Диагностический набор для определения беременности и бесплодия коров

Авторы патента:

Федотов Сергей Васильевич (RU)

Гнездилова Лариса Александровна (RU)

Позябин Сергей Владимирович (RU)

Белозерцева Наталья Сергеевна (RU)

Панкратова Анна Вадимовна (RU)

Назимкина Светлана Федоровна (RU)

A61K31/00 - Лекарственные препараты, содержащие органические активные ингредиенты

A01K67/02 - разведение позвоночных (животных) (станы для случки A01K 15/00; устройства для предотвращения произвольного спаривания или для оказания помощи при нем A01K 21/00)

Владельцы патента RU 2775205:

Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии - МВА имени К.И. Скрябина" (ФГБОУ ВО МГАВМиБ - МВА имени К.И. Скрябина) (RU)

Изобретение относится к области ветеринарного акушерства и гинекологии, в частности к препаратам, позволяющим определить беременность у коров. Диагностический набор включает упаковку, в которую помещают тестируемую поверхность или многолуночный планшет и диагностический препарат. Диагностический препарат содержит, об. %: фосфатно-буферный раствор 65-80; кристаллическую целлюлозу 10-25; бензоат натрия 0,5-1,0; 1%-ный бычий альбумин 1,0-2,0; ализарин 1,0-2,0; и остальное в виде сыворотки крови от иммунизированных животных. Использование изобретения позволит повысить точность постановки диагноза на беременность коров на ранних сроках стельности. 2 табл., 3 пр.

Изобретение относится к области ветеринарного акушерства и гинекологии, в частности к препаратам позволяющим определить беременность у коров.

В настоящее время основным способом диагностики беременности у крупных животных, например у коров, является ректальная пальпация развивающегося плода через прямую кишку. Данный способ дает возможность установления сроков беременности через 60-70 дней после оплодотворения. Использование УЗИ-сканеров для определения сроков беременности также ограничено из-за необходимости ввода электронного датчика через прямую кишку.

Ранняя и точная диагностика неудавшейся беременности животного, которое подвергают осеменению, имеет большое экономическое значение для промышленного животноводства. В связи с чем, существует значительная потребность в способе, с помощью которого можно точно определить, что животное не является беременным, чтобы не упустить возможности вновь осеменить животное в следующую стадию возбуждения полового цикла.

Известен способ иммунологической диагностики беременности и бесплодия коров и телок [2, 3], включающий обнаружение в сыворотке плацентарного гормона - хорионического гонадотропина в реакции ализариновых суспензионных антихориогонин-антител при помощи диагностикума, отличающийся тем, что гормон обнаруживается в моче животных, которую в объеме 5 мл вносят в пробирку, добавляют 1-2 капли диагностикума, содержимое пробирки перемешивают вращательными движениями до его однородного окрашивания в оранжевый цвет (10-15 с), далее пробы выдерживают при комнатной температуре в течение 15 мин и визуально учитывают реакцию, при этом положительная реакция на стельность - содержимое пробирки окрашивается в фиолетовый цвет, с последующим выпадением обильного осадка сиреневого или фиолетового цвета и просветлением надосадочной жидкости, отрицательная реакция - содержимое пробирки сохраняет изначальный оранжевый цвет и гомогенную консистенцию.

Известен способ определения ранней диагностики стельности включающий использование проб цельного молока, отобранные на 21 день после осеменения коров. Пробы наносили на мембранный носитель для получения сухих образцов [1].

Используя метод иммуноферментного анализа (ИФА) определяли количество образовавшихся пероксидазных иммунокомплексов с помощью однокомпонентного субстратного раствора на основе тетраметилбензидина (ТМБ). Интенсивность окраски образующегося продукта окисления ТМБ, регистрируемая на спектрофотометре, обратно пропорциональна концентрации прогестерона в анализируемом образце. В качестве стандартов использовали растворы, содержащие известную концентрацию прогестерона. Недостатком предлагаемого метода является то, что он требует наличия особого оборудования, которое в полевых условиях не всегда имеется.

Наиболее близким по своей технической сущности является диагностикумопределения беременности, основанный на способности церулоплазмина проявлять каталитическую активность как полифенолоксидазы. В результате окисления парафенилендиамина образуются вещества оранжевого цвета, интенсивность окраски пропорциональна концентрации церулоплазмина [4].

Необходимые реактивы:

- раствор №1: 0,4М ацетатный буфер (рН 5,6). Для приготовления раствора берут 1 мл 0,4 М СН₃СООН и 7,2 мл 0,4 М CH₃COONa.

- раствор №2: 1%-ный водный раствор парафенилендиаминасолянокислого. Берут 1 г парафенилендиамина солянокислого и растворяют в 99 мл Н₂О.

- раствор №3: 25%-ный раствор едкого натра (NaOH). Берут 25 г NaOH и растворяют в 75 мл Н₂О.

Способ осуществляется следующим образом.

В пробирки помещают 0,1 мл сыворотки крови, добавляют 1 мл 0,4 М ацететного буфера (рН 5.6) и 0,5 мл 1%-ного водного раствора парафенилендиамина солянокислого. Смешивают и помещают в водяную баню при 60°С. Через 10 мин реакцию останавливают добавлением 3,5 мл охлажденного 25%-ного раствора едкого натра. Полученную оранжевого цвета жидкость колориметрируют при 440 нм.

При значениях церрулоплазмина более 0,095 ед. оптической плотности диагностируют беременность (стельность) у коров на ранней стадии с высокой точностью и объективностью.

Однако данный диагностикум позволяет определять беременность в более поздние сроки, что ведет к потере времени на проведение повторного оплодотворения животных.

Задачей заявленного изобретения является расширение ассортимента диагностических реактивов и получение диагностического набора для определения беременности и бесплодия животных. В этом аспекте изобретение представляет диагностический набор определения беременности у животных по наличию хориального гонадотропина в биологических жидкостях (молоко).

Техническим результатом заявленного изобретения является точность постановки диагноза на беременность коров и телок на более ранних сроках стельности.

Достижение указанного технического результата возможно с применением диагностического набора для определения беременности и бесплодия коров, включающего буферный раствор и препарат натрия, который дополнительно содержит кристаллическую целлюлозу, бычий альбумин, краситель ализарин и сыворотку крови от иммунизированных животных при следующем соотношении компонентов, об. %:

Фосфатно-буферный раствор	65-80
Кристаллическая целлюлоза	10-25
1%-ный бычий альбумин	1,0-2,0
Краситель ализарин	1,0-2,0
Бензоат натрия	0,5-1,0
Сыворотка крови от
иммунизированных животных	остальное

Для отработки количественного соотношения компонентов в наборе было сформирована группа стельных коров - из 20. Проверку на стельность проводили предлагаемым препаратом, содержащим разный количественный состав компонентов. Положительная реакция на беременность сопровождается образованием крупных хлопьев в пробах, в случае отсутствия хлопьев ставим диагноз на бесплодие у проверяемой коровы или телки.

Первый опыт ставили на пробах молока, которые смешивали с диагностическим препаратом, содержащий об. %: фосфатно-буферный раствор - 80; кристаллическая целлюлоза - 15; 1%-ного бычьего альбумина 0,5; красителя ализарина - 0,5; бензоат натрия - 0,5; сыворотку крови от иммунизированных животных - остальное.

Во втором опыте молоко смешивали с предлагаемым диагностическим препаратом, содержащим, об. %: фосфатно-буферный раствор - 70; кристаллическая целлюлоза - 25; 1%-ного бычьего альбумина - 1; красителя ализарина - 1,0; бензоата натрия - 0,5; сыворотку крови от иммунизированных животных - остальное.

В третьем опыте молоко смешивали с предлагаемым диагностическим препаратом, содержащим, об. %: фосфатно-буферный раствор - 65; кристаллическая целлюлоза - 25; 1%-ного бычьего альбумина - 2,0; красителя ализарина - 2,0; бензоат натрия - 1,0; сыворотку крови от иммунизированных животных - остальное.

По результатам анализа диагностических тестов выявлено расхождение в постановке диагноза на стельность. Так набор, используемый в первом опыте был менее эффективен, погрешность составила 24,6%.

Набор препаратов, используемый во втором и третьем опыте показал одинаковую эффективность, при которой погрешность составила 4%.

Предложенный диагностический набор готовят следующим образом:

В 80 мл фосфатно-буфера растворяем 15 г кристаллической целлюлозы, затем вносим 1 г 1%-ного бычьего альбумина, тщательно перемешиваем. Далее в стерильном флаконе к готовому раствору добавляем 1 г красителя ализаринаи 1 г бензонат натрия смешиваю путем взбалтывания, а затем сыворотку крови от иммунизированных животных, доводя их объем состава до 100 мл.

Полученный таким образом препарат готов к применению.

Срок годности препарата - 8-12 месяцев, при хранении темном и прохладном месте (режиме 2+5°С).

Рабочее название диагностического препарата «Удин» (универсальный диагностический инновационный набор).

Набор включает в себя упаковку, которая вмещает тестируемую поверхность, такую как предметное стекло или многолуночные планшеты, где на указанную поверхность наносится 1 капля (0,05 мл) диагностикума «Удин», содержащего антитела к хориальному гонадотропину, которое будет связываться с эпитопом хориального гонадотропина исследуемого биологического материала (0,05 мл). В присутствии реагента, который при контакте с антителом способствует визуальному определению относительного количества присутствия хориального гонадотропина, указывающее на наличие или отсутствие беременности.

Набор согласно изобретению для диагностики статуса беременности с помощью определения относительного уровня индуцируемого при беременности гормона, такого как хориальный гонадотропин, в тестируемом образце по сравнению с контролем может быть получен различными способами, которые будут очевидны специалистам в данной области при прочтении описания.

Пример 1. Для ранней диагностики стельности подобрали группу коров, которых оплодотворили путем трансцервикального искусственного осеменения. На 22 день отбирали пробы цельного молока от исследуемых коров с целью постановки диагноза на беременность с использованием диагностического препарата «Удин». Для подтверждения диагноза отбирали образцы крови (10 мл) посредством венепункции яремной вены в пробирки "vacutainer", содержащие EDTA с последующим исследования сыворотки на специфический для беременности белок при помощи ИФА.

Для выявления стельности в качестве стандартного метода и контроля на 65-70 сутки после осеменения использовали ректальный метод диагностики. Полученные данные сведены в таблицу №1.

Из 34 исследованных коров при ректальной диагностике диагноз на наличие беременности был поставлен у 25 голов. Из них у 92% предварительный диагноз на стельность был поставлен при тестировании сыворотки крови в ИФА и при использовании набора для диагностики «УДИН», что свидетельствует о высокой достоверности метода.

Пример 2. Во второй серии тестов с целью диагностики беременности использовали слюну стельных коров с реагентами препарата «Удин». Для подтверждения диагноза отбирали образцы крови (10 мл) посредством венепункции яремной вены в пробирки "vacutainer", содержащие EDTA с последующим исследования сыворотки на специфический для беременности белок при помощи ИФА.

Из 34 коров при ректальной диагностики диагноз на наличие беременности был поставлен у 25 голов. Из них у 28% от общего числа исследованных животных были получены несовпадающие результаты диагностики стельности при использовании реагентов предлагаемого препарата со слюной коров.

Считаем, что применять предлагаемый диагностический набор целесообразно с пробой цельного молока (0,05 мл) с постановкой реакции на предметном стекле. Использование других биологических материалов (слюна и т.д.) не имеет смысла на ранних сроках стельности.

Пример 3. Было сформирована группа стельных коров - из 20. Проверку на стельность проводили предлагаемым препаратом содержащим разный количественный состав компонентов. Первый опты ставили на пробах молока, которые смешивали с диагностическим препаратом, содержащий об. %: фосфатно-буферный раствор - 80; кристаллическая целлюлоза - 15; 1%-ного бычьего альбумина 0,5; ализарина- 0,5; бензоат натрия - 0,5; сыворотку крови от иммунизированных животных - остальное.

Во втором опыте молоко смешивали с предлагаемым диагностическим препаратом, содержащим, об. %: фосфатно-буферный раствор - 70; кристаллическая целлюлоза - 25; 1%-ного бычьего альбумина - 1; ализарина- 1,0; бензоата натрия - 0,5; сыворотку крови от иммунизированных животных - остальное.

В третьем опыте молоко смешивали с предлагаемым диагностическим препаратом, содержащим, об. %: фосфатно-буферный раствор - 65; кристаллическая целлюлоза - 25; 1%-ного бычьего альбумина - 2,0; ализарина - 2,0; бензоат натрия - 1,0; сыворотку крови от иммунизированных животных - остальное.

По результатам анализа диагностических тестов выявлено расхождение в постановке диагноза на стельность. Так, диагностический набор, используемый в первом опыте был менее эффективен, погрешность составила 24,6%.

Диагностический набор, используемый во втором и третьем опыте показал одинаковую эффективность при которой погрешность составила 4%.

Источники информации

1. М. Sheldon. Pregnancy diagnosis in cattle. InPregtice. 2002. 24. 310-317.

2. Богданов И.И. Иммунологический экспресс-тест на беременность и бесплодие коров. / И.И. Богданов, М.А. Богданова, А.Н. Фомин. - Вестник ветеринарии. 2011. 59(4). 11-12.

3. Заявка на патент №2011134963. Метод иммунологической диагностики беременности и бесплодия коров и телок.

4. Патент на изобретение №2306701. Способ диагностики беременности у коров.

Диагностический набор для определения беременности коров по наличию хорионического гонадотропина в молоке, характеризующийся тем, что он содержит упаковку, в которую помещают тестируемую поверхность в виде предметного стекла или многолуночный планшет и диагностический препарат, содержащий фосфатно-буферный раствор, бензоат натрия, кристаллическую целлюлозу, 1%-ный бычий альбумин, ализарин и сыворотку крови от иммунизированных животных при следующем соотношении компонентов, об. %:

фосфатно-буферный раствор	65-80
кристаллическая целлюлоза	10-25
1%-ный бычий альбумин	1,0-2,0
ализарин	1,0-2,0
бензоат натрия	0,5-1,0
сыворотка крови от
иммунизированных животных	остальное

Изобретение относится к ветеринарии, в частности к способам лечения и профилактики субклинического кетоза у новотельных коров с использованием метаболического средства. Способ лечения субклинического кетоза содержит исходные компоненты, мас.%: 1% янтарной кислоты, 10% бутафосфана, 0,5% новокаина, остальное - дистиллированная вода.

Фармацевтическая композиция, обладающая иммуномодулирующей, иммунокорректирующей, иммуносупрессорной, противовирусной, противовоспалительной и онколитической активностями // 2775008

Настоящее изобретение относится к области медицины, а именно к фармацевтической композиции, обладающей иммунокорректирующей, противовирусной активностью в отношении COVID-19 и герпетического поражения слизистых губ и вульвы, а также противовоспалительной и онколитической активностью в отношении глиобластомы головного мозга, светлоклеточного рака левой почки с метастазами в легкие, неходжкинской лимфомы, аденокарциномы предстательной железы, метастазирующей меланомы, содержащей смесь двух солей: первой соли, представляющей собой соль из группы: 5-аминофталгидразид натрия, 5-аминофталгидразид калия и 5-аминофталгидразид лития, и второй соли, представляющей собой соль из группы: бис(5-амино-1,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидрофталазин-2-ил) мышьяка и бис(5-амино-1,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидрофталазин-2-ил) золота.

Композиции ирнк для сходного с ангиопоэтином 3 (angptl3) белка и способы их применения // 2774821

Настоящее изобретение относится к области биотехнологии и медицины, в частности к конъюгату и фармацевтической композиции для ингибирования экспрессии ANGPTL3, а также способу ингибирования экспрессии ANGPTL 3 и способу лечения нарушений метаболизма липидов. Конъюгат включает двухцепочечную рибонуклеиновую кислоту (дцРНК) и лиганд.

Антисептическая комбинация, антисептическая фармацевтическая композиция и их применение // 2774622

Группа изобретений относится к области медицины и химико-фармацевтической промышленности и предназначена для антисептической обработки повреждений эпителия в виде ран, ожогов, а также других повреждений кожи и слизистых оболочек. Антисептическая комбинация состоит из сахарозы и антисептика.

Композиция для кратковременного и долговременного лечения запоров // 2773084

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к композиции для профилактики и лечения запора. Предложена пероральная композиция для профилактики или лечения запора, содержащая комбинацию экстракта семян Plantago psyllium и/или экстракта семян Plantago ovata в количестве от 200 мг до 5 г в качестве суточной дозы, глюкоманнана в количестве от 200 мг до 5 г в качестве суточной дозы и экстракта цветов ромашки Matricaria chamomilla в количестве от 30 до 700 мг в качестве суточной дозы в смеси с подходящим приемлемым носителем.

Фармацевтическая комбинация, композиция и комбинированный состав, содержащий активатор глюкокиназы и блокатор к-атф-каналов, способ их приготовления и их применение // 2772875

Группа изобретений относится к области медицины, а именно к эндокринологии. Предложена гипогликемическая фармацевтическая комбинация, содержащая: (а) активатор глюкокиназы, представляющий собой соединение HMS5552, представленное формулой, или его фармацевтически приемлемую соль, b) блокатор К-АТФ-каналов, выбранный из группы, состоящей из глимепирида, репаглинида и их фармацевтически приемлемых солей, где массовое отношение активатора глюкокиназы к блокатору К-АТФ-каналов составляет от 400:1 до 10:1.

Способ лечения хронического катарального гингивита с применением антисептической композиции // 2772298

Изобретение относится к медицине, а именно к стоматологии, и может быть использовано для лечения хронического катарального гингивита. Способ включает профессиональную чистку зубов и удаление зубных отложений, отличающийся тем, что дополнительно применяют ротовые ванночки с использованием подогретой до 34-36°С антисептической композиции, содержащей 0,2 мас.% полиаминопропил бигуанида, после приема пищи и удаления ее остатков зубной щеткой щетиной средней жесткости с экспозицией 1,5-2 минуты курсом 10 дней, причем первые три дня ротовые ванночки применяют 3-4 раза в день, а в последующие дни - 2 раза в день.

Способ лечения пародонтита легкой и средней степени тяжести // 2772296

Изобретение относится к медицине, а именно к стоматологии, и может быть использовано для лечения пародонтита легкой и средней степени тяжести. Способ включает использование антисептической композиции в форме геля, содержащей 0,1 мас.% полиаминопропил бигуанида, причем указанную композицию применяют по следующей методике: после снятия над- и поддесневых назубных отложений при помощи ультразвукового скалера и щетки с пастой, осуществляют внесение в каждый пародонтальный карман указанной композиции, нагретой до температуры 26-28 °С, в количестве 1,5-2,0 г, при этом ее удаление из кармана не производят, далее назначают домашнее применение указанной композиции в виде аппликаций с использованием универсальной каппы, при этом аппликации проводят один раз в день после приема пищи и чистки зубов с экспозицией 40 мин, курс применения составляет 14 дней.

Способ профилактики альвеолита челюсти // 2772295

Изобретение относится к медицине, а именно к стоматологии, и может быть использовано для профилактики альвеолита челюсти после удаления зуба(ов) или удаления ретинированного(ых) и/или дистопированного(ых) зуба(ов). Способ включает проведение деконтаминации лунки зуба(ов), промывание лунки нагретой до температуры 30-32°С антисептической композицией, содержащей в качестве активного компонента полиаминопропил бигуанид в количестве 0,1 мас.%, со временем экспозиции 55-65 секунд, выполнение костной лунки кровяным сгустком с последующим отжатием и адаптацией краев.

Способ лечения хронического афтозного стоматита // 2772293

Изобретение относится к области медицине, а именно к стоматологии, и может быть использовано для лечения хронического афтозного стоматита. Способ лечения хронического афтозного стоматита включает применение нагретого до температуры 28-30°С антисептического раствора на основе 0,1 мас.

Способ выращивания ремонтных телок // 2774927

Изобретение относится к области животноводства и может быть использовано в товарных и племенных сельскохозяйственных предприятиях при интенсивном выращивании ремонтного молодняка крупного рогатого скота молочных пород. Способ выращивания ремонтных телок, включает кормление телок сбалансированными рационами, подкожную инъекцию биогенного препарата, при этом биогенный препарат вводят телкам ежемесячно с интервалом 30 дней.