комбинации. Стоит отметить, что самая высокая (50 мг/кг) доза липосомального иринотекана MM-398 характеризовалась наилучшей переносимостью (т. е. наименьшим измеренным снижением % массы тела, наблюдаемым в течение эксперимента), когда велипариб вводили на 4, 5 и 6 сутки (Фиг. 8С). Аналогично, комбинация велипариба и MM-398 характеризовалась наилучшей переносимостью при более низких дозах липосомального иринотекана MM-398, когда велипариб вводили только на 4, 5 и 6 сутки после введения MM-398. Токсичность комбинации наблюдали при наивысших дозах MM-398, применяемых близко по времени с дозами велипариба (Фиг. 8А). Однако эту токсичность можно было уменьшить путем снижения дозы MM-398 или задержки начала дозирования велипариба, причем наивысшую дозу MM-398 можно было успешно дозировать с велипарибом, применяемым на 4-6 сутки после дозирования MM-398 на 1 сутки (Фиг. 8A-8C). Схемы с дозированием велипариба на 4-6 сутки (после дозирования MM398 на 1 сутки) придерживались в последующих исследованиях эффективности, которые продемонстрировали синергический эффект комбинации в двух моделях с ксенотрансплантатами опухоли рака шейки матки, в которых один велипариб был неэффективным (Фиг. 11A), и во второй модели, в которой ни MM-398, ни велипариб не были эффективны в виде отдельных агентов (Фиг. 11B), при этом комбинация демонстрировала ингибирование опухолевого роста (Фиг. 11B).

[00137] Чтобы проиллюстрировать вариант реализации, демонстрирующий, что отложенное относительно MM-398 дозирование олапариба может снизить системную токсичность, проводили доклиническое исследование переносимости дозы. На Фиг. 9 приведено графическое представление дизайна исследования мышиной переносимости со сравнением MM-398 и олапариба в виде монотерапии или в комбинации с применением фиксированной дозы MM-398 и варьирующихся доз олапариба с различными схемами дозирования для разных групп: Группа 1: только MM-398 ВВ (10 мг/кг); Группа 2: только олапариб перорально (200 мг/кг); Группа 3: MM-398 (d1)+олапариб (200 мг/кг, d1-5); Группа 4: MM-398 (d1)+олапариб (150 мг/кг, d1-5); Группа 5: MM-398 (d1)+олапариб (200 мг/кг, d1-4); Группа 6: MM-398 (d1)+олапариб (200 мг/кг, d2-5); Группа 7: MM-398 (d1)+олапариб (200 мг/кг, d3-5); Группа 8: только ДМСО перорально. На Фиг. 10A-10D представлены линейные графики, демонстрирующие токсичность, связанную с MM-398 и олапарибом, применяемыми в виде монотерапии при варьирующихся дозах олапариба и варьирующейся схеме введения ингибитора PARP после MM-398 в мышиной модели. Мышей, получавших монотерапию MM-398, олапарибом, дозировали 5x в неделю. Мышей, которые получали комбинацию с постоянной концентрацией MM-398 (10 мг/кг) и варьирующейся концентрацией олапариба, дозировали согласно варьирующемуся режиму: Группа 3: MM-398 (d1)+олапариб (200 мг/кг, d1-5); Группа 4: MM-398 (d1)+олапариб (150 мг/кг, d1-5); Группа 5: MM-398 (d1)+олапариб (200 мг/кг, d1-4); Группа 6: MM-398 (d1)+олапариб (200 мг/кг, d2-5); Группа 7: MM-398 (d1)+олапариб (200 мг/кг, d3-5). Мышей наблюдали в отношении связанной с обработкой токсичностью путем нанесения на график (А) массы тела и (В) процента выживаемости. Добавление олапариба оказалось более токсичным по сравнению с монотерапией, однако задержка начала введения олапариба до с3 снижала связанную с олапарибом токсичность по сравнению с одновременной терапией. Мышей дозировали MM-398 на постоянной основе один раз в неделю при разных дозах на 1 сутки, тогда как олапариб дозировали раз в сутки при фиксированной недельной дозе в течение 5, 4 или 3 последовательных суток каждую неделю (на 1-5 сутки, 1-4 сутки, 2-5 сутки или 3-5 сутки) и отслеживали массу тела и процент выживаемости как показатели токсичности. Токсичность комбинации наблюдали при наивысших дозах MM-398, применяемых близко по времени с дозами олапариба (Фиг. 8). Однако эту токсичность можно было уменьшить путем задержки начала дозирования олапариба, причем наивысшую дозу MM-398 можно было успешно дозировать с олапарибом, применяемым на 3-5 сутки после дозирования MM-398 на 1 сутки (Фиг. 10A-10D).

[00138] Мышей дозировали MM-398 на постоянной основе один раз в неделю при разных дозах на 1 сутки, тогда как велипариб дозировали раз в сутки при фиксированной дозе в течение 3 последовательных суток каждую неделю (на 2-4 сутки, 3-5 сутки или 4-6 сутки) и отслеживали массу тела как показатель токсичности. Токсичность комбинации наблюдали при наивысших дозах nal-IRI, применяемых близко по времени с дозами велипариба. Однако эту токсичность можно было уменьшить путем снижения дозы nal-IRI или задержки начала дозирования велипариба. Этой схемы дозирования придерживались в последующих исследованиях эффективности на мышах, которые продемонстрировали синергический эффект комбинации в двух моделях с ксенотрансплантатами опухоли рака шейки матки, в которых один велипариб был неэффективным, и во второй модели, в которой ни nal-IRI, ни велипариб не были эффективны в виде отдельных агентов, при этом комбинация демонстрировала ингибирование опухолевого роста.

[00139] Переносимость комбинации MM398 в мышиной модели на 1 сутки оценивали в комбинации с введением велипариба на 1-3 сутки, 2-4 сутки и 3-5 сутки. Переносимость комбинированного режима у мышей (определяемая по процентному изменению массы тела в течение 20 дней) возрастала, если первое введение велипариба происходило на 2 сутки и 3 сутки, при этом начало дозирования велипариба на 3 сутки обеспечивало наиболее переносимую схему дозирования. На Фиг. 12А представлен график, который дополнительно отображает in vivo переносимость дозы MM-398, составляющей 50 миллиграмм/килограмм (мг/кг), на 1 сутки в комбинации с 50 мг/кг велипариба, применяемого на 1, 2 3 или 2, 3, 4 или 3, 4, 5 сутки после введения MM-398, что отражено в процентном изменении массы тела со скорректированным нижним пределом. На Фиг. 12В представлен график, который дополнительно отображает in vivo переносимость дозы MM-398, составляющей 28 мг/кг, на 1 сутки в комбинации с 50 мг/кг велипариба, применяемого на 1, 2 3 или 2, 3, 4 или 3, 4, 5 сутки после введения MM-398, что отражено в процентном изменении массы тела со скорректированным нижним пределом.

[00140] На Фиг. 16 представлен график, показывающий, что обработка мышей комбинацией MM-398 с велипарибом в модели с ксенотрансплантатом C33A, описанной в примере 5, также приводит к снижению массы тела по сравнению с введением любого лекарственного препарата в отдельности.

[00141] Эти исследования демонстрируют, что эту токсичность можно уменьшать путем задержки начала дозирования ингибитора PARP, предпочтительно на 2-3 суток после введения липосомального иринотекана. Схемы дозирования, в которой ингибитор PARP вводят только после введения липосомального иринотекана, придерживались в исследованиях эффективности на мышах (Пример 4), демонстрирующих терапевтический синергический эффект комбинации ингибитора PARP и липосомального иринотекана в двух моделях с ксенотрансплантатами опухоли рака шейки матки (в которых один велипариб был неэффективным, и во второй модели, в которой ни MM-398, ни велипариб не были эффективны в виде отдельных агентов, при этом комбинация демонстрировала ингибирование опухолевого роста).

Пример 4: Доклиническая эффективность липосомального иринотекана

[00142] In vivo исследования опухолевых ксенотрансплантатов продемонстрировали, что эффективность липосомального иринотекана больше, чем у свободного иринотекана. Кроме того, in vivo исследования опухолевых ксенотрансплантатов продемонстрировали, что MM-398 связан с высокой активностью CES и/или высокими уровнями CPT-11 в опухоли после дозирования MM-398. Кроме того, MM-398 продемонстрировал превосходящую активность по сравнению с эквивалентным дозированием свободного иринотекана в нескольких доклинических моделях, включая модели с с ксенотрансплантатами опухоли молочной железы, толстой кишки, яичника и поджелудочной железы.

[00143] Липосомальный иринотекан (MM-398) характеризовался большей эффективностью в различных раковых моделях по сравнению с нелипосомальным иринотеканом. Раковые клетки подкожно имплантировали мышам; когда опухоли хорошо развивались и достигали среднего объема 200 мм3, начинали ВВ обработку свободным иринотеканом, MM-398 или контролем. Дозы свободного и нанолипосомального иринотекана, применяемые в каждом исследовании, указаны выше, а моменты времени применения этих доз указаны стрелками. Прогнозируется, что проницаемость опухоли, а также активность карбоксилэстеразы (CES) в опухолевой ткани, которая отвечает за ферментативное преобразование CPT-11 в SN-38, являются критическими факторами для локальной представленности SN-38 в опухоли после дозирования MM-398. In vivo исследования опухолевых ксенотрансплантатов продемонстрировали, что эффективность MM-398 связана с высокой активностью CES и/или высокими уровнями CPT-11 в опухоли после дозирования MM-398. Кроме того, MM-398 продемонстрировал превосходящую активность по сравнению с эквивалентным дозированием свободного иринотекана в нескольких доклинических моделях, включая модели с ксенотрансплантатами опухоли молочной железы, толстой кишки, яичника и поджелудочной железы.

Пример 5: Доклиническая активность липосомального иринотекана и ингибиторов PARP

[00144] Согласно Фиг. 11А и Фиг. 11В исследовали противоопухолевую активность MM-398 в комбинации с велипарибом (ингибитор PARPi) в нескольких моделях с ксенотрансплантатами рака шейки матки. В этом исследовании использовали модели с ксенотрансплантатами рака шейки матки MS-751 и C33A для изучения действия от введения субоптимальных доз MM-398 в комбинации с ингибитором PARP велипарибом. Разные тканевые уровни MM-398 через 24 и 72 часа указывали на то, что MM-398 и активный метаболит SN-38 быстрее выводились из печени, селезенки, толстой кишки и плазмы, чем из опухолей. Комбинация велипариба и MM-398 привела к улучшению ключевых ФД-биомаркеров (расщепляемая каспаза и yH2AX) по сравнению с велипарибом или MM-398 в отдельности. Фиг. 11А и 11В показывают, что комбинация MM-398+велипариб является синергической. Две разных модели с ксенотрансплантатами рака шейки матки использовали для изучения эффективности MM-398, дозируемого один раз в неделю на 1 сутки (стрелки), велипариба, дозируемого при 50 мг/кг перорально раз в сутки в течение 3 последовательных суток на 4-6 сутки каждой недели, или комбинации, дозируемой по той же схеме, что и обработка одиночными агентами в комбинации. (A) Модель с ксенотрансплантатом рака шейки матки MS751 с применением MM-398, дозируемого при 5 мг/кг, и (B) модель с ксенотрансплантатом рака шейки матки C33A с применением MM-398, дозируемого при 2 мг/кг. В этом исследовании контрольные мыши принадлежали тому же штамму и отбирались раньше исследуемых мышей (были немного младше). Не представлены данные для мышей, исключенных из исследования вследствие потери массы, или для мышей, ненамеренно исключенных перед датой окончания.

Модель с ксенотрансплантатом рака шейки матки MS-751

[00145] Подробности, касающиеся модели с ксенотрансплантатом MS-751, обобщены в Таблице 6.

Таблица 6

Штамм мышей:	Бестимусные (Tacoma)
Опухоль	Шейки матки MS-751, C33A
Инокуляция:	5*10^6 (ПК) в 30% МГ
Лекарственный препарат:	MM-398 (ВВ)+велипариб (перорально)
Группы:		Животных на группу:	Доза (мг/кг)
1	Солевой раствор	10
2	MM-398	10	5
3	велипариб/перорально	10	50	3/4/5-е сутки
4	MM-398+велипариб	10	5+50	3/4/5-е сутки

[00146] Фиг. 13A показывает, что объем опухоли снижался, когда MM-398 (доза 5 мг/кг) вводили в комбинации с велипарибом в модели с ксенотрансплантатом MS751 (p=0,03) по сравнению с введением любого лекарственного препарата в отдельности. Фиг. 13В показывает, что процент выживаемости был лучше в случае мышей, обрабатываемых MM-398 (доза 5 мг/кг) в комбинации с велипарибом в модели с ксенотрансплантатом MS751 по сравнению с обработкой любым лекарственным препаратом в отдельности. Фиг. 13С показывает, что обработка комбинацией MM-398 с велипарибом в модели с ксенотрансплантатом MS751 приводит к снижению массы тела по сравнению с введением любого лекарственного препарата в отдельности.

Модель с ксенотрансплантатом рака шейки матки C33A

[00147] Подробности, касающиеся модели с ксенотрансплантатом C33A, обобщены в Таблице 7.

Таблица 7

Мыши:	Самки, бестимусные Ncr (Taconic), 5-6 недель.
Линии клеток:	C33 A
Инокуляция опухоли: 5×106 в 100 мкл Матригеля (30 об.%), ПК
15 мышей на линию клеток
Группы:	Доза, мг/кг:
Только MM-398	2
Только велипариб	50
MM-398+велипариб (3-4-5 с)	2+60
Получение образцов после умерщвления: Через 72 ч после первой инъекции
Замороженные (опухоль, печень, селезенка, плазма)
FFPA (опухоль)
Анализ:
гамма H2AX и расщепляемая каспаза/Tunnel в FFPE (Lia)
CPT-11 и SN-38 во всех тканях только для быстрозамороженных образцов MM-398 (Roswell)

[00148] Фиг. 14 показывает, что комбинация MM-398 с велипарибом в модели с ксенотрансплантатом C33A приводит к снижению объема опухоли сравнению с введением любого лекарственного препарата в отдельности. Фиг. 15 показывает, что процент выживаемости был лучше в случае мышей, обрабатываемых MM-398 (доза 5 мг/кг) в комбинации с велипарибом, в модели с ксенотрансплантатом C33A по сравнению с введением любого лекарственного препарата в отдельности.

Пример 6: Клиническое применение липосомального иринотекана и ингибиторов PARP

Клиническое применение липосомального иринотекана и велипариба

[00149] Это исследование с повышением дозы фазы 1, проводимое на людях для получения характеристик безопасности, переносимости, МПД и ФК MM-398 в комбинации с велипарибом, с целью определения оптимальной дозы комбинации и схемы, которая будет рекомендована в качестве дозы для фазы 2. Далее схематически приведены две разных схемы дозирования велипариба, которые будут исследоваться в комбинации с дозированием MM-398 каждые две недели:

[00150] MM-398 будут вводить путем внутривенной (ВВ) инфузии в течение 90 минут в дозе 80 мг/м² каждые две недели. MM-398 вводят путем внутривенной (ВВ) инфузии в течение 90 минут в дозе 80 мг/м² (соли) иринотекана один раз каждые две недели (на 1 и 15 сутки 28-суточного цикла лечения). Велипариб пациент перорально совместно принимает в домашних условиях в соответствии со следующим расписанием:

Таблица 8

Уровень дозирования1	Доза велипариба (мг, дважды в сутки)	Дни приема дозы велипариба	Доза MM-398 (соль) (мг/м2, раз в две недели)
1	100	5-12; 19-25 сутки	80, 1, 15 сутки
2	200	5-12; 19-25 сутки	80, 1, 15 сутки
3	200	5-12; 17-25 сутки	80, 1, 15 сутки
4	300	5-12; 19-25 сутки	80, 1, 15 сутки
5	400	5-12; 19-25 сутки	80, 1, 15 сутки

¹Дополнительные уровни дозирования и альтернативные режимы дозирования можно исследовать после разрешения спонсора, медицинского наблюдателя и исследователей.

** После достижения МПД и только для первого цикла мы планируем привлечь приблизительно 18 пациентов для получения биопсии опухолей в соответствии со схемой, приведенной в корреляционном разделе ниже.

[00151] Исследование будет включать по 3 пациента на группу дозирования с последующим традиционным 3+3 дизайном повышения дозы. Дозолимитирующую токсичность (ДЛТ) будут оценивать во время первого цикла лечения (28 суток) с целью определения МПД. Если в течение периода оценки безопасности не будет наблюдаться ДЛТ, тогда можно будет набирать следующую группу после соглашения между исследователями и медицинским наблюдателем. Если ДЛТ возникает, тогда группу расширят до 6 пациентов. Если у 2 или более пациентов будет наблюдаться ДЛТ в пределах заданного уровня дозы, тогда повышать дозу больше не будут; однако могут быть исследованы более низкие дозы. Также могут исследоваться дополнительных схемы дозирования в зависимости от наблюдаемых безопасности, переносимости и ФК.

[00152] Учитывая, что эти индивидуальные варианты терапии исследовали в предыдущих клинических исследованиях, важно, чтобы оценка безопасности учитывала ожидаемый профиль безопасности стандартных схем дозирования. Для всех схем лечения любая токсичность, связанная с прогрессированием заболевания, не будет считаться ДЛТ. Следующие события, происходящие во время 1 цикла исследования комбинации, будут считаться ДЛТ, если признаются связанными с лекарственным препаратом:

нейтропения 3 или 4 степени, осложненная лихорадкой 38,5°C (т. е. фебрильная нейтропения) и/или подтвержденная инфекция;

нейтропения 4 степени, которая не проходит в течение 7 дней, несмотря на оптимальную терапию (приостановка введения исследуемого лекарственного препарата и введение ГКСФ);

тромбоцитопения 4 степени, которая не проходит в течение 7 дней, или любая тромбоцитопения 3-4 степени, осложненная кровоизлиянием;

анемия 4 степени, которая не проходит в течение 7 дней, несмотря на оптимальную терапию (приостановка введения исследуемого лекарственного препарата и переливание красных кровяных телец);

неспособность начать последующий курс лечения в течение 14 дней от запланированной даты вследствие токсичности исследуемого лекарственного препарата;

любая негематологическая токсичность 3-4 степени (за исключением утомляемости/астении длительностью < 2 недель; рвоты или диареи, длящихся менее 72 часов, вне зависимости от наличия лечения согласно оптимальному противорвотному или противодиарейному режиму; или изменения уровня щелочной фосфатазы).

эпилептический припадок≥2 степени

[00153] Пациентов будут лечить до прогрессирования заболевания согласно определению по критерию RECIST v1.1, оцениваемому по КТ-сканам каждые 8 недель, начиная с первой дозы исследуемого лекарственного препарата. Критерии включения и исключения из клинического исследования обобщены ниже в Таблице 9.

Таблица 9

Критерии включения

Критерии исключения

Пациенты должны иметь гистологическое и цитологическое подтверждение рака, для которого не существует известной стандартной терапии, способной продлить продолжительность жизни. Функциональный статус по ECOG 0 или 1 Опухолевый(ые) очаг(и) поражения подлежит(ат) многократной чрескожной биопсии, а пациент согласен пройти требуемую биопсию до и после лечения Должны иметь адекватные: Функцию костного мозга АЧН > 1500 клеток/мл без применения гемопоэтических факторов роста Число тромбоцитов > 100 000 клеток/мл Гемоглобин > 9 г/дл Функцию печени Нормальный сывороточный общий билирубин АСТ и АЛТ ≤ 2,5 x ВГН (≤ 5 x ВГН является приемлемой в случае наличия метастазов в печени) Почечную функцию Сывороточный креатинин ≤ 1,5 x ВГН Нормальную ЭКГ возраст ≥ 18 лет Способность понять и подписать информированное согласие Разрешена предыдущая терапия ингибитором PARP Согласие пройти МТР с ферумокситолом перед лечением (пациенты будут отстранены от прохождения МТР с ферумокситолом, если у них есть признаки перенасыщения железом, известная гиперчувствительность к ферумокситолу или любому другому железосодержащему ВВ продукту, анамнез множественной лекарственной аллергии, или те, которым МРТ противопоказана по каким-либо другим причинам, включая клаустрофобию или беспокойство, связанные с прохождением МРТ)

Активные метастазы в ЦНС Клинически существенные ЖК-расстройства, включая анамнез непроходимости тонкой кишки, если непроходимость не была хирургически вылеченным удаленным эпизодом Предварительная терапия иринотеканом; или терапия топотеканом или терапия бевацизумабом в течение 6 месяцев до введения первой дозы согласно исследуемому варианту лечения Предыдущая химиотерапия или биологическая терапия в течение 3 недель или в пределах временного интервала, меньшего чем 5 периодов полувыведения агента, до введения первой дозы согласно исследуемому варианту лечения Предыдущая лучевая терапия в течение 4 недель до введения первой дозы согласно исследуемому варианту лечения Пациентов, которые проходили облучение таза или других участков с наличием костного мозга, будут рассматривать в индивидуальном порядке и могут исключить, если костномозговой резерв не будет признан адекватным (т. е. облучение >25% костного мозга) Известная гиперчувствительность к MM-398 Активная инфекция Беременность или кормление грудью

[00154] Для части исследования, включающей повышение дозы, может потребоваться до 30 пациентов, если для каждого из 5 уровней доз требуется 6 пациентов Дополнительных 18 пациентов могут привлечь для исследования действия велипариба на биологические корреляты. Таким образом, потолок увеличения набора будет установлен на количестве 48 пациентов.

[00155] Предлагается включить в исследование все типы солидных опухолей, при этом конкретные показания, которые представляют наибольший интерес для данного исследования, включают следующие: рак шейки матки, рак яичника, трижды негативный рак молочной железы (ТНРМЖ), немелкоклеточный рак легкого (НМКРЛ), мелкоклеточный рак легкого (МКРЛ), рак желудка, рак поджелудочной железы и нейроэндокринные опухоли.

[00156] Описанные в данном документе способы и применения также можно применять к другим подходящим типам опухолей, включая те, при которых отмечается высокая частота нарушений пути ответа на повреждение ДНК (ОПД) (или «BRCAness»), характерная для спорадических опухолей, которые согласно прогнозам должны быть чувствительны к ингибиторам PARP. Как было указано ранее, дефицит BRCA1 или BRCA2, характерный, в частности, для трижды негативного рака молочной железы и низкодифференцированного серозного рака яичника, делает клетки боле чувствительными к ингибиторам PARP. Аналогично, потеря функциональности других генов и белков, вовлеченных в пути ОПД, включая эндонуклеазу XPF-ERCC1, ремонтные белки гомологической рекомбинации, белок мейотической рекомбинации 11 (MRE11) и белки пути анемии Фанкони (FANC), также делают клетки боле чувствительными к ингибиторам PARP. При раках легких, шейки матки, молочной железы и яичников было продемонстрировано наличие дефицита пути анемии Фанкони. Эти и другие типы нарушений пути ОПД могут служить прогностическими биомаркерами для терапии ингибиторами PARP и будут ретроспективно изучаться в данном исследовании. В частности, велипариб также продемонстрировал клиническую активность при большом числе показаний, включая BRCA-положительный и связанный с BRCA дикого типа рак молочной железы и яичника, а также рак желудка, в комбинации с FOLFIRI. Для предложенного исследования показания выбирали не только на основании значительной неудовлетворенной медицинской потребности, но и с учетом потенциальной чувствительности к иринотекану и/или велипарибу на основании вышеуказанных доклинической и/или клинической практики. Хотя ингибитор PARP олапариб недавно был одобрен FDA в качестве монотерапии при BRCA+ раке яичника, в данном исследовании лечение в популяции пациентов с раком яичника не будет ограничиваться пациентами BRCA+, так как оно представляет собой исследование фазы I комбинированной терапии и может ретроспективно идентифицировать пациентов с другими типами нарушений пути ОПД кроме BRCA.

Применение липосомального иринотекана и олапариба

[00157] MM-398 вводят путем внутривенной (ВВ) инфузии в течение 90 минут в дозе 80 мг/м² (на основании соответствующего количества иринотекана гидрохлорида тригидрата, эквивалентного 70 мг/м² свободного основания иринотекана) каждые две недели. Олапариб пациент перорально совместно принимает в домашних условиях дважды в сутки в соответствии со следующей схемой (Таблица 10).

Таблица 10

Уровень дозирования1	Доза олапариба (мг, дважды в сутки)	Дни приема дозы олапариба	Доза MM-398 (мг/м2, раз в две недели)*
1	100	5-12; 19-25 сутки	80, 1, 15 сутки
2	200	5-12; 19-25 сутки	80, 1, 15 сутки
3	200	5-12; 17-25 сутки	80, 1, 15 сутки
4	300	5-12; 19-25 сутки	80, 1, 15 сутки
5	400	5-12; 19-25 сутки	80, 1, 15 сутки

*= доза 80 мг/м² MM-398 основана на соответствующем количестве иринотекана гидрохлорида тригидрата (эквивалентном 70 мг/м² свободного основания иринотекана).

Пример 7: Измерение фосфорилированного H2AX в образцах биопсии опухолей

[00158] Фосфорилированный H2AX (γ-H2AX) играет важную роль в привлечении и/или удержании ремонтных белков ДНК или белков контрольных точек, таких как BRCA1, комплекс MRE11/RAD50/NBS1, MDC1 и 53BP1. Было показано, что повреждение ДНК повышает фосфорилирование H2AX в раковых клетках после воздействия камптотецинов. Если соединение(я) ингибитора PARP способно/способны повышать степень повреждения ДНК благодаря иринотекану из MM-398, это можно выявить путем измерения фосфорилирования H2AX. В предыдущих клинических исследованиях использовали иммунофлуоресцентный анализ. В случае наличия легко доступного заболевания будут получать образцы мононуклеарных клеток периферической крови (МКПК), волосяные фолликулы и/или образцы биопсии опухоли. Связь между фармакодинамическим ответом, определяемую по уровню γ-H2AX, можно оценить по критерию Фишера или критерию суммы рангов Уилкоксона в зависимости от обстоятельств; эту оценку представляют как МПД +/- максимум 2 уровней дозы (Фиг. 18).

Таблица 11. Схема получения образцов биопсии и суррогатных маркеров

Уровень дозы		Доза ингибитора PARP (мг, дважды в сутки)	Дни применения дозы ингибитора PARP	Доза MM-398 (мг/м2, раз в две недели)	Биопсия для ФД-маркера
1		100	5-12; 19-25 сутки	80, 1, 15 сутки	--
2		200	5-12; 19-25 сутки	80, 1, 15 сутки	--
3		200	3-12; 17-25 сутки	80, 1, 15 сутки	1, 5, 19 сутки
4		300	3-12; 17-25 сутки	80, 1, 15 сутки	1, 5, 19 сутки
5		400	3-12; 17-25 сутки	80, 1, 15 сутки	1, 5, 19 сутки
Подтверждение	А	МПД	3-12; 19-25 сутки	80, 1, 15 сутки	1, 5, 19 сутки
	В	МПД	5-12; 17-25 сутки	80, 1, 15 сутки	1, 5, 19 сутки

Пример 8: Введение и выявление ферумокситола для прогнозирования отложения ингибитора топоизомеразы из липосомального иринотекана

[00159] На Фиг. 19А-19С показано, что МРТ ФМК может служить прогностическим инструментом опухолевого ответа на MM-398. На Фиг. 19А приведена схема, показывающая, что MM-398 и ФМК имеют сходные свойства, включая 1) расширенную ФК, 2) способность к отложению в опухолевых тканях благодаря эффекту ППУ (т. е. пропотеванию сосудов) и 3) поглощение макрофагами. Следовательно, визуализация ФМК на МРТ может прогнозировать отложение MM-398. (В) Концентрацию ФМК в очагах поражения индивидуальных пациентов рассчитывали, используя стандартную кривую, полученную из МР-изображений через 24 ч после инъекции ФМК. (C) Сигналы ФМК в очагах поражения через 24 ч сгруппированы по медианному значению, наблюдаемому в поддающихся оценке МРТ ФМК очагах поражения, и сравниваются с наилучшим изменением размеров очагов поражения на основании КТ-сканов (данные получены от 9 пациентов; всего 31 очаг поражения).

[00160] В исследовании фазы I MM-398 также изучали возможность применения магнито-резонансной (МР) визуализации для прогнозирования содержания опухоль-ассоциированных макрофагов (ОАМ) и отложения MM-398. Оказалось, что ОАМ играют ключевую роль в отложении, удержании и активации MM-398 в опухолевом микроокружении. В этом клиническом исследовании ферумокситол (ФМК) (содержащий микрочастицы препарат суперпарамагнитного оксида железа, покрытый карбоксиметилэфиром сорбита полиглюкозы) применяли в качестве визуализирующего контрастного агента, а МР-изображения получали через 1 ч, 24 ч и 72 ч после инъекции ФМК. ФМК является одобренным видом терапии, показанным для лечения железодефицитной анемии у взрослых пациентов с хронической болезнью почек; при этом все возрастающему количеству раковых пациентов без железодефицита вводят ФМК в качестве визуализирующего агента для визуализации содержания макрофагов и сосудистой системы. Как и MM-398, ФМК также является наночастицей диаметром приблизительно 17-31 нм. Прогнозировалось, что проницаемость опухоли является важным фактором в эффективности MM-398, а ФМК также исследовали для применения в качестве суррогата для прогнозирования отложения липосом (Фиг. 19А). Преимущество ФМК состоит в том, что этот агент помогает идентифицировать пациентов с меньшей вероятностью ответа на MM-398 вследствие плохого поглощения лекарственного препарата. В качестве диагностической тест-системы ферумокситол позволяет определять популяцию пациентов, которым применение MM-398 принесет пользу и которые в ином случае не были бы категоризированы.

[00161] Результаты МРТ из клинического исследования на людях продемонстрировали, что количество ФМК, отложенного в опухолевых очагах поражения, можно было оценить (Фиг. 19В), а после этого было показано наличие корреляции между поглощением ферумокситола в опухолевом очаге поражения по данным МРТ и ответом на MM-398 (Фиг. 19С). Сейчас эту корреляцию дополнительно исследуют в расширенном исследовании фазы 1, и также она включена в качестве коррелятивной визуализации в исследование MM-398+велипариб.

[00162] ФМК представляет собой заместитель железа, показанный для лечения железодефицитной анемии у взрослых пациентов с хронической болезнью почек. Хотя он не был одобрен в качестве показания, ферумокситол также используют в качестве визуализирующего агента у раковых пациентов и его будут использовать таким образом в данном исследовании. По меньшей мере за 2 суток до 1 суток 1 цикла (максимум за 8 суток) будут вводить единичную дозу в 5 мг/кг ФМК путем внутривенной инъекции. Общая единичная доза не будет превышать 510 мг, что является максимальной одобренной единичной дозой ФМК. Эта схема дозирования является менее интенсивной, чем одобренная и указанная на этикетке, рекомендующая применение двух доз по 510 мг с интервалом от 3 до 8 суток; однако, так как ФМК используют в качестве визуализирующего агента в данном исследовании в отличие от заместительного продукта в случае дефицита железа, низкая доза является более обоснованной. В течение 2 дней для каждого пациента проведут три сеанса МРТ. Для всех пациентов будет получено исходное изображение перед инфузией ФМК, а второе изображение будет получено через 1-4 ч после окончания введения ФМК. Все пациенты вернутся на следующий день для прохождения МРТ ФМК через 24 ч с применением такого же протокола и последовательностей, что и ранее. От каждого пациента будет требоваться завершить сеансы МРТ ФМК на одном и том же сканере, чтобы снизить вариабельность между сканами. Участок тела, предназначенный для сканирования, будет определяться локализацией заболевания пациента. Каждое МРТ-исследование будет оцениваться в отношении качества изображения и характеристик сигналов от опухолей и контрольной ткани по T1-, T2- и T2*- взвешенным последовательностям. После получения полного набора изображений от каждого пациента будет проводиться качественная проверка, а изображения будут посланы для анализа в лабораторию для проведения количественной оценки. Данные будут анализировать таким же образом, как описано выше.

Корреляты визуализации Таблица 12

Коррелятивный показатель	Метод визуализации	Сканируемый(ые) орган(ы) и время получения сканов
Поглощение ферумокситола (ФМК)	МРТ	Участки заболевания; 3 скана, полученные приблизительно за 2-6 суток до 1 суток 1 цикла. Момент времени получения сканов: -исходный (непосредственно перед инфузией ФМК) -1 ч (после инфузии ФМК) -24 ч (после инфузии ФМК)
Гистон гамма-H2AX (Pommier, DTB-CCR; Doroshow, Leidos)	Иммунофлуоресцентная микроскопия ELISA (в разработке)	- Биопсия опухоли до лечения и во время лечения. - Волосяные фолликулы во время лечения. МКПК до лечения и во время лечения.

Исследование коррелятов визуализации

[00163] Пациенты смогут участвовать в исследовании визуализации ФМК, если они не соответствуют любому из следующих критериев:

Признаки перенасыщения железом, определяемые по:

Насыщению трансферрина натощак >45% и/или

Уровням сывороточного ферритина >1000 нг/мл

Анамнез аллергических реакций на любой из следующих препаратов:

соединения, сходные с ферумокситолом или любыми его компонентами, описанными в полной инструкции по применению препарата для инъекции ферумокситола

любой заместительный железосодержащий ВВ продукт (например, парентеральное железо, декстран, железо-декстран или парентеральные препараты полисахаридов железа)

множественные лекарственные препараты

Не могут пройти МРТ или те, для кого МРТ по каким-либо другим причинам противопоказана (например, вследствие наличия металлических имплантатов, кардиостимуляторов, насосов для подачи лекарственных препаратов для облегчения боли или других несовместимых с МРТ устройств; или анамнез клаустрофобии или беспокойства, связанного с прохождением МРТ)

[00164] Если пациент соглашается на МРТ ФМК, пациент получит инфузию ферумокситола и пройдет требуемое МРТ ФМК сканирование приблизительно за 2-6 суток до начала лечения MM-398 (период ФМК). ФМК будут вводить в дозе 5 мг/кг до максимальной дозы 510 мг. Все другие аспекты введения будут соответствовать самой поздней инструкции по применению ферумокситола. Подробный протокол МТР ФМК будет включен в руководство по визуализации данного исследования. Вкратце, от каждого пациента будет требоваться завершить сеансы МРТ ФМК на одном и том же сканере, чтобы снизить вариабельность между сканами. Каждое МРТ-исследование будет оцениваться в отношении качества изображения и характеристик сигналов от опухолей и контрольной ткани по T1-, T2- и T2*- взвешенным последовательностям. После получения полного набора изображений от каждого пациента изображения будут загружаться в устройство для просмотра для проведения качественной проверки, а затем посылаться для анализа в лабораторию для проведения количественной оценки (принадлежащую центральной КИО по визуализации).

[00165] Многократные МР-изображения будут получать на 1-2 сутки периода ФМК в различные моменты времени: исходное изображение получают до инфузии ФМК, второе изображение получают через 1-4 ч после окончания введения ФМК, а третье изображение получают приблизительно через 24 ч после ФМК, используя такой же протокол и последовательности, что и на 1 сутки. Участки тела, предназначенные для сканирования, будут определяться локализацией заболевания пациента; подробные инструкции будут описаны в руководстве по визуализации данного исследования.

[00166] Пример 9: Клиническое применение липосомального иринотекана в комбинации с 5-фторурацилом и лейковорином

[00167] Клиническая эффективность MM-398 также была продемонстрирована у пациентов с рефрактерным в отношении гемцитабина метастатическим раком поджелудочной железы: в рандомизированном международном исследовании Фазы 3 (NAPOLI-1) MM-398 применялся в комбинации с 5-фторурацилом/лейковорином (5-FU/LV) и значительно продлевал общую выживаемость (ОВ) по сравнению с лечением только 5-FU/LV. Медианное значение ОВ для MM-398-включающей группы составило 6,1 месяца по сравнению с 4,2 месяца для контрольной группы (HR=0,67, p=0,0122). Так как активным фармацевтическим ингредиентом в MM-398 является иринотекан, профиль безопасности был, как и ожидалось, сходным с иринотеканом, когда наиболее распространенными нежелательными явлениями (≥30%) являются тошнота, рвота, боль в животе, диарея, запор, анорексия, нейтропения, лейкопения (включая лимфоцитопению), анемия, астения, лихорадка, снижение массы тела и алопеция (согласно вкладышу упаковки иринотекана). В Таблице 14 приведены обобщенные данные по безопасности 3 степени или выше для пациентов, проходивших лечение MM-398 плюс 5-FU/LV из исследования NAPOLI-1. В Таблице 13 для сравнения приведены данные по токсичности, наблюдаемой в исследовании монотерапии Фазы I.

Таблица 13. Обобщенные данные по наиболее распространенным (>10%) нежелательным явлениям 3 степени или выше для 13 пациентов, проходивших лечение монотерапией MM-398 в дозе 80 мг/м² каждые две недели на протяжении исследования фазы I.

Нежелательные явления ≥ 3 степени в исследовании MM-398-01-01-02
	n (%)
Диарея	4 (30,8)
Гипокалиемия	3 (23,1)
Боль в животе	2 (15,4)
Анемия	2 (15,4)
Тошнота	2 (15,4)
Нейтропения	2 (15,4)

Таблица 14. Обобщенные данные по НЯ 3 степени или выше из исследования NAPOLI-1 фазы III.

	MM-398 + 5-FU/LV1 (N=117)	5-FU/LV2 (N=134)
СТЕПЕНЬ ≥3 НЕГЕМАТОЛОГИЧЕСКИЕ НЯ У >5% ПАЦИЕНТОВ, %3	%	%
Утомляемость	14	4
Диарея	13	5
Рвота	11	3
Тошнота	8	3
Астения	8	7
Боль в животе	7	6
Снижение аппетита	4	2
Гипокалиемия	3	2
Гипернатриемия	3	2
Степень ≥3 гематологические НЯ на основании лабораторных значений, %3,4
Снижение числа нейтрофилов	20	2
Снижение гемоглобина	6	5
Снижение числа тромбоцитов	2	0

¹ Доза: 80 мг/м² MM-398+2400 мг/м² в течение 46 ч/400 мг/м² 5-FU/LV, раз в 2 недели

² Доза: 2000 мг/м² в течение 24 ч/200 мг/м² 5-FU/LV, еженедельно x 4, раз в 6 недель

³ согласно CTCAE, версия 4

⁴ Включает только пациентов, для которых проводили по меньшей мере одну оценку после исходного уровня

[00168] Пример 10: Выживаемость клеток для различных линий клеток ТНРМЖ после комбинированного лечения SN-38 и ингибитором PARP.

[00169] В Таблицах 15 и 16 приведены результаты in vitro измерений выживаемости клеток для различных раковых линий клеток трижды негативного рака молочной железы (ТНРМЖ) для определения жизнеспособности клеток после лечения SN-38 и/или ингибитором PARP. В Таблице 15 приведены данные по IC50, а в Таблице 16 приведены данные по максимальному уничтожению.

[00170] Эксперименты, в которых были получены эти данные, проводили в 384-луночном формате. Клетки высевали при 1000 клеток/лунка, а затем инкубировали в течение 24 часов. Затем добавляли SN-38 и/или один из четырех разных ингибиторов PARP (талазопариб, нирапариб, олапариб или рукапариб) и инкубировали в течение дополнительных 24 часов, затем лунки промывали ФСБ для удаления лекарственного препарата и снова добавляли в лунки свежую среду. Затем планшеты оставляли для инкубации в течение 72-часового периода. Через 72 часа инкубационного периода среду удаляли и определяли жизнеспособность клеток, применяя анализ клеточной жизнеспособности CellTiter-Glo® (Promega, Madison WI) в соответствии с инструкциями к этому продукту. На Фиг. 3А и 3В представлены линейные графики, которые отображают жизнеспособность клеток в линиях клеток рака молочной железы BT20 и HCC38, соответственно, после лечения SN-38 и/или талазопарибом.

Таблица 15 IC50 log10 (мкM)

Эксп. 1	Лечение	Линия клеток
		BT20	SUM159PT	HCC38	HCC 1187	HCC 1806	BT549
	SN38	-0,18	-2,35	-2,80	-0,68	-2,08	-0,10
	Нирапариб	2,14	0,35	1,23	2,11	1,27	2,03
	SN38 и нирапариб (3 мкг/мл)	-0,67	-3,99	-0,12	-1,58	-2,80	-0,39
	SN38 и нирапариб (1 мкг/мл)	-0,70	-3,42	-4,09	-1,45	-2,62	-0,64
	SN38 и нирапариб (0,3 мкг/мл)	-0,71	-2,85	-4,23	-1,61	-2,55	-0,74
	SN38 и нирапариб (0,1 мкг/мл)	-0,61	-2,87	-4,05	-1,41	-2,52	-0,55
Эксп. 2	Лечение	Линия клеток
		BT20	SUM149PT	SUM159PT	HCC70	HCC1187	BT549
	SN38	-0,69	0,24	-2,39	-0,07	-0,64	-0,04
	Олапариб	1,24	2,40	0,18	-4,2 x107	2,41	2,04
	SN38 и олапариб (3 мкг/мл)	-1,48	-0,19	-3,70	-0,58	-1,77	-0,55
	SN38 и олапариб (1 мкг/мл)	-1,49	-0,34	-3,31	-0,49	-1,67	-0,48
	SN38 и олапариб (0,3 мкг/мл)	-1,44	-0,18	-2,92	-0,50	-1,35	-0,35
	SN38 и олапариб (0,1 мкг/мл)	-1,29	-0,11	-2,92	-0,48	-1,56	-0,04
Эксп. 3	Лечение	Линия клеток
		BT20	SUM149PT	SUM159PT	HCC38	HCC1954	BT549
	SN38	-0,37	0,27	-2,66	-2,89	-0,97	-0,05
	Рукапариб	1,27	1,68	-0,07	-0,07	1,60	1,75
	SN38 и рукапариб (3 мкг/мл)	-1,33	-0,16	-3,64	4,93	-1,22	-0,48
	SN38 и рукапариб (1 мкг/мл)	-1,47	-0,23	-3,28	-3,88	-1,33	-0,57
	SN38 и рукапариб (0,3 мкг/мл)	-1,48	-0,49	-3,23	-4,01	-1,51	-0,49
	SN38 и рукапариб (0,1 мкг/мл)	-1,24	-0,10	-3,11	-3,29	-1,57	-0,52
Эксп. 4	Лечение	Линия клеток
		BT20	SUM159PT	HCC38	HCC 1187	HCC 1954	SKBR3
	SN38	-0,24	-2,33	-2,75	-0,98	-0,65	-1,38
	Талазопариб	1,45	-1,03	-1,23	2,28	3,64	-2,8×104
	SN38 и талазопариб (3 мкг/мл)	-1,88	-4,01	-3,41	-1,79	-1,64	-2,05
Эксп. 1	Лечение	Линия клеток
	SN38 и талазопариб (1 мкг/мл)	-1,70	-4,01	-4,01	-1,79	-1,51	-2,65
	SN38 и талазопариб (0,3 мкг/мл)	-1,10	-4,01	-5,46	-1,94	-1,45	-2,23
	SN38 и талазопариб (0,1 мкг/мл)	-1,36	-4,01	-2,87	-1,92	-1,29	-2,41

Таблица 16 Максимальное уничтожение

Эксп. 1	Лечение	Линия клеток
		BT20	SUM159PT	HCC38	HCC 1187	HCC1806	BT549
	SN38	100	97	96	90	93	95
	Нирапариб	100	97	100	98	100	100
	SN38 и нирапариб (3 мкг/мл)	100	100		89	91	94
	SN38 и нирапариб (1 мкг/мл)	100	100	93	93	92	92
	SN38 и нирапариб (0,3 мкг/мл)	100	99	100	89	92	92
	SN38 и нирапариб (0,1 мкг/мл)	100	100	100	89	93	94
Эксп. 2	Лечение	Линия клеток
		BT20	SUM149PT	SUM159PT	HCC70	HCC1187	BT549
	SN38	100	96	97	97	100	93
	Олапариб	98	100	94	50	87	100
	SN38 и олапариб (3 мкг/мл)	98	97	100	98	100
	SN38 и олапариб (1 мкг/мл)	99	96	97	100	91	96
	SN38 и олапариб (0,3 мкг/мл)	100	98	99	100	99	94
	SN38 и олапариб (0,1 мкг/мл)	100	96	99	100	99	96
Эксп. 3	Лечение	Линия клеток
		BT20	SUM149PT	SUM 159PT	HCC38	HCC 1954	BT549
	SN38	100	95	99	92	94	94
	Рукапариб	100	99	97	87	100	100
	SN38 и рукапариб (3 мкг/мл)	92	97	99		96	93
	SN38 и рукапариб (1 мкг/мл)	100	97	99	98	94	92
	SN38 и рукапариб (0,3 мкг/мл)	94	95	100	98	95	93
	SN38 и рукапариб (0,1 мкг/мл)	96	100	97	97	93	94
Эксп. 4	Лечение	Линия клеток
		BT20	SUM159PT	HCC38	HCC 1187	HCC 1954	SKBR3
	SN38	100	96	92	88	100	88
	Талазопариб	100	94	92		100
	SN38 и талазопариб (3 мкг/мл)	100			89	93	90
	SN38 и талазопариб (1 мкг/мл)	90			89	94	89
	SN38 и талазопариб (0,3 мкг/мл)	93			89	94	100
	SN38 и талазопариб (0,1 мкг/мл)	93			100	96	87

Хотя изобретение было описано в связи с его конкретными вариантами реализации, понятно, что возможны дополнительные модификации и предполагается, что данная заявка включает любые вариации, применения или адаптации изобретения, согласующиеся, в общем случае, с принципами изобретения и включающие такие отклонения от настоящего описания, которые относятся к компетенции известной или общепринятой практики в области техники, к которой относится изобретение, и применимы к существенным признакам, установленным в данном документе. Содержание любого патента или заявки на патент США или международный патент, или публикации, цитируемых в данном документе, в полном объеме включено в него посредством ссылки.

1. Способ лечения пациента с солидной опухолью, включающий:

i) систематическое введение пациенту липосомального иринотекана один раз каждые две недели; и

ii) введение ингибитора поли(АДФ-рибоза)полимеразы (PARP) ежесуточно в течение от 3 до 10 суток между последовательными введениями липосомального иринотекана, и где ингибитор PARP вводят начиная, по меньшей мере, через 2, 3, 4 или 5 дней после введения липосомального иринотекана и заканчивая, по меньшей мере, за 1, 2, 3, 4 или 5 дней до следующего введения липосомального иринотекана.

2. Способ лечения пациента с солидной опухолью, включающий: введение пациенту антинеопластической терапии в 28-дневном цикле лечения, где антинеопластическая терапия состоит из:

i) введения липосомального иринотекана на 1 и 15 сутки цикла лечения и

ii) введения ингибитора поли(АДФ-рибоза)полимеразы (PARP) в течение одних или более суток, начиная по меньшей мере через 3 суток после введения липосомального иринотекана и заканчивая по меньшей мере за 1 сутки до введения дополнительного липосомального иринотекана.

3. Способ по п. 2, где противоопухолевую терапию вводят пациенту в одном или нескольких последующих 28-дневных циклах лечения при отсутствии прогрессирования заболевания или неприемлемой токсичности во время предыдущего цикла лечения противоопухолевой терапией.

4. Способ по любому из пп. 1-3, где ингибитор PARP не вводят в течение по меньшей мере 3 суток после введения липосомального иринотекана.

5. Способ по любому из пп. 1-4, где ингибитор PARP не вводят в течение по меньшей мере 3 суток перед следующим введением липосомального иринотекана.

6. Способ по любому из пп. 1-5, где ингибитор PARP вводят в один или несколько дней из 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 и 12, и 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24 и 25 из 28-дневного цикла лечения противоопухолевой терапией.

7. Способ по любому из пп. 1-6, где ингибитор PARP вводят в течение одних или более из 5-12 суток 28-дневного цикла лечения с применением антинеопластической терапии.

8. Способ по любому из пп. 1-7, где ингибитор PARP вводят в течение одних или более из 19-25 суток 28-дневного цикла лечения с применением антинеопластической терапии.

9. Способ по любому из пп. 1-8, где ингибитор PARP вводят в течение одних или более суток 4-12 28-дневного цикла лечения с применением антинеопластической терапии.

10. Способ по любому из пп. 1-9, где ингибитор PARP вводят в течение одних или более суток 18-25 28-дневного цикла лечения с применением антинеопластической терапии.

11. Способ по любому из пп. 1-10, где ингибитор PARP вводят в течение одних или более из 3-12 суток 28-дневного цикла лечения с применением антинеопластической терапии.

12. Способ по любому из пп. 1-11, где ингибитор PARP вводят в течение одних или более из 17-25 суток 28-дневного цикла лечения с применением антинеопластической терапии.

13. Способ по любому из пп. 1-12, где ингибитор PARP вводят в течение каждых из последовательных суток 3-10 между сутками, когда вводят липосомальный иринотекан.

14. Способ лечения пациента с раком и имеющего опухоль, включающий:

i) парентеральное введение пациенту эффективного количества липосомального иринотекана и

ii) введение пациенту эффективного количества ингибитора поли(АДФ-рибоза) полимеразы (PARP), где ингибитор PARP вводят пациенту после эффективного интервала для выведения иринотекана из плазмы, где эффективный интервал для выведения иринотекана из плазмы составляет:

a) от около 48 до около 120 часов и/или

b) 2, 3, 4 или 5 дней.

15. Способ по любому из пп. 1-14, где ингибитор PARP не вводят в течение 3 суток до или после введения липосомального иринотекана.

16. Способ по любому из пп. 1-15, где каждое введение липосомального иринотекана осуществляют в дозе, составляющей 80 мг/м² (соль) или 70 мг/м² (свободное основание).

17. Способ по любому из пп. 1-16, где каждое введение ингибитора PARP осуществляют в дозе, составляющей от около 20 мг/сутки до около 800 мг/сутки.

18. Способ по любому из пп. 1-17, где каждое введение ингибитора PARP осуществляют один или два раза в сутки в дозе, составляющей от около 20 мг/сутки до около 400 мг/сутки.

19. Способ по любому из пп. 1-18, где ингибитор PARP выбран из группы, состоящей из нирапариба, олапариба, велипариба, рукапариба и талазопариба.

20. Способ по любому из пп. 1-19, где у пациента с солидной опухолью или у пациента с раком имеется рак шейки матки, рак яичника, трижды негативный рак молочной железы, немелкоклеточный рак легкого, мелкоклеточный рак легкого, гастроинтестинальные стромальные опухоли, рак желудка, рак поджелудочной железы, колоректальный рак или нейроэндокринный рак.

21. Способ по п. 20, где у пациента нет мутации BRCA1 или BRCA2.

22. Способ по любому из пп. 1-21, где у пациента с солидной опухолью или у пациента с раком имеется рак шейки матки, а ингибитор PARP представляет собой велипариб.

23. Способ по любому из пп. 1-22, где у пациента с солидной опухолью или у пациента с раком имеется рак шейки матки, а ингибитор PARP представляет собой олапариб.

24. Способ по любому из пп. 1-23, дополнительно включающий введение ферумокситола в качестве визуализирующего агента для отбора пациентов для получения липосомального иринотекана и ингибитора PARP.

25. Способ по п. 24, дополнительно включающий введение ферумокситола и получение после этого МРТ-изображения пациента через 24 часа после введения ферумокситола.

26. Способ по любому из пп. 1-25, где липосомальный иринотекан включает соль сахарософата иринотекана, инкапсулированную в липосомах для внутривенного применения.

27. Способ по любому из пп. 1-26, где липосомальный иринотекан содержит октасульфат сахарозы, инкапсулированный в липосомы, имеющие однослойную везикулу с одним липидным бислоем, содержащую 6,81 мг/мл 1,2-дистеароил-sn-глицеро-3-фосфохолина (DSPC), 2,22 мг/мл холестерина и 0,12 мг/мл полиэтиленгликоля с концевыми метоксигруппами (MW 2000)-дистеароилфосфатидилэтаноламина (MPEG-2000-DSPE).

28. Способ по любому из пп. 1-27, где липосомальный иринотекан вводят внутривенной инфузией в течение 90 мин.